日本宫颈癌研究进展论文

宫颈癌是全世界妇科肿瘤相关死亡的主要原因，也是在妇女中第二大最常见的恶性肿瘤，而持续感染高危人乳头瘤病毒(HR-HPV)是宫颈癌发生的主要原因。由于目前HPV预防疫苗对已经患有宫颈疾病的患者无效，因此感染HPV的患者需要药物治疗来阻止宫颈疾病的进展。已有研究显示宫颈癌发生的一个可能的原因是HPV整合，诱导E7在人类基因组中保持并稳定表达。 在从HPV感染到CIN 到 最终 形成 宫颈癌的漫长过程中，HPV致癌基因尤其是E7是预防和治疗的关键靶点。 Poly (β-amino ester)(PBAEs)是一种广泛应用的阳离子型聚合物基因载体，具有pH敏感性、低毒性和高水溶性，在酸性给药系统中具有较高的转染效率，这使得它们与酸性阴道环境相适应，能更适用于治疗HPV感染治疗。 针对上述情况，来自武汉华中科技大学同济医学院同济医院妇产科的Jinfeng Xiong等研究人员在International Journal of Nanomedicine上发表了名为“E7-Targeted Nanotherapeutics for Key HPV Afflicted Cervical Lesions by Employing CRISPR/ Cas9 and Poly (Beta-Amino Ester)”的文章。 文章中报道他们开发了由非病毒载体PBAE546和靶向HPV16 E7的CRISPR/Cas9重组质粒组成的纳米颗粒(NPs)，用于治疗HPV感染和相关宫颈恶性肿瘤。 研究人员设计了3个靶向HPV16 E7的sgRNAs（ 用 红棉CRISPR基因编辑系统 设计 ），并构建了CRISPR/Cas9质粒。用NPs（PBAE546/质粒60:1）处理HPV16-阳性细胞（SiHa、CaSki和S12）和HPV16-阴性细胞（HeLa）6个小时，并在24h，48h和72h时用CCK-8法检测细胞活性。与空质粒的对照组相比，三个NPs都有效地降低了HPV16-阳性细胞活性(图1A-C)，但没有观察到HPV16-阴性HeLa细胞活性的差异。为了进一步研究NPs对体内肿瘤生长的抑制作用，在裸鼠皮下接种SiHa细胞，当异种移植肿瘤增长大约35mm3时，肿瘤内注射NPs进行治疗。根据体外细胞系实验的结果，筛选出sgRNA2对细胞活性的抑制作用最好。每4天注射一次，持续20天。在SiHa皮下肿瘤小鼠中，与空质粒对照组相比，CRISPR-敲除HPV16 E7组肿瘤生长遭到显著抑制，肿瘤体积显著减小（图2），而在HeLa皮下肿瘤小鼠中，两组间无差异。 源井在这个实验中构建了靶向HPV16 E7的CRISPR质粒和对照质粒YKO-RP003-Ctrl，同时利用红棉CRISPR基因编辑系统智能设计了gRNA序列。基于数千个基因编辑成功案例与独家开发的精确算法，红棉CRISPR基因编辑系统能轻松实现基因敲除细胞方案与gRNA序列的自动化设计， 点此即可试用>> 为了更接近宫颈癌初步的临床位置，并寻求非侵入性处理，研究人员使用HPV16转基因小鼠通过阴道给药进行宫颈原位治疗。持续治疗20天后，NPs组小鼠宫颈上皮的恶性表型明显逆转。上皮细胞增殖受到抑制，基底细胞排列整齐，细胞核体积减小。对照组小鼠的宫颈上皮细胞明显增生(图3A)。用免疫组化技术检测HPV16 E7及其相关蛋白的表达水平。首先，靶分子HPV16 E7和HRHPV感染替代标记物P16的表达显著降低，而与E7癌蛋白相互作用的抑癌基因RB1的表达得以恢复。第二，增殖相关蛋白Ki67和CD34、细胞周期相关蛋白CDK2、转录因子E2F1的表达明显受到抑制(图3B)。 这些结果表明， 靶向 敲除 HPV16 E7 的 NPs可以有效降低靶基因癌蛋白的表达，影响相关信号通路，从而逆转HPV16转基因小鼠的宫颈上皮 细胞 恶性表型。 总之，他们开发了由PBAE546和CRISPR/Cas9组成的NPs用于治疗HPV感染。这些NPs稳定，且在酸性的阴道中具有良好的转染效率，因此非常适合作为阴道药物。NPs通过靶向敲除E7可以有效地使HPV无效。因此，这种NPs可以在未来以阴道洗液和凝胶的形式用于治疗宫颈炎和CIN。 该研究 为 纳米医学治疗宫颈病变的临床转化，从而预防宫颈癌提供了新的希望。

【病因学】 关于子宫颈癌的发病原因尚不清楚，国内外大量资料证实，早婚、早育、多产及性生活紊乱的妇女有较高的患病率。目前也有认为包皮垢中的胆固醇经细菌作用后可转变为致癌物质。也是导致宫颈癌的重要诱因。近年来还发现子宫颈癌与性交而传染的某些病毒有一定关系，如：①人类疤疹病毒Ⅱ型（HSV—2），因HSV—2抗体检查在浸润性宫颈癌的病人中80％～100％阳性；②人类*瘤病毒（HPV），对各类宫颈癌组织进行HPV特异性抗原的检测，均提示子宫颈癌的发病与HPV感染有关；③人类巨细胞病毒（CMV）。国内外均有报道，子宫颈癌前病变不典型增生患者血清CMV抗体滴度均高；动物实验证明CMV－DNA具有恶性转化能力。因此，病毒感染成为近年来研究宫颈癌发病原因的重要课题之一。 【病理改变】 子宫颈癌以鳞状上皮细胞癌为主，约占90％～95％，腺癌仅占5％～10％。但两者癌在外观上并无特殊差别，且均发生在宫颈阴道部或颈管内。 （一）目观在发展为浸润癌前，肉眼观察无特殊异常，或类似一般宫颈糜烂。随着浸润癌的出现，宫颈可表现以下四种类型： 1.糜烂型：环绕宫颈外口表面有粗糙的颗粒状糜烂区，或有不规则的溃破面、触及易出血。 2.外生型：又称增生型或菜花型。由息肉样或*状隆起，继而发展向阴道内突出的大小不等的菜花状赘生物，质脆易出血。 3.内生型：又称浸润型。癌组织宫颈深部组织浸润、宫颈肥大而硬，但表面仍光滑或仅有浅表溃疡。 4.溃疡型：不论外生型或内生型进一步发展后，癌组织坏死脱落，形成溃疡，甚至整个子宫颈为一大空洞所替代，因常有继发性感染，故有恶臭的分泌物排出。子宫颈癌尤其是腺癌也可向颈管内生长，使子宫颈成桶状增大，这也是内生型的一种。 （二）镜查 1.不典型增生：不典型增生表现为底层细胞增生，底层细胞不但增生，而且有细胞排列紊乱考试，大收集整理及细胞核增大、浓染、染色质分布不均等核异质改变。不典型增生可分为轻、中及重度。 ①轻度不典型增生（间变I级）：上皮细胞排列稍紊乱，细胞轻度异型性，异型上皮占据上皮层的下三分之一。 ②中度不典型增生（间变Ⅱ级）：上皮细胞排列紊乱，异型性明显，异型上皮占据上皮层的下三分之二。 ③重度非典型增生（间变Ⅲ级）：几乎全部上皮极性紊乱或极性消失，细胞显著异型性和原位癌已不易区别。 2.原位癌：原位癌（CIS）又称上皮内癌。上皮全层极性消失，细胞显著异型，核大，深染，染色质分布不均，有核分裂相。但病变仍限于上皮层内，未穿透基底膜，无间质浸润。异型细胞还可沿着宫颈腺腔开口进入移行带区的宫颈腺体，致使腺体原有的柱状细胞为多层异型鳞状细胞所替代，但腺体基底膜仍保持完整，这种情况称为宫颈原位癌累及腺体。 3.镜下早期浸润癌：镜下早期浸润癌在原位癌基础上，偶然可发现有癌细胞小团已穿破基底膜，似泪滴状侵入基底膜附近的间质中，浸润的深度不超过5mm，宽不超过7mm，也无癌灶互相融合现象，也无侵犯间质内脉管迹象时，临床上无特征。 4.鳞状上皮浸润癌：当癌细胞穿透上皮基底膜，侵犯间质深度超过5mm，称为鳞状上皮浸润癌。在间质内可出现树枝状、条索状，弥漫状或团块状癌巢。根据病理切片，癌细胞分化程度可以分为三级： ①I级：分化好。癌巢中有相当数量的角化现象，可见明显的癌珠。 ②Ⅱ级：中等分化（达宫颈中层细胞的分化程度），癌巢中无明显角化现象。 ③Ⅲ级：未分化的小细胞（相当于宫颈底层的未分化细胞）。 5.腺癌：腺癌来源于被覆宫颈管表面和颈管内腺体的柱状上皮。镜检时，可见到腺体结构，甚至腺腔内有*状突起。腺上皮增生为多层，细胞低矮，异型性明显，可见核分裂相。如癌细胞充满腺腔，以致找不到原有腺体结构时，往往很难将腺癌与分化不良的鳞癌区别。如腺癌与鳞癌并存时称为宫颈腺、鳞癌。腺、鳞癌恶性程度高，转移早、预后差。

母亲生产过程中癌细胞混入了羊水，新生儿出生后在哭泣时吸入羊水，导致癌细胞进入肺部，进而引发肺癌。

被誉为“现代细胞学之父”的Papanicolaou于1943年发表了用 *** 细胞涂片诊断宫颈癌的著名论文，建立了巴氏分级法，已延用了60多年。

虽然该方法存在诸多问题，如取材的局限性、制片背景模糊不利观察等，但Papanicolaou的贡献是巨大的，巴氏涂片已成为宫颈细胞学的代名词，在我国大部分中小医院仍在使用。

上世纪末，美国两家公司研制出了液基薄层细胞制片技术的自动装置，分别于1997年和1998年投产。

近几年，国内外对此方法又进行了进一步改进，使其更为简便。

液基细胞取材广泛，细胞涂片分布均匀，背景清晰，染色层次分明，便于镜下观察，明显提高了阳性细胞的检出率，如果价格适宜有可能完全代替巴氏涂片。

本方法可以观察上皮细胞，如宫颈鳞状细胞癌、颈管腺癌2例。

本方法除观察上皮细胞外，还可检出滴虫、念珠菌、放线菌、单纯疱疹病毒、衣原体等

建议要去正规的三甲医院检查，确诊后根据医生的指导选择合适的方法，可以选择手术切除的方法，但是要根据病情来选择，如果出现淋巴结转移的预后效果比较差，因此要早发现早治疗。

宫颈癌的治疗包括手术、放疗和化疗等等的治疗方式，主要依据于临床的分期、患者的年龄、生育的要求、全身的状况、医疗技术水平及设备条件等等，综合考虑制定适当的个性化治疗方案。通常会采用以手术和放疗为主，化疗为辅的综合治疗方案。手术主要用于早期的宫颈癌患者，手术的方式有全子宫切除术、次广泛全子宫切除术，及盆腔淋巴结清扫术、广泛的全子宫切除术、盆腔淋巴结清除术、腹主动脉旁淋巴结切除及取样，根据患者的不同分期选择不同的手术方式。另外就是放疗和化疗，放射治疗主要适用于中晚期患者，全身情况不适于手术的早期病人，宫颈癌大块病灶的术前放疗，手术治疗以后病理发现有高危因素的辅助治疗。化疗也就是用化学药物去治疗，主要用于晚期或者复发转移的病人，近年来也会采用手术联合术前新辅助化疗，就是静脉或者动脉灌注化疗来缩小肿瘤的病灶，控制亚临床转移，也可以用于放疗的增影。通常情况下有淋巴结转移的或者广泛转移的预后不好。宫颈腺瘤早期容易有淋巴结转移，预后也相对比较差，对于早期的宫颈癌，临床治愈的机会还是很大的。