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PTEN、uPA在原发性胃癌组织中的表达及相关性研究

2015-12-13 11:53 来源:学术参考网 作者:未知

摘 要:目的:分析PTEN、uPA在原发性胃癌组织中的表达及相关性。方法:采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织细胞和正常胃黏膜上皮细胞中PTEN和uPA的表达情况。结果:在胃癌细胞核正常胃黏膜上皮细胞中PTEN和uPA的表达情况比较,由χ2=19.80,χ2=2.86,P<0.05,说明在胃癌细胞中PTEN的表达率较正常胃黏膜细胞低,而uPA的表达阳性率较正常组织高。胃癌组织细胞中PTEN和uPA阳性率表达的相关性比较,经spearman等级相关分析,有r2=-0.4722,P<0.05,说明胃癌组织中PTEN和uPA的表达呈负相关。结论:PTEN与uPA在胃癌细胞中的表达量,能使肿瘤细胞外基质发生改变,可能有助于肿瘤的侵袭和转移。

关键词:PTEN;uPA;原发性胃癌细胞株;转移
    肿瘤的转移及侵袭过程复杂,涉及到许多过程的相互影响。但是肿瘤细胞中细胞外基质的降解是肿瘤转移及侵袭的重要前提,从而导致肿瘤细胞微环境的改变,进而发生肿瘤细胞的转移。尿激酶型纤溶酶激活物(uPA)是一种丝氨酸蛋白酶,可以由成纤维细胞、上皮细胞、中性粒细胞、肿瘤细胞分泌[1]。PTEN是一种抑癌基因,是第一个具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因,该基因编码的蛋白质具有蛋白磷酸酶活性及脂肪磷酸酶活性。文章研究PTEN、uPA在胃癌组织及正常胃黏膜组织中的表达情况,旨在分析胃癌细胞的转移及对预后的影响,取得较好效果,现报告如下。

1 资料与方法

1.1  一般资料:胃癌细胞细胞株及正常胃黏膜上皮细胞株:2种细胞株均选购于上海爱研生物科技有限公司,胃癌细胞株的型号为BSG23,人胃黏膜细胞株的型号为GES-1,胃癌细胞株用含5%胎牛血清的RPMI-1640培养基,配置培养液时添加碳酸氢钠2 000 mg/L,在37℃、5% CO2条件下常规培养;正常胃黏膜细胞的培养:培养液采用DMEM/F12浓度比为1:1的比例混合,加补充物2%~20%胎牛血清、L-谷氨酰胺、牛血浆白蛋白、HEPES缓冲液、链霉素及万古霉素等[2]。培养后从各个细胞株中采取样本,运用细胞石蜡包埋法制作切片,选取完整及较好的切片进行SP染色,并在显微镜下观察[3]

1.2  方法:采用免疫组织化学SP法:①运用特异性一抗与组织或细胞抗原结合;②将生物素化地二抗与一抗结合;③将链霉素亲和素-过氧化物酶复合物与生物素化二抗结合,最终作用于底物。鼠抗人PTEN和uPA单克隆抗体及S-P试剂盒均从福州迈新生物技术开发公司采购。将石蜡标本以5 μm层厚切片,烤干并经二甲苯脱蜡,梯度乙醇脱水,并用0.3% HO-甲醛液处理,阻断内源性过氧化物酶,运用PBS洗3次,并运用EDTA修复液常规修复,玻片封闭并在孵育盒中孵育抗体,正常羊血清保护,再加入一抗、二抗、链霉素亲和素-过氧化物酶复合物,运用免疫组织化学SP法进行染色,其步骤严格按照试剂盒的说明进行操作,同时运用PBS缓冲液取代一抗作为阴性对照。显微镜下观察切片以切片对角线的方式观察,每条对角线观察10个视野,分析各个视野中各个指标的阳性表达率。

1.3  评价标准:PTEN和uPA的染色:阳性细胞信号为在胞浆中出现棕色颗粒或是棕黄色颗粒,出现阳性细胞数占细胞总数的25%以上者为阳性[4]

1.4  统计学方法:所有数据均采用SPSS 16.0统计学软件打包处理完成,采用χ2检验分析胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的PTEN和uPA的表达;采用Spearman等级相关统计学方法分析PTEN和uPA的相关关系,以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

    在胃癌细胞核正常胃黏膜上皮细胞中PTEN和uPA的表达情况差异有统计学意义(χ2=19.80,χ2=2.86,P<0.05),说明在胃癌细胞中PTEN的表达率较正常胃黏膜细胞低,而uPA的表达阳性率较正常组织高。详见表1。

表1  PTEN和uPA在胃癌细胞核正常胃黏膜细胞中的表达情况比较(例)

类型

例数

PTEN

uPA

阳性

阴性

阳性

阴性

胃癌细胞

20

4

16

19

1

正常胃黏膜细胞

20

18

2

3

17


    胃癌组织细胞中PTEN和uPA阳性率表达的相关性比较,经spearman等级相关分析,有r2=-0.4722,P<0.05,说明胃癌组织中PTEN和uPA的表达呈负相关。

3 讨论

    uPA是一种丝氨酸蛋白酶,常以无活性的单链酶原形式存在,可经纤溶酶、组织蛋白等激活,当uPA与细胞膜上的uPA受体结合后,其可被纤溶酶、组织蛋白等激活,形成纤溶酶,进而非特异性的降解细胞外基质和基质中的蛋白质,如玻璃体结合蛋白、层黏连蛋白、蛋白多糖等,从而改善细胞局部生长的微环境,利于肿瘤细胞的转移和侵润。PTEN是新发现的一种抑癌基因,其中文名为人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因,位于10q23.3,转录产物为515 kb Mrna[5]。其蛋白产物含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白tenasin、auxilin同源的区域。它能抑制肿瘤侵润和转移,tenasin通过黏着斑连接肌动蛋白轴丝。黏着斑是包括整合蛋白、黏着斑激酶、Src和生长因子受体的复合物,它能介导细胞与基质的链接,形成的复合物参与信号传导,通过FAK信号传导通路影响着细胞向远处转移的能力。整合蛋白参与细胞生长调节、瘤浸润、血管生成和转移。此外PTEN能抑制多种金属基质蛋白酶的表达,而金属基质蛋白酶(丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶等)是肿瘤侵袭和转移的关键因素,PTEN可以通过抑制FAK的磷酸化阻止透明质酸诱导的MMP-9启动子分泌而抑制肿瘤细胞的转移和侵润[6]

    本文研究胃癌细胞中PTEN和uPA的表达情况发现:在胃癌组织中前者表达较低,而后者呈现高表达的现象。两者表达的差异,可能是导致肿瘤细胞发生转移的原因,PTEN的低表达,使其对金属基质蛋白酶的抑制作用减弱,导致了对癌细胞生长及转移的抑制作用减弱,而uPA的高表达,则更好的为肿瘤细胞的转移和侵润创造了良好的微环境,有利于肿瘤的转移。

4 参考文献

[1] 宁平霞,张亚平.uPA和MMP-9在胃癌组织中的表达及意义[J].中国现代医药杂志,2010,12(1):58.

[2] 程永波.正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法[J].胃肠病学和肝病学杂志,2006,15(1):84.

[3] 陈  罡,罗殿中,李  信,等.培养细胞的石蜡切片用于DcR3免疫化学染色的探讨[J].现代预防医学,2007,34(7):1251.

[4] 左玉如,汪家敏.MMP-9和uPA在胃癌组织中的表达及相关性研究[J].第二军医大学学报,2003,13(4):352.

[5] 梁文同,成志勇,贾志强,等.PTEN:抑制肿瘤侵袭及转移的新靶点[J].生理学进展,2011,42(3):201.

[6] 成志勇,郭晓玲,李世辉,等.PTEN-FAK信号传导通路在自血病细胞迁移、侵袭中的作用[J].中华血液学杂志,2009,30(1):115.
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