摘 要：目的：分析PTEN、uPA在原发性胃癌组织中的表达及相关性。方法：采用免疫组织化学SP法检测胃癌组织细胞和正常胃黏膜上皮细胞中PTEN和uPA的表达情况。结果：在胃癌细胞核正常胃黏膜上皮细胞中PTEN和uPA的表达情况比较，由χ2=19.80，χ2=2.86，P＜0.05，说明在胃癌细胞中PTEN的表达率较正常胃黏膜细胞低，而uPA的表达阳性率较正常组织高。胃癌组织细胞中PTEN和uPA阳性率表达的相关性比较，经spearman等级相关分析，有r2=-0.4722，P＜0.05，说明胃癌组织中PTEN和uPA的表达呈负相关。结论：PTEN与uPA在胃癌细胞中的表达量，能使肿瘤细胞外基质发生改变，可能有助于肿瘤的侵袭和转移。
关键词：PTEN；uPA；原发性胃癌细胞株；转移
肿瘤的转移及侵袭过程复杂，涉及到许多过程的相互影响。但是肿瘤细胞中细胞外基质的降解是肿瘤转移及侵袭的重要前提，从而导致肿瘤细胞微环境的改变，进而发生肿瘤细胞的转移。尿激酶型纤溶酶激活物（uPA）是一种丝氨酸蛋白酶，可以由成纤维细胞、上皮细胞、中性粒细胞、肿瘤细胞分泌[1]。PTEN是一种抑癌基因，是第一个具有双特异磷酸酶活性的抑癌基因，该基因编码的蛋白质具有蛋白磷酸酶活性及脂肪磷酸酶活性。文章研究PTEN、uPA在胃癌组织及正常胃黏膜组织中的表达情况，旨在分析胃癌细胞的转移及对预后的影响，取得较好效果，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：胃癌细胞细胞株及正常胃黏膜上皮细胞株：2种细胞株均选购于上海爱研生物科技有限公司，胃癌细胞株的型号为BSG23，人胃黏膜细胞株的型号为GES-1，胃癌细胞株用含5%胎牛血清的RPMI-1640培养基，配置培养液时添加碳酸氢钠2 000 mg/L，在37℃、5% CO2条件下常规培养；正常胃黏膜细胞的培养：培养液采用DMEM/F12浓度比为1:1的比例混合，加补充物2%～20%胎牛血清、L-谷氨酰胺、牛血浆白蛋白、HEPES缓冲液、链霉素及万古霉素等[2]。培养后从各个细胞株中采取样本，运用细胞石蜡包埋法制作切片，选取完整及较好的切片进行SP染色，并在显微镜下观察[3]。
1.2 方法：采用免疫组织化学SP法：①运用特异性一抗与组织或细胞抗原结合；②将生物素化地二抗与一抗结合；③将链霉素亲和素-过氧化物酶复合物与生物素化二抗结合，最终作用于底物。鼠抗人PTEN和uPA单克隆抗体及S-P试剂盒均从福州迈新生物技术开发公司采购。将石蜡标本以5 μm层厚切片，烤干并经二甲苯脱蜡，梯度乙醇脱水，并用0.3% HO-甲醛液处理，阻断内源性过氧化物酶，运用PBS洗3次，并运用EDTA修复液常规修复，玻片封闭并在孵育盒中孵育抗体，正常羊血清保护，再加入一抗、二抗、链霉素亲和素-过氧化物酶复合物，运用免疫组织化学SP法进行染色，其步骤严格按照试剂盒的说明进行操作，同时运用PBS缓冲液取代一抗作为阴性对照。显微镜下观察切片以切片对角线的方式观察，每条对角线观察10个视野，分析各个视野中各个指标的阳性表达率。
1.3 评价标准：PTEN和uPA的染色：阳性细胞信号为在胞浆中出现棕色颗粒或是棕黄色颗粒，出现阳性细胞数占细胞总数的25%以上者为阳性[4]。
1.4 统计学方法：所有数据均采用SPSS 16.0统计学软件打包处理完成，采用χ2检验分析胃癌细胞和正常胃黏膜细胞中的PTEN和uPA的表达；采用Spearman等级相关统计学方法分析PTEN和uPA的相关关系，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
在胃癌细胞核正常胃黏膜上皮细胞中PTEN和uPA的表达情况差异有统计学意义（χ2=19.80，χ2=2.86，P＜0.05），说明在胃癌细胞中PTEN的表达率较正常胃黏膜细胞低，而uPA的表达阳性率较正常组织高。详见表1。
表1 PTEN和uPA在胃癌细胞核正常胃黏膜细胞中的表达情况比较（例）
类型 | 例数 | PTEN | uPA | ||
阳性 | 阴性 | 阳性 | 阴性 | ||
胃癌细胞 | 20 | 4 | 16 | 19 | 1 |
正常胃黏膜细胞 | 20 | 18 | 2 | 3 | 17 |
胃癌组织细胞中PTEN和uPA阳性率表达的相关性比较，经spearman等级相关分析，有r2=-0.4722，P＜0.05，说明胃癌组织中PTEN和uPA的表达呈负相关。
3 讨论
uPA是一种丝氨酸蛋白酶，常以无活性的单链酶原形式存在，可经纤溶酶、组织蛋白等激活，当uPA与细胞膜上的uPA受体结合后，其可被纤溶酶、组织蛋白等激活，形成纤溶酶，进而非特异性的降解细胞外基质和基质中的蛋白质，如玻璃体结合蛋白、层黏连蛋白、蛋白多糖等，从而改善细胞局部生长的微环境，利于肿瘤细胞的转移和侵润。PTEN是新发现的一种抑癌基因，其中文名为人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源的基因，位于10q23.3，转录产物为515 kb Mrna[5]。其蛋白产物含有一酪蛋白磷酸酶的功能区和约175个氨基酸左右的与骨架蛋白tenasin、auxilin同源的区域。它能抑制肿瘤侵润和转移，tenasin通过黏着斑连接肌动蛋白轴丝。黏着斑是包括整合蛋白、黏着斑激酶、Src和生长因子受体的复合物，它能介导细胞与基质的链接，形成的复合物参与信号传导，通过FAK信号传导通路影响着细胞向远处转移的能力。整合蛋白参与细胞生长调节、瘤浸润、血管生成和转移。此外PTEN能抑制多种金属基质蛋白酶的表达，而金属基质蛋白酶（丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶等）是肿瘤侵袭和转移的关键因素，PTEN可以通过抑制FAK的磷酸化阻止透明质酸诱导的MMP-9启动子分泌而抑制肿瘤细胞的转移和侵润[6]。
本文研究胃癌细胞中PTEN和uPA的表达情况发现：在胃癌组织中前者表达较低，而后者呈现高表达的现象。两者表达的差异，可能是导致肿瘤细胞发生转移的原因，PTEN的低表达，使其对金属基质蛋白酶的抑制作用减弱，导致了对癌细胞生长及转移的抑制作用减弱，而uPA的高表达，则更好的为肿瘤细胞的转移和侵润创造了良好的微环境，有利于肿瘤的转移。
4 参考文献
[1] 宁平霞,张亚平.uPA和MMP-9在胃癌组织中的表达及意义[J].中国现代医药杂志,2010,12(1):58.
[2] 程永波.正常胃黏膜上皮细胞原代培养方法[J].胃肠病学和肝病学杂志,2006,15(1):84.
[3] 陈 罡,罗殿中,李 信,等.培养细胞的石蜡切片用于DcR3免疫化学染色的探讨[J].现代预防医学,2007,34(7):1251.
[4] 左玉如,汪家敏.MMP-9和uPA在胃癌组织中的表达及相关性研究[J].第二军医大学学报,2003,13(4):352.
[5] 梁文同,成志勇,贾志强,等.PTEN:抑制肿瘤侵袭及转移的新靶点[J].生理学进展,2011,42(3):201.
[6] 成志勇,郭晓玲,李世辉,等.PTEN-FAK信号传导通路在自血病细胞迁移、侵袭中的作用[J].中华血液学杂志,2009,30(1):115.