摘 要：目的：研究亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）基因多态性与自然流产的关系。方法：运用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性技术（PCR-RFLP）检测53例自然流产患者及63例正常对照组MTHFR C677T基因多态性，并加以对照分析。结果：自然流产组MTHFR基因TT纯合基因型、CT杂合基因型及T等位基因频率（分别为28.3%、47.17%、54.05%）均明显高于正常对照组（分别为19.05%、28.57%、32.20%），基因型和等位基因频率分布差异均有统计学意义（P＜0.05），T等位基因与自然流产的发生密切相关（OR=2.28，95%可信区间：1.24～4.26）。结论：基因C677T位碱基突变是自然流产发病的重要遗传因素，为探讨自然流产发病机理提供了新的依据。
关键词：自然流产；基因；亚甲基四氢叶酸还原酶
亚甲基四氢叶酸还原酶（MTHFR）是同型半胱氨酸（Hcy）与叶酸代谢的关键酶。亚甲基四氢叶酸还原酶基因的突变会引起酶活性有所降低，结果使叶酸水平降低，DNA低甲基化得产生及血浆Hcy浓度的升高，导致一系列病理的改变引发多种疾病[1]。最新研究表明，不明原因的重复性自然流产与血液的高凝状态有关。检测了53例自然流产患者和63例健康人，运用聚合酶链反应—限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术，探讨了（MTHFR）基因多态性与自然流产的相关性，为探索自然流产的发病机理提供资料。
1 资料与方法
1.1 一般资料：选取2009年1月～2011年1月期间在我院就诊的自然流产非孕期患者53例，年龄（28.4±2.5）岁，平均27岁，其中1次25例，2次18例，3次及以上10例。皆符合自然流产诊断标准[2]：排除生殖器解剖学畸形；外周血染色体异常；内分泌功能异常；对照组63例，均为非孕期正常妇女，年龄（26.9±2.8）岁，平均27岁，无相关病史。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。
1.2 研究方法：清晨空腹取外周静脉血4 ml，2%乙二胺四乙酸二钠（EDTA）抗凝，严格参照试剂盒说明，提取基因组DNA。利用RFLP可对其基因多态性进行检测。MTHFR C677T基因片段扩增及突变的检测PCR引物[3]：P1（NCO-351）：5′-GAAGCAGGGAGCTTTGAGGC-3′；P2（NCO-352）：5′-CCCATGTCGGTGCATGCCTT-3′。PCR反应体系总体积30 μl：10×Buffer 3 μl，4×dNTP 1.5 μl（2.5 mol/L），P1和P2各1 μl（6 pmol/L），Taq DNA聚合酶（Promega 1 U/μl）1.5 μl，模板DNA 5 μl（40 ng/μl）。94℃预变性5 min，然后进入循环程序：94℃ 45 s，72℃ 50 s，54℃ 30 s，共37个循环，75℃延伸15 min。2%琼脂糖凝胶电泳法检测扩增结果。6%聚丙烯酰胺凝胶垂直电泳法检测突变结果。
1.3 统计学分析：运用SPSS 17.0统计学软件对数据进行分析，观察数据以均数±标准差（ ）表示，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。
2 结果
两组MTHFR基因型和等位基因频率分布：见表1。
表1 两组MTHFR基因型和等位基因频率分布[例（%）]
组别 | 例数 | 基因型频率 | 等位基因频率 | |||
TT | TC | CC | T | C | ||
自然流产组 | 53 | 15（28.30） | 25（47.17） | 13（24.53） | 40（54.05） | 34（45.95） |
正常对照组 | 63 | 12（19.05） | 18（28.57） | 33（52.38） | 38（32.20） | 80（67.97） |
