biorvix发表论文

韩春雨在预印本网站BioRxiv上发表了一篇关于基因编辑的新文章：Background free tracking of single RNA in living cells using catalytically inactive CasE。

文章共有5名作者，依次为Feng Gao， Yue Sun， Feng Jiang， Xiaoyue Bai， Chunyu Han，工作单位均为河北科技大学基因编辑研究中心。其中，韩春雨为通讯作者。

据了解，论文中提到的CasE是Ⅰ-E型 CRISPR复合物的核心成分，它通过结合特定的茎环区域单独处理pre-crRNA，称之为 CasE Binding S，简称为CBS。CasE保守His20参与催化活性，ΔHis26-TtCse3突变的CasE（dCasE）则失去了催化活性，但仍然与其靶标紧密结合。

在该研究中，通过将 split 荧光与dCasE的N端和C-末端（ΔHis20）融合，构建了活体RNA跟踪工具VN-dCasE-VC。该系统仅在存在靶RNA时才发出荧光，从而增强信噪比。

在活细胞中进行可视化的RNA追踪，不需要特定的亚细胞分布。CasE-GFP和dCasE-GFP在HEK293T细胞中的高水平表达和均匀分布表明CasE和dCasE适合于活细胞中的RNA操作。

为了测试CasE在哺乳动物细胞中表达时是否具有强活性，作者构建了“关闭”报告基因质粒CBS-GFP-N1。它由5′-UTR中的GFP mRNA和CasE结合位点（CBS）组成。当CasE被引入系统时，GFP表达水平急剧下降。

同时，为了进一步测试CasE活性，作者还构建了“开启”报告基因质粒RED-16×CBS-Lin28-C1，其中CBS插入RED单体基因的3′-UTR区和Lin28的上游。Lin28是RNA核保留信号，在其3′-UTR中具有lin28信号的RED单体mRNA几乎不能翻译成蛋白质。

CBS-CasE依赖限制性切断lin28信号并从核释放靶mRNA用于翻译（图1E和图1F）。这些表明CasE可以结合并切割哺乳动物细胞中的CBS。

另外，为了将dCasE-CBS相互作用设计到RNA追踪系统中，作者通过将split-FP5-7与dCasE蛋白结合。发现一个版本，即VN-dCasE-VC很难发出荧光，这可能是由于不正确的折叠或不稳定的状态，但是当与靶RNA（CBS）结合时，可以在荧光显微镜下清楚地捕获荧光信号，即使VN-dCasE-VC表达质粒的转染剂量非常低。

接下来，作者使用VN-dCasE-VC系统追踪哺乳动物细胞中过表达的β-肌动蛋白（β-Actin）的mRNA，VN-dCasE-VC系统在细胞质中显示出强荧光。此外还观察到，向靶mRNA添加更多CBS可改善信号，荧光追踪更清晰，因此，可以通过增加CBS的数量来检测低丰度的mRNA。

总的来说，韩春雨团队发明了一种新的RNA追踪工具，将其命名为VN-dCasE-VC，该系统能够追踪活细胞中没有背景的特定RNA，通过荧光将其可视化。

目前已有两种活细胞RNA追踪成像工具，一种是MS2，一种是Cas13a，韩春雨团队开发的dCasE系统，成像效果由于MS2，而且，dCasE蛋白的分子量为22kDa，远小于Cas13a的130kDa，dCasE的小分子量更容易递送至细胞内，因此更适合用于活细胞的RNA追踪。

在这篇论文中，我们可以看到报道了一种新的活细胞内是综合糖核酸的工具，即使以前的论文受到了争议，但对于这次的结果，他依旧相信是非常具有科研效果的，韩春雨在接受了争议之后，他目前的工作岗位成为了副教授，他会继续研究这个课题。

时隔六年，韩春雨再发表新论文，文中哪些信息值得关注？下面就我们来针对这个问题进行一番探讨，希望这些内容能够帮到有需要的朋友们。

2022年1月21日，韩春雨在期刊（IF=16.971）发布了全新研究论文，落款企业为河北科技大学基因编辑研究中心。这间距他那时候造成极大的关注和异议的NgAgo研究论文早已过去快6年时间。

在这篇新论文中，韩春雨团队开发设计了一种新的根据Cas6的RNA荧光追踪服务平台，其具备更多的精确度和非特异。

该研究称NgAgo对真核生物（包含人）具备基因编辑技术工作能力。该研究取得成功迅速在全世界范畴内爆红，韩春雨教师先前籍籍无名，几乎一夜之间变成学界网络红人，被赞扬为“在三流学校获得全球一流原创设计成效，摆脱国际性基因编辑技术垄断性”。

该论文通讯作者为韩春雨，第一作者为高峰期，浙江大学专家教授沈啸为一同通讯作者，但在后面改动版本号中，沈啸从创作者名册中去除开。

2016年8月，河北科技大学创立基因编辑研究中心，方案资金投入资产逾2亿人民币。但NgAgo的研究成效引起普遍怀疑。

2017年8月3日，韩春雨撤销该论文。2018年8月31日，河北科技大学取消了韩春雨所获取的光荣称号，停止了韩春雨团队担负的科研课题并取回了科研费，取回了韩春雨团队所获校科学研究业绩考核奖赏。

2019年4月4日，预印本bioRxiv发表了一篇来源于美国普渡大学研究工作人员的研究论文，表明NgAgo根据Dna内切酶活力受体提高大肠埃希菌的同源重组。该研究表明NgAgo可以编写原核生物，但不可以编写真核生物基因。详细信息点一下：NgAgo可在原核生物上基因编辑技术

RNA在体细胞中的精准定位与其说作用息息相关，因而，开发设计用以追踪RNA在体细胞中遍布的技术性巨大地推动了RNA分子生物学的研究。近期，荧光蛋清标识的Cas9和Cas13在体细胞RNA追踪中的自主创新运用进一步充实了这一行业的研究辅助工具。

殊不知，Cas9和Cas13服务平台及其普遍采用的MS2-MCP技术性无法处理高声音分贝的问题。Cas6是I-E型CRISPR分子伴侣的关键部件，它根据鉴别具备Cas6融合结构域的茎环RNA完成融合并激光切割pre-crRNA。pre-crRNA的Cas6融合结构域与Cas6融合后可诱发Cas6的构像更改，造成其N端和C端并排。运用这一特点，韩春雨等人设计方案了一个根据Cas6的电源开关服务平台，用以在身体内检验和追踪总体目标RNA。

将split-Venus片段与来源于大肠埃希菌的内切圆核酸酶活力缺失的Cas6（dEcCas6）的N端（Venus-N，VN）和C端（Venus-C，VC）融合，结合的嵌合体VN-dEcCas6-VC与目地RNA融合时才会造成荧光。

因为其荧光相辅相成是由Cas6的变构电源开关受体的，因而韩春雨团队将其取名为根据Cas6的荧光相辅相成服务平台（Cas6FC）。

在体细胞中，Cas6FC可以几乎没有声音分贝的检验总体目标RNA。除此之外，只需在有兴趣的RNA中标识一个长为29nt的CBS团本，就能开启Cas6FC荧光，这极大降低了总体目标RNA构想和市场定位的潜在性更改的概率。

总体来说，韩春雨团队开发设计了一种新的根据Cas6的RNA荧光追踪服务平台，其具备更多的精确度和非特异。

值得一提的是，这篇论文的具体内容早在2019年7月份，就在预印本bioRxiv上线。如今这也是通过同行评议后宣布发布。

有以下缺点：首先，没有影响因子就是它第一个软肋。因为 medRxiv、bioRxiv 等预印本网站从未被 web of science 编入索引，它也区别于传统意义上的期刊，所以就没有影响因子了。其次，没有同行评审，这就导致文章质量鱼龙混杂。前一段时间，印度科学家在 BioRxiv 上发表了一篇爆炸性的论文《Uncanny similarity of unique inserts in the 2019-nCoV spike protein to HIV-1 gp120 and Gag》，把新冠肺炎疫情说成了阴谋论，随着质疑声越来越多，文章撤稿，作者道歉。这也足以说明预印本网站没有同行评审机制所带来的缺陷。这也是最初商业性的或非盈利的出版社，均不欢迎预印本的到来的原因之一。《自然》等各种科学期刊当时都表达了对它的强烈反对；《科学》的一位编辑甚至称其文章是“政府下属部门的低劣作品”。虽然，预印本的受认可度正逐步提高，但在投预印本平台之前一定要先了解好你最终发表的杂志的政策（并不是每个杂志都接受预印本的文章）。例如主要医学期刊《Molecular Biotechnology》、《Journal of Clinical Oncology》、《NEJM》与《JAMA》等期刊都已明确表示并不接收预印本文章。但与之相反，也有类似于《PSOL Generics》这样公开获取式的期刊，鼓励自己的编辑去预印本资料库中发掘值得发表的内容。截至2016年，发布在 bioRxiv 上的预印本，有三分之二后来发表在同行评议期刊上，大多数发表时间是在预印本发布后的六个月内。有42%的预印本最终在专业期刊上发表。已发表预印本数量最高的三本期刊分别是《科学报告》、eLife和 PLoS ONE ，每本的发表数量都超过了 700 篇。那么预印本网站能否比肩传统的学术出版形式，占据学术出版的一席之地，这还需要时间去考证。

新的论文发表了关于DNA荧光追踪技术，发现了新的组成、排列，灵敏性、特异性、遗传性这些都是韩春雨发表的新论文看到的信息。