碳水化合物研究方法论文

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问题一：有关营养学小论文，平衡膳食，养生之类的都行 （一）主题的写法[2] 毕业论文只能有一个主题（不能是几块工作拼凑在一起），这个主题要具体到问题的基层（即此问题基本再也无法向更低的层次细分为子问题），而不是问题所属的领域，更不是问题所在的学科，换言之，研究的主题切忌过大。因为涉及的问题范围太广，很难在一本硕士学位论文中完全研究透彻。通常，硕士学位论文应针对某学科领域中的一个具体问题展开深入的研究，并得出有价值的研究结论。 （二）题目的写法 毕业论文题目应简明扼要地反映论文工作的主要内容，切忌笼统。由于别人要通过你论文题目中的关键词来检索你的论文，所以用语精确是非常重要的。论文题目应该是对研究对象的精确具体的描述，这种描述一般要在一定程度上体现研究结论，因此，我们的论文题目不仅应告诉读者这本论文研究了什么问题，更要告诉读者这个研究得出的结论。 （三）摘要的写法 毕业论文的摘要，是对论文研究内容的高度概括，其他人会根据摘要检索一篇硕士学位论文，因此摘要应包括：对问题及研究目的的描述、对使用的方法和研究过程进行的简要介绍、对研究结论的简要概括等内容。摘要应具有独立性、自明性，应是一篇完整的论文。 （四）引言的写法 一篇毕业论文的引言，大致包含如下几个部分：1、问题的提出;2、选题背景及意义;3、文献综述;4、研究方法;5、论文结构安排。 问题的提出：讲清所研究的问题“是什么”. 选题背景及意义：讲清为什么选择这个题目来研究，即阐述该研究对学科发展的贡献、对国计民生的理论与现实意义等。 文献综述：对本研究主题范围内的文献进行详尽的综合述评，“述”的同时一定要有“评”,指出现有研究成果的不足，讲出自己的改进思路。 研究方法：讲清论文所使用的科学研究方法。 论文结构安排：介绍本论文的写作结构安排。 “第2章，第3章，……，结论前的一章”的写法是论文作者的研究内容，不能将他人研究成果不加区分地掺和进来。已经在引言的文献综述部分讲过的内容，这里不需要再重复。 （五）结论的写法 结论是对论文主要研究结果、论点的提炼与概括，应准确、简明，完整，有条理，使人看后就能全面了解论文的意义、目的和工作内容。主要阐述自己的创造性工作及所取得的研究成果在本学术领域中的地位、作用和意义。同时，要严格区分自己取得的成果与导师及他人的科研工作成果。 问题二：如何做到膳食平衡的5000字论文 太巧了，我有篇类似的要不要。通常状况下，一篇论文的定论不也许只是局限于对已有文献的回忆，由于假如这么的话，为了补偿文献在实证研讨上的缺乏，论文需求到达一个更高层次的自创性考虑。因而，文献总述通常只是是（又一次的）合适十分杰出的学生或经验丰富的研讨者来挑战的。 问题三：求一篇论文 论膳食平衡与健康 平衡膳食是指同时在四个方面使膳食营养供给与机体生理需要之间建立起平衡关系，即：氨基酸平衡，热量营养素构成平衡，酸碱平衡及各种营养素摄入量之间平衡，要不缺、不偏、不过、不乱，只有这样才有利于营养素的消化、吸收和利用。如果关系失调，也就是膳食不适应人体生理需要，就会对人体健康造成不良影响，甚至导致某些营养性疾病或慢性病。 （1）氨基酸平衡 食物蛋白质营养价值的高低，很大程度上取决于食物中所含的8种必需氨基酸的数量及比例，只有数量与比例同人体的需要接近时，才能合成人体的组织蛋白质。反之则会影响食物中蛋白质的利用。世界卫生组织提出了一个人体所需8种必需氨基酸的比例，比例越与之接近，生理价值越高。生理价值接近100时，唬100%被吸收，就称为全部氨基酸平衡。能达到氨基酸全部平衡的蛋白质，称之为完全蛋白质。利用这个标准可以对各种食物的蛋白质进行氨基酸评分。鸡蛋、人奶的氨基酸比例与人体极为接近，因此可称为氨基酸平衡的食品。而多数食品均属氨基酸构成不平衡，所以蛋白质的营养价值就受到影响。如玉米中亮氨酸过高影响了异亮氨酸的利用，小米中精氨酸过高，影响了赖氨酸的利用。因此以植物性为主的膳食，应注意食物的合理搭配，纠正氨基酸构成比例的不平衡。如将谷类与豆类混食，制成黄豆玉米粉、黄豆小米粉等，可提高蛋白质的利用率和营养价值。 食物蛋白质氨基酸构成评分 食物 氨基酸构成评分 人奶 100 鸡蛋 100 牛奶 95 黄豆 74 大米 67 花生 65 小米 63 小麦 53 芝麻 50 （2）热量营养素构成平衡 碳水化合物、脂肪、蛋白质均能给机体提供热量，故称为热量营养素。平衡膳食的关键不仅取决于这三大营养素的摄入量，也取决于它们之间比例的平衡。一般认为，人体热能的60-70%来自于碳水化合物，10-15%来自于蛋白质，20-25%来自于脂肪。按照这种组成比例，并考虑到不同营养素产生能量之区别（1克蛋白质或糖可产热4千卡，1克脂肪可产热9千卡），食物中三大热能营养素摄入量的比例为：碳水化合物∶蛋白质∶脂肪=6∶1∶。 当膳食中脂肪热量提供过高时，将引起肥胖、高血脂和心脏病。蛋白质热量提供过高时，则影响蛋白质正常功能发挥，造成蛋白质消耗，影响体内氮平衡。相反，当碳水化合物和脂肪热量供给不足时，就会削弱对蛋白质的保护作用。三者之间是互相影响的，一旦出现不平衡，将会影响身体的健康。 此外，要注意一日三餐热量的合理分配，早餐占30%，午餐占40%，晚餐占30%。 （3）各种营养素摄入量间的平衡 各种营养素之间存在着错综复杂的关系，并且不同的生理状态、不同的活动，营养素的需要量也有所不同，因此中国营养学会制定了各种营养素的每日供给量。我们膳食中所摄入的各种营养素在一定的周期内，保持在标准供给量上下误差不超过10%的范围。这种相互间的比例，即可称为营养素间的基本平衡。 根据“平衡膳食宝塔”，我们知道每人每天应吃（以生食计算）谷物300~500克，蔬菜水果为400~500克和100~200克，鱼、禽、肉、蛋等动物性食物125克（鱼虾类50克、禽肉50~100克、蛋类25~50克），奶类食物100克，豆及豆制品50克，油脂类不超过25克。 （4）酸碱平衡 正常情况下人的血液由于自身的缓冲作用，p H值保持在之间。人们食用适量的酸性食品和碱性食品，将会维持体液的酸碱平衡，但食品若搭配不当，则会引起生理上的酸碱失调。 常见的酸性食品有：蛋黄、大米、鸡肉、鳗鱼、面粉、鲤鱼、猪肉、牛肉、干鱿鱼、啤酒、花......>> 问题四：合理营养、平衡膳食对人体健康的重要性 下“排毒”之风盛行，书店里至少有十本以上“排毒”经，报纸上美眉明星秀“排毒”，网络上更是风起云涌说“排毒”。其实“排毒”风初起时，是个别没有接受过医学教育，或没有接受过正规营养学教育而自称“营养学家”的人来讲营养，说“排毒”。有些媒体为了提高收视率，吸引观众的眼球，为“排毒”推波助澜，给这些“另类”的人士戴上“国际著名专家”、“营养学博士”的头衔。不知就里的百姓以为来了真正的专家，为他们带来了福音。于是乎“排毒”就是养生，“排毒”就是保健。人人都有“毒”，“排毒”似乎成为健康的灵丹妙药。时下，有些接受过正规医学教育的中西医学专家，也参加到宣传“排毒”的行列里，使我很为纳闷。四月我曾在上海电视台新闻娱乐频道的“陈蓉博客”节目中有幸参与关于“排毒”的辩论，近期看过的“排毒”书有10多本，网上浏览的“排毒”信息有数千条，颇有感慨，直接的感觉就是“排毒”风扰乱了人们的视听。在一片“排毒”声中，“合理营养，平衡膳食，促进健康” 的呼吁被湮没了。 其实，从当年：某保健品厂商提出清除“体内垃圾”开始，到如今的 “毒”、“毒素”横行，以至于类似“今天您排毒了没有”的广告语越来越深入人心，直至危言耸听，危害大众。究竟所谓的“毒”指的是什么呢？中西医对人体内毒素的解释，一言以蔽之，就是人体内的代谢产物。时至今日它还应包括：外源毒素，即侵入人体内的细菌、病毒等微生物；被食人体内的瓜果蔬菜上残存农药与环境污染导致人体内重金属超标。此外，还有精神毒素，因现代人的生活压力，引起体内代谢产物增多并蓄积，而可能引起危害。其中最重要的就是人体自身代谢产物，尤其是蛋白质代谢产生的氨和含氮化合物，如肌酐、尿素氮、尿酸等。 那么，何谓“排毒”呢？人体绝大部分毒素来自体内自身的新陈代谢，产生出各种各样人体不需要的废物。而排毒就是将这些废物排出体外，如体内新陈代谢产生的废物通过粪便排出；尿素、尿酸、肌酐通过肾脏以尿液形式排出；皮肤通过发汗，排出某些毒素及多余的水分；此外，呕吐、呼出气息、分泌唾液等都可排出毒素。人体本身就具有强大的“排毒” 能力，排便、排尿和出汗就是“排毒”。绝大多数情况下，只要人体自身机能运转正常，完全可以依赖自身的“排毒”机能，将毒素基本排出体外，无需借助外力来“排毒”。如果确实需要通过外力“排毒”，一定要找出“毒”在何处，然后根据自身具体状况，在医生指导下有针对性地进行 “排毒”，且要量力而行。 人体可自行完成排毒，而且所谓的外力排毒也并不是人人适用的。如 “洗肠”排毒对于便秘、结肠炎、腹胀、胀气及急性粪石阻塞等，有一定的治疗和保健作用。但是，如果长期清洗大肠，会使营养随着清洗而冲出，从而使营养得不到很好的吸收。况且，多次“洗肠排毒”，大肠排便功能可能会形成对人为水洗的依赖性，后果不容乐观；一旦破坏肠内正常菌群的生态平衡，将会成为新的健康隐患。此外，患有严重心脏病、高血压、肛周病及贫血、前期怀孕和刚刚接受手术的人是不适合洗肠的。再如服用药物通便“排毒”，不是治本之方，这类药物中或多或少都含有大黄的成分，大黄含有多量鞣质，小剂量不仅没有泻下作用，反而呈收敛作用。 有关专家认为，大黄的主要作用是消炎，也有一定的泻下作用，但绝对不能长期服用，这类中约在某种程度上像毒品一样，会“成瘾”，产生依赖，一旦停药，就会出现继发性便秘。另外，长期服用大黄会抑制自身的免疫力。有的人吃大黄还会产生副作用，表现为腹痛、轻度恶心等。如果长期依赖泻下方式来排毒，久而久之就有可能影响人体对某些营养的吸收，造成贫血等不良后果。 在很多保健品......>> 问题五：合理营养、平衡膳食对人体健康的重要性 合理营养、平衡膳食对人体健康是非常重要的，营养不均衡，人的机体容易出问题，身体容易有毛病，这样疾病就应运而生了。 问题六：求一篇以平衡膳食为主题不少于800字的小论文 要自己写的不要网上复制下来的 答完奖励再追加20 100分 人生无涯。显然，健康就是人的一切。有人说健康是1，财富、事业、爱情等都是这个1后面的0，没有了1，再多的0都成就不了人生。因此，科学饮食，健康生活成了我们当今社会的一个重要话题。我们正处于生长发育的重要年龄阶段。从小处来说，科学饮食关系到我们大家的健康成长与家庭的幸福,我们不能成为职场的“草莓族”――那些只有光鲜的外表，质地却绵软无力，体质与心理都没有抗压力；从大处来讲，我们是未来社会建设的主力军，科学饮食关系到今后国民素质总体水平的提高，乃致于体现到综合国力。 中国文化博大精深，有“五谷为养”的蒸煮文化；有“医食同源”的食疗保健文化；还有面食文化、米食文化、豆腐文化、粥文化、茶文化、酒文化等等，“民以食为天，食以安为先”，我们大家都要注重科学饮食，食以善人，食以养人，而不是食以伤人。 可是，我们可以看到，无论春秋冬夏，用餐前后很多同学拿着碳酸饮料在喝。每到就餐时，都可看到许多人在泡方便面，香气四溢。 还有一些同学买外面的小贩用发泡塑料装着的外卖。在校门外的大路边，在满是尘土的路旁，津津有味地吃着路边烧烤。到小店用元或1元钱买来一、两包香气扑鼻的零食在吃。在早上寝室关门的最后五秒钟，冲出寝室，不吃早餐，在两节课后，纷拥到超市以零食充饥。这就是“食以伤人”的行为。 健康是人的基本权利，是人生最宝贵的财富之一；健康是生活质量的基础；健康是人类自我觉醒的重要方面；健康是生命存在的最佳状态，有着丰富深蕴的内涵。我们每个人的生活习惯都不同，健康的生活方式有利于预防疾病，延长寿命，但是，许多人并不懂得珍惜自己的健康，没有完全做到对社会、对家庭、对个人的健康负责，而是沉溺于不良的生活和行为方式之中，使自身健康遭受损害。为此，世界卫生组织提出并向全世界推广健康的生活方式，也就是健康的四大基石：合理膳食、适量运动、戒烟限酒、心理平衡。专家得出了这样一个公式：健康=（情绪稳定+运动适量+饮食合理）/（懒惰+嗜烟+嗜酒），做好了这几个要求，健康自然就不会是那么困难的事情了。 让“科学饮食，健康生活”深入人心，从思想转变为行为，只有形成共识与舆论，才能使“科学饮食，健康生活”这样一种温情而上进的氛围弥漫在校园中。控制金钱，可以得到财富；控制餐饮，可以得到健康；控制情绪，可以得到幸福，学会控制，可以得到更多！ 作为一个单位的餐饮工作者，常常遇上诸如吃什么才更健康之类的问题，那么我们究竟应该吃什么，怎么吃？这里面有一个食物配比关系。即在人体的生理需要和膳食营养供给之间建立平衡的关系，就形成平衡膳食。 一、 平衡膳食，科学用餐是基础 随着生活水平的提高，都市中高血压、高血脂、高血糖、高血粘稠度等所谓“四高”患者近年来呈大幅度攀升趋势，且日趋年轻化。我国的“四高”还普遍呈现出来的一个症状，就是体重增加造成肥胖症。目前，对于都市上班族来说，如何科学合理地安排一日三餐已经是个非常重要的话题。 1、早餐：给你一天好开始 早餐对于身体健康的重要性大多数人都清楚，但现代都市人生活工作节奏加快，早餐很容易被一些上班族忽视。特别是一些年轻人，对早饭的重视程度是远远不够的。因为一天的工作和学习大多集中在上午，需要消耗大量脑力和体力，所以在生活方式上应把早餐放到较为重要的位置。 一般情况下，上班族要依靠早餐提供足够的热量和营养素来完成从早晨到中午之间三四个小时的工作。如果只是短时间内不吃早餐，还看不出来对身体所所造成的影响，如果长时间空腹开始上午的工作和学习，那就会对身体造成伤害了。 那么早餐应该怎么吃呢？虽然人们的年龄和各自的体质状......>> 问题七：关于膳食与营养健康的论文 健康与长寿是人类永恒的主题，千百年来当我们询问什么是健康的时候，大多数人会毫不犹豫的说：“健康就是没有疾病”。但是世界卫生组织（World Health Organization,简称WHO）给“健康”所下的定义是：“健康是指一个人在生理、心理及社会适应等个方面都处于完满的状况，而不仅仅是指没有疾病或不虚弱而已”。短短的两句话为我们展示了一个全新的健康理念。当我们了解了新的健康理念的时候，我们还应该知道我们的寿命和疾病是怎么样的关系呢？ 那么人的生理寿命应该是多大岁数呢？生物学的原理，哺乳动物的寿命是它生长期的5-6倍。人的生长期是用最后一颗牙齿长出来的时间（20-25岁）来计算，因此人的寿命最短100岁，最长150岁，公认的人的正常寿命是120岁。那为什么绝大多数人迄今都活不到120岁呢？这是由自己“不能控制主宰”的衰老进程速度和自己“可以控制主宰”的“自律、养生、保健”可以延缓衰老进程速度这两点来决定的。世界卫生组织最近提出：每个人的寿命长短，大部分取决于自己如何控制。而取决于遗传因素仅15%，社会因素仅10%。所以说，人如果懂得善自珍重和保养，就能享受健康和长寿。 那营养含义又是什么呢？ “营”就是谋求的意思，“养”是养生的意思，合起来就是谋求养生，具体地说，营养就是生命体不断地从外界摄取所需物质以维待生命活动的过程。对人来说，营养就是从外界摄取食物，经过消化吸收利用食物中身体需要的物质以维持生命活动的整个过程，这些维持身体正常生长发育新陈代谢所需的物质，叫做“营养素”。 雪雪我考营师的论文不要照搬目前所知，人体所需营养素有42种，可分成6大类，即蛋白质、脂肪、碳水化合物、矿物质、维生素、水。近年来，有些学者认为膳食纤维也是一类营养素。 营养素在人体内的功能各不相同。大致可以分为三个方面。 1． 供给生命活动所需能量和维持体温 2． 构成和修补营养的论不要身体组织 3． 作为调节物质，如同机器中的润滑油一样，维持身体的各种正常生命活动。 当今世界营养与健康有关的人类疾病集中在两个方面，其中一个就是营养素摄入不足或利用不良所致的营养缺乏，其中主要是微量营养素（包括微量矿物质元素和维生素）缺乏。目前全世界约有20亿人处于微量营养素缺乏状态，约占世界人口1/3雪雪我考养师的论文不要照搬。其次是与营养素摄入过剩和（或）不平衡有关的各种慢性非传染性疾病。国际权威专家认为，约1/3的癌症的发生与膳食有关。心脑血管病，糖尿病等慢性病与膳食营养的关系密切。 1、蛋白质 蛋白质是所有生物细胞的基本构成物质，它由20种基本氨基酸组成，其中有9种人体内不能合成而必须从食物中获取的氨基酸，他们是构成蛋白质的基本单位。人体是由无数细胞组成的，蛋白质是主要部分。它不但是人类机体的主要构成物质，而且还是构成人类体内各种重要生命活性的物质，所以体内的蛋白质的种类数以千计，其中包括人类赖以生存的无数酶类，多种作用于人体代谢活动的激素类，抵御疾病侵袭的各种免疫物质类，以及各种微量营养素的载体，还包括构成人体神经传递介质，调节人体正常渗透压和多种体液的组成等。 缺乏蛋白质是可以致命的。如果丢失体内蛋白质20%以上，生命活动就会被迫停止，这种情况见于久病的恶液质病人。常见的蛋白质缺乏症状为代谢率下降，生命变的脆弱易生病，远期效果在器官上的损害是肯定的。蛋白质的缺乏往往又与能量的缺乏共同存在，常见的有儿童的生长发育迟缓、体重下降、淡漠、易激惹、贫血以及干瘦或水肿，并因为易感染而继发疾病。 2、维生素 维生素是维持人体生命过程所必需的一类......>> 问题八：你知道合理膳食的意义吗？ 饮食与健康的关系饮食（又称“膳食”）是指我们通常所吃的食物和饮料。所有的食物都来自植物和动物。人们通过饮食获得所需要的各种营养素和能量，维护自身健康。合理的饮食充足的营养，能提高一代人的健康水平，预防多种疾病的发生发展，延长寿命，提高民族素质。不合理的饮食，营养过度或不足，都会给健康带来不同程度的危害。饮食过度会因为营养过剩导致肥胖症、糖尿病、胆石症、高脂血症、高血压等多种疾病，甚至诱发中瘤，如乳腺癌、结肠癌症等。不仅严重影响健康，而且会缩短寿命。饮食中长期养素不足，可导致营养不良，贫血，多种元素、维生素缺乏，影响儿童智力生长发育，人体抗病能力及劳动、工作、学习能力下降。怀孕期营养不良可引起流产、早产、甚至畸形。饮食的卫生状况与人体健康密切相关，食物上带有的细菌、霉菌及毒素和有毒化学物质，随食物进入人体，可引起急、慢性中毒，甚至可引起恶性肿瘤。总之，饮食得当与否，不仅对自身的健康和寿命影响很大，而且影响后代的健康

PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!

技术的研究进展

摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。

关键词 PCR技术;研究进展;应用

中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02

PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。

1 PCR技术原理

PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。

2 PCR技术的分类

在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。

实时荧光定量PCR技术

1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。

荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。

多重PCR技术

多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。

在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。

单分子PCR技术(SM-PCR)

单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。

单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。

3 PCR技术的应用

PCR技术在水产上的应用

基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。

PCR技术在微生物检测上的应用

1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。

4 展望

传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。

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