有关猪口蹄疫的毕业论文

1、 [动物医学]猪场免疫程序的建立和正确使用疫苗摘要:猪群的健康是经营猪场成败的重要关键。近几年来，养猪业不断向规模化、集约化发展，同时，由于畜禽及其产品的频繁流通和交易，猪的疫病比较严重。据估计规模化猪场因病死亡率平均在5％～20％不等。尽管养猪...2、 [动物医学]猪瘟的诊断与防治方法的探讨摘要：猪瘟可分为急性、亚急性、慢性、不典型或不明显型猪瘟。CSF由强毒引起：高发病率、高死亡率.不典型猪瘟由弱毒引起、表现不明显. 猪瘟严重威胁养猪业的发展。近两年来，猪瘟病的发生在我市养猪业中有流行...3、 [动物医学]猪圆环病毒2型ORF2结构蛋白单克隆抗体的制备及鉴定中文摘要猪圆环病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)是引起猪断奶后多系统衰竭综合征等相关疾病的重要病原。PCV2的ORF2基因编码该病毒结构蛋白，是区分PCV1和PC...4、 [动物医学]动物剥制标本的创新应用中 文 摘 要生物标本制作是一项具有多学科知识的专门技术，始于英国，至今已有300年的历史。我国的动物标本制作技术是在欧洲标本制作技术的基础上逐步发展起来的，早期形成了具有自己风格的两大派系，即南唐北...口蹄疫简介口蹄疫是一种以病毒为载体的疾病，主要受感对象为猪、牛等大型偶蹄兽类，老鼠和家兔也是高发种群，潜伏期有几天至半个月不等，接触、空气、食物等均可导致疾病传播，如遇大风或兽群的大批运输则传染更快。口蹄疫发病后一般不致死，但会导致病兽口、蹄部出现大量水泡、高烧不退，使实际产量锐减。另外，个别口蹄疫病毒的变种亦可传染给人。因此，每次爆发后只能屠宰和集体焚毁以绝后患。由于口蹄疫传播迅速，难于防治，补救措施少，被称为“头号杀手”。口蹄疫可人畜共患。人因接触口蹄疫病畜及其污染的毛皮，或误饮病畜的奶，或误食病畜的肉品等途径感染。人一旦受到口蹄疫病毒传染，经2——18天潜伏期突然发病，表现为发烧、口腔干热、唇、齿、舌边颊部、咽部潮红、出现水泡（皮肤水泡见于手指尖、手掌、脚趾），同时伴有头痛、恶心、呕吐或腹泻，患者数天痊愈，有时可并发心肌炎，患者对人基本无传染性，但可把病毒传染给牲畜动物，再度引起畜间口蹄疫流行。1口蹄疫临床症状1．1本病以牛最易感最初体温升高，精神沉郁，食欲减退或废绝，反刍缓慢或停止，不喜饮水，闭口呆立，开口时，大量流涎。病畜口腔黏膜、齿龈、唇部、舌部及趾间等发生水泡或糜烂。起初水泡只有豌豆大，继而融合增大或连成片状，1——2天破溃后，形成红色烂斑。很多病例出现条状，高低不平的水泡。用手抓取舌时，常能见大片地脱落，偶见有鼻镜、角茎、乳房上发生水泡。在发生口腔水泡后或同时在蹄冠、蹄踵和趾间发生水泡或烂斑，若破溃后被细菌污染，时发跛行严重，幼牛常并发严重的胃肠炎。羊的感染率低病羊口腔黏膜上可见到水泡、烂斑和弥漫性炎症变化。山羊比绵羊明显，但主要症状在蹄部，哺乳羔羊对口蹄疫特别敏感，常呈现出血性胃肠炎和心肌炎症状，发病急、死亡快。2防治2．1预防病畜疑似口蹄疫时，应立即报告兽医机关，病畜就地封锁。所用器具及污染地面用2％苛性钠消毒，确认后，立即进行严格封锁、隔离、消毒及防治一系列工作，发病畜群扑杀后要无害化处理，工作人员外出要严格全面消毒，病畜吃剩的草料或饮水，要烧毁或深埋。畜舍及附近用2％苛性钠、1％——2％福尔马林喷洒、消毒，以免散毒。对疫区周围牛羊接种，选用与当地流行的毒型相同的疫苗、疫种。2．2治疗口腔有溃疡时，用碘甘油合剂每天涂3——4次，用大蒜或10％食盐水也可。蹄部病变，可用消毒液洗净，涂甲紫溶液或碘甘油。并用绷带包裹，不可接触湿地。对病畜要加强饲养管理及护理工作。每天要用盐水、硼酸溶液等洗涤口腔及蹄部，要喂以软草、软料或麸皮粥等。晨报讯 据英国广播公司23日报道，有迹象表明，英国口蹄疫疫情有可能已经传染给人类。英国卫生部已开始对此进行调查。报道说，口蹄疫疫情严重的坎布里亚郡一名屠宰工人可能已经传染上口蹄疫�这名屠宰工人曾多次接触受口蹄疫感染的牲畜。英国卫生部一位发言人透露，该屠宰工人患有牲畜口蹄疫的“所有症状”，包括手脚及口腔内起水泡等。如果病情得到确认的话，他将是英国历史上第二个患口蹄疫的人。但英国科学家指出，牲畜将口蹄疫传染给人类的可能性非常小。即使有人染上口蹄疫，病情也很轻，目前还没有口蹄疫疫情在人类中传播的记录。英国1966年爆发口蹄疫疫情时，曾有一人感染了口蹄疫，但对他的健康没有带来任何影响 为你锝母猪默哀3秒....＾－＾

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猪群的健康管理 养猪业市场行情的轮回波动，总是让养猪人几多欢喜几多愁。但这是正常规律，是市场调节的结果，以后也将循环往复下去。生产水平低下、猪病接连不断，才是养猪业的真止灾难，才是让养猪人承受痛苦的根本原因!就拿每头母猪每年提供的肥育猪数来说，全国平均不到千头，可见有相当数量的猪场是赚不到钱的! 市场行情的跌宕起伏，固然影响着养猪效益;把猪养好实现每头猪的效益最大化，才是养猪人最应该关注的焦点。采取综合措施，加强猪群的健康管理，才能实现猪群的健康、高产、高效。1加强人员管理和培训 猪群的健康管理是山人来执行的，员工素质的高低将直接影响执行的结果。 首先，要对猪有一颗爱心。要热爱养猪事业，应该以轻松卞俞决的心情投入养猪工作。“要我干”与“我要干”，所得到的结果将是大相径庭的!要设身处地为猪群着想，要无微不至地关心照顾猪群。对小猪，要给予孩子般的呵护;对怀孕母猪，要给予孕妇般的呵护;对哺乳母猪，要给予产妇般的呵护;对公猪，要给予贵宾般的呵护。只有这样，猪群才能源源不断地为我们创造则富。如果仅仅把猪当成畜生来对待，漠不关心，甚至野蛮粗暴，猪群在没有适宜的环境、得不到良好的饮食、凄苦恐惧的状态下，连最起码的生存都谈不上，更何祝为我们创造则富了! 其次，员工队伍要有坚强的执行力。通俗地讲，执行力就是将一各种思想观念、规章制度和操作规程执行到位、落到实处的能力。有很多猪场在专家或者专业技术人员指导下，制定了一系列切实可行的猪场管理方案，但最终的结果还是问题不断。这在很大程度上与执行有关。“目标十执行=结果”，缺乏执行力，即使有再好的方案、再止确的目标，也不可能得出好的结果。拿消毒这个环节来讲，假设规定3天消毒1次，在实际施行过程中就可能出现多个问题:消毒没消毒?用的什么消毒药?刺激性多大?浓度多大?舍温及水温多高?一天当中的什么时间消毒的?是否和疫茁接种相冲突?猪舍或猪群的卫生状祝如何?猪群反应如何?.••…能否得到强有力的、止确的执行，将在很大程度上影响消毒效果。 第三，在确保猪场生物安全的基础上，想方设法，给员工创造一个相对宽松白山的环境。猪场享有“文明监狱”的“美誉”，这似乎是降低职业风险的需要，但也成了很多养猪人的无奈。一天24小时蹲在猪场里，一年难得回家儿次，环境极脏，伙食极差，整天机械式地重复着枯燥乏味的生活和劳作。在这种“监狱”似的环境中，员工的情绪往往是低落和烦躁的;在这样的环境中，员工很难表现出旺盛的工作热情，很难发挥出攻无不克的战斗力。于是，很多猪场都出现了“用工难”的尴尬局面:畜牧兽医技术人员难找，像样的饲养员也难找，跳槽现象频频发生。员工队伍不仅素质低，‘非常不稳定。在这种局面下，要确保猪群的健康、要达到较高的生产水平，儿乎是不可能的!因此，要不断改善员工的饮食和居住条件，以缓解员工被压抑的感觉;要改变过于严苛的管理模式，lfu代之以人性化的管理模式;采用“请进来、派出去”的方式，定期进行技术和管理培训，使员工有一种成长的白豪感;不断采用先进的生产设备和技术，从降低员工的劳动强度和工作难度;营造积极、乐观、团结、向上的企业文化氛围，增强员工对企业的认同感和归属感。2在种猪选育工作中，要坚持把“健康、高产”当作}几要目标，lfu不是一味地追求漂亮的体形健康，即没有特定病原体、适应性强、抗病力强;高产，即繁殖性能好、生长速度快、产肉性能好。平均一头母猪一年提供的断奶仔猪或者肥育猪的头数，是决定一个猪场盈利与否的重要指标。平均一年提供育肥猪不足14头，盈利的可能性不大;超过18头，则，损的可能性不大。如果没有健康、高产的猪群，则猪场的经营状祝是不可能达到盈5平衡线以上的! 在实际养猪生产中，却有相当多的猪场热衷于引进类似于健美运动员体形的种猪，有的甚至声称“非双肌臀”不要!为了迎合市场需求，很多种猪场也不得不调整选育方向，把培育外观漂亮的猪当成首要目标。这样一来，猪的体形的确越来越漂亮了，随之带来的弊端也越来越让养猪人头痛:抗应激能力差、发病率高，母猪发情不明显、配种准胎率低、产活仔数低、难产的比例大幅度提升。 必须明确:养猪的目的是为了赚钱不是为了好看;要养赚钱的猪，lfu不是养好看的猪。具备和谐健康体形、能多产仔、生长快、饲料一效率高、生产更多优质猪肉的种猪，应该是育种学家、种猪场、商品猪场、屠宰)‘共同追求的目标，不应片面追求某项体形目标，走向极端，那将会产生很大的负面影响。3调整疾病防制观念，彻底摒弃“病来乱求医”的治疗方式，树立“养重于防、防重于治”的观念 侧重于“治”的猪场，往往是漏洞百出、危机四伏的猪场，员工充当了“消防队员”的角色，为了“火火”lfu忙得焦头烂额;侧重于“防”的猪场，一般是管理水平和生产水平较高的猪场，员工能够有条不紊地从事防疫和保健工作，很少出现大的疫情;1fO侧重于“养”的猪场，则是进入了“出神入化、游刃有余”境界的猪场:员工轻松快乐，猪群悠哉游哉! 这里的“养”是广义的养，包括良好的环境控制、良好的营养供给和良好的饲养管理。 良好的环境控制。合格的养猪人必须具备很强的环境意识:没有好的环境，就不可能有好的猪群;要想养好猪，首先要创造良好的环境。猪场大的环境应力求绿树成荫、花草遍地、没有异味、极少蚊蝇。栋舍之间应适当拉大距离，以利于通风、采光和防疫。进入办公区，应感觉不是进了猪场，lfi!是进了修身养性的庄园。猪舍小的环境应力争达到“干、净、暖、通风”4项标准。“干”指干燥，潮湿的环境不利于任何猪的生长、发育和繁殖;“净”指清洁卫生、及时清除污染物;“暖”指舍内温度适宜，冬天不寒冷、夏天不炎热;“通风”指换气良好、空气新鲜，空气中有害气体、灰尘、病原微生物浓度大幅降低。 良好的营养供给。饲料一成本是应该考虑的，但不可一味追求饲料一成本的降低，因为低的营养水平往往导致低的养殖水平。除了蛋白质、能量等应满足猪的营养需要外，更要确保足够的、比例均衡的多种维生素、微量元素和氨基酸等营养物质的供给。好的饲料一所起的作用，远远超过任何“灵月一妙药”。近年来大面积流行的所谓“高热病”，在一定程度上与养猪场、户过分追求降低饲养成本有关，用便宜饲料一、便宜药物和疫茁，包括在员工使用上也优先选择月薪要求低的员工，从lfu导致猪群健康状祝差、生产水平低。 良好的饲养管理。关键是对猪要有一颗“爱心”，这点在前面已述及。善待猪群者，猪会给以丰厚的回报:产得多、活得多、长得快;lfu虐待猪群者，猪只能给以微薄的回报:产得少、活得少、长得慢，这种回报可能连成本都不够。要尽可能减少诸如转群、换料一、注射、环境突变等对猪群造成的应激，使猪群充分发挥其遗传潜能。4对关键性的疾病进行净化，可使疾病控制难度大大降低 近儿年困扰养猪业的严峻疫情当中，病原是复杂多变的。有病毒:猪瘟病毒、蓝耳病病毒、伪狂犬病病毒、圆环病毒2型、流感病毒;有细菌:副猪嗜血杆菌、链球菌、巴氏杆菌、大肠杆菌、放线杆菌;还有支原体、弓形虫、附红细胞体等等。想把所有病原体都消火掉是困难的，也是不现实的。在全国一各地众多的疫情当中，猪瘟、蓝耳病和伪狂犬病都扮演了重要角色。对猪瘟和伪狂犬病进行净化，实践证明是切实可行的，也是行之有效的。 从2004年起，在中国兽医药品监察所丘惠深研究员指导下，山东省济宁原种猪场在山东省率先开展了全群猪瘟净化工作，每年两次对公猪、母猪和后备猪进行全群采样检测，至今已有5年多的时间。从2008年下半年起，济宁原种猪场又开始了猪群伪狂犬病的净化工作。尽管在这方面还存在一些争议，比如有无净化的必要、采用何种方法净化、能否达到顶期目的等等，但从全场生产水平的不断提高和引种客户的良好反映来看，疾病净化工作已经取得了巨大成效，我们将坚持不懈地做下去。 猪瘟净化方法:逐头活体采集扁桃体，到有条件的研究机构用荧光抗体法检测，凡抗原阳性者即为带毒猪，应坚决淘汰。净化的难度不在于技术难关，也不在于检测费用，lfi!在于巨大的淘汰成本，但这对本场和客户的长期利益都是值得的。5不要把“救死扶伤”当成养猪人的职责，应执行严酷的淘汰制度 在人医方面提倡“救死扶伤，发扬革命的人道}几义精神”，这是I}所当然的。lfi!在养猪生产实践中，如果一味追求“救死扶伤”，必将造成猪病的进一步泛滥。养猪的目的是为了赚钱，lfu不是研究疾病。对疾病的研究，应该是高等院校、利一研院所的专家和教授们的工作。 热衷于研究、治疗一各种疑难杂症的猪场，不可能是高效益的猪场，反倒有可能成为一各种病毒、细菌、支原体等病原微生物的乐园!吴增坚教授提出的“五不治”原则，具有很现实的指导意义:无法治疗的病猪不治，治疗费用高的病猪不治，费时费工的病猪不治，愈后经济价值不高的病猪不治，传染性强的病猪不治。经过一段时期的严酷淘汰，病净化将发挥积极的作用，猪群的健康状祝和生产性能会明显提高。6高度重视霉菌毒素对猪群的危害 2003年前后，霉菌毒素的危害开始引起养猪业的重视。回首过去匕八年的时间，霉菌毒素对养猪业造成的危害，已经远远超过单独的某一种疾病。近儿年闹得沸沸扬扬的所谓“高热病”中，霉菌毒素“功不可没”。 饲料一的作用胜过一切灵月一妙药，但如果饲料一原料一发生霉变，霉菌毒素就会对猪产生一定的毒害作用，甚至引起猪群发病死亡。玉米、豆粕、鼓皮、鱼粉等原料一都有可能受到霉菌毒素污染。在我国危害养殖业最}几要的是镰刀菌毒素，有玉米赤霉烯酮、伏马菌素和去氧瓜萎镰菌醇(呕叶毒素)，还有黄曲霉毒素、储曲霉毒素等，可引起猪群采食量下降、生长不良、泌乳力下降、发情不止常、流产、死胎等现象。霉菌毒素的免疫抑制作用，是尤其令养猪人头痛的问题!可以导致免疫效果降低甚至免疫失败，还可以造成用药无效。接种了猪瘟疫茁还照发猪瘟，接种了伪狂犬病疫茁还照发伪狂犬病，不一定是疫茁不好，也不一定是程序有问题，很可能是出现了免疫抑制。在实验室中证明很敏感的药物，应用到猪群中防治某些细菌性疾病，也有可能毫无效果。 2003年，很多玉米受到霉菌毒素污染，该年度猪群发病率明显升高;2006年，全国很多地区发生了猪的“高热病”，养猪业损失更为惨重，这在很大程度上与2005年收获的玉米受霉菌毒素污染有关。2009年9月，北方很多地区阴雨天气比较多，尤其应该警惕霉菌毒素可能造成的危害。 减轻霉菌毒素造成的危害，关键是要严把原料-采购关，宁可每斤多花儿分钱进好货，也不可贪图便宜进劣质原料一。有条件的可使用种子精选机对玉米等原料一进行精选，筛除小的霉粒及杂质。根抓霉菌毒素的污染情祝，在饲料一里面加入一定量的高效霉菌毒素处理剂，可以在一定程度上降低霉菌毒素的危害。7制定切实可行的防疫保健程序 要因地制宜、因场制宜、因时制宜，制定利一学的防疫保健程序，并确保落到实处。这里说的防疫保健程序，包括疫茁接种，也包括通过注射给药、饮水投药、饲料一投药等形式进行的药物保健。这些措施非常重要，直接关系到猪场的生存和发展。应该强调的是，任何专家推荐的任何防疫保健程序，都不可能是“放之四海lfu皆准”的真理，必须具体情祝具体分析。在某些问题上，一直是有不同观点的，不同的专家教授之间甚至争论不休，比如:哪些疫茁应列入防疫程序、猪瘟可否做超前免疫、蓝耳病疫茁有无接种的必要、若接种蓝耳病疫茁则应选火活茁还是弱毒茁、口蹄疫的防疫效果为何常常不理想等等。 专家教授的观点要虚心学习，其他先进猪场的成功经验也要积极借鉴，这样可以使白己少走弯路。但不加分析地对防疫保健程序进行照搬照抄，将是很危险的!必须经过小群试验，经过一段时间的对比、分析和总结，才可以确定适合白己的程序。对猪场lfi!言，稳定才是硬道理，合适的才是最好的

沙门氏菌病是公共卫生学上具有重要意义的人畜共患病之一，其病原沙门氏菌属肠道细菌科，包括那些引起食物中毒，导致胃肠炎、伤寒和副伤寒的细菌。它们除可感染人外，还可感染很多动物包括哺乳类、鸟、爬行类、鱼、两栖类及昆虫。人畜感染后可呈无症状带菌状态，也可表现为有临床症状的致死疾病，它可能加重病态或死亡率，或者降低动物的繁殖生产力。蛋、家禽和肉类产品是沙门氏菌病的主要传播媒介，感染主要取决于沙门氏菌的血清型和食用者的身体状况，受威胁最大的是小孩、老年人及免疫缺陷个体。根据国际惯例，要求对易受沙门氏菌污染的食品进行分类管理，以使大多数食物不含沙门氏菌，从而有效预防沙门氏菌病。为此，人们在探索沙门氏菌检测方法的过程中，作出了不懈的努力，现将有关进展报告如下，并介绍两种快速检测沙门氏菌的试剂盒。自19世纪后期，沙门氏菌首次被鉴定为人类的一种病原以来，检测方法学都是建立在采取感染病人的粪便或血液作为临床病料的基础上。此后的60年间，用于从食品中分离沙门氏菌的方法实质上与那些用于临床病料的方法是相同的。但至少有三个因素限制了用于临床病料的方法应用在食品分析上。第一，通常，沙门氏菌的含量水平在污染食品中比有感染病人的病料中要低很多；第二，食品本身的性质会干扰病原的检测，例如，某些食品中固有菌群可能处在一个很高的水平，从而影响特定细菌的选择性分离和鉴定；第三，与临床病料不同的是，经过加工的食品，由于加热、干燥、高含盐量、酸和冷冻等因素的作用，其中的沙门氏菌受到了尚不致命的损伤或称“致伤”。这就形成了一个具有不同生长特性的细菌群。这种现象对那些希望从食物样品中分离出沙门氏菌的食品分析家来说有很大影响，因为在选择培养基上直接培养“致伤”的沙门氏菌通常是以细菌死亡和试验失败而告终。为克服这些困难，人们建立了一种简单的微生物增殖步骤，专门针对以食品为传播载体的病原。虽然这些方法本身证明是可靠的，但却很费力、耗时，需要4～7天才能完成。因此，在需要及时、快速评价食品中微生物的安全性时，通常不被采用。随着DNA和抗体技术的发展，近10～15年间发展了无数改进的方法，其中许多可以在48h内检出沙门氏菌，这些方法通称为快速检测。1 传统的培养方法用于沙门氏菌分析的传统方法是食物样品分步增菌，以增加病原的可检出率，这种培养方法总体可分4个不同阶段或步骤。第一步(预增菌)，将样品加到一种高营养、无选择性的培养基中，温度37℃，使那些“致伤”的细菌复苏及使所有微生物生长。虽然缓冲胨水被建议常规使用(由于其可保持溶液pH值稳定)，但对培养基的选择仍存有争论。第二，是选择性增菌步骤，它使沙门氏菌生长而使肉汤中同时存在的微生物数量减少，与预增菌培养基相似，对选择性培养基的选择，也存在许多不同的观点。目前应用的主要有如下3种类型：连四硫基盐肉汤(Tetrathionate broth)、硒酸盐胱氨酸肉汤(Selenite cystine broth)和RV(Rappaport-Vassiliadis)培养基。由于没有任何一种培养基可以全面地保持所有食品基质或各种沙门氏菌血清型，所以，较适当的做法就是使用两种培养基平行地进行试验。第三步是分离步骤，即选择性培养物在含一种或多种抑制非沙门氏菌生长制剂的琼脂平板上划线培养，然后对平板上肉眼可见的特征性菌落进行确认，并对该菌落分离物进行一系列生化和血清学检测，以作出鉴定。传统沙门氏菌检测法全过程需时至少4～7天，才能得出明确的诊断结果。2 以抗体为基础的检测方法利用抗原-抗体反应的显著特异性，来进行细菌的鉴别和血清学定型，已有半个多世纪的历史。细菌菌体或鞭毛抗原的特异性抗体的存在，使得人们可以建立一些快速方法来检测以食品为载体的病原。已经建立的沙门氏菌免疫学检测方法有许多种，大致可分为以酶标抗体(ELISA)，荧光抗体染色(免疫荧光法)，同位素标记抗体(放射免疫试验)为基础的方法及其它多种以抗体为基础，利用乳胶凝集、免疫传感器、免疫扩散及免疫色谱技术的方法。但常规中最广泛采用的是以双位点ELISA技术即夹心ELISA为基础的方法。此法改进后用有放射活性的同位素替代标记抗体，概括地说，是指以固定在固体基质上的“捕捉”抗体来捕捉目标抗原，经洗涤除去未结合的成分，加入第二种酶标抗体，此者结合在捕捉到的抗原的不同位点上，第二次洗涤后加入酶作用基质，并令其与颜色成分反应，然后用分光光度法即很容易检 测到目标抗原。采用微量滴定板作为固态基质使反应形式标准化，并促成其自动化。最近黎兆滚等人首次在国内口岸系统应用微量板ELISA法(Salmonelle test 1)对进出口动物产品(鱼粉、肉骨粉等)进行沙门氏菌检测。该法采用预先包被了沙门氏菌(A-E群)单克隆抗体的微量板，加入经增菌处理的样品，反应后再加入一定的指示剂，作用毕后用酶标仪测定OD值来判定结果。食物样品经适当的增菌处理，也可用此法进行沙门氏菌检测。ELISA法检出沙门氏菌的极限范围在105～106个细胞/ml，因此，要得出可靠的结果，食物样品首先必需进行预增菌、选择性增菌，通常还要在含有D-甘露糖的肉汤(M肉汤)中进行后增菌，以促进鞭毛发育。总的来说，标准的ELISA法样品的制备，约需要经过40～48h的孵育才能完成。黎兆滚等人的微量板ELISA法(Salmonella test 1)样品制备过程分三步，共耗时24h：①选用营养肉汤进行预增菌(6h)，使“致伤”、冷冻的沙门氏菌复苏。②使用选择性培养基RV进行增菌(14h)，使沙门氏菌大量繁殖，同时抑制其它杂菌生长。③使用营养肉汤(蛋白胨水)进行后增菌(4h)，使沙门氏菌的数量大大增加。比上述标准的ELISA法样品制备过程缩短了一半的时间。ELISA方法本身，则仅需要大约2h而已(其中30min是操作时间，90min是孵育时间)。相比之下，黎兆滚等人的方法可在27h内完成，比上述方法缩短了一半的时间，颇值得推广应用。最新式的沙门氏菌免疫学检测法，利用经特异性抗体敏化的免疫色谱卡片为基础。几滴样品加到卡片上，结果可以直接用肉眼读出。免疫色谱卡片极易操作，且由于无需要特殊设备，很适合小型实验室使用。尽管卡片检测法与ELISA法一样需要对样品进行增菌处理，但它(卡片法)本身通常需时不超过10min，如果采用黎兆滚等人的样品制备法，则可使操作时间更为缩短。3 以核酸为基础的方法细胞核酸DNA和RNA是唯一一类可以携带信息的大分子。由于所有的细胞都含有这种分子，可以利用它作为检测的标靶。标靶通常是一个特异性核酸序列，它可通过以补体核酸分子作为探针来检出。与免疫学方法相似，探针也需要加附适当的标记，如放射性同位素、酶或发光的标识物。Fitts等人在食品沙门氏菌检测中引入了第一代DAN—RNA杂交技术，此法应用的探针含有用放射性同位素标记的伤寒沙门氏菌DNA片段，其敏感性高，经大约48h的增菌步骤后，检测极限可达108个细菌/ml，但由于要使用放射性同位素，只能在专门的实验室应用，此方法的优点都被抵消了。为此，以核酸杂交为基础的第二代技术—比色计目前已发展起来。这种方法依赖于沙门氏菌核糖体RNA(rRNA)—核糖体发育过程中储存的核酸成分的检测。核糖体是细胞蛋白质合成器的一部分，每个细菌细胞中存在5000～20 000个复制体，而相比之下染色体DNA复制体仅2～10个。这种天然富含rRNA标靶序列的情况使得用无辐射计检测成为可能，同时又保持了与放射性同位素方法相当或更高的敏感性。其另一优点是由于rRNA为单链(而DNA为双链)，杂交前无需经过变性步骤。要得到阳性结果，此法需要105个靶细胞/ml，因此对沙门氏菌检测来说，需要进行预增菌和选择性增菌，总共约50h。rRNA探针法比沙门氏菌ELISA法更耗时，但二者成本相近。食品细菌检测法的最新进展是在化学扩增体系方面的发展，即聚合酶链反应(PCR)，用该体系可对制备好的样品进行细菌DNA扩增，以便更易于用诸如凝胶电泳法或比色型ELISA法检测。用于检测沙门氏菌和其它以食物为载体的病原的PCR方法业已建立，其中一些方法显示了极好的敏感性。但该法较难自动化，且必需经选择性增菌以稀释可能干扰检测反应的某些成分。一个完整的以PCR为基础的方法，需要2天才能完成，很大程度上抵销了其高敏感性的优点，但这种方法对那些含沙门氏菌较少或沙门氏菌“致伤”严重难以复苏而仍保有沙门氏菌rRNA的样品尤其有效。尽管目前用来检测沙门氏菌的方法各有优缺点，但随着科学发展，技术进步，人们探索、实践的继续深入，我们可以期待，将会有更多，敏感性更高，特异性更强，诊断时间更短的新方法出现。4 两种沙门氏菌快速检测法 Transia沙门氏菌平板检测法 与耗时、昂贵的传统方法相比，此法快1～2天，且每次检测所需的操作时间缩短。该法建立在夹心ELISA法的基础上，利用多抗体混合物以保证检出所有的沙门氏菌血清型。反应的固相载体是一种有可见或不可见条纹的微量反应板。其小孔内包被有沙门氏菌的特异性单克隆抗体。第一阶段，在小孔内加入样品和抗体联合物(沙门氏菌属特异性单克隆和多克隆抗体的混合物)。孵育期间，沙门氏菌抗原和包被抗体形成了一种复合物：包被单克隆抗体-沙门氏菌抗原-抗体联合物。洗涤后，通过每孔加入基质溶液(过氧化脲)和色素原溶液(四甲基氨基丙苯)来显示上述复合物；酶催化色素原的氧化，结果产生蓝色。加入反应终止液终止催化反应，并使反应混合物酸化，颜色由蓝变黄。这种ELISA方法可对经选择性增菌及热休克作用后，释放了特异性沙门氏菌抗原的食品和环境样品进行检测。如采用黎兆滚等人的样品制备法，可大大缩短检测时间；此法可在没有酶标仪的实验室进行，从这点来说，Transia沙门氏菌平板检测法比黎兆滚等人的微量板ELISA法(Salmonella test 1)更适应于一般的实验室使用。 Transia沙门氏菌卡片检测法 此法以单步免疫反应即夹心型免疫色谱反应为基础。反应固相包括一块用“抗沙门氏菌抗体-染料”偶合物浸透的染料衬垫和一张薄膜条，抗沙门氏菌抗体就固定在薄膜的反应区上。增菌后，增菌肉汤用移液管加到样品小孔内并令其吸收，如样品存在沙门氏菌抗原，它们会与偶合物作用，然后依次迁移到膜上，与固定在膜上反应区的抗体结合，在反应窗上呈现一条色带。最后结果可在5～7min内读取。此法也适用于没有酶标仪的实验室。如采用黎兆滚等人的样品制备法，可更加缩短检测时间，可在普通实验室条件下进行。参考文献1.黎兆滚，陈博文,等.用ELISA法快速检测沙门氏菌.中国进出境动植检,1997，(3)： Axelsson,Marie-laure Salmonella technical handbook 1997,16～ bergogata 5,S-422 46 Hisings Backa, in laboratry 89-01,October 1988,1～ agricultural Libraty,Beltsville, Welfare Information Center (AWIC).(301)344～3212.