摘 要：目的：探讨检测葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）酶活的可靠方法。方法：选取190例临床标本为检测标本，分别采用定量比值法、NBT定量法和酶活测定法检测G6PD酶活，比较三种方法测定结果。结果：使用三种不同的方法检测G6PD缺乏型，总检出率分别为5.26%、5.26%和5.78%。其中，男性人群中G6PD缺乏检出率为6.93%，女性人群检出率为3.37%。结论：NBT定量法具有简便快捷，同时准确性高等优点，可对高发地区进行G6PD缺乏症的大规模筛查。
关键词：G6PD；定量比值法；NBT定量法；酶活测定法
葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（Glucose-6-phosphate dehydrogenase，简称为G6PD）是催化磷酸戊糖途径第一步反应的关键酶，催化6-磷酸葡萄糖脱氢，生成6-磷酸葡萄糖酸和NADPH，参与了维持细胞内谷胱甘肽的还原性[1]。由G6PD活性降低所引起的G6PD缺乏症（简称G6PD缺乏症）是世界上最常见的单基因遗传病之一，属于X-连锁不完全显性遗传。全世界约有4亿多人罹患此病，临床上主要表现为慢性非球形细胞溶血性贫血、蚕豆病、新生儿黄疸以及食物、药物或感染诱发的溶血性贫血等，其分子基础是G6PD基因突变[2]。G6PD缺乏症导致细胞内的还原力降低，红细胞不能抵抗氧化损伤而遭受破坏，引起溶血性贫血[3]。我国是本病的高发区之一，呈南高北低的分布特点，尤其是广东、广西、海南等地区。目前，测定G6PD酶的方法有：高铁血红蛋白还原试验、G6PD酶活性测定、G6PD荧光斑点试验。为快速获得G6PD酶活的准确信息，采用改良的G6PD定量比值法和G6PD酶活性测定法进行对比试验，现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选取医院门诊血标本共190例，其中成年男性血标本101例，女性成年血标本89例。
1.2 试剂与方法：血样先用生理盐水洗涤2次。①改良G6PD /6PGD定量比值法采用广州米基科技贸易发展有限公司提供的试剂盒，按照试剂盒说明书操作，分光光度计比色；②G6PD酶活性测定采用世界卫生组织于1967年公布的标准测定方法进行测定；③硝基四氮唑蓝法（NBT法）。
1.3 参考范围：①WHO推荐的Zinkham法，其正常值为（12.1±2.09）IU/gHb；②NBT定量法，其正常值为13.1～30.0 NBT单位；③G6PD /6PGD比值法，其正常值为：G6PD /6PGD≥0.98（新生儿：≥1.09）。
2 结果
2.1 三种方法的检测结果：应用定量比值法、NBT定量法和酶活测定法筛查G6PD缺乏症，三种方法的总检出率分别为5.26%、5.26%和5.78%。定量比值法和NBT定量法呈现高度的一致性。男性人群中定量比值法和NBT定量法检出率均为6.93%，而酶活测定法的检出率偏低，为5.94%。女性人群中定量比值法和NBT定量法检出率均为3.37%，而酶活测定法的检出率为5.61%。详见表1。
表1 三种G6PD测定方法阳性检出率比较
方法 | 例数 | 阳性（例） | 阳性率（%） | |||
男 | 女 | 男 | 女 | 男 | 女 | |
定量比值法 | 101 | 89 | 7 | 3 | 6.93 | 3.37 |
NBT定量法 | 101 | 89 | 7 | 3 | 6.93 | 3.37 |
酶活测定法 | 101 | 89 | 6 | 5 | 5.94 | 5.61 |
2.2 G6PD缺乏症在不同年龄段中的分布情况：在60岁以下人群中，20～30岁中的G6PD缺乏症病例最多，见图1。在所检测的50例60岁以上人群中未发现G6PD缺乏症患者，详见表2。
图1 不同年龄段人群中G6PD缺乏症的分布情况
表2 G6PD活性同年龄间的关系
方法 | 例数 | 阳性（例） | 阳性率（%） | |||
＜60岁 | ≥60岁 | ＜60岁 | ≥60岁 | ＜60岁 | ≥60岁 | |
定量比值法 | 140 | 50 | 10 | 0 | 7.1 | 0 |
NBT定量法 | 140 | 50 | 10 | 0 | 7.1 | 0 |
酶活测定法 | 140 | 50 | 11 | 0 | 7.85 | 0 |
为确定NBT定量法和酶活测定法的测定值是否有相关性，我们将测定的相关参数进行比较。WHO标准酶活测定法数值OD650， NBT定量法数值OD340， 将两组数据进行相关性测试。结果表明两组数据间形成一定的相关性（y=1.4356 x+0.591，R2=0.508）。
3 讨论
应用三种方法进行G6PD酶活测定，WHO标准酶活测定法的检出率与另外两种方法不一致。WHO标准规定G6PD缺乏症Ⅰ型为酶活基本丧失，Ⅱ型为酶活小于正常值的10%，Ⅲ型为酶活小于正常值的60%。用WHO标准酶活测定法检测出的G6PD缺乏症结果中，有2个病例酶活接近Ⅲ型的阈值。另外有1例血样利用WHO标准酶活测定法测定的酶活高于正常值，而使用定量比值法和NBT定量法都表明该例样品为G6PD缺乏。这可能跟血样本身受药物抑制或三种测定方法的不同操作相关。
G6PD缺乏症的筛查方法有多种，包括高铁血红蛋白还原试验、NBT纸片、荧光斑点法等。高铁血红蛋白还原试验由于检测假阳性过高，被逐渐的弃用。尽管NBT纸片定性法也有过高假阳性的特点，但由于其简便的特点，只需要对阳性样品进行复查即可。本实验采用WHO标准定量酶活测定方法，NBT定量法及G6PD /6PGD比值定量法进行G6PD缺乏症筛查，检出结果基本一致。在酶活换算方面，杜传书等人提出G6PD值=S/H×20.7（U）（S为第一管吸光值；H为血红蛋白吸光值）的计算公式[4]。通过数值比较，WHO标准定量酶活测定方法同NBT定量法数据间的R2值在0.5左右，表明两组数据间有一定的相关性，但这种相关性并不强烈。因此通过不同的方法进行酶活测定，能够近似的进行相互间的换算。在实验操作流程上，NBT定量法较WHO标准定量酶活测定方法更加简便，如果需要快速的测定酶活，NBT定量法可以获得比较满意的效果。
海南省是G6PD缺乏症高发区，黎族人群G6PD缺乏症的携带率6.47%，保亭县黎族人群G6PD缺乏症发生率为7.03%，五指山市黎族人群G6PD缺乏症发生率为9.94%[5-6]。通过大规模的海南新生儿G6PD缺乏症筛查，检出率为3.73%。本实验血样来源于医院门诊，人群包括汉、黎等多族群，利用三种方法测定G6PD酶活，阳性检出率为5.26%～5.78%。该结果略低于黎族筛查获得的结果，并高于新生儿的检出率[7]。本研究结果表明，医院就诊人群中G6PD缺乏症的发生率较高，结果对于提醒临床医生对患者进行G6PD检测及指导临床用药具有重要的意义。
4 参考文献
[1] 杜传书.我国葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺陷症研究40年回顾和展望[J].中华血液学杂志,2000,21(4):174.
[2] 杜传书.漫谈“蚕豆病”和“葡萄糖-6磷酸脱氢酶缺乏症”[J].新医学,2001,32(11):696.
[3] 周 笑.G6PD缺乏性溶血性贫血83例临床分析[J].广西医学,2007,29(8):1254.
[4] 张 铀,褚嘉佑.应用G6PD/6PGD比值法检测云南省勐腊县6-磷酸脱氢酶缺乏症的基因频率[J].中国优生与遗传杂志,1995,26(1):4.
[5] 黄慈丹,王 洁,赵振东,等.海南省新生儿G6PD缺乏症筛查结果分析[J].中国热带医学,2007,7(11):2145.
[6] 王 政,江 渊,蔡 苗.海南省保亭县、五指山市黎族G6PD缺乏症调查[J].海南医学,2006,17(12):121.
[7] 余小燕,余 相,张丽科.新生儿脐血地贫筛查和葡萄糖-6-磷酸脱氢酶缺乏的分析[J].国际医药卫生导报,2010,16(18):2229.