医学论文绘制引物序列

疯了………………你这个是要实验用还是要交作业啊…………引物设计首先需要找到你要P出来的序列。让我们假设这一段就是你要P的东西………………第二步就是在该序列或者附近直接用原序列做引物。你这个为例的话，5'就是TCGATG，而3'就是TAGGCT。注意5'就是原序列而3'则是互补序列。还需要注意的是，两个primer都是5'-3'的写法。第三步则应该是在全序列中寻找这两个引物是否会出现错配，以及错配的严重情况。错配严重的在PCR之后会出现较小的杂带。还有就是引物自身会不会出现发夹（就是引物自己的局部会发生错配），两条引物会不会形成互配等等（这些都是不存在为最好的）。这两个会影响PCR产物的量，严重的会没有产物形成。因为是做PCR的，还需要检查两条引物的TM（变性解聚需要的最低温度）值是否接近（接近为好）。真正设计引物的时候经常还需要考虑加入酶切位点，这样的话，酶切位点因为是回文结构，错配就会无法避免，不用考虑了。基本上设计引物的要点就是这些了。有什么不懂的你再补充。回答补充：至少我老师给我讲引物设计的时候，没有说过开头能否使用CG之类的东西……关于引物中GC的问题，一般说其含量在40~60%左右时，P的效果最好。但是也有人用实验证明小于或大于这个范围同样可以做的很好。上次还忘记说了，引物设计中比较关键的是3'端。那里的序列是不能动的，因为P的时候就是3'端的紧密结合开始的。相对的，如果要做任何改动，可以考虑5'端，但也最好不要直接从头开始改。留下几个碱基作为保护碱基可以提高引物的效果。

使用设计引物点文件,选新建DNA序列(File——New——DNASeqence)然后把要设计引物的序列复制进去就行了(如果你要是愿意也可以一个一个碱基的打进去),然后点Primer进入到引物设计界面,进去后选点Search设置相应相应的条件,如:你要设计PCR扩增还是测序引物,是正向、反向还是双向,在片段中的那个位置设计及引物的长度等等,设置好后一路OK点下去就行了,然后就会有引物出来供你选择了。哈哈不过具体的步骤1L那个网址好像已经给出了,不过在设计引物时LZ还要注意些条件,如TM值和GC一类的,还有引物长度等等^_^反正我一般设计引物的时候TM和GC都控制在50-60之间,长度一般18或19个碱基(555合成的时候按碱基收费呀555),错配和发卡都没有,不过引物二聚体有的话问题倒是不大(反正我设计出来有二聚体的引物基本都OK)然后就是最好不要有4个或以上连续的碱基,再有就是不要在重复序列里设计引物。只要注意以上这些的话设计出的引物那里测序或扩增都OK呵呵希望对LZ有所帮助如何用设计引物进入软件,genetank窗口file---new----DNAsequence进入序列输入版块。然后control+v输入序列,如不改变序列,选择AS菜单。然后进入primer引物设计。进入search,点OK。系统自动生成引物。选你需要的就可以了。(有评分)。如要克隆基因,则在primer菜单下手动设计。引物设计一、PCR引物设计原则二、软件设计引物三、引物设计步骤①输入序列:安装好软件后,首先打开软件,左上角来操作,file-new-dnasequence,这一项可以把复制的序列粘贴进去,也可以选择另一个file-open-dnasequence去open一个新的文件。②点击Primer进入引物设计界面。③点击引物设计界面上的search按钮进行搜索选项设定。④点击搜索选项界面上的OK按钮可得到引物设计结果。⑤选择分值高的引物对作为实验合成引物选项。⑥根据需要对引物进行编辑。

射击影不多的话直接看怎么设计，你要收集好的，你要设置坏的还是你要设置一般般的，它有几种设置方法，首先你要看一下你想设置哪一种的，如果你把哪一种你想设置你给我说的，我就可以告诉你。

一般是通过设计软件，例如oligo6，primer5等，你可以在网上搜一下引物设计软件下载和使用说明，是比较容易的。至于设计引物的一般原则如下：* 序列选取应在基因的保守区段* 避免引物自身或与引物之间形成4个或4个以上连续配对，避免引物自身形成环状发卡结构 * 典型的引物18到24个核苷长。引物需要足够长，保证序列独特性，并降低序列存在于非目的序列位点的可能性。但是长度大于24核苷的引物并不意味着更高的特异性。较长的序列可能会与错误配对序列杂交，降低了特异性，而且比短序列杂交慢，从而降低了产量。* Tm值在55－65℃（因为60℃核酸外切酶活性最高），GC含量在40%－60%* 引物之间的TM相差避免超过2℃* 引物的3’端避免使用碱基A，引物的3’端避免出现3个或3个以上连续相同的碱基* 为避免的扩增，引物设计最好能跨两个外显子。* Taqman探针PCR要求片段长度在80bp－150bp * 引物末端（最后5个核苷酸）不能有超过2个的G和C。

很多时候，即使啥事儿说心烦，我没回答，朋友问啥？