两种凝集法检测布病抗体的论文

由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻而且时间长，所以布鲁氏菌病的诊断以血清学诊断为主。其原理主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应，用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原)。虎红平板凝集试验（RBPT）灵敏度高，价格便宜，操作方便，检测快速，适于群体布鲁氏菌病的普查。在国际贸易中是牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。检测布鲁氏菌病所用的虎红平板凝集抗原是用抗原性良好的布鲁氏菌菌株经培养，灭活，离心收集菌体用虎红染料染色后，悬浮于乳酸缓冲液中制备而成。试验原理：虎红平板凝集试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于所用的抗原是酸性（）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查的抗体是IgG类，因此提高了反应的特异性。虎红平板凝集试验具体方法如下：一、材料准备1、虎红平板凝集抗原、标准阳性血清、阴性血清由制标单位提供，按说明书使用。2、被检血清应新鲜，无明显蛋白凝块，无溶血和无腐败气味。3、洁净的玻片或玻璃板，其上划分成4cm2的方格。4、吸管或移液器，适于滴加液体。5、牙签、混合棒或火柴杆，供搅拌用。二、操作方法1、实验前，应将血清和抗原在室温放置30-60min。2、将玻璃板上各格标记被检血清号，然后加相应被检血清。3、在被检血清旁滴加虎红平板凝集抗原。4、用牙签类小棒搅动血清和抗原，使之充分混合，在5分钟内观察结果。5、每次试验应设阴性血清、阳性血清对照。三、结果判定1、在阴、阳性血清对照成立的条件下，方可对被检血清进行判定。2、受检血清在4min内出现肉眼可见凝集现象者判为阳性(+)，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性(-)。四、方法评价1、虎红平板凝集试验检测布鲁氏菌病，方法简便、快速、容易操作，适于基层大面积检疫；2、该方法敏感性较好，检查牛的阳性率稍高于绵羊、山羊。3、因为在酸性环境下IgM活性受抑，该法主要是检查IgG类凝集抗体，所以特异性较好，与补体结合试验、二巯基乙醇（2-ME）试验和抗球蛋白试验有较高的吻合率。4、该法受制备抗原时条件影响较大，所以每批制备抗原应予以检查、标化方可应用。

凝集反应（agglutination） 一种血清学反应.颗粒性抗原（完整的病原微生物或红细胞等）与相应抗体结合,在有电介质存在的条件下,经过一定时间,出现肉眼可见的凝集小块.参与凝集反应的抗原称为凝集原,抗体称为凝集素.可分为直接凝集反应和间接凝集反应两类.直接凝集反应 颗粒状抗原（如细菌、红细胞等）与相应抗体直接结合所出现的凝集现象.分为玻片法和试管法.玻片法是一种定性试验方法.可用已知抗体来检测未知抗原.若鉴定新分离的菌种时,可取已知抗体滴加在玻片上,将待检菌液一滴与其混匀.数分种后,如出现肉眼可见的凝集现象,为阳性反应.该法简便快速,除鉴定菌种外,尚可用于菌种分型、测定人类红细胞的ABO血型等.试管法是一种定量试验的经典方法.可用已知抗原来检测受检血清中有无某抗体及抗体的含量.用来协助临床诊断或供流行病学调查研究.操作时,将待检血清用生理盐水连续成倍稀释,然后加入等量抗原,最高稀释度仍有凝集现象者,为血清的效价,也称滴度,以表示血清中抗体的相对含量.诊断伤寒、副伤寒病的肥达氏反应（Widaltest）、布氏病的瑞特氏反应（Wright test）均属定量凝集反应.间按凝集反应 将可溶性抗原（或抗体）先吸附于一种与免疫无关的、一定大小的颗粒状载体的表面,然后与相应抗体（或抗原）作用.在有电介质存在的适宜条件下,即可发生凝集,称为间接凝集反应.用做载体的微球可用天然的微粒性物质,如人（O型）和动物（绵羊、家兔等）的红细胞、活性炭颗粒或硅酸铝颗粒等；也可用人工合成或天然高分子材料制成,如聚苯乙烯胶乳微球等.由于载体颗粒增大了可溶性抗原的反应面积,当颗粒上的抗原与微量抗体结合后,就足以出现肉眼可见的反应,敏感性比直接凝集反应高得多.

待测血清中抗布氏杆菌抗体与胶乳试剂相遇，发生抗原-抗体反应，出现肉眼可见的凝集反应。