中药复方活血通对糖尿病大鼠肾组织晚期糖基化终产物影响的研究
【关键词】 中药；活血通；糖尿病并发症；晚期糖基化终产物
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【摘要】 目的 观察中药复方活血通对糖尿病大鼠晚期糖基化终产物（ages）的影响，探讨中药复方活血通防治糖尿病慢性并发症的作用机制。方法 采用链脲佐菌素糖尿病大鼠模型,随机分为预防组和治疗组,给予中药复方活血通灌胃,并以氨基胍作为对照,治疗12周,观察中药复方活血通对糖尿病大鼠血糖和肾组织ages的影响。结果 中药复方活血通预防组和治疗组血糖、中药复方活血通预防组、治疗组和氨基胍组肾组织ages均较模型组为低(p＜0.01);氨基胍组血糖高于中药复方活血通预防组(p＜0.05),与模型组比较,差异也有显著性(p＜0.05)。结论 中药复方活血通可能通过降低血糖，抑制终末期糖基化终产物在肾皮质中的形成,延缓糖尿病慢性并发症的进一步发展。
【关键词】 中药；活血通；糖尿病并发症；晚期糖基化终产物
effects of hexue composita on advanced glycation and products in kidneys of diabetic rats
xiong biane,li pu,liu ying, deng zuguo
(department of medicament,the people's hospital of qiannan autonomous profecture for buyi and miao nationalities,duyun 558000 china)
【abstract】objective to investigate the effects of activating blood and resolving stasis hexue composita(hxc) on advanced glycation end products(ages) in kidneys of diabetic rats.methods stz induced diabetic rats were randomized to hxc prevention group and hxc treatment group. the levels of blood glucose and ages in kidneys of the animals were checked after 12 weeks′treatment and compared with that of aminoguanidine (ag) treatment group.results blood glucose level in the hxc prevention andt reatment group,and ages in kidneys of the hxc prevention group and the ag group were lower than those of the non treated group (p＜0.01).blood glucose level in the ag group was higher than that in the hxc prevention group(p＜0.05),but was significantly different from that in the nontreated group (p＜0.05).conclusion hxc might delay the development of diabetic complications by decreasing blood glucose and inhibiting ages formation in kidneys of stz induced diabetic rats.
【key words】traditional chinese medicine；hexue composita；diabetic complications；advanced glycation end products
有研究表明，糖尿病长期高血糖可引起体内蛋白糖化，大量蛋白非酶糖化产物转化为不可逆的糖基化终产物（ages）。wWW.133229.cOmages的蓄积和糖尿病各种并发症的发生有密切关系［1］。因此，抑制ages的生成对预防糖尿病慢性并发症的发生、发展有重要意义。我们观察了中药复方活血通对糖尿病大鼠肾组织ages的影响，现报道如下。
资料与方法
1.材料
(1)动物
雄性sd大鼠，7周龄，体重180～220 g，由贵阳医学院实验动物中心提供，动物证号：医动字第01～3008。
(2)试剂与药品
链脉佐菌素（stz）、牛血清白蛋白、ⅴ型胶原酶、氨基胍均为美国sigma公司产品。中药复方活血通由太子参15 g、生黄芪15 g、怀山药15 g、苍术12 g、玄参15 g、当归15 g、丹参30 g、川芎6 g、穿山甲2 g、益母草15 g、芡实6 g、金樱子6 g、生大黄2 g、肉桂2 g组成，煎成每ml含生药5 g的液体备用。
(3)实验仪器
rf5000荧光分光光度计，日本京都血糖仪。
2.方法
(1)动物模型的建立
参照于德明报道［2］的方法制作糖尿病大鼠模型，用0.1 mol/l枸椽酸钠（ph4.5）将stz配成0.45％的溶液，按65 mg/kg体重一次性腹腔注射建立糖尿病模型，注射stz 72 h后，取大鼠尾静脉血查空腹血糖(fbs)，凡血糖≥16.67 mmol/l作为糖尿病大鼠。
(2)动物分组及处理
将入选动物喂养3天后随机分为4组，即模型组、氨基胍组、中药复方活血通预防组（预防组）、中药复方活血通治疗组（治疗组），每组10只，并以体重鼠龄相匹配的正常大鼠10只作为正常对照组。氨基胍组给予氨基胍100 mg·kg-1·d-1灌胃；中药复方活血通预防组（造模成功后立即开始灌胃）和治疗组造模成功后1个月开始灌胃）给予活血通100 mg·kg-1·d-1灌胃，模型组、正常对照组同时灌胃等量自来水。
(3)指标检测
于治疗组用药后第6周末、第9周末、第12周末测定体重及空腹血糖1次，第12周末将大鼠处死，速取肾脏，分离肾皮质，称重，速冻后，密封保存待用。采用monnie［1］等方法，将肾皮质剪碎，匀浆，离心去上清，沉淀加氯仿甲醇去脂，4℃摇振过夜，经水化冲洗，在hepes缓冲液中过夜，加入280uv型胶原酶，37℃振荡消化24 h。离心取上清液，于波长370/420 mm处测定荧光强度，以含280uv型胶原酶的hepes缓冲液作为空白标准管。用1 g/l的牛血清白蛋白绘制蛋白标准曲线，肾皮质中ages含量以auf/mg表示。
3.统计学分析
各组数据均采用均数±标准差（-±s）表示，spss10.0统计软件进行数据分析，采用t检验，p＜0.05为差异有显著性意义。
结果
1.动物饲养情况观察
连续给药12周后，正常对照组大鼠表现为精神状态好，体重增加，动作自如。模型组出现典型的多饮、多尿，消瘦明显，毛竖无光泽，绻卧拱背。预防组、氨基胍组、治疗组也有类似表现，但程度较模型组轻。整个观察过程中，正常对照组未出现动物死亡，模型组和预防组各死亡2只，氨基胍组和治疗组各死亡3只（其中死亡的原因与动物尾部感染和灌胃有关）。
2.各组糖尿病大鼠空腹血糖比较
与正常对照组比较，糖尿病模型组血糖显著升高（p＜0.01）；各治疗组血糖虽有不同程度下降，但与正常对照组相比仍有统计学意义（p＜0.01）。见表1。表1 各组动物空腹血糖比较（略）
3.各组动物体重及肾重/体重比较
与正常对照组相比，糖尿病模型组及各治疗组体重显著降低（p＜0.01）；肾重/体重×103显著升高（p＜0.01）；与模型组相比，第12周后中药复方活血通预防组和治疗组体重升高（p＜0.05），肾重/体重×103显著降低（p＜0.01），氨基胍组无差异。见表2。表2 各组动物体重及肾重/体重比较（略）
4.各组动物肾组织ages比较 与正常对照组相比，糖尿病模型组ages显著升高（p＜0.01），氨基胍组及中药复方活血通预防组和治疗组ages有所下降，与正常组相比有统计学意义（p＜0.05），但与模型组比较也有明显差异（p＜0.01）。见表3。表3 12周末各组动物肾组织ages比较（略）
讨论
在糖尿病状态下，体内葡萄糖及果糖与多种蛋白质等物质发生非酶促糖基化反应生成不稳定的schiff碱，并进一步形成比较稳定的，但仍然可逆的amadori类早期产物，这些早期糖化产物再经过缓慢、复杂的重排，最后形成不可逆的ages［1］。研究表明，ages不仅可以直接影响细胞和组织功能，参与疾病的产生，也可以通过与特异受体结合，发生反应来改变蛋白质和细胞功能，导致机体的病理变化［4］。糖尿病的各种慢性并发症被认为与晚期糖基化产物有密切关系［5］，ages浓度的升高与糖尿病及其并发症也密切相关［6～7］。本研究采用的对照药氨基胍被公认为ages抑制剂，可以减轻实验性糖尿病大鼠的慢性并发症，但目前仍处于实验阶段。因此，从中药中寻找ages抑制剂将有广阔的应用前景。
糖尿病肾病重要证侯分布特点研究发现［8］：中医本证以气阴两虚证为多，中医兼证以血瘀证发生率高；本证、兼证与糖尿病肾病分期的相关性分析显示，早、中期糖尿病肾病出现率的本证为气阴两虚证，终末期肾病时以阴阳两虚证发生率高，血瘀兼证则贯穿于病程始终。血瘀证在糖尿病中具有普遍性，文献报道其发生率为50%～77.3%［9］。近年来血瘀与糖尿病肾病相关的研究引人注目，许多学者对糖尿病进行了血液流变学、血液动力学以及血小板功能等方面的研究，提示：糖尿病合并血管病变与糖尿病伴有血瘀证者均呈现有明显高凝倾向［10～11］，糖尿病患者均存在不同程度的血液流变学异常及微循环障碍［12］。中药复方活血通采用益气养阴、活血化瘀为大法。方中太子参补气生津，生黄芪健脾益肾、益气升阳，怀山药益气养阴、补脾肺肾，以上三味药为君，具有益气生津、补脾肺肾之功。苍术健脾燥湿，玄参利水通淋、滋阴补肾，又防止苍术之燥，当归、丹参、川芎、穿山甲活血化瘀，益母草活血化瘀、利水消肿，共为臣药。芡实补脾祛湿、益肾固精，金樱子固精、缩尿，两者合用为水陆二仙丹，具有健脾益肾、固精收涩之效。少用大黄以取通腑、泻热、活血。肉桂补火助阳、温通经脉，反佐以防诸药过于寒凉以碍胃、凝血之弊。全方共奏益气养阴、健脾补肾、活血利水之功。本研究表明中药复方活血通可明显减少糖尿病大鼠肾组织ages含量，其作用与氨基胍相似，其预防用药组降低血糖作用优于氨基胍。
本实验结果表明，第12周后糖尿病大鼠肾组织ages显著升高，经氨基胍及中药复方活血通治疗后，ages下降。除ages改变外，糖尿病大鼠在第12周末还可见到明显肾脏肥大，肾重体重比明显增加，经中药复方活血通治疗后，肾重体重比较模型组改善，而氨基胍组无明显变化。在治疗过程中，各治疗组对糖尿病大鼠血糖有不同程度下降，差异有统计学意义。可以认为中药复方活血通对糖尿病及其慢性并发症的治疗是通过控制血糖，抑制醛糖还原酶糖基化，减少ages生成有关。抑制蛋白非酶糖化可能是其延缓糖尿病及并发症发生发展的途径之一。
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作者：熊变娥，李溥，刘瑛，邓祖国作者单位：贵州省黔南布依族苗族自治州人民医院药剂科，贵州都匀558000；贵州省黔南民族医学高等专科学校生物化学教研室，贵州都匀 558003
