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大鼠急性肾脏缺血再灌注后处理动物模型的建立 【摘要】 目的：建立肾脏缺血后处理动物模型 方法：将40只SD大鼠随机分为对照组、缺血再灌注组（IR组）和3个缺血后处理组（IPO1，IPO2，IPO3组），分别制作动物模型 IR组在同时夹闭双侧肾动脉45 min后恢复血供，IPO1，IPO2和IPO3组在肾缺血45 min后分别采用不同的后处理方法，其中IPO3组采用反复10次再灌注20 s-缺血20 s的后处理方法 恢复血供24 h后留取各组大鼠静脉血标本及肾组织，检测肾功能指标，光镜下观察肾组织形态学变化并对肾小管损伤程度进行评分 结果：IPO3组血尿素氮为（9±2） mmol/L，血肌酐为（232±49） μmol/L，肾小管损伤程度评分为382± 和IR组相比，IPO3组的血尿素氮、血肌酐及肾小管损伤程度评分均明显降低（P<01），肾组织损伤明显减轻，其余两个缺血后处理组与IR组相比差异无统计学意义（P>05） 结论：在急性肾脏缺血后，采用IPO3组的方法可以减轻急性肾脏缺血再灌注损伤，从而成功建立大鼠急性肾脏IRI的后处理动物模型 【关键词】 缺血后处理 0引言 急性肾脏缺血再灌注损伤（ischemia reperfusion injury，IRI）是一种常见的临床病理生理过程，多见于低血容量性休克、急性肾动脉阻断以及肾脏移植等情况，可以造成急性肾衰竭或使移植肾功能延迟恢复 因此，如何有效防止因急性肾脏IRI而导致的各种急慢性肾脏疾病是一个亟待解决的问题 2000年，陶凌等［1］在国内首先证实了缺血后处理（ischemic postconditioning，IPO）对急性心肌缺血再灌注兔心脏具有保护作用，此后，更多研究者［2-4］把研究对象拓宽到不同物种和不同器官，建立了IPO动物模型，并对IPO保护作用机制进行了探讨 但是，肾脏IPO是否同样具有对急性肾脏IRI的保护作用尚不清楚 我们在大鼠急性肾脏IRI模型基础上，探讨建立肾脏IPO大鼠模型的方法 1材料和方法 1材料健康雌性SD大鼠40只，体质量（236±10）g（第四军医大学实验动物中心），动物许可证号SCXK（军2002005），标准饲料喂养，正常饮水，普通光照 血尿素氮、血肌酐试剂盒（化学法）（南京建成生物工程研究所）；721分光光度计（上海精密科学仪器公司）；光学显微镜（日本Olympus公司） 2方法 1动物分组与模型制作将SD大鼠随机分为5组，每组8只 ①缺血再灌注组（IR组）：参考Basile等［5］的方法进行双侧肾脏缺血再灌注，建立缺血再灌注引起的急性肾衰竭的动物模型 将大鼠用30g/L戊巴比妥腹腔注射麻醉，去毛、固定，沿上腹部正中线逐层切开皮肤、腹直肌及腹膜，先后在结肠脾区及结肠肝区位置暴露左、右肾，游离左、右肾蒂，用玻璃分针小心分离出左、右肾动脉，然后用血管夹同时将双侧肾动脉夹闭，45 min后同时松开双侧血管夹，恢复双侧肾脏血供 ②缺血后处理1组（IPO1组）：各缺血后处理组的手术方法基本同IR组 在缺血45 min后用血管夹同时给予双侧肾脏反复5次的恢复血供3 min-阻断血供3 min处理（即缺血后处理），再恢复血供 ③缺血后处理2组（IPO2组）：在缺血45 min后用血管夹同时给予双侧肾脏反复5次的恢复血供20 s-阻断血供20 s处理，再恢复血供 ④缺血后处理3组（IPO3组）：在缺血45 min后用血管夹同时给予双侧肾脏反复10次的恢复血供20 s-阻断血供20 s处理，再恢复血供 ⑤对照组（S组）：手术方法基本同IR组，但仅分离出大鼠双侧肾动脉，不进行夹闭 2标本留取在末次恢复肾脏血供24 h后将大鼠用30 g/L戊巴比妥腹腔注射麻醉，固定，分离下腔静脉，用注射器采血2～3 mL，用于血液生化指标检查；然后用冰生理盐水经肾动脉对肾脏进行灌注直至肾脏发白，取下双肾，留取部分组织做光镜检查 3指标观察①肾功能：采用化学比色法检测血尿素氮及血肌酐 ②肾脏组织形态学：部分肾组织用100 mL/L甲醛固定，常规脱水、包埋、切片后，行HE和PAS染色，光镜下观察形态，参考Paller等［6］的方法进行评分，每只大鼠肾组织随机选择10个无重叠视野（×200），每个视野下随机选择10处肾小管，共按100个肾小管计分，分数越高表示肾小管损伤程度越严重 统计学处理：所得数据采用x±s表示，采用完全随机设计的单因素方差分析（ANOVA），多组之间的两两比较采用LSDt检验，应用SPSS 0软件进行统计学处理，以P<05为差异有统计学意义 2结果 1血尿素氮及肌酐与S组相比， IR， IPO1， IPO2， IPO3组的血尿素氮及血肌酐均显著增高（P<01） 与IR组相比，IPO1组的血尿素氮和血肌酐略有增高、IPO2组略有降低，但均无统计学意义（P>05），IPO3组的血尿素氮和血肌酐均明显降低，差异有统计学意义（P<01，表1） 表1各组SD大鼠血尿素氮、血肌酐及肾小管损伤程度评分的比较（略） 2肾脏组织形态学的变化 1肾小管损伤程度的评分与S组相比，IR，IPO1，IPO2，IPO3组的肾小管损伤程度差异有统计学意义（P<01） 与IR组相比，IPO1组的肾小管损伤程度更重（P<05），IPO2组的肾小管损伤程度略轻，但无统计学意义（P>05），IPO3组的肾小管损伤程度明显减轻（P<01，表1） 2肾脏组织形态学改变在光镜下S组大鼠肾组织结构正常，肾小管、肾间质未见明显病理改变（图1A） 经过再灌注24 h后，IR组大鼠肾组织中可见间质水肿，肾小管上皮细胞刷状缘消失，大量上皮细胞脱落、坏死，基底膜裸露，管腔明显扩张，管腔内可见大量管型（图1B） IPO3组大鼠肾组织中可见间质轻度水肿，肾小管上皮细胞扁平，部分刷状缘脱落消失，部分管腔扩张，可见少量管型，相对IR组病理改变明显减轻（图1C） 图1各组SD大鼠肾脏形态学改变PAS ×200 略 3讨论 1986年，Murry等［7］发现在急性缺血再灌注出现之前对心脏进行反复多次的短暂缺血再灌注（即缺血预处理）可以减轻心脏的IRI，此后，Islam等［8］证实了预处理对肾脏急性IRI同样有保护作用 然而在临床中，如果一旦发生IRI，则预处理难以实施，因此，研究在缺血后对再灌注进行处理更具有实用价值 2000年，我国学者［1］首先证实了IPO对急性心肌IRI具有保护作用，此后，Zhao等［2］和Kin等［9］的研究分别证明了IPO可以减轻犬和大鼠心脏IRI 不仅在心脏，随后的一些研究针对肝脏［3］、脑［4］等组织进行IPO，证实对其相应器官的IRI也可产生保护作用，并对保护作用机制进行了探讨 但是，以往的国内外众多研究并未涉及到肾脏器官，而且针对大鼠心脏等器官的研究中，单次后处理的时间和后处理的循环次数也不尽相同［10］，因此，在开展针对肾脏IPO作用效果及作用机制的研究之前，首先需要建立成功的大鼠肾脏IPO模型 在国外许多大鼠缺血再灌注的急性肾衰模型研究［5, 11］中，都将肾脏缺血时间限定在45 min，我们在本研究中同样将缺血时间限定在45 min，通过预实验成功复制了大鼠急性肾脏IRI模型 Yang等［12］通过对研究发现，如果在开始再灌注10 min后再进行后处理将丧失对IRI的保护作用，更多的研究［9,13］发现，如果在开始再灌注1 min之后再进行后处理，同样会使其对心肌IRI的保护作用丧失 最近，Tang等［10］的研究显示，不同的后处理循环次数和心肌梗死面积有关，单次后处理时间过长、后处理循环次数过少都有可能限制其心肌保护作用的发挥 因此，我们在成功复制了大鼠急性肾脏IRI模型的基础上，重点针对单次后处理的时间和后处理的循环次数进行了研究，以期成功建立大鼠急性肾脏IRI的后处理动物模型 我们在实验中对大鼠肾脏缺血后采用了3种不同的后处理方式，从功能学和形态学角度对后处理的效果进行了分析，以便选择合适的肾脏缺血后处理动物模型 结果显示，相对于IR组，采用反复5次恢复血供3 min-阻断血供3 min的后处理（IPO1组）并不能减轻急性肾脏IRI，反而可能加重损伤；采用反复5次恢复血供20 s-阻断血供20 s的后处理（IPO2组）能使肾功能指标改善，但无统计学意义 而采用反复10次恢复血供20 s-阻断血供20 s的后处理组（IPO3组）和IR组相比，肾功能指标明显改善，肾组织中未见肾小管上皮细胞脱落和基底膜裸露，间质水肿、刷状缘消失、管腔扩张、管型等改变也较IR组轻，对肾小管损伤程度评分的分析同样支持上述结果 综上所述，在急性肾脏缺血后及时采取反复10次的短暂（恢复血供20 s-阻断血供20 s）后处理，可以减轻急性肾脏IRI，从而成功建立大鼠急性肾脏IRI的后处理动物模型，为进一步研究IPO对大鼠肾脏的保护作用机制奠定了基础 【参考文献】 ［1］ 陶凌, 李源, 高峰,等 缺血后处理对急性心肌缺血再灌注兔心脏的保护作用［J］ 第四军医大学学报, 2000, 21(6): S116-S ［2］ Zhao ZQ, Corvera JS, Halkos ME, et Inhibition of myocardial injury by ischemic postconditioning during reperfusion: comparison with ischemic preconditioning［J］ Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2003, 285(2):H579-H ［3］ Sun K, Liu ZS, Sun Q Role of mitochondria in cell apoptosis during hepatic ischemiareperfusion injury and protective effect of ischemic postconditioning［J］ World J Gastroenterol, 2004, 10(13): 1934- ［4］ Danielisova V, Nemethova M, Gottlieb M, et The Changes in Endogenous Antioxidant Enzyme Activity After Postconditioning［J］ Cell Mol Neurobiol, 2006, 26(78):1179- ［5］ Basile DP, Donohoe D, Cao X, et Resistance to ischemic acute renal failure in the Brown Norway rat: a new model to study cytoprotection［J］ Kidney Int, 2004, 65(6):2201- ［6］ Paller MS, Hoidal JR, Ferris TF Oxygen free radicals in ischemic acute renal failure in the rat［J］ J Clin Invest, 1984, 74(4): 1156- ［7］ Murry CE, Jennings RB, Reimer KA Preconditioning with ischemia: a delay of lethal cell injury in ischemic myocardium［J］ Circulation, 1986, 74(5):1124- ［8］ Islam CF, Mathie RT, Dinneen MD, et Ischaemiareperfusion injury in the rat kidney: the effect of preconditioning［J］ Br J Urol, 1997, 79(6):842- ［9］ Kin H, Zhao ZQ, Sun HY, et Postconditioning attenuates myocardial ischemiareperfusion injury by inhibiting events in the early minutes of reperfusion［J］ Cardiovasc Res, 2004, 62(1):74- ［10］ Tang XL, Sato H, Tiwari S, et Cardioprotection by postconditioning in conscious rats is limited to coronary occlusions <45 minutes［J］ Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2006, 291(5): H2308-H ［11］ Spandou E, Tsouchnikas I, Karkavelas G, et Erythropoietin attenuates renal injury in experimental acute renal failure ischaemic/reperfusion model［J］ Nephrol Dial Transplant, 2006, 21(2): 330- ［12］ Yang XM, Proctor JB, Cui L, et Multiple, brief coronary occlusions during early reperfusion protect rabbit hearts by targeting cell signaling pathways［J］ J Am Coll Cardiol, 2004, 44(5):1103- ［13］ Philipp S, Downey JM, Cohen MV Postconditioning must be initiated in less than 1 minute following reperfusion and is dependent on adenosine receptors and PI3kinase［J］ Circulation, 2004, 110(Suppl III):
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龟的影像学和血液学研究摘要:龟鳖以颈和四肢的伸缩运动而产生呼吸，先呼气，后吸气，这种特殊的呼吸方式叫做“咽气式”呼吸，简称龟吸。应用现代先进的医疗诊断技术，我们对1只缅甸陆龟进行螺旋CT、磁共振成像（MRI）和磁共振血管造影（MRA）检查，发现龟背甲下方左右各有1个大气囊，腹甲上面的软组织有胸主血管和腹主血管。影像学研究和解剖对比分析，我们发现龟肺发育不良是咽气式龟吸的基础，不健全的龟肺决定了龟的新陈代谢必然缓慢。对龟的血液成份进行定性定量测定，发现龟的红细胞大而有核，中性粒细胞和血小板缺如，这是龟血的奇异现象，我们获得的宝贵资料，对探索乌龟新陈代谢缓慢和长寿机理，提出了新的课题。 关键词：龟螺旋CT MRI 医学检验 应有螺旋CT、磁共振成像（MRI）和磁共振血管造影（MRA）的先进医疗诊断技术，我们对1只缅甸陆龟进行影像学检查，龟的呼吸系统做了影像学研究和解剖对比分析，并对龟的血液成份进行了测定，资料报道如下，供同道们参考分析。 1、科研目的： 了解龟体软组织结构，对龟的呼吸系统进行影像学研究和解剖对比分析，探索乌龟新陈代谢缓慢的机理。 2、实验材料： 缅甸陆龟又名象龟，俗名Elongated tortoise(拉丁学名Indotestudo elongata),属龟鳖目、曲颈龟亚目、陆龟科、缅甸陆龟属。实验象龟体重3000g,头项部淡黄色，有对称鳞片，吻印，上喙略勾曲，鼻孔粉红色，背腹甲被覆角质盾片完整无损。背甲隆起光滑平坦……
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动物行为学的形成与发展 贾秀英 20世纪60年代以来，动物行为学的研究就受到各国科学家的关注。欧洲的一些动物行为学家对动物行为研究的发展作出了重大的贡献。70年代以来，随着人们对动物行为研究重要性的认识，有关的科研项目日益增多，动物行为学已成为生物学中极为活跃和重要的一个分支学科。它除了研究动物行为本身外，还把研究内容从行为维系群体的作用，扩展到行为的个体发育进化史、行为的控制及社会性组织等方面。通过这些研究，使动物行为学得到了进一步的发展，并已逐渐发展为一门不仅涉及行为学，而且涉及到生态学、生理学、心理学、遗传学、进化论、社会学和经济学的一门综合性学科。一、动物行为学的研究历史20世纪以前是动物行为学的萌芽时期，是动物行为学经历的一个缓慢发展的阶段。早在旧石器时代（34000～10500年前），人们开始注意观察周围的动物，随着动物家养的开始，人类也需要了解动物的生活周期和行为。在文明时代的早期，古埃及人开始尝试人工孵卵。古希腊的亚里斯多德（384～322BC）开始了观察、描述动物行为的新纪元。在他的论著中，记录了540种动物的生活史和行为，对后人关于生命的认识方面产生了相当大的影响。17、18世纪，研究动物行为的人更多了，开始了比较不同物种行为的研究和行为的理论探讨。如德国人约翰（Johunn Pernaller）研究了不同鸟的行为差异，涉及取食地、社会行为、筑巢、领地、季节性羽毛色彩变化、迁徙、鸣叫和育雏等方面。法国的勒雷（Chorles George Lereg）对狼、狐的捕食行为及野兔的恐惧表现有过生动的描述，提出了动物依靠它们的记忆和生活经验能够聪明地生活。1859年，达尔文的《物种起源》的发表，对动物行为学的研究产生了深远的影响。他的《人类的由来》（1871）一书研究比较了人与动物，及本能行为。19世纪末，人们使用述宫，研究老鼠的学习行为。劳埃德（CLioyd MOrgun）研究鸡的本能、学习、模拟行为。现代行为学中许多术语，如Behaviour（行为）、Animod Behaviour（动物行为），都首次出现在他的论著中。20世纪是动物行为学迅速发展和真正延伸的世纪。霍布豪斯（Hobhouse）在1901年发现了猴及其它动物能使用一定的工具（棍、箱子）得到食物。1906年，动物学家詹宁斯（HSJennings）对原生动物的行为进行了详细研究，写出了《原生动物的行为》一书，这是第一本专门论述动物行为的著作。柏林的海因罗特（Oskar Heinorth）在1871年至1945年间，详尽研究了多种鸭、鹅，比较了它们的运动方式、解剖学特征、社会行为、鸣叫及繁殖行为，并且发现了灰雁从孵卵箱中孵出后的印记行为。他独自阐述的同源性学说，现在还被许多人认为是行为学真正诞生的标志之一。动物学家罗曼内斯（HS Reimarus）发展了达尔文的思想，并正式建立了比较行为学这一学科，为现代的行为生物学奠定了基础。随后摩尔根（CLMorgun）和杰姆斯（WJames），以及劳埃波（JLoeb）等都在方法、概念上对行为的发展做出了贡献。 1931年至1941年，欧洲著名的行为生物学家廷伯根和劳伦兹在自然和半自然条件下对动物进行了长期的观察，发表了诸如“社会性鸦的行为学”、“鸟类环境世界中的伙伴”、“关于本能的概念”、“对雁鸭类行为的比较研究”等论文，建立了物种的行为图谱，发现了所研究的行为型的功能。提出了显示、位移、仪式化等等新概念和新的研究课题。特别是劳伦兹提出的“印记”这一术语，极好地说明了先天性和后天获得性行为的结合问题。在行为分析、行为生态方面作出了很大的贡献。二、动物行为学的现代进展近年来，动物行为学的研究获得了蓬勃的发展，主要是把动物行为与生命科学中许多其它的许多分支学科相互渗透在一起，形成了许多新的研究领域，从不同的角度进一步完整、系统地阐述动物行为的原因、机制、发生或发育。进化与适应功能等问题。动物行为学的分支很多，不可能在此全面论述，本文仅以行为遗传学和行为生态学为中心，作一简要介绍。行为遗传学 行为遗传学是用遗传学方法研究行为的遗传基础。自1960年，美国学者Thompson第一个总结了有关资料，写成《行为遗传学》一书，从而宣布这一新学科的诞生。其后，相关研究大量涌现。10年以后，一份专业期刊，《行为遗传学》问世。1967年，Benzer第一个通过人工诱导和选择的方法得到了果蝇的行为突变体，从而为行为遗传学的研究开辟了道路。从此以后，行为突变体的研究很快在果蝇、线虫、草履虫、细菌及其他生物的研究中大量开展起来。目前，已在分子水平分析的基础上，进一步作行为基因的分离、克隆和转移的研究。行为遗传学为动物行为学的研究开辟了一个新天地，对于阐明行为遗传的规律和机制都具有重要意义。行为生态学行为生态学主要是研究生态学中的行为机制、动物行为的生态学意义和进化意义，在理论及方法论方面是动物行为学中发展最快、最为活跃的一个领域。行为生态学主要涉及到取食行为生态学。防御行为生态学、繁殖行为生态学、社会生态学、时空行为生态学（如栖息地的选择、定向和导航、巢域和领域现象等），以及行为生态学预测等内容。其中，在社会生态学或社会生物学方面，近年来取得了突出的进展。KLorenz对鸟类社会行为的研究、NTinbergen（1974）对人类社会行为的研究，以及KVon Frisch对蜜蜂社会行为的研究，奠定了社会生物学的基础。1975年，EO Wilson出版了《社会生物学》一书，系统地介绍了这门学科的观点、理论体系和研究方法。社会生物学把达尔文自然选择的概念应用于社会行为的研究，又把生态学、行为学、遗传学和进化沦加以综合，提出了内在适合度和亲缘选择的新概念。这些新概念把社会行为的研究提高到了一个新的高度。目前，这一领域所展示的迷人前景正吸引着越来越多的科学家。尤其是关于行为经济学和进化稳定对策（ESS）的研究，正显示着强大的生命力。尽管在我国这一领域还几乎是个空白，但随着这一学科的迅猛发展，也必将引起我国学术界的巨大兴趣。动物行为的研究在我国正处于起步阶段，研究的内容主要是描述性的，在理论研究方面，在研究的广度和深度方面，与国外存在着很大的差距。到目前为止，国内仍没有形成专门的动物行为学教材、期刊。但据已公开发表的有关论文和资料显示，我国在动物行为某些领域方面的研究已取得了一定的进展。
动物营养学报中国畜牧兽医就我所知是影响力居前两位的畜牧类杂志。
S8 畜牧、动物医学、狩猎、蚕、蜂类核心期刊表1、畜牧兽医学报 2、中国兽医学报 3、中国预防兽医学报 4、中国兽医科技（改名为：中国兽医科学） 5、中国兽医杂志 6、草业学报 7、中国草地（改名为：中国草地学报） 8、草地学报 9、动物营养学报 10、蚕业科学 11、黑龙江畜牧兽医 12、草业科学 13、中国家禽 14、动物医学进展 15、中国饲料16、畜牧与兽医 17、饲料工业 18、中国畜牧杂志 19、饲料研究 20、中国畜牧兽医S9 水产、渔业类核心期刊表
学报类可以发〈长春大学学报〉
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79期第三卷。
“动物科学学报（或杂志）”，2001年，79卷，第3期，623-633页