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你的法医学论文准备往什么方向写，选题老师审核通过了没，有没有列个大纲让老师看一下写作方向？ 老师有没有和你说论文往哪个方向写比较好？写论文之前，一定要写个大纲，这样老师，好确定了框架，避免以后论文修改过程中出现大改的情况！！学校的格式要求、写作规范要注意，否则很可能发回来重新改，你要还有什么不明白或不懂可以问我，希望你能够顺利毕业，迈向新的人生。 （一）选题毕业论文（设计）题目应符合本专业的培养目标和教学要求，具有综合性和创新性。本科生要根据自己的实际情况和专业特长，选择适当的论文题目，但所写论文要与本专业所学课程有关。（二）查阅资料、列出论文提纲题目选定后，要在指导教师指导下开展调研和进行实验，搜集、查阅有关资料，进行加工、提炼，然后列出详细的写作提纲。（三）完成初稿根据所列提纲，按指导教师的意见认真完成初稿。（四）定稿初稿须经指导教师审阅，并按其意见和要求进行修改，然后定稿。一般毕业论文题目的选择最好不要太泛，越具体越好，而且老师希望学生能结合自己学过的知识对问题进行分析和解决。不知道你是否确定了选题，确定选题了接下来你需要根据选题去查阅前辈们的相关论文，看看人家是怎么规划论文整体框架的；其次就是需要自己动手收集资料了，进而整理和分析资料得出自己的论文框架；最后就是按照框架去组织论文了。你如果需要什么参考资料和范文我可以提供给你。还有什么不了解的可以直接问我，希望可以帮到你，祝写作过程顺利毕业论文选题的方法: 一、尽快确定毕业论文的选题方向 在毕业论文工作布置后,每个人都应遵循选题的基本原则,在 较短的时间内把选题的方向确定下来。从毕业论文题目的性质来看,基本上可以分为两大类:一类 是社会主义现代化建设实践中提出的理论和实际问题;另一类是专业学科本身发展中存在的基本范 畴和基本理论问题。大学生应根据自己的志趣和爱好,尽快从上述两大类中确定一个方向。二、在初步调查研究的基础上选定毕业论文的具体题目在选题的方向确定以后,还要经过一定的 调查和研究,来进一步确定选题的范围,以至最后选定具体题目。下面介绍两种常见的选题方法。 浏览捕捉法 :这种方法就是通过对占有的文献资料快速地、大量地阅读,在比较中来确定 论文题目地方法。浏览,一般是在资料占有达到一定数量时集中一段时间进行,这样便于对资料作 集中的比较和鉴别。浏览的目的是在咀嚼消化已有资料的过程中,提出问题,寻找自己的研究课 题。这就需要对收集到的材料作一全面的阅读研究,主要的、次要的、不同角度的、不同观点的都 应了解,不能看了一些资料,有了一点看法,就到此为止,急于动笔。也不能“先入为主”,以自己头 脑中原有的观点或看了第一篇资料后得到的看法去决定取舍。而应冷静地、客观地对所有资料作 认真的分析思考。在浩如烟海,内容丰富的资料中吸取营养,反复思考琢磨许多时候之后,必然会有 所发现,这是搞科学研究的人时常会碰到的情形。 浏览捕捉法一般可按以下步骤进行: 第一步,广 泛地浏览资料。在浏览中要注意勤作笔录,随时记下资料的纲目,记下资料中对自己影响最深刻的 观点、论据、论证方法等,记下脑海中涌现的点滴体会。当然,手抄笔录并不等于有言必录,有文必 录,而是要做细心的选择,有目的、有重点地摘录,当详则详,当略则略,一些相同的或类似的观点和 材料则不必重复摘录,只需记下资料来源及页码就行,以避免浪费时间和精力。 第二步,是将阅读 所得到的方方面面的内容,进行分类、排列、组合,从中寻找问题、发现问题,材料可按纲目分类,如 分成: 系统介绍有关问题研究发展概况的资料; 对某一个问题研究情况的资料; 对同一问题几种 不同观点的资料; 对某一问题研究最新的资料和成果等等。 第三步,将自己在研究中的体会与资料分别加以比较,找出哪些体会在资料中没有或部分没有;哪些体会虽然资料已有,但自己对此有不 同看法;哪些体会和资料是基本一致的;哪些体会是在资料基础上的深化和发挥等等。经过几番深 思熟虑的思考过程,就容易萌生自己的想法。把这种想法及时捕捉住,再作进一步的思考,选题的目 标也就会渐渐明确起来。
砒霜 少量可入药
沙门氏菌，葡萄球菌
法医学毕业论文写具体的案例分析可以的。当时也不太会弄，还是上届师姐给的雅文网，有高手帮忙简单多了法医临床鉴定细节问题的探讨病案在法医活体检验鉴定中的作用论法医鉴定的规范性接受法医鉴定者的心理状态分析死刑复核中法医鉴定结论审查的特点与建议——基于634例统计分析我是法医四川大学法医学科全基因组扩增技术及其在法医个体识别中的应用谈法医对人身伤害案鉴定审查的看法法医在医疗纠纷鉴定中的地位和作用伦理学在法医实践中的应用初探虚拟解剖技术在解决法医尸检结论准确性和伦理学矛盾中的作用法医与侦查员的配合充分发挥法医门诊的职能作用PBL教学模式下法医毒物分析与法医毒理学阶段性合并实验教学探讨海峡两岸法医现状之比较再议法医在医疗纠纷技术鉴定中的定位、问题及建议法医案例信息库的构建与教研互动我国法医命案尸检现状及规范对策研究Mallory染色变法在法医病理切片中的应用发光细菌在法医毒物检测中的应用法医昆虫学死亡时间的推断与Daubert规则之思考第九次全国法医学术交流会征文通知日本法医解剖法律制度及特点番禺区人民检察院2003-2011年法医文证审查工作分析第九次全国法医学术交流会征文通知《国际功能、残疾和健康分类》评述及其法医临床学应用价值基层法医学习方法浅谈我国法医鉴定体制的新发展法医文证审查案例分析要重视法医文证审查工作中山医科大学法医鉴定中心对当前法医鉴定体制改革完善及执行新刑诉法第120条的有关问题的探讨
是的。因为幼蛇没有什么经验，而且只要稍微有点响动就会开始进攻，而且它的控制能力也比较差，往往会在注入毒液的时候将自己存储的毒液全部注入进去，使得毒性变得更强。
研究人员认为，蜈蚣毒液中的这种多肽毒素通过阻断上述离子通道导致猎物大脑、肺及心脏功能障碍，从而高效捕食猎物。
蜈蚣广泛分布在除南极洲外各大洲陆地，可以捕食小型哺乳动物、啮齿类动物、两栖爬行类动物等远大于自身体重的猎物。人如果被蜈蚣叮咬后会出现疼痛、水肿、发炎、坏死和皮下出血等症状，严重者有高血压、心肌缺血、呼吸衰竭、昏迷和痉挛等临床症状，甚至可能死亡。
蜈蚣（Chilopoda）又作吴公，又称百足虫、百脚虫、蝍蛆、天龙，是一种有毒腺的、掠食性的陆生节肢动物。，常见的蜈蚣有红头、青头、黑头三种。
红头的背部呈红黑色，腹部现淡红色，足为淡橘红色或黄色。青头的背部和足部呈蓝色，腹部淡蓝色，体型小，长度约为红头蜈蚣的二分之一。
黑头蜈蚣背部和足部呈黑色，腹淡黄色，体型更小。《本草纲目》曰：“蜈蚣，西南处处有之，春出冬蛰，节节有足，双须岐尾。”通常身体很长，并且有许多对步足。《本草衍义》称：“蜈蚣背光黑绿色，足赤，腹下黄。”蜈蚣与蛇、蝎、壁虎、蟾蜍并称“五毒”，并位居五毒首位。
1、 在中小学课外科技活动，对生物学科的某一专题是某一现象进行探索研究，把研究过程中枢观察纪录的资料，加工整理，综合分析，去会有共，并指出自己的观点。把上述的工作用文字系统全面的表达出来，这就是生物科学小论文。 2、 学生论文的特点 课题应具体，题目不应过大。因为基础知识薄弱，研究深度浅。生物科技小论文是学生进行生物科技活动的总结，这对扩大学生知识领域、培养能力、发展创造力，都有重要的实践意义。 完成生物小论文课题的方法 小论文课题确定后，怎样去完成研究课题呢？下面分别作些介绍。 （一） 考察法 即调查某一区域内的某些生物种类组成、数目和分布的规性等。如某的去昆虫种类及数目变化;环境宝物种的各种动物吹气候变化的调变，等等。 这种研究犯法化钱少，不需要复杂的仪器和设备一般的中小学都可进行。但指导教师事前应适当扑导，让学生与县长掌握一定的动物分类知识，并且事先订好固定的考察计划。 （二） 观察法：就是对某种动植物的个体进行仔细的观察，以了解掌握其生活习性和生长发育的规定性。佩观察的对象必须要有一定的数目，因为只对一个个体进行观察，其必然性的因素太大，回引响研究的结论。观察的同时，应随时注意收集实物资料，使证据更完全，效果更好。 （三） 实验法 在人物改变某个环境因素条件下（如营养、温度、光照等），观察在某一特定环境下，环境对生物产生的引响，找出其中的规定性的研究方法。注意点：1：要有对照组 2:研究的对象要有一定的数目。 例："营养对青蛙蝌蚪发育的影响"。 实验时，分天然水和坦然谁加少是农家肥，两族作对照。试验过程中，除了营养条件不同外，其他条件如蝌蚪的来源、大小、水温、光照等都要尽权，一免其他因素影响了实验。 以上三种方法在实验研究中常有的，以那一中为止，以课题内容、性质而定。但不要用那种方法，都要引导学生进行仔细的观察，特别是在变化过程，要做好计数和测量，记录下来，然后用统计学得出正确的结论
“一朝被蛇咬，十年怕草绳”，一句话道尽人们被毒蛇支配的恐惧。尤其是生活在农村里面的朋友，无论是在田间地头，还是山野林中，蛇几乎是最常见的动物之一。
正所谓“七月黄蜂八月蛇”，在夏秋之际，黄蜂与毒蛇是有名的“毒物”。相对于黄蜂来说，蛇更具隐蔽性，被其咬到的概率不仅更大，而且所带来的后果往往也是更严重的，轻则肿胀皮肤溃烂，重则危及生命。
在我国民间，有这么一种说法：幼年的蛇，其毒性比成年蛇更大。无独有偶，在美国西部一些州县里面，也有类似的说法，他们认为幼年响尾蛇要比成年响尾蛇更具威胁性。
为什么会这样呢？按照我们的理解，不应该是越成熟的蛇其毒性越强吗？
之所以会出现这种观点，主要是人们觉得首先幼年蛇缺乏经验，稍有异动就会下嘴咬，而成年蛇经验较足，一般性防御或者攻击时往往采取只咬不注入，或者注入少部分毒液，在非必要情况下尽量会避免浪费毒液。
其次是幼年蛇在控制力方面也要比成年蛇差，在注射毒液的时候会一次性注入自己所拥有的绝大部分毒液，从而使毒性大大增强。
乍看之下这两个理由都十分充分，但是在现实生活中，是不是幼年蛇比成年蛇更危险呢？
我们以响尾蛇为例，目前没有任何的研究资料表明，响尾蛇干咬（即只咬不注射毒液）的频率会随着年龄的增大而变化，并且从加利福尼亚州南部9年的蛇类咬伤报告数据来看，人们被咬伤的严重程度，与响尾蛇的大小呈正相关关系，即被越大的响尾蛇咬伤，后果越严重。
从这些方面来看，“响尾蛇幼蛇比成年蛇更毒”，仅是民间传说而已，没有相关证据能证明其正确性。
蛇类在每一次咬住对手时，所注入的毒液量一直以来都是科学界研究的热门课题，所以这方面的研究数据和成果我们不难获得。
比如2002年《毒蛇生物学》第207-233页有一篇研究里提到了响尾蛇在捕食老鼠和蜥蜴的时候，所注入的毒液量是不同的，蜥蜴体型比老鼠小很多，响尾蛇会相应减少毒液的注入量。
洛马琳达大学医学院的动物学和生理学博士威廉·K·海斯等一些科学家在1992年的时候也发现了响尾蛇在捕食鸟类的时候会注入更大剂量的毒液，可以理解，如果毒液剂量太小，不能让鸟类瞬间丧失飞行能力的话，即便是鸟类短暂飞行了一下就死了，也没有留下踪迹，对于响尾蛇来说是得不偿失的。
人们研究了北太平洋响尾蛇，这是一种中大型的毒蛇，它们捕食了大大小小的老鼠，从研究数据可以发现，猎物的大小的确可以影响响尾蛇毒液的注入量，越大的猎物，往往会被注入更大剂量的毒液。
当响尾蛇攻击大型啮齿类动物的时候，会注入更多的毒液，以避免猎物在被捕食的过程中出现反抗行为，从而对自己造成威胁。
当然实验结果也表明了响尾蛇的确能够控制自己在每次啃咬猎物时的毒液注入剂量，但没有证据表明成年蛇比幼年蛇在这方面的控制力更强。
海斯博士的另一项研究结果表明，成年响尾蛇一次性往往能够注入更大剂量的毒液，随着响尾蛇的成熟与长大，它的毒腺也会随着增大，这就意味着越大的蛇体内能够储存的毒液就越多，那么在每次啃咬之后能够释放的毒液也就可以更多。
科学家们研究了不同年龄段，不同体型的草原响尾蛇，及它们在捕食行为上所释放的毒液，发现与前面提到的民间观点相反，成年蛇、大型蛇每次注入的毒液更多，它们有更大的腺体，储存的毒液更多，它们会合理并不吝啬地使用这些毒液。
科学家们用带有人类气味，且充满生理盐水的温暖手套来模拟人类四肢，从而去测试响尾蛇的防御性攻击，发现无论是何种年龄段的蛇，所注入的毒液剂量要远比它们攻击老鼠时注入的剂量小得多，而且有其中10%的啃咬，是干咬没有注入毒液的。
这就意味着，幼年蛇也具备了控制注入毒液剂量的能力。当人类不小心干扰到响尾蛇时，它采取的防御性攻击，所带来的后果要比掠食性攻击小一些。
但研究同时还发现了，即便是在防御性攻击的时候，成年大型响尾蛇，所注入的毒液剂量要比幼年蛇大，原因是它们有更多的毒液可以利用。
民间的传说里面之所以会认为幼年的蛇更毒，无非就是认为幼年蛇的经验和控制能力都不如成年蛇，但现有的研究早已证明幼年蛇也具备了控制毒液注入的能力，它们在进行防御性攻击的时候，会本能地减少毒液的注入量，也就不存在说“经验不足”这一说法。
另外，幼年蛇的毒腺往往比成年蛇小，所能储存的毒液也更小，即便在一次啃咬时将所有毒液完全注入，其剂量也有可能不如成年蛇总体的一部分，所以抛开实际情况而言毒性，都是“耍流氓”。
那么存不存在说幼年蛇的毒性比成年蛇毒性更强呢？比如说为了弥补幼年蛇“实力弱”的缺点，从而给予了它更强的毒性呢？
这倒是有可能的，毕竟幼崽的特殊保护机制在大自然中是很常见的现象，比如狮子和美洲狮，成体身上都是没有斑点的，而它们的幼崽身上却有明显的斑点，更有利于隐藏。
世界上也有不少专家认为幼年响尾蛇的毒液作用效果更快，但似乎并不能弥补与成年蛇相比在剂量上的不足。
根据对动物行为的分析和研究，发现成年响尾蛇无论是在进行掠食性攻击还是防御性攻击上面，所释放的毒液剂量都比幼年蛇多20-50倍，如此巨大的差距是幼年蛇凭更快的发作效果所不能弥补的。
蛇毒的强弱主要取决于其毒液的成分，响尾蛇的毒液包含了100多种不同的活性成为，它们分别作用于不同的部位，比如低分子量神经毒素能破坏神经组织，而高分子量的金属蛋白酶则能破坏血液和软组织，从而引起组织坏死、肿胀、疼痛等等。
但是一种特定蛇的毒液成分，往往跟这种蛇的年龄、饮食结构及所处的地理位置等因素有关，即便是同一条蛇，它在不同时期的毒性也是不同的，所以很难界定幼年响尾蛇的毒性就一定比成年蛇强。
根据现有对蛇类动物行为的研究表明，蛇的大小，以及所注入的毒液剂量是决定了毒性强弱的关键，成年蛇有着较多的毒液，每次啃咬的时候会释放更多的剂量，所以成年蛇往往比幼年蛇更危险，一旦被咬，所带来的后果也是更严重的。
所以我们不能随意轻信民间的一些传言，在被任何蛇咬了之后，一定要及时就医，不能理所应当地认为是成年蛇或者幼年蛇就放松警惕。
当然最好的做法就是尽量避免被蛇咬，蛇是一种比较怕人的动物，只有在少数情况下才会被迫反击，比如人们踩踏到它的时候，因此尽量避免到陌生的野外环境，野外行走时多注意观察就是极佳的做法。
另外穿一些较厚的牛仔裤、长筒靴，也能很好地起到阻隔作用，从而减少被蛇咬后的毒液注入剂量，减小中毒后果。不过尤为重要的是认清毒蛇的威胁性，不要轻易相信幼年蛇比成年蛇更毒的说法，毕竟没有相关科学依据支持该理论。
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生物类或生物化学类的中文核心期刊哪个容易投中北大核心里综合性生物类核心期刊表根据主管单位级别期刊等级，基本全是国家级：1.《生态学报》国家级，主管：中国科学技术协会2.《生物化学与生物物理学报（英文）》国家级，主管：中国科学院3.《遗传学报(英文版)》国家级，主管：中国科学院4.《中国生物化学与分子生物学报》国家级别，主管：中国科学技术协会5.《生物化学与生物物理进展》国家级，主管：中国科学院6.《微生物学报》国家级，主管：中国科学院7.《生物物理学报》国家级别，主管：中国科学技术协会8.《遗传》国家级，主管：中国科学院9.《生物工程学报》国家级，主管：中国科学院10.《应用生态学报》国家级，主管：中国科学院11.《中国科学院》国家级，主管：中国科学院12.《中国科学.C辑》国家级，主管：中国科学院13.《古生物学报》国家级，主管：中国科学院14.《微生物学通报》国家级，主管：中国科学院15.《水生生物学报》国家级，主管：中国科学院出版图书情报委员会16.《菌物系统（改名为：菌物学报）》国家级，主管：中国科学院17.《生物多样性》国家级，主管：中国科学院18.《生物工程进展（改名为：中国生物工程杂志）》国家级，主管：中国科学院19.《实验生物学报》新闻出版总署未查到，应该属于停刊或改名期刊20.《生命的化学》国家级别，主管：中国科学技术协会21.《古脊椎动物学报》国家级，主管：中国科学院22.《微体古生物学报》国家级，主管：中国科学院23.《生态学杂志》国家级别，主管：中国科学技术协会24.《生物数学学报》新闻出版总署未查到，应该属于停刊或改名期刊
晚唐诗歌又一变。中唐的那种改革锐气消失了，诗人们走向自我。这时出现了大量写得非常好的咏史诗，杜牧、许浑是代表。杜牧是写咏史诗的大手笔，对于历史的思索其实是对于现实的感慨，历史感和现实感在流丽自然的形象和感慨苍茫的叹息中融为一体，《江南春》都是咏史佳作。晚唐艺术成就最高的一位诗人是李商隐。唐诗的发展，到盛唐的意境创造，达到了意象玲珑、无迹可寻的纯美境界，是一个高峰。杜甫由写实而走向集大成，是又一个高峰。中唐诗人在盛极难继的情况下，另辟蹊径，或追求怪奇，或追求平易，别开天地，又是一个高峰。诗发展至此，大有山穷水尽之势。李商隐出来，以其深厚的文化素养、惊人的才华，开拓出一个充满朦胧、幽约的美，让人咀嚼回味的诗的境界，达到了新的高峰。他是一位善于表现心灵历程的诗人，感情浓烈而细腻。他的爱情诗深情绵邈，隐约迷离，刻骨铭心而又不易索解。他的不少诗（特别是无题诗）情思流动是跳跃式的，意象组合是非逻辑的，意旨朦胧而情思可感，往往可作多种解释。他的艺术技巧，达到了出神入化的境界，极大地扩大了诗的感情容量，为唐诗的发展作出了最后的贡献。
《微生物学报》、《生物工程学报》、《病毒学报》、《中国人兽共患病学报》、《中国病毒学》、《微生物学通报》、《微生物学杂志》
中药讲究五行相生相克！
有些根茎类，块茎类，叶类中药材需要泡制后才能用因为它含毒性太厉害了；再就是矿物类产品是剧毒的必须有效监管才能不出问题！
寨卡病毒是黄病毒家族中的一种虫媒病毒。寨卡这个名字最早是在1947年从非洲乌干达寨卡森林的一只发热恒河猴身上分离出来的。在过去的70年里很少有相关的研究发表，原因是它只会引起发烧、关节痛、结膜炎、皮疹等轻微症状，且症状在2015-2016年消失，然而不久村卡病毒突然在巴西、美国、东南亚爆发，迅速蔓延到世界61个国家和地区，并与流产、新生儿小头症和吉兰巴雷综合症病例的迅速增加密切相关。
2016年初，世界卫生组织将村卡病毒列为全球突发公共卫生事件，从而大大加快了全球村卡病毒研究的步伐，在短时间内更是建立了多种小鼠和非人灵长类动物的村卡模型，进行感染和被应用于村卡病毒诊断、治疗和疫苗的相关临床前评估。然而，到目前为止，寨卡病毒导致新生儿小头症的致病机制仍不清楚，相关的分子机制，尤其是神经系统的感染机制非常有限，这严重影响了抗病毒靶向药物的开发。
RNA干扰（RNAi）是一种由小双链RNA引发的转录后基因沉默过程。正常细胞自身RNA干扰的调控在细胞分化和发育中起着非常重要的作用。
细胞内转录产生的初始miRNA（pri-mirNA）被Drosha加工成miRNA前体（pre-mirNA），通过exportin-5转运器输出到细胞质中。细胞质中的内切酶Dicer将这些miRNA前体裂解成多个具有特定长度（约21至23bp）和结构的小双链Rnas，即成熟的mirnas。miRNA的一条链与含有Ago2的蛋白复合物结合，形成rnA诱导的沉默复合物（RISC）。RISC和具有miRNA同源区的mRNA序列特异性地结合，在结合部位劈开mRNA，并引起转录后的调控。最近的研究表明，神经细胞中Dicer酶的缺陷可引起神经发育的退化。
寨卡病毒“爆发式传播”已成为“国际关注的突发公共卫生事件”，但全球并无可有效防治寨卡病毒感染的疫苗或药物。中国医学专家经短短两年艰辛攻关，在抗寨卡病毒药物研究中获重要进展。
据悉，复旦大学基础医学院陆路、姜世勃研究团队与复旦大学附属公共卫生临床中心和军事医学科学院微生物流行病研究所研究团队，合作设计的“多肽类病毒灭活剂”可有效杀灭寨卡病毒，阻止其感染孕鼠及其胎儿，对研发防治寨卡病毒感染的药物有重大意义。这项成果于7月26日在线发表在国际权威期刊上，引起世界医学界关注。
据悉，寨卡病毒是一种有包膜、蚊媒传播的病毒。1947年，该病毒首次在乌干达的恒河猴体内分离得到。2007年以前，该病毒只零星感染人类，但2007年后人类出现爆发感染。截止2017年3月，全球约80多个国家或部落报道了该病毒的感染。为此，世界卫生组织将南美地区发生的寨卡病毒“爆发式传播”宣布为“国际关注的突发公共卫生事件”。
据了解，两年前，陆路、姜世勃研究团队首先对寨卡病毒E蛋白的序列进行分析和研究，成功地研发出了一种能够灭活寨卡病毒的多肽候选药物(Z2)。研究人员发现该多肽可与寨卡病毒的表面蛋白结合，最终使病毒失去感染活性。体外细胞模型及体内动物模型上的实验结果亦显示Z2多肽可较好地抑制寨卡病毒的感染。
研究人员进一步研究发现，Z2多肽具有穿透胎盘屏障的能力，不仅能够降低寨卡病毒感染孕鼠血清中的病毒滴度，还能显著降低胎盘和胎儿寨卡病毒的感染率，阻止寨卡病毒的垂直传播。此外，该多肽灭活剂对孕鼠及胎鼠均表现出较好的安全性，有望发展为可防治寨卡病毒感染的新型药物，尤其适用于孕妇等寨卡病毒感染的高危人群。
利用基因沉默疗法 ，这样就可以很好的进行保护了，并且可以解决许多问题，这和小细胞外囊泡是有关系的。
反向遗传学 被认为是一种不可或缺的工具，它彻底改变了我们对病毒发病机制和疫苗开发的认识。大型的RNA病毒基因组，如冠状病毒基因组，由于基因组较大且不稳定，很难在大肠杆菌宿主中克隆和操作。 两位通讯作者均来自瑞士的University of Bern Transformation-Associated Recombination cloning TAR克隆 基因组DNA片段和过量的TAR载体在去除细胞壁的酵母细胞中进行混合。每个载体中都含有对目的基因特异的两段序列（标为蓝色和红色）以及酵母的筛选标记HIS3和CEN6（淡蓝色原点）。由于载体过量，酵母细胞便会将DNA片段全部接受。根据具体情况又可分为三类：1）未分到基因组DNA的；2）分到基因组DNA但未被整合到TAR载体上的；3）分到基因组DNA且通过自身同源重组被整合到TAR载体上的。显然我们是只需要第三种情况的阳性克隆，怎么把其它两种过滤掉呢？答案是进行电泳。 下图是对上述过程的简化示意： 2010年5月20日，J. Craig Venter Institute在美国 Science 杂志上报道了首例人造细胞的诞生。向山羊支原体 Mycoplasma capricolum 细胞中转入人工合成的蕈状支原体 Mycoplasma mycoides 的基因组而来，产生的人造细胞表现出的是蕈状支原体的生命特性。利用该平台，研究人员在拿到合成DNA片段后一周内，对新冠病毒进行了基因组改造和病毒拯救。研究团队于1月14日向试剂公司下单，以化学合成方式得到上述14个DNA片段，并在2月4日拿到其中的12个含片段载体（有pUC57、pUC19、pUC57mini和PCC1-His3）。其中片段5 和7 未获得，原因不详。研究团队最终通过对一位来自慕尼黑患者的新冠病毒样本（BetaCoV/Germany/BavPat/2020）进行RT-PCR 扩增，获得了第5和第7个片段。 利用TAR 克隆，研究人员获得了6 组正确组装的新冠病毒构建体的分子克隆。随后用酵母的同源重组系统依据末端重复的序列将这些DNA 序列拼到一起。获得完整的病毒序列后，用T7 RNA 聚合酶将其通过脱落转录，得到病毒RNA，将该RNA 用电穿孔技术导入到非洲绿猴肾细胞（VeroE6 cell）中，使其感染。将用于培养绿猴肾细胞（~2d），含释放出的病毒颗粒的上清液注入到别的培养基中，发现可以感染别的细胞，说明新构建的酵母合成平台可以拯救病毒。 同理，作者团队在鼠肝炎病毒A59（MHV-A59）和MERS-CoV进行病毒拯救的测试，发现效果依旧很好，测试的克隆中正确组装了病毒基因组的YAC均可达到90％，这表明病毒在酵母中的组装效率相当之高。 TAR 克隆系统的一个最重要的优点就是可以先对全基因组进行设计，通过对小的具有重复序列的片段的合成，进而再依靠酵母的同源重组系统进行片段的正确组装，极大的降低了合成的难度，也大幅提高了合成的效率。无需得到变异毒株的临床样本，通过对病毒变异的分析，可以合成构建出该变异毒株的基因组片段，再通过酵母平台进行重建与拯救。论文中还提到对局部片段的重新设计，以测试改变前后对病毒的影响。 总的来说，这一方法即利用酵母人工染色体在酵母体内将合成的SARS-CoV-2的DNA片段进行体外重组，获得全长cDNA克隆。再将cDNA体外转录为RNA，利用电穿孔将病毒RNA转染进哺乳动物细胞，实现病毒拯救。 化学合成的基因组DNA所产生的SARS-CoV-2可以绕开病毒分离物的来源限制，而且还可以对单个基因进行遗传修饰和功能表征。 对于这一篇论文，我起初有许多地方不明白。 首先是病毒的基因组合成，理论上讲，比病毒更高级的生物基因组，并不是没有人合成出来过，因此这篇论文的技术可以说是降维打击了，那为什么还可以发表在顶级杂志 Nature 上呢？ 从时间线上进行分析，我们可以得知，1月11日病毒序列正式被公布（据我所知应该是中国CDC发布的），但是国外第一个提取出病毒毒株的时间却是到了2月26日，与序列的公布整整相差1个多月。我们也可以知道这次的Pandemic，一个多月可以新增多少感染者和死亡者，时间就是生命啊！而作者在序列公布后的第3天便下出了订单，在ICTV正式公布新冠病毒名称的第2天便得到了拯救完成的病毒。可以想象，如果以后没有可能及时得到病毒的毒株，我们可以直接根据序列得到病毒的毒株， 这是本篇文章最大的亮点之一，即在此类形势下给人一种研究病毒的范式。 第二个亮点，可以关注到作者不仅做了SARS-CoV-2，还做了MHV和MARS-CoV。看不明白的话给个提示：这三种病毒都是冠状病毒科（Coronaviridae ）的！此外，作者在表格中还列出未实现拯救的人呼吸道合胞病毒（hRSV-B）、寨卡病毒（ZIKA virus）和流感病毒（HCoV）。这意味着作者想 通过对一系列冠状病毒的拯救验证来说明这一平台广泛的适用性 ，将难缠的冠状病毒，乃至其他病毒的毒株获取难度降低。这或许对科学界是件好事，但是可能也是件坏事吧… Craig Ventor；冠状病毒亚基因组； 《COVID-19全景综述》，为一张大图，涉及基本信息，免疫学过程等内容， 很震撼且 非 常华丽 ！在 公众号“炫亦”回复“cv”即可获得云盘链接！ [1] Thao, et al. Nature , 2020. [2] Natalay Kouprina & Vladimir Larionov. Nat Protocol , 2008. [3] Daniel G. Gibson, et al. Science , 2010. [4] 孙明伟, 李寅, 高福. 生物工程学报 , 2010.