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HPLC法测定血脂灵胶囊中大黄素的含量

2015-08-18 08:43 来源:学术参考网 作者:未知

摘 要:目的 为血脂灵胶囊质量控制提供新的方法。方法:选用C18柱,流动相为甲醇:0.1%磷酸溶剂(85:15),检测波长为254nm。结果:大黄素(C15H10O5)对照品在0.0565—0.1695μg范围内成良好的线性关系,平均回收率为97.69%,RSD为1.64%。结论:方法简便、灵敏、准确,可作为血脂灵胶囊质量控制方法。

关键词:血脂灵胶囊 大黄素 高效液相色谱法。

 
1、仪器与试药
1.1、  仪器  高效液相色谱仪(日本岛津公司):LC-10AT泵,SPD-10A紫外检测器,CTO-10S柱温箱,HW色谱工作站。
1.2、  药品:血脂灵胶囊:由芜湖市博英制药有限公司生产的中试产品,规格每粒装0.45g;批号090812  090813  090814
1.3、  大黄素对照品(中国药品生物制品检定所,批号:110756-200110,供含量测定用);
      实验中所用的试剂均为色谱纯或分析纯。
2、  方法与结果
2.1、   色谱条件  参照2005年版药典“血脂灵片”[含量测定]项下的色谱条件确定;色谱柱:Shim-pack VP-ODS C18柱(150×4.6mm,5μg);流动相:甲醇:0.1%磷酸溶液(85:15);流速:0.8ml/min;检测波长:254nm,柱温:30℃;进样量:20μl。
2.2、 系统适用性实验
2.2.1、理论塔板数(N)
      取大黄素对照品溶液适量,注入液相色谱仪,测定,结果大黄素对照品N=7228,因此,将理论塔板数暂定为3000。
2.2.2、分离度(R)
      取供试品溶液适量,注入液相色谱仪,测定,结果大黄素的分离度R=5.0,符合《中国药典》2005年版一部规定。
    2.2.3、拖尾因子(T)
      利用分离度测定的图谱,大黄素T=1.03(0.95<T<1.05)。符合《中国药典》2005年版一部规定。
2.3、 线性范围的考察
      分别精密吸取大黄素对照品溶液(11.3μg/ml)5.0、7.5、10.0、12.5、15.0μl,依次注入液相色谱仪,按上述色谱条件,分别进行分析,测定其峰面积值,并以对照品量(X)为横坐标,峰面积值(Y)为纵坐标,得大黄素回归方程:Y=2509642X-4639(r=0.9999,n=5)。结果表明:大黄素对照品在0.0565~0.1695μg范围内成良好的线性关系,结果见表1。
表1   大黄素的线性范围

     2.4、精密度试验
    精密吸取大黄素对照品溶液20μl,连续进样5次测定峰面积值,计算RSD=0.56%,结果见表2。
表2大黄素的精密度试验结果(n=5)


       试验证明,本法精密度良好。
  2.5、稳定性试验
     取供试品溶液,每隔2小时进样,测定峰面积,结果表明:供试品溶液在所测定的10小时内测得结果基本一致,大黄素的RSD=0.60%,见表3。
表3  稳定性试验

表5

2.8、试液的制备
     对照品溶液的制备    精密称取在105℃干燥至恒重的大黄素对照品适量,加甲醇制成每1ml含大黄素5μg的溶液,作为对照品溶液。
  试验表明:供试品溶液至少在10小时内稳定。
2.6、重复性试验
     取批号为050812的血脂灵胶囊,分别制备6份供试品溶液,按上述色谱条件测定大黄素的含量,结果见表4

表4  重复性试验

实验表明:本法重现性良好。
2.7、回收率试验
     取已知大黄素含量(0.24mg/粒)的样品(批号:050812)6份,每份约0.25g,分别精密加入大黄素对照品溶液(0.1445mg/ml)1ml,按上述供试品溶液的制备方法进行制备,测定,结果见表5。


2.8、试液的制备
     对照品溶液的制备    精密称取在105℃干燥至恒重的大黄素对照品适量,加甲醇制成每1ml含大黄素5μg的溶液,作为对照品溶液。供试品溶液的制备  取本品内容物,研细,取约0.45g,精密称定,置具塞锥形瓶中,精密加入甲醇25ml,密塞,称定重量,加热回流1小时,放冷,再称定重量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密量取续滤液5ml,置具塞烧瓶中,蒸干,加2.5mol/L硫酸溶液10ml和三氯甲烷20ml,加热回流2小时,分别取三氯甲烷液,水层用三氯甲烷振摇提取,合并三氯甲烷液,用水10ml洗涤取三氯甲烷液,置水浴上蒸干,残渣用甲醇溶解,转移至10ml容量瓶中,加甲醇至刻度,摇匀,取续液,作为供试品溶液。
              阴性对照品溶液的制备   按处方组成,提取制何首乌、决明子外的其余药材,按制备工艺要求,制成不含制何首乌、决明子的颗粒,按供试品溶液制备项下的方法,制成阴性对照品溶液。


       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       
       3、讨论
   血脂灵胶囊,为血脂灵片改变剂型而成,其处方与血脂灵片相同,生产工艺为质的改变,一粒胶囊相当于一片片剂(所含生物量为2g)其[用法用量]与血脂灵片相同,参照2005年版中国药典一部,血脂灵片[含量测定]项的含量限度的规定及本品的十批样品的含量测定结果。考虑到药材的不同来源及工业化大生产的特点等因素,将本品的含量限度订为本品每粒含制何首乌、决明子以及大黄素(C15H10O5)计不得少于0.15mg。经十批样品检查,含量均符合规定。

参考文献:中国药典2005年版一部         北京化学工业出版社2005.1


 

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