青海师范大学毕业论文

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【摘要】 目的 建立大豆异黄酮苷元含量测定方法。方法 采用HPLC法，Diamonsil C18柱 (250 mm×6 mm,5 μm)，流动相：甲醇-3%磷酸溶液（体积比48∶52），流速7 mL/min，测定波长260 nm,柱温25 ℃。结果 制备的大豆异黄酮苷元总含量为98%;大豆苷元、黄豆黄素和染料木素平均回收率分别为7%、9%和2%，RSD分别为1%、6%和4%。结论 所建立的测定方法重现性好、可靠，可用于3种大豆异黄酮苷元的含量测定。 【关键词】 大豆异黄酮苷元；高效液相色谱法；含量测定 Abstract:Objective To establish an HPLC method for the content determination of isoflavone Methods Isoflavone aglycones were analyzed on a Diamonsil C18 column (250 mm×6 mm，5 μm) A mixture of MeOH-3%H3PO4（48∶52) was used as the mobile phase with a flow rate of 7 mL/ The detecting wavelength was 260 nm at 25 ℃Results The content of isoflavone aglycones in the sample was 98%The average recoveries of genistein,daidzein and glycitein were 2%,7% and 9% with RSD 4%,1% and 6%, Conclusions This method can be used for the quality control of soy isoflavone Key words:soy;isoflavone aglycones； HPLC 大豆异黄酮有广泛的生理活性，具有抗氧化、防癌和抗癌、预防骨质疏松症、保护心血管系统和神经保护等作用。有资料表明，在哺乳动物体内，去除糖基配体后形成的大豆黄酮苷元及其代谢产物均是弱雌激素样活性物质,苷元比糖苷更容易被人体吸收〔1,2〕。大豆异黄酮苷元广泛用于保健品、食品和化妆品等，正受到广泛的关注，因此建立一个稳定、准确的含量检测方法有重要的应用价值。 1 仪器与材料 Dionex P680A高效液相色谱仪，数显恒温水浴锅（江苏省宏华仪器厂），旋转蒸发器(上海亚荣仪器厂)，SH2-D循环水真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司），电子天平（Sartorius）。 染料木素、大豆苷元和黄豆黄素对照品 (购于上海同田生化技术有限公司,纯度均≥99%)，脱脂豆粕（购于山西省曲沃县），AB-8大孔树脂（南开大学化工厂），聚酰胺（浙江省台州市路桥四甲生化塑料厂）；甲醇(色谱纯,英国TEDIA公司)，屈臣氏蒸馏水，其余试剂均为分析纯。 2 方法与结果 1 大豆异黄酮苷元的制备 取豆粕适量，用8倍量（g/mL）体积分数为70％的乙醇溶液浸泡30 min，80 ℃水浴回流提取2次，每次90 min；合并提取液，过滤后回收乙醇、浓缩；上AB-8大孔树脂,以体积分数为50％的乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，浓缩，45 ℃烘干。适量乙醇溶液溶解，拌样上聚酰胺柱，以体积分数为70％的乙醇溶液洗脱，得粗提浸膏，45 ℃烘干。取一定量的粗提物置于圆底烧瓶中，加入4倍量（g/mL）的7%盐酸-乙醇液，80 ℃水浴水解2 h，浓缩，乙醚萃取，挥干乙醚；用适量体积分数为70％的乙醇溶液溶解，石油醚脱脂，用200～300目硅胶拌匀，自然干燥，上硅胶柱，用三氯甲烷-甲醇（体积比6∶1）洗脱，收集洗脱液，挥去溶剂，得大豆异黄酮苷元混合物〔3,4〕。 2 样品溶液的制备 精密称取大豆异黄酮苷元混合物50 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，精密吸取0 mL置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得质量浓度为0570 mg/mL的样品溶液。 3 对照品溶液的制备 分别精密称定大豆苷元、染料木素对照品20 mg、60 mg各置50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，得浓度为264 0 mg/mL的大豆苷元及292 0 mg/mL的染料木素对照品溶液；精密称定黄豆黄素75 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇超声溶解，定容，精密吸取0 mL，至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得111 0 mg/mL的黄豆黄素对照品溶液。4 ℃储存备用。 4 色谱条件〔5～6〕 Diamonsil C18柱 (250 mm×6 mm，5 μm)；柱温25 ℃；流动相：甲醇-3%磷酸溶液（体积比48∶52）；流速=7 mL/min ；测定波长260 nm；进样量：20 μL。 5 线性关系 分别精密吸取上述大豆苷元、染料木素、黄豆黄素对照品溶液 8、5、6 mL置100 mL量瓶中，甲醇定容，得混合对照品溶液Ⅰ。同法制备混合对照品溶液Ⅱ-Ⅵ，浓度见表1，混合对照品HPLC色谱图见图1。 表1 混合对照品溶液中大豆苷元、黄豆黄素、染料木素的质量浓度 （略） T1 Contents of genistein,daidzein and glycitein in the control sampleρ/ 按上述色谱条件依法测定，分别以大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的浓度(μg/mL)对峰面积作回归计算,得回归方程（n＝6）分别为： y=1x+8812，r=9994； y=4x+1372，r=9994； y=6x+894，r=9992。 大豆苷元、黄豆黄素和染料木素分别在112～12 μg/ mL，666 0～66 0 μg/mL,380～80 μg/mL范围内，线性关系良好。 大豆苷元 黄豆黄素 染料木素 图1 对照品HPLC色谱图（略） F1 HPLC chromatogram of reference substance 6 精密度试验 取对照品溶液Ⅲ，重复进样6次，记录色谱图，测定峰面积值，计算RSD值，得大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的RSD分别为59%、 62%和83%。 7 重复性试验 取同一批次大豆异黄酮苷元混合物6份，按“2”项下，制备样品溶液，测定峰面积值，计算RSD值，得大豆苷元、黄豆黄素和染料木素的RSD分别为0%，2%和4%。

王文颖，青海师范大学生命与地理科学学院教师，教授、博士、青联委员、硕士研究生导师、系副主任。自1998年研究生毕业任教以来，一直从事植物学和生态学方向的教学和科研工作。主要承担青海师范大学生物技术专业本科及硕士研究生的《植物生物学》，《生态学原理》，《植物生理学》，《环境生态学》，《普通生物学》，《生态学研究进展》，《植物学》等课程的教学和实验工作，同时还担任了本科毕业生综合实习指导、野外专业见习、毕业论文指导等教学任务。