2019农业经济论文发表

农村经济管理工作的不足与优化措施论文

在平时的学习、工作中，大家肯定对论文都不陌生吧，论文是讨论某种问题或研究某种问题的文章。相信写论文是一个让许多人都头痛的问题，下面是我精心整理的农村经济管理工作的不足与优化措施论文，欢迎阅读与收藏。

摘要：

农村经济是我国经济的重要组成部分。近年来，农村经济不断发展，促进我国国民经济发展的同时，也提升了农村居民的生活质量和经济水平，为构建和谐农村贡献了一份力量。政府也提供了人力、物力和财力等多方面的支持与保障，让农村经济有发展的空间，同时保障了管理工作顺利进行，从而促进了农村经济的发展。但是，目前的农村经济管理工作还存在很多问题，成为我国农村经济发展的阻力，所以，农村经济管理工作的改进十分紧迫。本文从当前农村经济管理工作中存在的问题出发，提出了一些基础性的建议，以期与读者共同探讨农村经济管理工作的发展与进步。

关键词：

农村经济管理；存在的问题；对策分析；

1、农村经济管理工作中存在的主要问题

1.1、农村经济管理工作人员专业素养不高

近年来，大量农村富余劳动力流向城市，而农村偏向于老龄化，剩下村民的素质偏低。农村主要以农业劳作为经济收入的主要来源，而现在的农业也逐渐趋向于机械化，剩下的农村劳动力普遍文化水平不高，科学种植、农作的村民几乎没有，导致农作物产量不高。很多人难以学会使用机械化种植，即使存在相关的培训班也只是走马观花，不能理解真正的含义，从而也无法应用。很多农民对于先进的高产种植技术不能领会，不能灵活应用于劳作生产，不能科学提高农作物产量，严重制约了农村经济的发展。所以，如何科学的提高农村剩余劳动力的技术水平、吸引懂得种植的技术型人才，是需要共同研究探讨的问题。

1.2、农村经济管理中土地收入零散，难以增收

对于农村经济来说，土地种植收入占绝大部分。在目前的农耕工作中，最突出的问题就是土地的规模经营，在部分农村土地的经营规模不大，不能进行统一地机械化种植，浪费了很多劳动力，劳动强度大，收益却不高，经济效益与劳动强度成反比，严重挫败了农民的生产积极性。同时，目前我国在很多农村补贴政策、脱贫攻坚等正如火如荼的进行，大部分农民不愿意将土地承包出去，同时又不具备科学种植的能力，土地的零散增加了农村居民土地创收的难度，导致增收空间十分狭小。

1.3、农村居民的维权意识低，维权保护不到位

随着国家各项脱贫攻坚政策的落实，许多农民看到了耕种的红利，想要重新耕种，从而出现了很多土地流转纠纷案例，一方面是因为农民自身的法律素养不高，意识淡薄；另一方面也是因为农民团体属于弱势团体，力量不够，难以通过法律的途径解决这些问题和纠纷。

1.4、农村经济管理相关法律法规不健全

农村经济管理是一项任重道远的工作，其包括很多部分和环节，需要相对完备健全的法律法规给予保障。目前，缺乏一套法规来约束、规定、依据来保证农村经济管理工作的顺利开展，同时也缺乏专业的监督机构和人员，致使法律实施的缺口很大。

2、提升农村经济管理水平的对策分析

2.1、提高农村相关工作人员的专业素质

对于农村居民专业性素养不高的.问题，要转换思路，考虑举办各种培训，设计多种培训形式，使劳动技能和科学素质一同结合，全面整合教育资源，可以考虑利用现代化网络培训，开设网络直播、举办讲座、开通微信公众号等，同时可以专设咨询人员，更具有针对性地解决农村的各种问题，及时让农民得到反馈，加大培训的投入，进行各种各样的技能培训，提高农民的综合素质。

2.2、重视农村经济管理工作的发展，解决基础性问题

目前，农村的经济管理工作中存在诸多问题，涉及广大农民的利益。因此，对于这些基础性管理工作，要提高重视度，各部门不仅需要专业性的管理知识，还需要有硬件的支持，例如，相应的电子查询设备、网络电子设施等，同时要给予一定数额的经费支持，全面地推进农村的经济管理工作，使农村的经济管理职能得到充分发挥。

2.3、健全农村经济管理相关法律法规

农村经济管理工作需要以成熟的法律法规为基础，同时各单位也可以根据自身管理的村落的具体法律制度建设情况，建立具有针对性的管理制度，具体包括执法责任制度、农村经济经营管理执法岗位制度等，同时也要建立完备的农村承包合同制度，通过法律法规制度的约束，利用相应的法律法规解决农民之间的矛盾纠纷，使村民有法可依，充分维护自己的合法权益。

2.4、组建专业的农村经济管理领导班子和管理队伍

组建一个专业的团队是重要一环。在确立农村经济管理制度前提下，应在各个乡(镇)配备专业的人员，组建一支专业化、懂体系、懂管理、懂得农村经济现状的领导班子，同时要对这些人员定期进行专业化的培训，提高整体的综合素质。此外，对于领导队伍的编制、绩效等都需要有激励性的作用，这样才能够留住人才，防止人才的流失，在多方的协调下共同努力，促进农村经济的高速发展，解决随时出现的各种问题，为农村经济管理工作出谋划策。

3、结语

农村经济管理是我国构建和谐社会的一个重要部分，是一项基础性的农村建设工程。虽然目前我国的农村经济管理存在很大问题，但是这些问题通过政府的宏观引导，领导班子的微观调控，工作人员的共同努力，一定能够有所改善，只要积极应对，提出相应的解决办法，一定能让农村经济管理工作取得巨大的进展。

参考文献

[1]蒋国志.加强农村经济管理促进农村经济发展[J].吉林农业，2019，(02).

[2]潘静萍.浅谈信息化手段在农村经济管理中的应用[J].中外企业家，2018，(30).

农村经济建设中农业保险的作用及其发挥路径论文

在学习和工作中，大家总免不了要接触或使用论文吧，借助论文可以达到探讨问题进行学术研究的目的。那么，怎么去写论文呢？以下是我帮大家整理的农村经济建设中农业保险的作用及其发挥路径论文，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。

摘要：

农业保险在防范农业生产风险、降低农业灾害损失方面具有重要意义。合理发挥农业保险的作用，可以稳定农业生产，调节农村经济，刺激农业经济增长。基于此，论文重点阐述农业保险对农村经济发展的影响以及相应的对策。

关键词:

农业保险,农村经济发展影响;对策，

1、引言

在改革开放之后，政策与技术成为促进农业发展的双重动力。现代化农业生产已经成为重要趋势。为全面应对农业生产中可能出现的各类自然灾害风险，需要加强农业保险的应用范围，为农民的收入提供坚实的保障。因此研究农业保险对农村经济的影响具有非常重要的现实意义。

2、农业保险对农村经济发展的影响

2.1、农业保险的应用有利于提高农民的收入

作为一个农业大国，我国的农业生产分布范围比较广，传统的农业生产模式下，农民的收入受自然因素的影响较大，对抗自然灾害的能力较弱，靠天吃饭的现象非常严重，这也导致我国的农业生产发展具有一定的不稳定性。就自然天气而言，本身就难以预测，这种不可抗力也是目前农业生产的最大威胁。

由于我国幅员辽阔，不同区域的农业生产受到风俗习惯、土壤情况以及其他方面的影响，因此面临的自然灾害类型也存在一定的差异，南方的涝灾、北方的旱灾，以及沿海地区的台风等都严重威胁着我国的农业生产。近年来由于全球气候变暖，气象变化更加无偿，这为农业经济的稳定发展带来了很大的困难。而通过发展农业保险，可以大大提升农业生产流程的安全性，提升农民抵御风险的能力，改善收入。另一方面，农民的生产有了保障，更能调动农民的生产积极性，对于提升产量、改善土地的利用率都具有重要的实际意义。

2.2、农业保险有利于改变农民的投资方向

在城市经济快速发展的今天，越来越多的农民开始通过进城打工增加自身的收入，这种方式相对于从事农业生产，经济收益更加明显。在当前的快节奏社会中，进城打工也成为农民缓解压力的重要方式。近年来，我国对农村建设工作的重视程度不断提升，农村的面貌开始发生改变，即便如此，村里的年轻人数量依然较少。大量的农村人进城增加了城市的压力，农村青壮劳动力的缺失，也不利于农村和农业经济的发展。这种局面也导致农业技术的革新相对较慢，从而农业生产的有生力量薄弱，导致新技术和创新手段的周期较长，这也在很大程度上限制了我国农业经济的发展。

针对这种情况，通过发展农业保险可以为农民从事农业生产提供更多的保障，从而提升农民的经济收益，帮助农民积极转变投资的方向，促进现代农业生产方式的转变。有了农业保险，农民可以在兴修水利、设备租赁方面进行投资，这有利于带动农业生产的规模化经营发展，从而进一步提升农业生产的效率，提升群众对农业发展信息的掌控，促进我国农业的进一步发展。

3、农业保险助力农村经济发展的对策

农业保险助力农村经济发展应该从以下几个方面入手：第一，完善农业保险的工作机制和法律体系；第二，提升宣传力度，改善农民对保险的认识；第三，构建新型的农业保险模式；第四，加大政府扶持力度，提升保险公司的服务水平；第五，降低保险成本，推动产业的良性发展。

3.1、完善农业保险工作机制和法律体系

在实际工作中，由于农业生产情况复杂，因此农业保险的运作并不简单，对于专业能力有着较高的要求，仅仅依靠市场调节作用，难以发挥农业保险在农村经济发展中的价值。对此，需要结合实际情况进一步完善农业保险的工作机制，并重视法律制度的完善，从而为工作开展提供依据。就农业保险的实施而言，国家已经出台了相应的措施，对于农业保险的经营范围也进行了明确的划分，这对于激发保险公司的工作积极性具有重要的现实意义。

就目前我国农村金融发展状况而言，传统信贷模式已经落伍，必须寻求新的转变和突破，即通过信用投保，实现农村信用体系建设。而且信用投保模式还能解决传统信贷的历史遗留问题，降低信贷过程中的风险，培养并引导信贷参与者养成诚实守信的好习惯，进一步提升农业保险投保人的诚信意识和守信能力。另外，通过对借款人的信用记录进行积累，利用按时还款、日常守信行为等具体表现换取信用积分，以此提高个人信用等级，实现对信贷潮流的引领。最终，随着政府担保体系逐渐退出历史舞台，农业保险投保逐渐实现真正的市场化和商业化，为乡村振兴发展提供助力。

3.2、加强宣传力度，提升农民对农业保险的认识

当前，尽管农业保险在一定程度上为农业生产保驾护航，但部分区域受到经济发展水平和传统观念等因素的影响，群众对于农业保险的认识不够全面，这也导致参保人数不多。为充分发挥农业保险的作用，需要从以下几个方面进行宣传：第一，借助自媒体和传统媒体等工具加大宣传力度，让农民可以通过广播、电视以及互联网等方式了解农业保险的真实情况和作用。第二，基层工作人员需要配合做好线下的宣传工作，从而让农民切实体会到农业保险的内容以及带来的`好处，提升保险意识，能够帮助农民更好地自愿从事保险办理工作。普及农业保险的过程就是保障农民经济收入的过程。

3.3、构建新型的农业保险模式

农业保险的模式众多，在不同的区域，针对不同的农业经营方式，衍生出来的种类繁多。在实际的工作开展过程中，需要充分结合区域的特色和水文气候条件，积极开发多元化的农业保险模式，从而满足人民群众不同区域的不同层次的实际需求。在东北地区，可以推广大灾保险，并做好参保的全覆盖工作。对于不同的农作物在种植过程中可能遇到的风险也会存在差异，因此需要结合现代农业经营的形式和农业经营的需求，创新服务内容，并积极联合政府的政策保障，为群众提供坚实的保障。

3.4、加大扶持力度，提升保险公司的服务水平

由于我国农业地区结构复杂多样，外在风险因素较多，因此在风险概率偏大的区域农业保险的业务开展通常会陷入经营与收益两难的局面。为了鼓励更多的农民参与农业保险，需要政府部门加大扶持力度，并充分发挥政策的优势，激发农业保险公司的经营积极性。另一方面，对于农业保险公司而言应该根据实际情况进行创新，不断提升自身的管理水平和服务能力，从而提升保险的质量，引导群众更好地参保。

对于农业保险内容的设计，应该明确受众群体，保证保险内容的通俗易懂，方便村民理解。另一方面，对于保险合同中涉及到的专业术语应该由专业的人员及时进行讲解，从而帮助民众更好地了解内容。对于农业保险而言，必须以事实为依据，通过现场实地考察，对风险进行评估，从而制定相应的保险条款。保险需要以被保人为中心，确保利益，切实保障农民的收益情况。

3.5、降低保险成本，推动产业的良性发展

尽管我国是农业大国，但我国的农业发展模式不管是在规模上还是在发展质量上相对于美国等发达国家还有很大差距。就目前而言，我国的农业发展处于重要的转型时期，农业保险方面与实际需求之间存在一定的差异，需要面临的问题也有很多，因此需要农业保险持续创新，并大力推广成熟产品，保证农业保险的规模效应，从而为农村经济的发展提供动力。

我国的农业保险还存在一个明显的问题，就是业务与产品之间的分裂，导致机构的盈利受到影响。通过组合创新或者嵌入式的创新方式，不仅能够满足农民的需求，还能有效降低保险的成本，从而拓宽保险业务的渠道。在政府部门和社会多层力量的推动下，充分发挥互联网技术的优势，能够为保险公司提供更多的收益可能。

4、结语

农业保险能够保障农村经济的健康发展，为农民的收入保驾护航。但就当前而言，由于我国的农业生产区域广，不同的区域之间农业生产模式以及面临的风险都存在明显的差异，因此农业保险公司需要根据实际情况，对保险业务和保险内容进行创新，联合政府部门，加大政策扶持，提升服务水平，助力我国农村经济进入新的发展阶段。

参考文献

[1]谢琳乡村振兴战略下农村农业保险对农村经济的功能性分析[J]湖北社会科学2020(08):84-89.

[2]王悦.杨骁张伟科农业保险发展对农村全要素生产率的影响研究--基于空间计量模型的实证分析[J]华中农业大学学报(社会科学版),2019(06):70-77+162-163.

多子小瓜虫感染后草鱼TLR信号通路基因的表达动态2019-12-08农业科技摘要：【目的】明确草鱼Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)信号通路基因在防御多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)感染过程中的免疫作用，为有效防控鱼类多子小瓜虫感染提供理论参考。【方法】以多子小瓜虫感染草鱼后，采用实时荧光定量PCR检测分析在不同时间点(感染后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d)草鱼部分TLRs基因(TLR1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88和TRIF)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及细胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN)在其皮肤和脾脏中的表达动态变化。【结果】草鱼感染多子小瓜虫后，TLR1、TLR2、TLR9、TLR20和TLR21基因在皮肤和脾脏中的表达主要呈上调趋势，TLR4基因在皮肤中主要呈上调表达，在脾脏中则主要呈下调表达;TLR信号通路接头蛋白基因MyD88和TRIF的表达变化趋势明显不同，其中，MyD88基因的表达在感染后第1～3 d均呈显著上调趋势(P<0.05，下同)，而TRIF基因的表达在整个试验过程中绝大多数时间点与对照组无显著差异(P>0.05);IRAK4和IRAK1在皮肤和脾脏中的表达也主要呈上调趋势，但在脾脏中IRAK4在感染后第1 d和IRAK1在感染后第6 h的表达呈显著下调趋势;IL-1β和TNF-α在绝大多数时间点均显著上调，但IFN的表达基本没有变化。【结论】草鱼TLR信号通路中的部分TLRs基因(TL1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白基因(MyD88)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及下游细胞因子(IL-1β和TNF-α)均参与防御多子小瓜虫感染的免疫反应，尤其是在感染早期和中期发挥关键作用。关键词： 草鱼;多子小瓜虫;Toll样受体(TLR);信号通路;基因表达引言【研究意义】Toll样受体(Toll-like receptor，TLR)属于I型跨膜蛋白，是一类重要的模式识别受体，能特异性识别病原相关分子模式(Pathogen-associated molecular patterns，PAMPs)，并通过募集接头蛋白、转导信号及诱导炎性细胞因子等表达而发挥免疫防御作用，既是机体的第一道天然屏障，也是连接先天性免疫和获得性免疫的重要桥梁(何玉洁和潘建平，2017)。因此，研究TLR信号通路基因在病原感染过程中的表达动态，对揭示病原和鱼类间的免疫互作机制及制定有效的防控措施具有重要意义。【前人研究进展】依据接头蛋白的不同哺乳动物TLR信号通路可分为髓系分化因子88(Myeloid differentiation factor 88，MyD88)依赖型和β干扰素TIR结构域衔接蛋白(TIR domain-containing adaptor-inducing IFN-β，TRIF)依赖型(Yuk and Jo，2011)。TLRs在识别相应的PAMPs后，除TLR3外，其他TLRs均以MyD88为接头蛋白，然后招募白细胞介素-1受体相关激酶4(IL-1 receptor-associated kinase 4，IRAK4)和IRAK1，再将信号转导给肿瘤坏死因子受体相关因子6(Tumor necrosis factor receptor-associated factor 6，TRAF6)，TRAF6与转化生长因子β活化激酶1(Transforming growth factor-β-activated kinase 1，TAK1)及其结合蛋白(TAK1-binding proteins，TABs)TAB1和TAB2组合成复合物，从而激活下游的NF-κB和AP-1等转录因子，诱导免疫因子表达，最终启动免疫防御反应(Jiménez-Dalmaroni et al.，2016)。其中，TLR2和TLR4识别细菌的脂肽和脂多糖等;TLR3识别病毒的双链RNA;TLR5识别细菌的鞭毛蛋白;TLR7和TLR8识别病毒的单链RNA;TLR9识别非甲基化的CpG-DNA(Tan and Kagan，2017)。目前，有关TLRs与寄生虫感染的相关性研究仍较少，仅发现TLR2或TLR4可识别利什曼原虫(Leishmania major)(Bec-ker et al.，2003)、刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)(Debierre-Grockiego et al.，2007)和恶性疟原虫(Plasmodium falciparum)(Zhu et al.，2011)的糖基磷脂酰肌醇(Glycosylphosphatidylinositol，GPI)锚定蛋白;TLR9可识别克氏锥虫(Trypanosoma cruzi)非甲基化的DNA(Bafica et al.，2006);TLR11能识别刚地弓形虫的Profilin-like蛋白(Yaro-vinsky et al.，2005)等。至今，已在哺乳动物中发现15种TLRs，而从鱼类中至少鉴定出20种TLRs(范泽军等，2015)。针对鱼类的研究主要集中在TLRs与细菌或病毒感染的相关性方面(Liao et al.，2017)。Li等(2011a，2011b，2012，2016)研究发现，斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的TLR2、TLR9、TLR21、MyD88及IRAK1等广泛参与抵御刺激隐核虫(Cryptocaryon irritans)感染的免疫反应，表明鱼类TLR信号通路基因在防御寄生虫的感染过程中发挥重要作用。【本研究切入点】多子小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)是一种广泛分布的纤毛类寄生性原虫，几乎可感染全部淡水鱼类，引起小瓜虫病(俗称白点病)，导致鱼类死亡或引起细菌、病毒等继发性感染，而造成巨大的经济损失(宋飞彪等，2012;赵飞等，2012)。草鱼(Ctenopharyngodon idella)是我国最重要的水产养殖鱼类之一，约占淡水鱼总产量的20%，但草鱼养殖一直深受小瓜虫病困扰。早期研究发现，草鱼的TRAF6、TAK1、TAB1和TAB2及斑点叉尾鮰(Ictalurus punctatus)的TLR1、TLR2、TLR9和TLR21等TLR信号通路基因参与了抵御多子小瓜虫感染的免疫应答(Zhao et al.，2013a，2013b，2014)，但草鱼TLR信号通路其他基因是否参与并发挥防御多子小瓜虫感染作用等机理尚不清楚。【拟解决的关键问题】以多子小瓜虫感染草鱼后通过实时荧光定量PCR检测分析草鱼的部分TLRs(TLR1、TLR2、TLR4、TLR9、TLR20和TLR21)、接头蛋白(MyD88和TRIF)、信号转导分子(IRAK4和IRAK1)及细胞因子(IL-1β、TNF-α和IFN)在其皮肤和脾脏中的表达动态变化，明确草鱼TLR信号通路基因在防御多子小瓜虫感染过程中的免疫作用，为有效防控鱼类多子小瓜虫感染提供理论参考。1 材料与方法1. 1 试验材料草鱼购自广东省佛山市某养殖场，健康活泼，规格整齐，体重约50 g/尾，在养殖过程中未感染过多子小瓜虫。随机挑取10尾草鱼，镜检鱼鳃和体表均未发现多子小瓜虫或其他寄生虫。草鱼在实验室内的循环流水养殖箱中暂养2周，氧气充足，水温控制在(23±1)℃，每日定时投喂商品饲料2次。多子小瓜虫从患病草鱼上分离获得，采用农业农村部渔用药物创制重点实验室建立的以斑点叉尾鮰为宿主的室内传代系统进行保种传代(Zhao et al.，2013a，2013b，2014)。1. 2 多子小瓜虫幼虫准备在多子小瓜虫传代过程中将体表已显现白点的斑点叉尾鮰置于5 L的塑料烧杯中，发育成熟的包囊将从鱼体上自动脱落，分别用孔径250和75 μm的网筛过滤、收集包囊。将包囊轻轻洗净后转入1 L的玻璃烧杯中，添加少量无菌水，23 ℃孵化20 h即发育成幼虫，再以孔径40 μm的网筛过滤，得到活体幼虫滤液。取10份10 μL的幼虫滤液，显微镜下观察计数，换算出总滤液中的多子小瓜虫活体幼虫数量，用于后续的草鱼感染试验。1. 3 感染试验将120尾草鱼随机平均分成感染组和对照组。感染组的60尾草鱼置于60 L的水桶中，按1∶10000的感染剂量加入多子小瓜虫活体幼虫进行体表感染，感染2 h后将草鱼转至250 L的鱼缸中。采用相同方法处理对照组的60尾草鱼，但不添加多子小瓜虫幼虫。于感染后6 h、12 h、1 d、2 d、3 d、5 d和7 d时分别从感染组和对照组随机取样6尾草鱼。以灭菌刀片刮去草鱼背部中央的鳞片，使用尖头镊子剥离1.0 cm×1.5 cm大小的皮肤，轻轻刮除皮肤内侧肌肉以得到干净的背部皮肤，液氮速冻后-70 ℃保存备用。同时快速采集脾脏冻存备用。1. 4 总RNA提取及cDNA合成采用TRIzol试剂盒(Invitrogen公司)提取草鱼皮肤和脾脏组织的总RNA，以Nanodrop 1000微量紫外分光光度计(Thermo公司)和1.5%琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量。使用RNase-free DNase I(Fermentas公司)去除基因组DNA后，按ReverTra Ace@ Reverse Transcriptase试剂盒(TOYOBO公司)说明反转录合成cDNA，反应程序：42 ℃ 20 min;99 ℃ 5 min;4 ℃ 5 min。合成的cDNA置于-20 ℃冰箱保存备用。1. 5 目的基因片段克隆及测序分析采用Beacon Designer 8.0设计草鱼TLR信号通路基因的特异性引物(表1)。以草鱼脾脏cDNA为模板进行目的基因PCR扩增，反应体系25.00 μL：cDNA模板1.00 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各1.00 μL，10×PCR Buffer(Mg2+)2.50 μL，dNTP Mixture(2.5 mmol/L)2.00 μL，rTaq DNA聚合酶0.25 μL，ddH2O 17.25 μL。扩增程序：95 ℃预变性2 min;95 ℃ 15 s，60 ℃ 15 s，72 ℃ 20 s，进行35个循环;72 ℃延伸5 min。PCR扩增产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳检测后，采用E.Z.N.A? Gel Extraction Kit(OMEGA公司)进行目的条带回收纯化，然后TA克隆至pMD18-T载体上，再转化大肠杆菌DH5α感受态细胞。取100.00 μL菌液凃布于含氨苄青霉素(100 μg/mL)的LB培养基上，37 ℃培养过夜，挑选3个菌落PCR验证呈阳性的克隆送至广州艾基生物技术有限公司测序。1. 6 实时荧光定量PCR检测分析采用实时荧光定量PCR检测感染多子小瓜虫后草鱼皮肤和脾脏组织中TLR信号通路基因的表达动态，以每个时间点各组织的cDNA为模板、β-action为内参基因，在Roche LightCycler480 Real-time PCR Detection System上进行定量检测分析。反应体系10.00 μL：cDNA模板0.40 μL，上、下游引物(10 μmol/L)各0.40 μL，SYBR Green Real-time PCR Master Mix 5.00 μL，ddH2O 3.80 μL。每个样品均设3个重复。扩增程序：95 ℃预变性30 s;95 ℃ 30 s，60 ℃ 15 s，72 ℃ 20 s，进行40个循环，每个循环结束时采集1次荧光信号。采用2-△△Ct法(Livak and Schmittgen，2001)计算目的基因的相对表达量，并以SPSS 22.0进行统计分析。2 结果与分析2. 1 感染多子小瓜虫后草鱼TLRs基因表达的动态变化2. 1. 1 TLR1和TLR2基因的表达动态 草鱼感染多子小瓜虫后，其皮肤和脾脏的TLR1和TLR2基因表达主要呈上调趋势(表2)。在感染后第12 h，TLR1基因在皮肤中开始显著上调表达(P<0.05，下同)，是对照组的3.02倍，至感染后第1和2 d持续上调至对照组的5.38和6.31倍;在脾脏中，TLR1基因在感染后第2和3 d时分别上调2.49和4.69倍，在其他时间点与对照组间无显著差异(P>0.05，下同)。TLR2与TLR1基因的表达变化相似，在皮肤中表现为感染后第1～3 d均显著上调，于感染后第3 d达峰值，为对照组的4.35倍;在脾脏中表现为感染后第2和3 d显著高于对照组，分别是对照组的2.89和5.69倍。2. 1. 2 TLR4基因的表达动态 草鱼感染多子小瓜虫后，TLR4基因在其皮肤和脾脏中的表达变化趋势不同(表2)。在皮肤中，TLR4基因在感染后第12 h上调为对照组的2.82倍，但至感染后第1 d回落到对照组水平，随后其表达又逐渐上调，于感染第3 d达峰值(4.55倍)。而在脾脏中，TLR4基因在感染后第12 h和第1 d的表达量显著下调，仅为对照组的35%和25%;在其他时间点与对照组间均无显著差异。2. 1. 3 TLR9基因的表达动态 草鱼感染多子小瓜虫后，其皮肤中的TLR9基因在感染后第2、3和7 d均呈显著上调表达，于感染后第3 d达峰值(3.35倍);而在脾脏中，TLR9基因除在感染第1 d显著上调2.45倍和感染后第3 d显著下调39%外，其他时间点与对照组间均无显著差异(表2)。推荐阅读：农业经济类论文发表sci难