禽腺病毒检测论文

2.1生产用鸡胚 毒种传代和制备用鸡胚应来源于SPF鸡群。疫苗生产用鸡胚应来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群，并选用9~11日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。2.2 毒种2.2.1 名称和来源生产用毒种为WHO推荐的甲型和乙型流行性感冒病毒株，经检定证明为WHO当年推荐的病毒株或相似株。2.2.2种子批的建立应符合 “生物制品生产检定用菌毒种管理规程”规定。以WHO推荐并提供的流感毒株代次为基础，传代建立主种子批和工作种子批，至成品疫苗病毒总传代不得超过5代。2.2.3种子批检定主种子批应做以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.5项检定。2.2.3.1 鉴别试验血凝素型别鉴定：应用相应（亚）型流感病毒特异性免疫血清进行血凝抑制试验，结果应证明其抗原性与推荐的病毒株相一致。2.2.3.2 病毒滴度应用鸡胚半数感染剂量法（EID50）检查，病毒滴度应不低于6.5LgEID50/ml。2.2.3.3 血凝滴度采用血凝法检测，血凝滴度应不低于1：160。2.2.3.4无菌检查依法检查（附录XII A），应符合规定。2.2.3.5支原体检查依法检查（附录XII B），应符合规定。2.2.3.6 外源性禽白血病病毒检测用相应（亚）型的流感病毒特异性性免疫血清中和病毒后，接种SPF鸡胚细胞，经培养，用酶联免疫法检测培养物，结果应为阴性。2.2.3.7 外源性禽腺病毒检测用相应（亚）型的流感病毒特异性性免疫血清中和病毒后，接种SPF鸡胚肝细胞，经培养，分别用适宜的血清学方法检测其培养物中的I型和III型禽腺病毒，结果均应阴性。2.2.4 毒种保存冻干毒种应于－20℃以下保存，液体毒种应于－60℃以下保存。2.3 单价病毒原液2.3.1 病毒接种和培养于鸡胚尿囊腔接种经适当稀释的工作种子批毒种， 置33～35oC培养48~72小时。一次未使用完的工作种子批毒种，不得再回冻继续使用。2.3.2 病毒收获筛选活鸡胚， 置2~8oC一定时间冷胚后，收获尿囊液于容器内。逐容器取样进行尿囊收获液检定。2.3.3 尿囊收获液检定2.3.3.1 微生物限度检查菌数应小于105CFU/ml，沙门氏菌检测应为阴性（附录XII G）。2.3.3.2 血凝滴度按2.2.3.3项进行， 应不低于1：160。2.3.4 尿囊收获液合并每个收获容器的含单型流感病毒的尿囊液检定合格后可合并为单价病毒合并液。2.3.5 病毒灭活在规定的蛋白质含量范围内进行病毒灭活。单价病毒合并液中加入终浓度不高于0.2mg/ml的甲醛，置适宜的温度下进行病毒灭活，灭活到期后， 每个病毒灭活容器应立即取样，分别进行病毒灭活验证试验，并进行细菌内毒素含量测定。（也可在纯化后或纯化过程中加入适宜浓度的甲醛溶液进行病毒灭活）。2.3.6 浓缩及纯化2.3.6.1超滤浓缩采用离心或其他适宜的方法，将单价病毒合并液进行澄清后，采用超滤法将病毒液浓缩至适宜蛋白质含量范围。浓缩后的病毒液应取样进行细菌内毒素含量测定。2.3.6.2 纯化超滤浓缩后的单价病毒合并液可采用柱色谱法或蔗糖密度区带离心法进行纯化，采用蔗糖密度区带离心法法进行纯化的应用超滤法去除蔗糖。纯化后取样进行蛋白质含量测定。2.3.7病毒裂解应在规定的蛋白质含量范围内进行病毒裂解。将纯化后的单价病毒合并液中加入适宜浓度的裂解剂，在适宜条件下进行病毒裂解。2.3.8裂解后纯化采用柱色谱法或蔗糖密度梯度离心法以及其他适宜的方法进行病毒裂解后的再纯化，采用蔗糖密度区带离心法进行纯化的应用超滤法去除蔗糖。超滤后的病毒液取样进行细菌内毒素含量测定和微生物限度检查， 微生物限度检查菌数应小于10CFU/ml。2.3.9 除菌过滤纯化后的病毒裂解液经除菌过滤后，并加入适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为单价病毒原液。2.3.10 单价病毒原液检定按3.1项进行。2.3.11保存于2～8℃保存。2.4 半成品2.4.1 配制根据各单价病毒原液的血凝素含量，将各型流感病毒按同一血凝素含量进行半成品配制，（血凝素配制量可在30-36ug/ml范围内， 每年各型别流感病毒株应按同一血凝素含量进行配制），可补加适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为半成品。2.4.2半成品检定按3.2项进行。2.5 成品2.5.1分批应符合 “生物制品分批规程”规定。2.5.2分装应符合 “生物制品分装和冻干规程”规定。2.5.3 规格本品为每瓶（支）0.25ml或0.5ml。每1次人用剂量为0.25ml（6个月至3岁儿童用），含各流感病毒株血凝素应为7.5μg ； 或0.5ml（成人及3岁以上儿童），含各型流感病毒株血凝素应为15μg。2.5.4 包装应符合 “生物制品包装规程”规定。

建室以来，实验室科研成果累累：第一，在基因组工程研究方面，完成了最大的动物病毒——我国痘苗病毒天坛株以及禽腺病毒、肠道病毒71等基因组全序列的测定与分析之后，又在国际上首先完成引起我国常见病痢疾的病原菌——福氏痢疾杆菌2a基因组的全序列测定与分析，并有多项重大发现；第二，对丙型肝炎病毒基因组的结构与功能进行了系统研究, 初步阐明了丙型肝炎病毒致癌的分子基础；第三，在国际上首先发现并证明大肠杆菌增强子样序列，并利用这项发现应用于基因工程药物的开发研究,研制成功两种通用性强的新型大肠杆菌高效表达载体，成为国内基因工程室最长用的生物材料之一；第四，在抗病毒研究方面，研制成功基因工程人α型干扰素系列产品，成为我国第一批投放市场的高新技术产品，其中a1b型干扰素系I类新药，属我国首创，用于治疗我国常见病、多发病；在中药抗病毒的研究方面，首次发现中药黄芪的抗病毒感染作用，并阐明了黄芪与干扰素在抗病毒作用上的协同作用。实验室先后获得省部级以上奖项40余项，其中国家科技进步一等奖1项，国家科技进步二等奖7项，国家自然科学二等奖1项，国家发明三等奖1项，国家自然科学四等奖1项，卫生步科技进步一等奖10项；先后获新药证书9个；在国内外包括Cell、Science等著名学术刊物上发表科研论文近500余篇、专著10余册，专利50余项，培养博士研究生百余人。目前从本实验室出国深造的人员有150人左右。多年来，实验室培养了一批优秀青年科技人才，其中突出的有：金奇，金冬雁, 吴小兵等，现均已成为科研工作中的领军人物。金奇研究员担任实验室常务副主任，为973计划“严重传染病防治基础研究”项目首席科学家、863计划生物信息专家组组长等多项要职；荣获国家自然科学奖、国家发明奖及美国“人类健康与服务部部长奖”和James H.Nakano杰出科技论文奖等多项奖励，并获得国家杰出青年科学基金和国家“有突出贡献的中青年专家”等称号。多年来，实验室的研究成就在国内外产生了很大的影响，获得国内外同行的高度评价。在1995年12月Science的“中国科学”专栏中，曾载文对本实验室进行介绍；多年来，全国约有200多个实验室使用了本实验室研制的生物材料；1989年以来国内批准上市的基因新药中有一半使用了本实验室的研究成果，并在华北制药、深圳科兴等一批国内知名制药企业建立了成果转化基地，从而为我国生物高技术产业的发展作出了重要的贡献。