天津医科大学硕士学位论文 中文摘要 目的:血友病A是由于遗传性凝血因子VIII基因缺陷,造成血浆凝血因子VIII含量不足或功能缺陷,引起的一组终身出血的凝血障碍性疾病n,2|。凝血因子VIII是治疗血友病的唯一有效用药,它的生产原料就是血浆,而血浆的严重不足造成了目前凝血因子VIII一药难求的局面,也使有些患者不治而亡。 FVIII, 血友病A的治疗主要包括血浆来源的凝血因子VIII(plasma-derived FVIII,rFVIII)制剂∞1。重组凝血pdFVIII)和重组凝血因子VIII(recombinant因子VIII制剂的问世是血友病治疗史上的一大突破【4J,由于生产工艺繁琐、价格昂贵其生产仅限于发达国家【5J。目前国内对血友病A的治疗仍以血浆凝血因子VIII浓缩剂为主,然而接受这类血液制品的患者其感染病毒性肝炎及艾滋病等传染性疾病的风险较高。重组凝血因子VIII在生化、免疫、凝血活性及药物动力学等方面与血浆来源的凝血因子VIII无明显差别,但其在纯度、抗原性、安全性、无自身血源性病毒感染等方面具有血浆来源的凝血因子VIII无法比拟的优点,具有良好的应用前景。面对目前国内凝血因子VIII的短缺,利用基因工程生产重组凝血因子VIII成为解决其短缺的一个重要方法。B区缺失型fA760aa-1 domain-deletedhumanFVIII,BDDhFVIII) 639aa)人凝血因子VIII(B与野生型凝血因子VIII具有相同的生物学特性,但B区缺失型凝血因子VIII却解决了载体包装容量的限制,且表达产物的结构更为简单n’2’6|。本研究通过构建含有BDDhFVIII的真核表达质粒,转染HepG2细胞使其稳定表达人凝血因子VIII。方法:参照GenBank人凝血因子VIII基因序列设计引物并加入限制性内切酶 I和Xho位点及