作者：包晓玮，周旋 郭庆勇 韩海霞 阿依姑丽 舒云芳 王颖
【摘要】 目的研究维吾尔族传统药材家独行菜子水提物的镇咳、抗炎作用及其水提物、醇提物的抑菌作用。方法以不同溶剂分离家独行菜子各组份，并以氨水引咳法探讨其水提物的镇咳作用;同时以二甲苯致炎法探讨其水提物的抗炎作用;通过抑菌实验探讨其水提物、醇提物对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单孢菌、金黄色葡萄球菌的抑菌作用。结果家独行菜子水提物组与生理盐水组相比，能明显延长咳嗽潜伏期、降低每分钟咳嗽次数，及抑制鼠耳肿胀作用(均p<0.05);且家独行菜子水提物、95%乙醇提物、甲醇提物对4种细菌均有明显的抑菌作用。结论家独行菜子水提物具有显著的镇咳、抗炎作用，水、醇提物均具有明显的抑菌作用。
【关键词】 家独行菜子; 镇咳; 抗炎; 抑菌
abstract：objectiveto study the antitussive and anti-inflammatory effects of water extract of semen lepidii sativi, an uyghur traditional medicine and the bacteriostatic effect of its water extract, alcohol extract. methodsto separate different components from semen lepidii sativi with different solvent. the antitussive effect of water extract was observed in the cough model induced by ammonia,and also the anti-inflammatory action was tested in the inflammatory model induced by xylene.the bacteriostatic effect of the water extract, alcohol extract were studied on e.coli, bacillus subtilis, pseudomonas bacilli and staphylococcus aureus.resultswater extract of semen lepidii sativi could delay latent period, reduce number of cough, and inhibit inflammation of mouse ear (p<0.05).the bacteriostatic effect of water extract , methanol extract and ethanol extract were appear to four strains of bacteria. conclusionthe water extract of semen lepidii sativi has antitussive and anti-inflammatory effects and both of water extract, alcohol extraction has obvious effect bacteriostatic.
key words：semen lepidii sativi; antitussive; anti-inflammatory; bacteriostatics
家独行菜子(semen lepidiμm sativi)是十字花科、独行菜属植物家独行菜lepidiμm sativμm l.的干燥成熟种子，是维吾尔民族传统药物之一，维吾尔药名为台尔台孜tertiz[1]。www.133229.CoM据 文献 报道本品有扩张冠状动脉、解毒、理肺杀虫、广谱抗菌、利尿助阳、促进伤口愈合等作用。可行水消肿、镇咳平喘、健脾胃，用于 治疗 气管炎、消化不良、腹泻及伤口不愈等疾病[2，3]，但其具体的有效成分及药效作用很少见报道。前期仅探讨了家独行菜子水浸液的抗实验性胃溃疡、促进溃疡愈合、抑制小肠运动及镇痛作用[4]。本文对家独行菜子各组份进行初步的分离，探讨其水提物的镇咳、抗炎作用，并观察其水提物、醇提物的抑菌作用，以期为家独行菜子的进一步研究提供依据。
1 材料与仪器
1.1 实验材料动物：icr小鼠60只(清洁级)，♀♂兼用，体重(20±2) g，由新疆医科大学实验动物中心提供。受试药物：家独行菜子(semen lepidiμm sativi)原植物药用种子部分，购于维吾尔药材市场。实验病菌：枯草芽孢杆菌(p63501)、大肠杆菌(p44102)、金黄色葡萄球菌(p26003)、铜绿假单孢菌(p10104)，购于新疆医科大学菌种保存中心。
1.2 试剂和药品联邦止咳露：深圳致君制药有限公司，批号070913。阿司匹林肠溶片：新疆华康药业有限责任公司，批号：070107，用1%阿拉伯胶配成混悬液，浓度为5 mg·ml-1。头孢曲松钠钠：悦康药业集团有限公司,批号0705061。用注射用水配制成2μg·ml-1，1 μg·ml-1。其他常用试剂均为国产分析纯。
1.3 仪器re-52b旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂);shb-iii循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司);hfsafe-1200生物安全柜(上海申力 科学 仪器有限公司);常规手术用具等。
2 方法
2.1 家独行菜子有效成分的分步提取[5]取原生药250 g粉碎，依次加入以下溶剂：①石油醚：向原生药中加入石油醚500 ml，超声提取30 min，滤出滤液，滤渣再加入石油醚500 ml重复提取，合并两次滤液,于旋转蒸发仪中(45 ℃，50 r/min)浓缩,得成分ⅰ(体积比为100∶7)。②乙醚：将①中滤渣加入乙醚500 ml，超声提取30 min，取滤液，于旋转蒸发仪中(30 ℃,50 r/min)浓缩,得成分ⅱ(体积比为100∶3)。③氯仿：将②中滤渣加入氯仿500 ml，超声提取30 min，取滤液，于旋转蒸发仪中(50 ℃,50 r/min)浓缩,得成分ⅲ(体积比为50∶27)。④丙酮：将③中滤渣加入丙酮500 ml，超声提取30 min，取滤液，于旋转蒸发仪中(45 ℃,50 r/min)浓缩,得成分ⅳ(体积比为100∶1)。⑤95%乙醇：将④中滤渣加入95%乙醇500 ml，超声提取30 min，取滤液，于旋转蒸发仪中(60 ℃,50 r/min)浓缩,得成分ⅴ(体积比为25∶1)。⑥甲醇：将⑤中滤渣加入甲醇500 ml，超声提取30 min，取滤液，于旋转蒸发仪中(55 ℃,50 r/min)浓缩,得成分ⅵ(体积比为50∶3)。⑦蒸馏水：将⑥中滤渣加入蒸馏水1 000 ml，超声提取30 min，取滤液，于旋转蒸发仪中(78 ℃,50 r/min)浓缩,得成分ⅶ(体积比为100∶7)。
2.2 家独行菜子水提物对小鼠氨水引咳的影响[6]icr小鼠30只，♀♂各半，随机分成3组：ns组[0.2 ml·(10g)-1]、联邦止咳露组[0.2 ml·(10g)-1]及家独行菜子水提物组[0.1 ml·(10g)-1]。每组10只，每日定时ig给药，连续7 d。于末次给药1 h后将小鼠置于1 l玻璃钟罩内喷氨雾，观察记录各组小鼠咳嗽潜伏期 (从放入罩内到第一次咳嗽的时间)以及1 min内的咳嗽次数[7]。 结果见表1。
2.3 家独行菜子水提物对鼠耳二甲苯致炎的影响[6]icr小鼠30只，♀♂各半，随机分成3组：ns组[0.2 ml·(10g)-1]、阿斯匹林组[0.4 ml·(10g)-1]及家独行菜子水提物组[0.1 ml·(10g)-1]。每组10只，每日定时ig给药，连续7 d。各组小鼠于末次给药1 h后用乙醚麻醉，在右耳的前后两面涂布二甲苯作致炎剂(0.05 ml/只)[8]。4 h后，将小鼠处死，剪下双耳用6 mm直径打孔器分别在同一部位打下圆耳片，称重,小鼠右耳片重量减去左耳片重即为肿胀度并 计算 肿胀抑制率[9]。结果见表2。
肿胀抑制率(%)=(ns组平均肿胀率-用药组平均肿胀率)/ns组平均肿胀率×100%。
2.4 家独行菜子水提物和醇提物的时间-杀菌曲线(kcs)实验[6]取无菌装有lb液体培养基(8 ml)的试管若干支，分为4组：即枯草芽孢杆菌组、大肠杆菌组、金黄色葡萄球菌组、铜绿假单孢菌组。每组中加入对应的实验病菌(100 μl)，每种实验病菌组再分5组，分别加入家独行菜子水提物(1 ml/管)、乙醇提物(1 ml/管)、甲醇提物(1 ml/管)、头孢曲松 (1 ml/管，2 μg·ml-1)及无菌水(对照组，1 ml/管)，每个加药试管设3个平行对照。将各组菌液置于37.8 ℃振荡培养(250 r·min-1)，分别于0，4，8，12，16，20 h在波长600 nm下测量各组菌液的吸光值(a)值。制作家独行菜子水提物和醇提物对4种实验菌的时间-杀菌曲线(kcs)。结果见图1～4。
2.5 家独行菜子水提物和醇提物的药敏实验[6]药敏试纸的制备：将6 mm的药敏纸片，分别浸于家独行菜子水提物、甲醇提物、乙醇提物、头孢曲松(2 μg·ml-1)、头孢曲松(1 μg·ml-1)溶液中浸泡24 h，干燥备用。
平板法接种4种实验菌，将上述5种药敏试纸贴于各实验菌琼脂表面，置于37.8 ℃孵育16 h后检测各平板的抑菌圈大小，观察其抑菌效果。结果见表3。
2.6 统计学处理实验数据均以t检验进行统计学处理，分析实验结果。
3 结果
3.1 家独行菜子水提物对小鼠氨水引咳的影响镇咳结果见表1。家独行菜子水提物组与ns组比较，咳嗽潜伏期延长、每分钟咳嗽次数减少(p<0.05);联邦止咳露组与ns组比较，有极显著统计学差异(p<0.01);结果显示家独行菜子水提物具有镇咳作用，可以延长由氨水所致的小鼠潜伏期，减少小鼠每分钟咳嗽次数，但与联邦止咳露相比，镇咳效果还有一定差距。表1 家独行菜子水提物对小鼠氨水引咳的影响
3.2 家独行菜子水提物对鼠耳二甲苯致炎的影响抗炎作用结果见表2。家独行菜子水提物组与ns组比较，能够抑制小鼠鼠耳肿胀，降低肿胀率(p<0.05);阿斯匹林组与ns组比较，有极显著统计学差异(p<0.01)。结果显示家独行菜子水提物对二甲苯所致小鼠鼠耳肿胀具有抑制作用，具有抗炎功效，但与非甾体类解热镇痛药阿司匹林相比，抑制效果还有一定的差距。表2 家独行菜子水提物对二甲苯致小鼠耳肿胀的影响
3.3 家独行菜子水提物和醇提物的时间-杀菌曲线(kcs)
3.3.1 对枯草芽孢杆菌的杀菌曲线(kcs)见图1。与头孢曲松和空白对照组相比，家独行菜子乙醇提物对枯草芽孢杆菌的杀菌效果较好，甲醇提物杀菌效果次之，水提物的杀菌效果较差。
图1 家独行菜子水提物和醇提物对枯草芽孢杆菌的杀菌曲线
3.3.2 对大肠杆菌的杀菌曲线(kcs)见图2。与头孢曲松和空白对照组相比，家独行菜子甲醇提物对大肠杆菌的杀菌效果较好，乙醇醇提物杀菌效果次之，水提物的杀菌效果较差。
图2 家独行菜子水提物和醇提物对大肠杆菌的杀菌曲线
3.3.3 对金黄色葡萄球菌的杀菌曲线(kcs)见图3。与头孢曲松和空白对照组相比：家独行菜子乙醇提物对金黄色葡萄球菌的杀菌效果较好，甲醇提物杀菌效果次之，水提物的杀菌效果最差。
图3 家独行菜子水提物和醇提物对金黄色葡萄球菌的杀菌曲线
3.3.4 对铜绿假单胞菌的杀菌曲线(kcs)见图4。与头孢曲松和空白对照组相比，家独行菜子水提物、乙醇提物对铜绿假单胞菌的杀菌效果较好，甲醇提物的杀菌效果最差。
图4 家独行菜子水提物和醇提物对铜绿假单胞菌的杀菌曲线
3.4 家独行菜子水提物和醇提物的抑菌效果 抑菌圈大小(见表3)。数据显示，家独行菜子水提物、乙醇提物和甲醇提物对4种实验菌均有抑制作用。但抑菌效果因菌因药而异。表3 家独行菜子水提物和醇提物对4种实验菌的抑菌效果
4 讨论
家独行菜子的具体有效成分及药效作用很少见报道，本实验室前期仅仅做了家独行菜子水浸液的有关抗实验性溃疡、抑制小肠蠕动和镇痛的研究[4]。本文进一步用生药的提取方法对家独行菜子组份进行了初步的分离，对其水提物和醇提物进行了镇咳、抗炎及抑菌的研究。
镇咳实验结果表明，家独行菜子水提物在一定剂量下对实验动物具有明显镇咳作用，能够明显的延长咳嗽的潜伏期，可减少每分钟咳嗽次数。结果显示，水提物有解除平滑肌痉挛，扩张气管平滑肌作用。抗炎实验结果表明家独行菜子水提物对二甲苯所致小鼠鼠耳肿胀具有明显的抑制作用,能降低小鼠耳肿胀度，提示其对急性非特异性炎症具有抑制作用。这可能与其存在具有局部镇痛、消炎作用的苷类[2]等有效成分有关，其具体有效成分及作用机理有待进一步深入研究。抑菌实验表明，家独行菜子水提物、乙醇提物及甲醇提物对4种实验菌均有抑制作用，其kcs曲线和抑菌圈因菌而异，各有不同。本文仅就一种浓度进行了抑菌实验，但其最佳抑菌浓度还需进一步进行探讨。
从新疆的药用植物资源开发利用的前景来看，家独行菜子有很大的市场价值、药用价值和 经济 价值。本研究仅对其进行了初步分离，其药效方面已显示出很好的效果。鉴于天然药物与化学合成药相比具有毒副作用小，药性温和等方面的优越性，为了丰富我国药用植物资源宝库，挖掘新疆维吾尔药材资源所蕴涵的巨大潜力，今后对家独行菜子有效成分的分离、提取、纯化、纯度鉴定及相关药理作用进行更深入、细致的研究将具有重要意义。
【 参考 文献 】
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