非洲猪瘟实验室检测论文

1、红细胞吸附试验：将健康猪白细胞与非洲猪瘟猪的血液或组织提取物混合，在37℃下培养，若观察到许多红细胞吸附在白细胞上，呈玫瑰花状或桑椹体状，说明为阳性。2、直接免疫荧光试验：在荧光显微镜下观察，若观察到细胞浆内有明亮荧光团，说明为阳性。3、间接免疫荧光试验：将非洲猪瘟病毒接种在长满Vero细胞的盖玻片上，并准备好对照组，如果待检样品在细胞浆内出现明亮荧光团核荧光细点，说明为阳性。

一、非洲猪瘟的检测方法有哪些，非洲猪瘟疫情防控方法

1、检测方法

（1）红细胞吸附试验

将健康猪的白细胞与非洲猪瘟猪的血液或组织提取物混合，在37℃的环境条件下进行培养，如果观察到许多红细胞吸附在白细胞上，呈玫瑰花状或桑椹体状，说明为阳性。

（2）直接免疫荧光试验

在荧光显微镜下进行观察，如果观察到细胞浆内有明亮荧光团，说明为阳性。

（3）间接免疫荧光试验

将非洲猪瘟病毒接种在长满Vero细胞的盖玻片上，并准备好未接种病毒的Vero细胞进行对照，如果待检样品在细胞浆内出现明亮的荧光团核荧光细点，说明为阳性。

（4）酶联免疫吸附试验

待检样品的吸收值大于时，说明为阳性，待检样品的吸收值小于时，说明为阴性。

（5）间接酶联免疫蚀斑试验

使用肉眼或者是显微镜进行观察，如果蚀斑呈棕色，说明为阳性，如果无色，说明为阴性。

（6）免疫电泳试验

抗原于待检血清间出现白色沉淀线者，说明为阳性。

2、疫情防控方法

（1）使用2%苛性钠、2%次氯酸钠、甲醛、3%邻苯基苯酚和碘化合物等消毒药剂对猪舍以及饲喂用具进行全面消毒。

（2）及时打扫猪舍卫生，避免蚊蝇滋生。

（3）在饲料或者是饮用水中添加免疫类动保制剂，增强猪群的免疫能力，降低猪瘟发生概率。

（4）及时消灭潜伏期隐性带毒猪，无害化处理病死猪。

二、非洲猪瘟的症状

1、超急性型

食欲不振，无力，高烧（41-42℃），没有明显症状突然死亡。

2、急性型

体温升高至40-42℃，精神沉郁，食欲不振，嗜睡喜卧，耳、四肢、胸部、腹部、尾部皮肤有出血点，发绀，眼睛、鼻腔处有黏液脓性分泌物流出。呕吐，便秘，粪便表面覆盖有血液和黏液，或腹泻，粪便带血。步态僵直，呼吸急促、困难，病情较长时，出现神经症状。

3、亚急性型

体温波动无规律，一般在℃以上。精神沉郁，食欲不振，呼吸窘迫， 湿咳，关节疼痛、肿胀。

4、慢性型

轻度发烧，呼吸困难，身形消瘦或发育迟缓，体弱，关节肿胀，局部皮肤溃疡、坏死。

中国大陆至少23省份已沦为非洲猪瘟疫区。由于非洲猪瘟没有疫苗，其病毒在冷冻猪肉中可存活一千天，感染猪只死亡率100%。台湾也闻猪色变，防疫规格上升到国安层级。台湾大学兽医学院名誉教授赖秀穗指出，非洲猪瘟病毒是“猪的爱滋病毒”，呼吁全民要有长期抗战的准备。台湾曾爆发的禽兽疫病，赖秀穗几乎无役不与，。21年前台湾爆发口蹄疫时他是防疫大将，有“病猪之神”称号。他接受自由☆亚洲☆电台采访，一语道破非洲猪瘟快速传播与美中贸易大战的关联：赖秀穗说：“亚洲地区没有非洲猪瘟的感染已经97年。这次因为美中的贸易战中国赌气不向美国购买猪肉，他们就转向有严重非洲猪肉污染的俄罗斯去买了应该是数百万吨的猪肉，结果这样不久就感染了。”赖秀穗说，非洲猪瘟过去在欧洲、非洲、南美洲发生，依标准程序扑杀、销毁，传播速度一年约100公里；今年8月辽宁出现第一例后，从东北三省传到福建、广东，不到5个月传了几千公里，传播速度快得非常不寻常。赖秀穗研判，从最近台湾海关拦查多起陆配、陆客或台湾旅客，夹带非洲猪瘟病毒的香肠、火腿、腊肉等中国大陆肉制品，这可证明，中国大陆处理病死猪时并没有全数销毁，很可能将同一养猪场没发病或发病没死的猪只运送出去屠宰，进入食物链加工制成食品或鲜猪肉贩卖，有时运送距离几百公里，病毒株因此扩散污染整个环境。

1、红细胞吸附试验：将健康猪的白细胞加上非洲猪瘟猪的血液或组织提取物，37℃培养，如见许多红细胞吸附在白细胞上，形成玫瑰花状或桑椹体状，则为阳性。

2、直接免疫荧光试验：荧光显微镜下观察，如见细胞浆内有明亮荧光团，则为阳性。

3、动物接种试验。

4、间接免疫荧光试验：将非洲猪瘟病毒接种在长满Vero细胞的盖玻片上，并准备未接种病毒的Vero细胞对照。试验后，对照正常，待检样品在细胞浆内出现明亮的荧光团核荧光细点可被判定为阳性。

5、酶联免疫吸附试验：对照成立时（阳性血清对照吸收值大于，阴性血清吸收值小于），待检样品的吸收值大于时，判定为阳性。

6、免疫电泳试验：抗原于待检血清间出现白色沉淀线者可判定为阳性。

7、间接酶联免疫蚀斑试验：肉眼观察，或显微镜下观察，蚀斑呈棕色则为阳性，无色则为阴性。

扩展资料

非洲猪瘟急性病例临床症状以高热、病程短、死亡率高、内脏器官广泛性出血以及呼吸系统和神经系统功能紊乱为主要特征。

在无本病的国家和地区应防止ASFV的传入，在国际机场和港口，从飞机和船舶来的食物废料均应焚毁。对无本病地区事先建立快速诊断方法和制定一旦发生本病时的扑灭计划。

参考资料来源：百度百科-非洲猪瘟病毒

参考资料来源：百度百科-非洲猪瘟

参考一下这篇文章

怕的非洲猪瘟来了，该如何防控

农业农村部新闻办公室8月3日发布，辽宁省沈阳市沈北新区发生一起生猪非洲猪瘟疫情，这是我国首次发生非洲猪瘟疫情（ASFV）。疫情发生后，农业农村部根据《非洲猪瘟疫情应急预案》启动Ⅱ级应急响应。当地按照要求，启动应急响应机制，采取封锁、扑杀、无害化处理、消毒等处置措施，禁止所有生猪及易感动物和产品运入或流出封锁区，沈阳市已暂停全市范围的生猪向外调运。目前，该起疫情已得到有效控制。

中国农业科学院兰州兽医研究所早在十年前就针对我国非洲猪瘟的防控和应急储备，OIE非洲猪瘟参考实验室建立了良好的合作关系，并在农业农村部韩长赋部长的见证下与波兰国家兽医所共建实验室，引进相关诊断技术和材料，并于2011年申请并得到农业部兽医局的许可，进行非洲猪瘟诊断技术的研究及诊断试剂盒的研发（农医药便函[2011]596号）。

目前，已经完成成套非洲猪瘟病原学和血清学诊断技术和试剂盒的研发和储备，包括常规PCR和实时荧光定量PCR试剂盒, 间接ELISA抗体检测试剂盒，为非洲猪瘟的防控打下了坚实的基础~与OIE非洲猪瘟参考实验室建立了良好的合作关系，并在农业农村部韩长赋部长的见证下与波兰国家兽医所共建实验室，引进相关诊断技术和材料，并于2011年申请并得到农业部兽医局的许可，进行非洲猪瘟诊断技术的研究及诊断试剂盒的研发（农医药便函[2011]596号）。目前，已经完成成套非洲猪瘟病原学和血清学诊断技术和试剂盒的研发和储备，包括常规PCR和实时荧光定量PCR试剂盒, 间接ELISA抗体检测试剂盒，为非洲猪瘟的防控打下了坚实的基础。

非洲猪瘟(African Swine Fever ,ASF）是猪的一种急性、热性、传染性极强的高度接触性传染病，又称非洲猪瘟疫或疣猪病。临床以高热、食欲废绝、致死率高、皮肤发绀以及淋巴结和内脏器官的严重出血、妊娠母猪流产、水肿为特征。死亡率可高达100％。该病属于世界动物卫生组织（OIE）要求报告的动物疫病，被我国农业部定为一类动物疫病。非洲猪瘟是猪的最可怕的流行病之一，主要原因在于其高传染性、传播方式的变化多端、高发病率、高死亡率以及缺乏特效疫苗。非洲猪瘟已经对全球的猪肉生产和贸易造成严重影响，2014到2017年，东欧和俄罗斯由于非洲猪瘟病死和扑杀的猪只达八十万头，2014到2015年，因发生非洲猪瘟疫情，仅波兰、拉脱维亚、立陶宛、爱沙尼亚四个国家的猪肉出口额下降达亿元美元，在俄罗斯，2011年因非洲猪瘟造成的损失达亿美元。

一、病原

非洲猪瘟由DNA病毒感染引起，以前曾被划入虹彩病毒科成员，但其DNA结构及复制方式与虹彩病毒差距很大，与痘病毒相似，1995年，国际病毒分类委员会（ICTV）将它单独列为一个新的病毒科---非洲猪瘟(Asfarviridae）病毒科。2005年7月ICTV发表的最新病毒分类第八次报告，明确非洲猪瘟病毒在病毒分类中属于DNA病毒目录（dsDNA）、非洲猪瘟病毒科、非洲猪瘟病毒属（Asfivirus）,ASFV也是目前非洲猪瘟病毒科唯一被认可的成员。与其他DNA病毒不同的是，ASFV是一种真正的虫媒病毒，能在脊椎动物和无脊推动物宿主中繁殖。在猪体内，非洲猪瘟病毒可在几种类型的细胞浆中，尤其是网状内皮细胞和单核细胞和巨噬细胞中复制。该病毒可在钝缘蜱中增殖，并使其成为主要的传播媒介。非洲猪瘟病毒感染动物后，不产生中和抗体，因此只有一个血清型。最新的研究表明，非洲猪瘟有23个基因型。其中基因型1于1921年首次在肯尼亚确诊后，主要流行于东非和中非，之后于1957年至1960年入侵欧洲，在西班牙、葡萄牙等国流行。基因型II于2007年入侵格鲁吉亚，之后传入俄罗斯、乌克兰、波兰、拉脱维亚、立陶宛、爱沙尼亚、摩尔多瓦、捷克、罗马尼亚。1971年该病首次传入古巴；1978年入侵巴西，至此美洲国家出现了疫情。

二、流行病学

ASFV只感染猪和野猪。发病猪和带毒猪（康复猪和隐性感染猪）是主要传染来源，野猪与钝缘蜱属软蜱是病毒的储存宿主。病猪在发热前即可排毒；有些慢性感染猪可终生排毒；病毒可在康复猪体内持续存在一年，排毒达6个月以上。本病主要通过消化道和呼吸道传染，接触传播、经食物传播、软蜱叮咬等方式是该病的主要传播途径。也有其他传播途径，研究显示ASFV近距离（2m以内）可通过空气传播。还有其他可能的潜在传播途径，如经鸟类和啮齿动物传播。各品种猪及不同年龄猪群的易感性没有差异。直接与感染猪接触后的潜伏期为5-19d，被感染蜱叮咬后的潜伏期不超过5d，5-7d即出现症状。

在非洲，ASFV可感染疣猪、丛林野猪和大森林野猪。多种野猪对ASFV易感，但通常不表现明显的临床症状。欧洲和北美的野猪对ASFV都易感，临床症状和死亡率与家猪的表现相似。但美国花斑野猪例外，其对ASFV不易感。不同毒株致病性有差异，ASFV超强毒株感染可导致猪在4～14d内100％死亡，病猪血液中的病毒含量大于108个病毒粒子／mL，主要侵袭淋巴细胞，导致淋巴细胞凋亡、血管内皮细胞损伤和出血。中等毒力毒株造成的死亡率一般为30％～50％，低毒力毒株感染仅引起少量猪只死亡。

非洲猪瘟不是人畜共患病。目前，还没有证据表明ASFV能感染人。虽然非洲猪瘟不传染人，但由于我国是养殖大国，猪的饲养量占世界的一半以上，其入侵我国后不能得到及时有效控制，一旦大面积传播，会造成灾难性后果，严重影响经济和社会的稳定。

三、发病机理

ASFV可经过口和上呼吸道系统进入猪体，在鼻咽部或扁桃体发生感染，病毒迅速蔓延到下颌淋巴结，通过淋巴和血液遍布全身。之后，几乎在所有的组织中均能检测到病毒，病毒含量最高的组织包括单核巨噬细胞系统，网状内皮细胞如脾脏和淋巴结。ASFV引发出血性病变是由于感染单核细胞/巨噬细胞释放细胞因子，而不是直接引起内皮细胞的损失。ASFV感染伴随着血小板减少，这可能是由于损伤血小板的生成或外周血管血小板的消耗引起。强毒感染时细胞变化很快，在呈现明显的刺激反应前，细胞都已死亡。弱毒感染时，刺激反应很容易观察到，细胞核变大，普遍发生有丝分裂。

四、临床症状

不同品种、年龄的猪均可发生，最急性型发病猪无明显临床症状突然死亡，有些病猪的临床症状同急性型。病死率高达100%。急性型感染ASFV后潜伏期5-15天d，最先出现的症状是体温升高（41-42℃）。表现为精神沉郁、厌食、扎堆，耳、鼻、四肢、腹部皮肤黏膜广泛性出血和出血点，末梢等部位皮肤出现发绀，甚至有出血块；粪便表面有血液和黏液覆盖；共济失调或步态僵直，呼吸困难，病猪一般常在发热后7d，出现症状后1-2d死亡。妊娠母猪流产。病死率高达100%。亚急性型症状同急性型，但症状较轻，病死率低，持续时间长，仔猪病死率相对较高，病程5-30d。慢性型死亡率低，表现为呼吸道及肺炎症状，大部分猪感染后能康复，但终生带毒，病猪通常可存活数月，但由于免疫力低下，容易继发细菌感染，很难康复，病程2-15个月。

五、诊断

依据临床症状和病理变化做出初步判断，由于非洲猪瘟临床症状和猪瘟在临床上非常相似，如果没有典型的症状-特征性出血，仅从临床症状和肉眼病变几乎无法鉴别。必须开展实验室检测进行鉴别诊断。另外还与高致病性蓝耳病、猪皮炎肾炎综合征（PDNS）、细菌性败血症、真菌毒素中毒和香豆素中毒等疫病相鉴别。实验室诊断有以下方法：由于该病多表现为最急性或急性病型，往往在特异性抗体出现之前已经死亡，因此，病毒的病原学检测在非洲猪瘟疫情诊断中就显得非常重要。病毒分离是最常用的病原学诊断技术。但必须在P3实验室高度安全条件下才能进行诊断。另外，红细胞吸附和红细胞吸附抑制试验、免疫荧光、酶联免疫吸附、琼脂扩散等血清学检查试验也可用于本病的诊断。目前，中国农业科学院兰州兽医研究所已经完成成套非洲猪瘟病原学和血清学诊断技术和试剂盒的研发与储备,包括常规PCR以及实时荧光定量PCR试剂盒，间接ELISA抗体检测试剂盒，正在大量生产，不同试剂盒使用非常方便，而且具备准确性高，时间短等优点，可以广泛应用于实验室确诊。兰州兽医研究所非洲猪瘟病原学(PCR、实时荧光定量PCR)和血清学(抗体检测间接ELISA)诊断试剂盒为非洲猪瘟的防控提供有力的技术支撑。

鉴别诊断：ASFV病变与猪瘟十分相似。最急性型常以内脏器官的严重出血为特征。本病体温升高初期通常不表现临床症状；急性型的最显著病变是脾肿大，可达原来的几倍，脾又大又黑，极软易碎。腹腔内淋巴结出血严重，类似血瘤，结肠黏膜、肠系膜等多部位发生水肿；本病没有疫苗和药物进行紧急接种和治疗。

猪瘟在体温升高时就出现明显的临床症状；淋巴结呈大理石状；水肿病变不明显；当猪瘟大面积发生时，再用猪瘟疫苗紧急接种，能使疫情减轻。可见，非洲猪瘟通常是先出现体温升高，后出现其他症状，而猪瘟则随体温升高，几乎同时出现其他症状，可作为二者鉴别诊断。

六、防治方法

加强进口种猪和猪产品的检疫，坚决做好国际机场及港口的废物、垃圾的销毁处理工作。一旦有可疑非洲猪瘟发生，要采取果断的扑杀措施，严格封锁，彻底消毒。病毒对环境的抵抗力较强，在23℃经120天仍存活。在热带，猪圈内的病毒至少可存活2周。有效消毒剂的种类较少。目前，最有效的消毒剂是10%的笨及苯酚。OIE推荐使用的其他消毒剂包括的氢氧化钠、％福尔马林和的次氯酸盐等。生猪养殖者要严禁从疫区调运生猪，注意做好日常消毒工作，尽可能封闭饲养生猪，采取隔离防护措施，尽量避免与野猪、钝缘软蜱接触，严禁使用未经高温处理的餐馆、食堂的泔水或餐余垃圾饲喂生猪。一旦出现不明原因死亡异常增多且有猪瘟类似症状的，应及时上报当地兽医部门。

非洲猪瘟检测方法可用pcr检测法，可对取自待检测样本的分析物或其他分析物中的目标核酸进行快速、准确的定性检测。