荧光法测维生素c论文研究背景

1.滴定法测定维生素测定原理2，6一二氯靛酚法和碘量法是较常见的滴定测定维生素C的方法。还原型抗坏血酸还原染料2，6一二氯靛酚，该染料在酸性中呈红色，被还原后红色消失。还原型抗坏血酸还原2，6一二氯靛酚后，本身被氧化成脱氢抗坏血酸。在没有杂质干扰时，一定量的样品提取液还原标准2， 6-二氯靛酚的量与样品中所含维生素C的量成正比。碘量法的原理：维生素C包括氧化型、还原型和二酮古乐糖酸三种，当用碘滴定维生素C时，所滴定的碘被维生素C还原为碘离子，随着滴定过程中维生素C全被氧化，所滴入的碘将以碘分子形式出现。碘分子可以使含指示剂（淀粉）的溶液产生蓝色，即为滴定终点。 测定操作2，6一二氯靛酚法：取适量的样品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，制成匀浆。取同一样品匀浆10g，加入1%草酸溶液20 mL，摇匀，用滤纸过滤，取5mL过滤液于锥形瓶中，用2，6一二氯靛酚钠盐溶液滴定(1 mL≈ mgVitC)，以淡红色存在30 s内不褪色为滴定终点。记录2，6-二氯酚靛酚钠盐溶液的消耗量，根据结果计算出样品中维生素C含量(mg/100 g)。碘量法：将果蔬洗净，用纱布拭干其外部所附着的水分，若样品清洁可以不必洗。样品可以先纵切为4~8等份，分别称取20g可是用食部分，置于研钵中加入2% Hcl 15~10ml，研磨至浆状，移于 100ml 容量瓶中，用2% HCl 加至刻度线处，混匀，过滤，记录滤液总体积。样品液的测定: 在50ml 烧杯中，用移液管注入10% KI 溶液0．5ml， 的淀粉溶液 2ml，样品液 5ml，蒸馏水 ，用 KIO3 液滴定，要一滴滴加入，并时时摇动烧杯，至微蓝色不褪色为终点( 一分钟不褪为止) 。记录所用 KIO3 液毫升数，计算维生素C含量。 测定方法评价2，6-二氯酚靛酚滴定法具有简便、快速、比较准确等优点，适用于许多不同类型样品的分析。缺点是不能直接测定样品中的脱氢抗坏血酸及结合抗坏血酸的含量，易受其他还原物质的干扰，如果样品中含有色素类物质，将给滴定终点的观察造成困难。碘酸钾滴定法较便宜，使用碘酸钾滴定法测定蔬菜中维生素C含量较为简便易行，而2，6一二氯靛酚法相对复杂。总的来说，滴定法操作简便、快速，无须特殊仪器，但在测定深色样品时，准确度和精确度欠佳。2.荧光法测定维生素测定原理Deutsch和Weeks曾经报道过一种检测维生素C的荧光分析法(OPDA)，并被指定为维生素C的经典荧光分析法。在该方法中，维生素C先被活性炭(Norit)氧化为脱氢抗坏血酸(DHAA)，DHAA再与荧光底物邻苯二胺(OPDA)结合生成荧光产物，通过对该荧光产物的检测实现对维生素C的定量分析。孙振艳等[1]提出了一种新的测定维生素C的荧光分析方法。基于维生素C被Cu2+氧化为DHAA，DHAA进一步与苯甲酸及十六烷基三甲基溴化铵产生荧光协同增敏作用，通过对体系荧光强度的测定进行维生素C的定量分析。 测定操作荧光分析法(OPDA)的测定方法：称取一定量样品，研磨后用水浸泡，取清液加入适量1%草酸溶液，振摇约3min，加入已处理好的活性炭再充分振摇约3min后过滤，滤液加于两个25mL比色管再加入缓冲溶液,，其中一管加入硼酸溶液(即空白)摇匀，放置15min后，两管均加入邻苯二胺溶液10mL，避光放置30min待测。样品荧光强度减去空白荧光强度值即为样品相对荧光强度值。孙振艳等的荧光分析法：在25 mL比色管中依次加入0. 6 mL CuSO4溶液，2. 0 mL十六烷基三甲基溴化铵溶液，2. 0 mL苯甲酸溶液，一定体积的维生素C标准溶液，，5. 0 mLNaOH-邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液，用蒸馏水定容，摇匀。在35℃恒温水浴中加热30 min，将溶液流水冷却至室温，激发波长为308 nm，在发射波长408nm处，测量荧光强度F，以不含维生素C的试剂空白为F0，计算ΔF=F-F。 测定方法评价荧光分析法测定维生素C具有操作简单，精密度高，检出限低等优点，该法可以应用于水果、蔬菜和药物中维生素C的检测，适于推广。 3.光度分析法测定维生素C3. 1测定原理2，4-二硝基苯肼法和钼蓝比色法是常见测定维生素C的一种光度分析法。2，4-二硝基苯肼法的原理是总维生素C包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2，4-二硝基苯肼作用生成红色脎，脎的含量与总抗坏血酸含量成正比，进行比色测定。钼蓝比色法是测定果蔬中还原型维生素C含量的一种常用方法，因偏磷酸和钼酸铵反应生成的磷钼酸铵经还原型的维生素C还原后生成亮蓝色的络合物，通过分光比色可以测定样品中还原型维生素C的含量。 测定操作2，4-二硝基苯肼法：取适量的样品可食部，加入100 mL 2%草酸溶液，制成匀浆。取匀浆20 g (含1~2 mg抗坏血酸)置入100 mL容量瓶中，用1%草酸溶液定容，混匀后过滤。取25 mL过滤液放入有2 g活性炭的25 mL比色管中，振摇1 min，过滤。然后取10 mL此氧化提取液，加入10 mL 2%硫脲溶液，混匀。按照GB12392-90中呈色反应方法，用分光光度计进行比色，根据结果计算出样品中抗坏血酸含量。按下式计算样品中Vc的含量:X=c·Vm×F×1001000。X—样品中总抗坏血酸含量，mg/100g；c—由标准曲线查得或回归方程算得“样品氧化液”总抗坏血酸的浓度，μg/mL； V—试样用1%草酸溶液定容的体积，mL； F—样品氧化处理过程中稀释倍数； m—试样质量，g。钼蓝比色法：准确称取 100 g 样品， 加入草酸－EDTA 溶液， 经捣碎后移入 100 mL 容量瓶，定容，过滤，吸取 2 mL 上清液于 50 mL 容量瓶中，加入 1 mL 的偏磷酸－醋酸溶液，5％的硫酸 2．0 mL，摇匀，加入 4 mL 钼酸铵，以去离子水定容至 50 mL，20 min 后测定吸光度。 测定方法评价钼蓝比色法测定果蔬中还原型维生素C含量数据稳定性、准确性较好，是一种快速、准确、灵敏度高的测定方法，而且不受样液颜色的影响。2，4-二硝基苯肼比色法测定总VitC (还原型和氧化型)，特异性较好，但操作复杂，是我国食品中VitC测定的标准方法，此方法适用于蔬菜、水果及其制品中总抗坏血酸的测定。4.高效液相色谱法 测定原理高效液相色谱法是近年来发展起来的一种测定维生素 C 含量的方法，测定维生素 C 含量通常采用 C18柱或 C8柱，由于维生素 C 对紫外光有吸收，故检测器常用紫外检测器。测定操作称取维生素C标准样品 g.转移至100 ml容量瓶中，用双蒸水定容，得到·ml-1的维生素C标准溶液。参考Nisperos-Carriedo等的方法。准确称取果肉 g，用5 ml 偏磷酸冰浴研磨， 10000 g离心15 min，残渣加入4 ml 偏磷酸再提取，合并上清液，定容至10 ml，经μm滤膜过滤后待测。每个样品重复5次。维生素C在240 nm波长时有最大吸收峰，故以240 nm作为检测波长。以偏磷酸为流动相。分别吸取标准溶液1 ml、2 ml、4 ml、6 ml、8m，l各自定容至10 m，l从中分别吸取μl进样分析，以峰面积(mv)为纵坐标，标样浓度(mg·ml-1)为横坐标，绘制标准溶液曲线，计算线性回归方程的回归系数和截距。将样品溶液分别进样μl进行液相色谱分析，测定维生素C的色谱峰面积，代入标准曲线计算出维生素C含量。 测定方法评价高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、结构准确、操作简便等特点。该法分离时间短，对结构不稳定的维生素C尤为适合，还特别适用于颜色较深的提取液样品的测定，成为近年来较受欢迎的维生素C测定方法。缺点是所用仪器较为昂贵。

目前研究Vc测定方法的报道较多，有关Vc的测定方法如荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、碘量法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等，各种方法对实际样品的测定均有满意的效果。为了解国内Vc含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势。方法以"Vc或抗坏血酸和测定"为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索，对所得有关Vc含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析。结果核心期刊载刊文献占文献总量的％，其中光度法占％，电化法占％，色谱法占％；复杂被测样品文献占文献总量的％，其中光度法占％，色谱法占％，电化法占％。结论目前国内Vc含量测定仍以光度法为主流，但近年来色谱法，特别是HPLC法上升趋势尤为明显。 还原型Vc的测定 2,6-二氯酚靛酚法(2,6-D法) 其原理是利用2,6-二氯酚靛酚钠盐(C12H6O2NCl2Na)在酸性条件下将还原型抗坏血酸氧化成氧化型抗坏血酸，而其本身被还原成无色的衍生物；当还原型抗坏血酸全部被氧化时，过量的2,6-二氯靛酚钠盐呈现红色，指示终点。该方法适于测定无色和浅色样液或提取液中的AsA，无须特殊仪器，操作简便、快速、准确[7]。 由于大多数果蔬和其制品有颜色，影响了终点的准确性。使用白陶土脱色[8]和加1,2-二氯乙烷[9]均不能得到理想的结果。作为对该法的改进，向一定量的AsA提取液中加入过量2,6-D与AsA作用后，剩余的2,6-D被二甲苯萃取、比色。样液中AsA含量与二甲苯萃取液中浅红色呈线性负相关。因花青素不溶于二甲苯，故可测定深色样品[10]。应用流动注射分析(Flow Injection Analysis,简称FIA)，使该法的分析速度更快(120样品/h)、灵敏(检出限 ug/ml)[11]。由于2,6-二氯靛酚和还原型抗坏血酸具有不同的电位(2,6-二氯靛酚的氧化还原电位是150mV，AsA的氧化还原电位是100 mV)，利用铂和氯化银复合电极测定其电位差的变化，可准确地测定样液中AsA的含量。该法适宜色泽较深样品中AsA的测定。溶解氧测定是利用极谱分析法原理进行的,其基本电路与电位滴定相似[12]。但样品中同时存在的Fe2+、Sn2+、SO2、SO3、S2O32-等还原性杂质对本法则有干扰。扣除样品中内源还原性物质是对2,6-二氯靛酚法的一个改进[13]。 碘量法 其原理是基于AsA还原碘，自身氧化DAsA,而碘可由碘酸钾还原碘化钾来得到，当多余碘存在时，淀粉呈蓝色，指示终点。反应式如下: KI+KIO3+6H→2K++3H2O+I2 (1-1)还原型抗坏血酸+I2+2H+→氧化型抗坏血酸+2HI 该法简便，但在测定深色样品时，准确度欠佳[14]。 分光光度法 其原理是三价铁离子被AsA还原二价铁离子，后者与4,7-二苯基-1,10-菲咯啉(Bathophenanthroline, BP)生成红色络合物，其强度与样品中AsA含量有化学计量关系。该法具有快速，灵敏的优点；此外，样品中DAsA还可被Dithiothreitol (DTT)还原为AsA，同时测定DAsA的含量[15]。 采用流动注射分析停留技术还可实现AsA与果蔬常用抗褐变剂L-半胱氨酸的同时测定[16]。 间接光度法 测定是在pH=的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，抗坏血酸与铁(III)和1,10-二氮杂菲溶液相互作用，形成橘红色的Fe(II)-二氮杂菲络合物，在波长510 nm处，吸光度与50mL抗坏血酸含量在10~200ug浓度内呈线性关系。该法的特点是简便快速，灵敏度高，干扰少[15]。 紫外光度法 其原理是还原型Vc(AsA)在紫外区处有最大吸收峰，以Cu2+作催化剂，利用溶解氧，将在处有最大吸收的AsA选择性氧化为处无最大吸收峰的DAsA，进行本底校正，此法具有简便、快速、准确的特点[17]。 光电比浊法 其原理是在酸性提取液中的AsA，可被亚硒酸氧化成DAsA，后者还原成元素硒，在一定条件下，其溶液中形成稳定的悬浊液。当20~50mL浸出液中AsA含量在0~4mg时，浊度与AsA含量成正比。样品中含有单宁、山梨酸、还原酮类不干扰测定。Fe2+、SO2在常温下干扰不明显，仅亚锡离子有干扰[18]。 高效液相色谱法(HPLC) 此法的优点不仅操作简便，分离时间短，对结构不稳定的Vc尤为适合；缺点是所用仪器较为昂贵[20]。 极谱法 其原理是用溴水将AsA氧化成DAsA，而后者与邻苯二胺缩合，可用于极谱定量测定Vc含量。脱氢型的还原糖、还原酸等对测定有干扰，可用氯仿萃取分离干扰物质后进行测定[18]。 Vc总量的测定 2,4-二硝基苯肼法 此法为测定Vc总量最常用的方法。其原理是用活性炭把AsA氧化成DAsA，在pH5以上时，后者分子重排，其内酯环裂开生成2,3-二酮古乐糖酸(DKG)，与硝基苯肼偶联，生成红色的脎，其呈色强度与DKG浓度成正比；如果再测定出DKG、DKG + DAsA的含量，则可计算出AsA、DAsA的含量。该法虽然测试过程长、须严格掌握测试条件，但其准确度和精密度均较高[20]。 荧光分光光度计法 其测定Vc的基本原理是:样品中的AsA被氧化成DAsA，并与邻苯二胺反应，生成荧光物质喹喔啉(Quinoxaline)衍生物，荧光强度与DAsA的浓度成正比，用荧光计测定荧光强度。该法具有较强的专一性，样品中有些成分会造成干扰，可作空白试验校正干扰物质所产生的荧光。此法的优点是，生成荧光物质所需时间短，操作简单，能在短时间内测定Vc总量和分开测定AsA、DAsA的含量[19]。 过氧化物酶法 果蔬中的Vc在过氧化氢存在下，添加合成底物1,4-二氨基苯，通过过氧化物酶氧化显色，作为Vc氧化终点，然后比色测定。该法的特点是不需要昂贵的仪器，适应性强，容易掌握，费用低，检测快速，不需要预先纯化所分析的试样[20]。这个是我论文的综述部分，你看看吧！

这个测量恐怕只有专业的人员才可以做到，普通人员是无法在家里做倒的。如果真的需要数据，可以上网搜索一下，就可以找的一般蔬菜中含有的VC含量。