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骨关节炎滑液中肿瘤坏死因子α活性检测及滑膜组织超微结构观察中华外科杂志 1998年第2期第36卷 骨科基础研究作者:邓廉夫 柴本甫 李慧 齐进单位:200025 上海市伤骨科研究所关键词:骨关节炎;滑液;肿瘤坏死因子;显微镜检查,电子 【摘要】 目的 进一步探讨滑膜参与骨关节炎病理进程的机理。方法 采用L929细胞毒活性法检测了24例急、慢性关节内损伤及晚期骨关节炎(OA)患者关节滑液中肿瘤坏死因子(TNF-α)生物活性,并用光镜和电镜观察比较三者滑膜组织间的形态学差异。结果 OA滑液中所含TNF-α水平较高;OA滑膜细胞性内膜,细胞增殖与脱落同时发生,内膜下层呈现明显的纤维增生性变、滑膜增厚;B型和A型滑膜细胞的超微结构变化分别呈现旺盛的蛋白分泌相和活跃的吞噬功能。结论 OA滑膜细胞的功能改变是其滑液中TNF-α升高的原因之一;滑膜的变性既可受变性软骨产物的介导,又可导致OA的进展。 Bioassay of TNF-α in synovial fluid and ultrastructural observation of synovium from patients with osteoarthritis Deng Lianfu,Chai Benfu,Li Hui,et al. Shanghai Institute of Traumatology and Orthopaedics, Shanghai 200025. 【Abstract】 Objective To better define the role of synovium in the pathogenesis of osteoarthritis (OA).Methods We measured the bioactivity of tumor necrosis factor-α(TNF-α) in synovial fluid (SF) and exammined the histologic and ultrastructural features of the synovium from patients with OA and from patients with acute and chronic traumatologic joint. Results The results showed that the levels of TNF-α in SF from OA were significantly fibrosis and thickened intima were found in OA synovium, with much dense collagen,which,in some cases, was banded,but no specific inflammtory changes were B cells in OA synovium had the characteristics of organelles of cells active in synthesizing and secreting A cells in OA synovium had the features of the macrophage. Conclusion Evident fibrosis in synovium may be either mediated by the cartilage degradation product or by the enchanced joint damage process in OA. 【Key words】 Osteoarthritis Synovial fluid Tumor necrosis factor Microscopy,elec- tron 近年来,在关节疾病发生、发展机理的研究中,细胞因子的介导作用日益受到重视〔1,2〕。本研究通过检测及观察比较不同形式关节内损伤和骨关节炎(OA)滑液中肿瘤坏死因子(TNF-α)含量和滑膜超微结构的变化,旨在进一步探讨滑膜参与OA病理进程的机理。资料和方法 1.滑液标本:本组24例患者,其中OA行全髋、全膝关节置换术者9例(男5例、女4例,年龄62±4岁);股骨颈囊内骨折行股骨头置换术者6例(男2例、女4例,年龄67±岁);股骨头无菌性坏死行股骨头置换术者5例(男4例、女1例,年龄57±6岁);胫骨平台骨折、半月板损伤行关节镜清创术者4例(男3例、女1例,年龄±岁)。 术前抽取每一患者关节滑液2~5ml,4 000r/min离心30分钟,置1ml离心管分装,-50℃冷藏、待测。 2.滑液中TNF样物质生物活性检测:用L929细胞毒活性测定法〔3,4〕。重组人TNF-α标准品由上海生物化学研究所华新公司提供。测定结果以L929细胞杀伤率(KR)表示。 KR(%)=〔阴性对照(OD)-标本(OD)〕÷〔阴性对照(OD)-阳性对照(OD)〕×100% 阴性对照为L929细胞+更生霉素D;阳性对照为L929细胞+重组人TNF-α+更生霉素D。 3.滑液中TNF-α特异性检测:将TNF-α单克隆抗体(军事医学科学院基础医学研究所)1∶10稀释后加入重组人TNF-α和待测滑液标本中,37℃作用1小时、4℃作用30分钟,2 000r/min离心10分钟,取上清,检测其L929细胞毒活性。 4.滑膜标本及处理:患者滑膜标本取材同滑液标本。无明显关节疾病的尸检滑膜标本2例,作对照。分不同部位,取滑膜组织2块(约1cm×1cm),近内膜处取滑膜约,PBS漂洗,常规电镜制片,铅、铀双重染色,日立H-500型透射电镜观察;余下标本,常规电镜制片,HE和AS染色,光镜观察。结 果 一、滑液中TNF样物质的生物活性 在所有被检测的滑液标本中,均呈现L929细胞毒作用,但不同来源的标本,对L929细胞杀伤率不同(KR值为%~%)。以KR=90%为界,KR>90%者:OA组7例(7/9);股骨头无菌性坏死患者和股骨颈囊内骨折患者作为老年性慢性关节内损伤组(CAT)2例(2/11);胫骨平台骨折和半月板损伤作为急性关节内损伤组(AAT)2例(2/4)(图1)。图1 三组患者关节滑液中TNF-α的KR值及发生频数示意图 采用四格表确切概率法(x2)进行组间统计学处理,OA组患者滑液所含TNF-α水平较高,对L929细胞毒作用的发生率明显高于CAT组及AAT组(P≤)。 二、滑液中TNF-α的特异性 滑液标本中加入1∶10稀释的TNF-α单克隆抗体后,其L929细胞毒活性物质可被完全或大部分中和,从而使KR值接近于阴性对照。 三、滑膜的形态学观察 1.滑膜组织学结构: (1)正常滑膜:滑膜层细胞性内膜由2~3层滑膜细胞组成,较疏松地平行排列,包埋在基质中;基质内的纤维成份由内向外逐渐增多,至内膜下层胶原纤维呈波浪状;细胞性内膜无明显基膜,因此与内膜下层分界不明显。滑膜下层结构疏松,含有较多的脂肪组织及纤维网状组织。 (2)急性胫骨平台骨折及半月板损伤滑膜:与正常滑膜比较,有较多血细胞为主要表现,血细胞多分布于内膜下层,但无多核性巨噬细胞。 (3)股骨颈囊内骨折滑膜和股骨头无菌性坏死滑膜:两者组织学特征呈现相似的变化,细胞性内膜细胞狭长,1~3层平行排列,其间基质成份稀少;内膜下层较薄,极少有细胞成分。 (4)OA滑膜:细胞性内膜细胞较大、变圆,平行排列;有的部位细胞层缺失,使内膜下层纤维呈绒毛状突出于滑膜内表面,而有的部位细胞层增多,可达6层,细胞间质成分较多(图2);内膜下层增厚,以波浪状胶原纤维成分为主,有的部位呈束状(图3);滑膜层(细胞性内膜至滑膜下层脂肪组织)可达~,纤维间缺乏细胞成分。 2.滑膜超微结构: (1)正常滑膜:正常滑膜细胞性内膜可分为A、B型细胞。A型细胞较多、形似巨噬细胞,细胞器以吞噬相为主要特征,包括发达的高尔基体,分散于胞质内的多种形式的小泡或囊泡和溶酶体;胞膜有较多细长的突起伸向间质;B型细胞形似成纤维细胞,细胞器以蛋白分泌相为主要特征,包括丰富的成层排列的粗面内质网,较多的高尔基体和线粒体。细胞间质为颗粒状或细丝状不定形纤丝,逐渐向内膜下层过渡为有周期性横纹的胶原纤丝。 (2)急性胫骨平台骨折和半月板损伤性滑膜:滑膜细胞以B型细胞为主,呈三角形或柱状;B型细胞蛋白分泌相旺盛,粗面内质网呈池状扩张,胞质内可见有脂滴及小泡;细胞膜较少突起;细胞周围有纵横排列的具周期性横纹的胶原纤丝;内膜下层胶原纤丝束状排列(图4)。 (3)股骨颈囊内骨折滑膜:滑膜细胞以A型滑膜细胞为主,细胞膜有不规则突起,细胞质内含有大量的溶酶体、丰富的高尔基体、囊泡及脂滴(图5);B型细胞狭长,胞质内细胞器较少;细胞周围胶原纤丝稀疏(图6)。 (4)股骨头无菌性坏死滑膜:A型滑膜细胞体积较大,形态不规则,胞膜具有绒毛状或指状突起,胞质内含大量的溶酶体、吞噬物及囊泡(图7);B型细胞形态不规则,胞膜突起较长,胞突内及细胞周围可见胶原纤丝。 (5)OA滑膜:滑膜细胞体积较大,A、B型细胞都呈现功能活跃相。A型细胞呈三角形,胞膜有微绒毛样突起,胞核染色质常凝集成团块状,细胞质内含大量的溶酶体及小泡(图8);B型细胞呈极度活跃的蛋白分泌相,并含有较多的囊泡(图9)。细胞间常呈斑点和缝隙样连接。在滑膜细胞层内,尚可见三角形具较长突起的细胞,细胞质内较少细胞器,但含有丰富的中丝分布于核的周围。A、B型细胞周围具周期性横纹的胶原纤丝丰富。讨 论 1.在已知的细胞因子中,IL-1、TNF-α和IL-6是参与OA发病进程的重要介质。实验性OA的早期,TNF-α是滑液中最先出现的细胞因子,并与关节软骨的降解相关〔5〕。TNF-α既协同IL-1的作用,又可激活IL-6基因、诱导IL-6的生成,在OA的发生、发展中有可能起着决定性作用〔6〕。一般认为TNF-α可来源于由单核细胞等浸润的炎性滑膜组织及变性软骨细胞。然而,本研究发现,除变性的软骨细胞等因素外,晚期OA与其滑液中TNF-α含量增加相关的滑膜组织并非表现为明显的炎性病变,而以A、B型滑膜细胞功能异常活跃为主。因此,可以认为滑液中TNF-α的异常升高主要归因于滑膜A、B型细胞的功能异常。 通常被分为原发性和继发性,但两者并无明显的病理学差异。继发性OA可由多种原因所诱发,关节创伤几乎不可避免地引起OA〔7〕。既往的动物实验表明,单一的急性滑膜炎症并不能诱发OA,只有对滑膜炎性病变的关节施加可致关节不稳定性因素时,才能导致OA的发生〔8〕。本研究发现,因胫骨平台骨折和半月板损伤所造成的关节内创伤,B型滑膜细胞数量增加、功能旺盛,从而使内膜下层胶原纤维含量丰富。这种现象在晚期OA滑膜组织同样发生,并且滑膜组织的纤维化程度及厚度增加更为明显。提示其间可能存在的某些因果关系。关节创伤后,一方面机体对损伤后的保护性限动,加速关节软骨的退变〔7〕;另一方面滑膜组织细胞因对创伤的反应性而出现异常增殖和功能改变,使关节滑液出现异常蛋白分子(包括细胞因子等),进而刺激滑膜细胞的增殖〔9〕,使关节力学特征因滑膜纤维化(甚至瘢痕化)而改变,关节软骨细胞生活微环境进一步向非生理方向变化,形成恶性循环,结果导致关节软骨细胞变性,呈现OA的病理特征。这其间更复杂的机理有待进一步阐明。 3.关节软骨的退变及变性软骨细胞的产物,可促进滑膜细胞的增殖和功能。股骨颈囊内骨折和股骨头无菌性坏死,作为关节内亚急性及慢性创伤的病因,本研究未发现滑膜组织明显的纤维性增生现象,坏死组织主要刺激A型滑膜细胞,使其数量增加、吞噬功能活跃。而在关节软骨并不坏死的情况下,关节内损伤早期及晚期OA,B型滑膜细胞功能异常旺盛、蛋白分泌相活跃;在OA,因脱落关节软骨碎片等异物刺激,A型滑膜细胞同时亦呈现功能活跃相。提示滑膜细胞,尤其是B型滑膜细胞的生物学活性提高,可能由变性软骨细胞的分泌物所介导。这种介导作用还表现为,OA滑膜组织内,有些A型滑膜细胞质内含有丰富的中丝,这可能与细胞的迁移、转化有关〔10〕。图2 骨关节炎滑膜组织,细胞性内膜厚薄不均,内膜下层细胞成分极少(HE×) 图3 骨关节炎滑膜组织,内膜下层胶原纤维呈波浪状或束状排列(AS×130) 图4 急性胫骨平台骨折滑膜B型细胞,呈三角形、蛋白分泌相旺盛(TEM×5000) 图5 股骨颈囊内骨折,A型滑膜细胞含大量吞噬囊泡及高尔基体,细胞膜呈指状突起(TEM×5000) 图6 股骨颈囊内骨折,B型滑膜细胞狭长,细胞质内细胞器较少(TEM×5000) 图7 股骨头无菌性坏死,A型滑膜细胞含大量的吞噬异物(TEM×5000) 图8 骨关节炎,A型滑膜细胞膜微绒毛状突起,细胞质内含大量溶酶体及小泡(TEM×4000) 图9 骨关节炎,B型滑膜细胞,呈蛋白分泌旺盛相,细胞周围有大量的胶原纤丝(TEM×4000)参 考 文 献 1 Pelletier JP, Di Battista JA, Roughleg P, et al. Cytokines and inflammation in cartilage degration. Rheum Dis Clin North Am,1993,19:545-568. 2 Arend WP, Dayer JM. Inhibition of the production and effects of interleukin-1 and tumor necrosis factor-α in rheumatoid arthritis. Arthitis Rheum, 1995,38:151-160. 3 Flick DA, Gifford GE. Comparison of in vitro cell cytotoxic assays for tumor necrosis factor. J Immun Method, 1984,68:167-175. 4 郑永唐,贲昆龙. 测定细胞存活和增殖的MTT方法的建立. 免疫学杂志,1992,8:266-269. 5 Venn G, Nietfeld JJ, Duits AJ, et al. Elevated synovial fluid levels of interleukin-6 and tumor necrosis factor associated with early expermental canine Rheum, 1993,36:819-826. 6 邓廉夫,柴本甫. IL-1、TNF和IL-6与骨关节炎. 国外医学创伤与外科基本问题分册,1996,17:102-106. 7 Howell DS. Pathogensis of osteoarthritis. Am J Med, 1986,80:24-28. 8 Walker ER, Boyd RD, Wu DD, et al. Morphologic and morphometric changes in synovial membrane associated with mechanically induced osteoarthrosis. Arthitis Rheum, 1991,34:515-524. 9 Gitter BD, Labus JM,Lees SL,et of human synovial fibroblast activation by IL-1β and TNF-α. Immunology, 1989,66:196-200. 10 Meek WD, Raber BT, McClain OM, et al. Fine structure of the human synovial lining cell in osteoarthritis:its prominent cytoskeleton. Anat Record, 1991,231:145-155.
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摘要:现代生物技术制药工业始于1971年,现已创造出35个重要治疗药物,全球大约有2500多家公司,主要产品有重组蛋白质药品、重组疫苗和诊断、治疗用的单克隆机体三大类。我国自80年代开始进行现代生物技术药品的研究和开发,到1998年7月底,我国已有近200多个现代生物技术制药企业,已有14种现代生物技术药品和疫苗投产,已经批准进入临床的有近10种药,正在进行临床前研究的有10多种。在采用现代生物技术改造传统生物技术制药产业方面已取得初步成果。但我国生物技术诊断试剂、酶工程、动植物细胞工程医药产品、现代生物技术支撑技术、后处理技术和制剂技术等方面与国外还存在差距。其中不重视中试放大过程是影响我国生物技术产业化发展的一个很重要的原因。 关键词:生物技术制药 生物技术的应用 生物技术发展 生物药物研究进展 生物技术药物(biotech drugs)或称生物药物(biopharmaceutics)是集生物学、医学、药学的先进技术为一体,以组合化学、药学基因(功能抗原学、生物信息学等高技术为依托,以分子遗传学、分子生物、生物物理等基础学科的突破为后盾形成的产业。现在,世界生物制药技术的产业化已进入投资收获期,生物技术药品已应用和渗透到医药、保健食品和日化产品等各个领域,尤其在新药研究、开发、生产和改造传统制药工业中得到日益广泛的应用,生物制药产业已成为最活跃、进展最快的产业之一。有些学者认为,20世纪的科学技术是以物理学和化学的成就占主导地位,而21世纪的科学技术是以生物学的成就占主导地位。无论这种说法是否得到普遍的认同,生物技术是当今高技术中发展最快的领域似乎是不争的事实。 科学家预测,生命科学到2015年会取得革命性进展。这些进展可以帮助人类解决很多目前无法医治的疾病的治疗问题,彻底消除营养不良,改善食品的生产方式,消除各种污染,延长人类寿命,提高生命质量,为社会安全和刑侦提供新的手段。有些成果还可以帮助人类加速植物和动物的人工进化以及改善生态环境对人类的影响等。产生新的有机生命的研究也会取得进展。 1.生物制药现状 目前生物制药主要集中在以下几个方向: 1 肿瘤 在全世界肿瘤死亡率居首位,美国每年诊断为肿瘤的患者为100万,死于肿瘤者达万。用于肿瘤的治疗费用1020亿美元。肿瘤是多机制的复杂疾病,目前仍用早期诊断、放疗、化疗等综合手段治疗。今后10年抗肿瘤生物药物会急剧增加。如应用基因工程抗体抑制肿瘤,应用导向IL-2受体的融合毒素治疗CTCL肿瘤,应用基因治疗法治疗肿瘤(如应用γ-干扰素基因治疗骨髓瘤)。基质金属蛋白酶抑制剂(TNMPs)可抑制肿瘤血管生长,阻止肿瘤生长与转移。这类抑制剂有可能成为广谱抗肿瘤治疗剂,已有3种化合物进入临床试验。2 神经退化性疾病 老年痴呆症、帕金森氏病、脑中风及脊椎外伤的生物技术药物治疗,胰岛素生长因子rhIGF-1已进入Ⅲ期临床。神经生长因子(NGF)和BDNF(脑源神经营养因子)用于治疗末稍神经炎,肌萎缩硬化症,均已进入Ⅲ期临床。 美国每年有中风患者60万,死于中风的人数达15万。中风症的有效防治药物不多,尤其是可治疗不可逆脑损伤的药物更少,Cerestal已证明对中风患者的脑力能有明显改善和稳定作用,现已进入Ⅲ期临床。Genentech的溶栓活性酶(Activase重组tPA)用于中风患者治疗,可以消除症状30%。 3 自身免疫性疾病 许多炎症由自身免疫缺陷引起,如哮喘、风湿性关节炎、多发性硬化症、红斑狼疮等。风湿性关节炎患者多于4000万,每年医疗费达上千亿美元,一些制药公司正在积极攻克这类疾病。如 Genentech公司研究一种人源化单克隆抗体免疫球蛋白E用于治疗哮喘,已进入Ⅱ期临床;Cetor′s公司研制一种TNF-α抗体用于治疗风湿性关节炎,有效率达80%。Chiron公司的β-干扰素用于治疗多发性硬化病。还有的公司在应用基因疗法治疗糖尿病,如将胰岛素基因导入患者的皮肤细胞,再将细胞注入人体,使工程细胞产生全程胰岛素供应。 4 冠心病 美国有100万人死于冠心病,每年治疗费用高于1 170亿美元。今后10年,防治冠心病的药物将是制药工业的重要增长点。Centocor′s Reopro公司应用单克隆抗体治疗冠心病的心绞痛和恢复心脏功能取得成功,这标志着一种新型冠心病治疗药物的延生。基因组科学的建立与基因操作技术的日益成熟,使基因治疗与基因测序技术的商业化成为可能,正在达到未来治疗学的新高度。转基因技术用于构造转基因植物和转基因动物,已逐渐进入产业阶段,用转基因绵羊生产蛋白酶抑制剂ATT,用于治疗肺气肿和囊性纤维变性,已进入Ⅱ,Ⅲ期临床。大量的研究成果表明转基因动、植物将成为未来制药工业的另一个重要发展领域。 2.生物制药展望 今后10年生物技术将对当代重大疾病治疗剂创造更多的有效药物,并在所有前沿性的医学领域形成新领域。目前热门的药物生物技术如下:表1 热门药物生物技术技 术 新颖性 技 术 新颖性 组合化学 成熟领域 前导物综合鉴定技术 新生技术 药学基因组科学 发展领域 核糖酶 新生技术 蛋白质工程 发展领域 抗体酶 新生技术 基因治疗 发展领域 药物设计与人工智能 新生技术 糖类治疗剂 发展领域 功能抗原 新生技术 表2 正在研究开发的生物技术药物类型领 域 开发药物品种 领 域 开发药物品种 单克隆体 78 人生长激素 5 疫苗 62 组织纤溶酶原激活剂 4 基因治疗 28 凝血因子 3 白介素 11 集落细胞刺激因子 3 干扰素 10 促红细胞生成素 2 生长因子 10 SOD 1 重组可溶性受体 6 其他 56 反义药物 6 总数 284 生物学的革命不仅依赖于生物科学和生物技术的自身发展,而且依赖于很多相关领域的技术走向,例如微机电系统、材料科学、图像处理、传感器和信息技术等。尽管生物技术的高速发展使人们难以作出准确的预测,但是基因组图谱、克隆技术、遗传修改技术、生物医学工程、疾病疗法和药物开发方面的进展正在加快。除了遗传学之外,生物技术还可以继续改进预防和治疗疾病的疗法。这些新疗法可以封锁病原体进入人体并进行传播的能力,使病原体变得更加脆弱并且使人的免疫功能对新的病原体作出反应。这些方法可以克服病原体对抗生素的耐受性越来越强的不良趋势,对感染形成新的攻势。 除了解决传统的细菌和病毒问题之外,人们正在开发解决化学不平衡和化学成分积累的新疗法。例如,正在开发之中的抗体可以攻击体内的可卡因,将来可以用于治疗成瘾问题。这种方法不仅有助于改善瘾君子的状况,而且对于解决全球性非法毒品贸易问题具有重大影响。 各种新技术的出现有助于新药物的开发。计算机模拟和分子图像处理技术(例如原子力显微镜、质量分光仪和扫描探测显微镜)相结合可以继续提高设计具有特定功能特性的分子的能力,成为药物研究和药物设计的得力工具。药物与使用该药物的生物系统相互作用的模拟在理解药效和药物安全方面会成为越来越有用的工具。例如,美国食品药物管理局(FDA)在药物审批的过程中利用Dennis Noble的虚拟心脏模拟系统了解心脏药物的机理和临床试验观测结果的意义。这种方法到2015年可能会成为心脏等系统临床药物试验的主流方法,而复杂系统(例如大脑)的药物临床试验需要对这些系统的功能和生物学进行更为深入的研究。 到下世纪初生物技术药物的种类数目尚不会超过一般药物的总数,但生物技术制药公司总数将超过前10年的6倍。目前主要生物技术公司多分布在美国,如Amgen,Genetics institute,Genzyme,Genentech和Chiron,还有Biogen也发展较快。1987年尚没有一种重组DNA药物进入世界药品销售额排名前列表,但到1996年已有多种生物工程药物榜上有名。经上市的生物技术药物主要含3大类,即重组治疗蛋白质、重组疫苗和诊断或治疗用的单克隆抗体。 药物的研究开发成本目前已经高到难以为继的程度,每种药物投放市场前的平均成本大约为6亿美元。这样高的成本会迫使医药工业对技术的进步进行巨大的投资,以增强医药工业的长期生存能力。综合利用遗传图谱、基于表现型的定制药物开发、化学模拟程序和工程程序以及药物试验模拟等技术已经使药物开发从尝试型方法转变为定制型开发,即根据服药群体对药物反应的深入了解会设计、试验和使用新的药物。这种方法还可以挽救过去在临床试验中被少数患者排斥但有可能被多数患者接受的药物。这种方法可以改善成功率、降低试验成本、为适用范围较窄的药物开辟新的市场、使药物更加适合适用对症群体的需要。如果这种技术趋于成熟,可以对制药工业和健康保险业产生重大影响。 值得注意的是,制药工业的知识产权保护在世界各地是不平衡的。某些地区(例如亚洲)会继续以生产专利过期药物为主,有些地区(如美国和欧洲)除了继续生产低利润的药物外会不断开发新的药物。 总之,综合多学科的努力,通过新技术的创立可以大大拓宽发明新药的空间,增加发明新药的机遇与速度。因为这些手段可以寻找快速鉴定药物作用的靶,更有效地发现更多新的先导物化学实体,从而为发明新药提供更加广阔的前景。
“克隆”这个、词对大家来说想必已经耳熟能详了吧,克隆是英文Clone一词的单译,意为无性繁殖系,即通过无性繁殖(如细胞丝分裂)可连续传代并形成的群体,常用于细胞水平的描述。克隆技术(Cloning)则指由众多的基因或细胞群体中通过无性繁殖和选择获得目的基因或细胞的技术操作。如基因克隆是指某种目的基因的分离过程,通常是将生物材料的遗传物质如DNA以酶切成片断,插入到载体中,通过无性繁殖(细菌或细胞的倍增)使其扩增,然后再以某种探针选择、钓取目的基因。细胞克隆技术在制备单克隆抗体的B淋巴细胞杂交瘤技术中运用的最为充分,永生性骨髓瘤细胞与某种抗体生成细胞融合后,接种于多孔板或软琼脂上,生成的细胞集落性状各不相同,采用特定的标记抗原即可筛选到产生目的抗体的杂交瘤细胞系。可是我们对这个词并不抱乐观的态度。我觉得“克隆”技术对人权的侵犯是极重的(从客观的角度来看)世上谁希望多出一个跟自己长的一样的人呢?这是多么可爱的一只克隆羊啊,可是大家知道,用来克隆多利羊的母羊有6岁,那么多利羊的生理年龄是从6岁开始累计呢,还是像新生羊那样从零岁开始累计?1999年5月27日,培育多利羊的英国PPL医疗公司和罗斯林研究所科学家组成的一个研究小组宣布,多利的染色体端粒长度比同年龄普通绵羊要短。这意味着多利可能会比普通绵羊更快地走向衰老和死亡,表明了现有克隆技术的局限性。在看下一条消息: 4月6日,多国媒体纷纷报道了一个重大消息:曾引起广泛争议的意大利妇科医生塞韦里诺.安蒂诺里5日在阿拉伯联合酋长国阿布扎比参加一个有关克隆和基因工程的学术会议时宣布,他正在进行一项克隆人的计划,有5000对夫妇参加了该计划,而且目前有一名妇女已经怀有8周身孕。如果报道属实,这位妇女怀的将是得到确认的人类历史上第一个成功植入人体的克隆人胚胎。如果她成功诞下腹中婴儿的话,该婴儿将是人类历史上第一位克隆人。 早在2001年1月,安蒂诺里和扎沃斯在美国肯塔基州列克星敦举行的一次会议上宣布,他们将联手尝试克隆人,以帮助不育夫妇获得后代。安蒂诺里当时就表示,由于欧洲对克隆人“谈虎色变”,他不会在欧洲进行克隆人实验,其地点很可能会选择在海湾某个国家。安提诺里的计划宣布后曾引起世界范围内对克隆人问题的大辩论。由于克隆人会导致很多复杂的伦理道德以及技术问题,世界很多生物技术发达的国家都立法禁止克隆人。面对一心想当“克隆人之父”的安提诺里,各国媒体不由得纷纷惊呼:狼来了!意大利医生安蒂诺里继上周五(4月5日)宣布一名不育妇女,已透过复制胚胎技术怀孕八星期后,又表示全球首名复制婴儿将成为阿拉伯一名富商的儿子。非常严重先天不足的情况下,贸然踏上克隆人之路是非常不负责的。实际上,克隆婴儿能不能活下来就是个问题。我希望最好的结果就是胎儿夭折!”
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