根癌农杆菌论文写法

主要原理：农杆菌介导法主要以植物的分生组织和生殖器官作为外源基因导入的受体，通过真空渗透法、浸蘸法及注射法等方法使农杆菌与受体材料接触，以完成可遗传细胞的转化，然后利用组织培养的方法培育出转基因植株，并通过抗生素筛选和分子检测鉴定转基因植株后代。 农杆菌能在自然条件下感染大多数双子叶植物的受伤部位，植物细胞被侵染后形成肿瘤。农杆菌的质粒上有一段转移DNA（T-DNA），具有向植物细胞传递外源基因的能力，而细菌本身并不进入受体细胞。农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括：①受伤的植物细胞为修复创伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集中，并吸附在细胞表面。③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达，同时形成转移DNA的中间体。④转移DNA进入植物细胞，并整合到植物细胞基因组中。方法：1：制作适宜浓度的农杆菌液2：将外植体与适量的农杆菌液在适宜条件下培养，一段时间后，得到愈伤组织；3：将脱分化形成的愈伤组织在含抗生素筛选培养基上进行植株筛选；4；将得到的植株在固体筛选培养基上再分化成苗；

原理：农杆菌是普遍存在于土壤中的一种革兰氏阴性细菌，它能在自然条件下趋化性地感染大多数双子叶植物的受伤部位(受伤处的细胞会分泌大量酚类化合物,从而使农杆菌移向这些细胞)，并诱导产生冠瘿瘤或发状根。根癌农杆菌和发根农杆菌中细胞中分别含有Ti质粒和Ri质粒，其上有一段T-DNA，农杆菌通过侵染植物伤口进入细胞后，可将T-DNA插入到植物基因组中,并且可以通过减速分裂稳定的遗传给后代，这一特性成为农杆菌介导法植物转基因的理论基础。人们将目的基因插入到经过改造的T-DNA区，借助农杆菌的感染实现外源基因向植物细胞的转移与整合，然后通过细胞和组织培养技术，再生出转基因植株。农杆菌介导法起初只被用于双子叶植物中，近年来，农杆菌介导转化在一些单子叶植物（尤其是水稻）中也得到了广泛应用。农杆菌转化植物细胞涉及一系列复杂的反应，主要包括：①受伤的植物细胞为修复创伤部位，释放一些糖类、酚类等信号分子。②在信号分子的诱导下，农杆菌向受伤组织集中，并吸附在细胞表面。③转移DNA上的毒粒基因被激活并表达，同时形成转移DNA的中间体。④转移DNA进入植物细胞，并整合到植物细胞基因组中。方法：（根据不同受体环境基因要求而不同）1． 农杆菌准备2． 外植体的准备（愈伤组织、悬浮细胞系、幼嫩茎段或叶片）;3． 用 MS-AS液体培养基稀释原菌液15倍（ / 20ml）或离心后稀释3倍;4． 外植体与菌液共培养20 分钟;5． 放置在带滤纸的培养皿上（注意充分吸干多余的菌液）;6． 将外植体接种到MS-AS固体诱导培养基，培养2－3天 ;7． 移至含卡那霉素（Kan）300mg/L和羧苄青霉素（Cb 300mg/L）的固体筛选培养基上进行Kan抗性愈伤组织的筛选;8． 隔20天，进行第二次筛选；9． 抗性愈伤组织在固体筛选培养基上分化成苗；10 在生根培养基上生根，获得完整的再分化植株。

根癌农杆菌（emphasis：role=italicAgrobacterium：tumefaciensemphasis）含有一种内源质粒，当农杆菌同植物接触时，这种质粒会引发植物产生肿瘤（冠瘿瘤），所以称此质粒为Ti质粒（tumor：inducing：plasmid）。

Ti质粒是一种双链环状DNA分子，其大小有200kb左右，但是能进入植物细胞的只是一小部分，约25kb，称为T-DNA（transfer：DNA）。T-DNA左右两边界（left：border，LB，right：border，RB）各有一个25bp长的正向重复序列（LTS和RTS），对T-DNA的转移和整合是不可缺少的，并且已证实T-DNA只要保留两端边界序列。

虽然中间的序列不同程度被任何一个外源DNA片段所替换，仍可转移整合到植物基因组中。根据Ti质粒的这个性质近年来构建成含LB和RB的质粒载体（link：xlinkhref=i010602图4-6link），已被广泛地用于植物的基因转移。利用基因枪等新的基因转移技术将其直接导入植物细胸，使含有目的基因的外源DNA片段整合到植物基因组中。