蝴蝶兰组培论文的参考文献

前言项目1感知组织培养任务1认识植物组织培养任务2参观组培室项目2配制培养基任务1配制MS培养基母液任务2配制工作培养基项目3无菌接种任务1无菌操作任务2初代培养任务3继代培养任务4生根培养项目4无菌系统环境控制任务1认识污染的来源任务2防治污染任务3消毒组培室项目5典型植物组织培养任务1草莓茎尖组织培养任务2百合鳞茎组织培养任务3红掌叶片组织培养任务4蝴蝶兰腋芽培养附录组培室生产计划的制订和效益分析简介参考文献

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1 .外植体蝴蝶兰的快速繁殖可选用的外植体有茎尖、茎段、叶片、花梗腋芽、花梗节间、根尖等, 其方法各异, 难度各有高低。2 .采样、消毒与初代培养选用的外植体不同, 其采样、消毒与初代培养的方法也不相同。下面分别就各种方法做一介绍:(1 )花梗腋芽培养将蝴蝶兰花梗剪下, 用75%酒精棉球擦拭, 切成约5 厘米的每节带芽小段, 仔细除去苞片, 防止伤及嫩芽,然后用2%次氯酸钠溶液消毒20 分钟, 其间不停地摇动。消毒后用无菌水冲洗3～5 次, 放到培养皿中。用4 号解剖刀将两端各切去0 .5 厘米, 芽体朝上插接在1/ 2MS+ 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤培养基上。培养基中还需加入蔗糖20 克/ 升, 水解乳蛋白1 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 活性炭1 克/ 升, 调pH 值为5 .6。(2 )茎尖培养茎尖是组培成功率较高的部位, 但蝴蝶兰的茎尖深藏于叶片夹缝中, 分离和消毒都比较困难。茎尖的取材有两种方法: 一是将除去叶片的茎用水冲洗, 再用10% 的漂白粉溶液作表面灭菌15 分钟( 每100 毫升消毒液加1 滴吐温20 ) , 除去叶原基后, 再用5% 漂白粉液灭菌10 分钟, 然后用无菌水冲洗。切取茎尖和各叶基部的腋芽, 大小约2～3 毫米, 接种到培养基上,用添加15%椰乳的V&W 培养基进行液体培养,或加9 克/ 升琼脂进行固体培养。培养温度为25 ℃ , 光强2 000勒克司, 每天光照时间为16～24 小时。液体培养以160 转/ 分钟速度做震荡培养, 7～10 天再转至新培养基。从开始培养算起, 1个月后转到固体培养基。在这种条件下培养1 个月即可形成原球茎状球体, 以后可继代增殖。二是先诱导花梗侧芽成为植株, 再利用试管苗的茎尖进行培养。其方法是: 在双目镜下剥取约0 .3 毫米大小的茎尖, 接种到MS(附录表1 1) + 3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤固体培养基上, 在温度( 25±2 ) ℃ , 光强1 500 勒, 每天光照10小时条件下培养。14 天可见茎尖膨大, 呈浅绿色半球状, 3 个月后, 长成桑果状原球茎状体, 组织块6 毫米。此方法最大的优点是免去了外植体消毒的程序, 成功的可能性较大。(3 )花梗节间的培养正在伸长的蝴蝶兰幼嫩花茎具有分化原球茎的能力, 因此可采用快速伸长的花梗节间作培养材料。从花梗可见至其后的45 天之间, 全部幼嫩花序以及花梗等具有细胞分裂能力的节间组织, 最有利于诱发原球茎形成, 成功率可达62 .9%～77 .1%。从第一花蕾可见起, 随花梗的发育分化, 原球茎的比率下降, 能作为外植体的节间也愈短。具体操作方法为: 切取花梗节间, 进行表面消毒, 然后斜切成1～1 .5 毫米厚的薄片, 平放在固体斜面培养基上。培养基配方为: 1 .2 倍的V&W无机盐, 加100 毫克/ 升肌醇, 维生素B1 、B6 和烟酸各0 .5毫克/ 升, 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤, 2% 蔗糖, 0 .8%琼脂。置温度(26±2 ) ℃ , 光强500 勒, 每天光照16 小时的环境下培养。(4 )叶培养从3～4 月龄蝴蝶兰植株上取幼叶, 用自来水冲洗干净。在超净工作台上, 叶片用75% 酒精消毒30 秒, 然后用无菌水清洗2～3 遍, 再用0 .1%升汞溶液浸泡11 分钟, 最后用无菌水冲洗4～5 遍。用无菌手术刀将叶片切成5 平方毫米左右大小的小块, 平放或按极性接种在MS+ 3 .0 毫克/ 升6苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸诱导培养基上( 培养基中加入蔗糖20 克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 椰汁200 毫升/ 升) , 近轴面向上。培养条件为: 温度25～28 ℃ , 光强1 600～2 000 勒, 每天光照10～12小时。幼叶切块在诱导培养基上培养1～2 个月后, 从每个叶片组织块上可产生1～7 个不等的原球茎。(5 )根组织培养取正在培养的花梗苗, 切取根尖长约1～1 .5厘米, 并用解剖刀切去尖端约1 毫米, 露出根的分生组织, 接种于根尖诱导培养基MS+ 8～12 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5～1 .0 毫克/ 升萘乙酸+ 10% 椰乳, 附加3% 蔗糖, 培养基中加入一块泡沫海绵, pH5 .4～ 5 .6; 液体震荡培养( 30 转/ 分钟) , 培养温度( 27±2 ) ℃ , 光强1 000～2 000 勒, 每天光照10 小时。20 天左右材料膨大且表面颜色明显变深, 60 天后根分生组织部位开始有分化芽, 分化率约为60%。再过45 天左右, 切下分化芽, 转入原球茎诱导培养基2/ 3MS+ 1～3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5 ～1 .0 毫克/ 升萘乙酸+ 10% 椰乳, 加蔗糖3% , 琼脂0 .7%。经2 个月可形成原球茎。3 .继代培养蝴蝶兰早期原球茎状球体外观象瘤状愈伤组织, 继续培养可见表面突起一个个圆球, 部分表面细胞分化出根毛状物。在原球茎球状体形成后, 无菌条件下将原球茎取出切割成几小块, 切块不可太小( 直径> 2 毫米) , 转入MS+2 .0 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .5 毫克/ 升萘乙酸( 加蔗糖20克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 椰汁200 毫升/ 升)继代培养基中, 进行增殖培养。或在原球体的诱导时, 以1/ 2MS 为基本培养基, 激素以2 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸, 配方中均加入糖20 克/ 升, 琼脂8 克/ 升, 调pH 值5 .6 , 也可获得理想的效果。培养60 天左右, 再进行分割转移。通过这种方式, 原球茎可成倍增长。4 .小植株的培养将不需继代的原球茎, 在无菌条件下, 切开丛生小植株, 将小植株转入育苗培养基上培养。育苗培养基可选用1/ 2MS+ 1 .5 毫克/ 升吲哚丁酸+ 0 .05 毫克/ 升萘乙酸, 并加入蔗糖20 克/ 升, 琼脂12 克/ 升, 活性炭5 克/ 升, 椰汁200毫升/ 升; 或2/ 3MS+ 香蕉100 克/ 升, 加蔗糖30/ 升,琼脂7 克/ 升。此后, 将其转入1/ 2MS+ 0 .8 毫克/ 升萘乙酸的生根培养基。不久, 小植株生根。当小植株长到一定大小时, 移入温室。切离丛生小植株时, 基部未分化的原球茎及刚分化的小芽应接入诱导培养基中, 作为种苗。一段时间后, 将长大的种苗移出, 种植, 小苗及原球茎可继续增殖与分化。5 .试管苗出瓶移栽当小植株长至4 厘米左右, 叶3～4 片,根2～3 条时, 即可移栽。此时将小植株带瓶移入温室内, 1～2 周后, 再将瓶塞半开或完全打开炼苗3～5 天后, 取出组培苗, 用自来水洗净其根部的培养基, 将根部放于50%多菌灵水溶液中消毒2小时, 药液浓度为1 000 倍, 晾干后即可栽植于水苔穴盘中。刚定植的植株, 温度白天以20～25 ℃为宜, 夜间以18～23 ℃为宜。以后, 温室内日温以25～29 ℃为宜, 夜温以20～24 ℃为宜。湿度以80%～90%为好, 以后逐渐保持在70% 左右。初期光照不宜太强, 一般以1 500～2 500 勒为佳。多采用遮阳网, 春秋用一层遮阳网遮光50%左右, 夏季用双层遮阳网, 遮光70%左右, 冬季可适当减少遮荫。缓苗后(两周左右) 逐步提高光照强度至6 000～8 000勒。蝴蝶兰根部忌积水, 水分过多, 易引起根系腐烂。刚出瓶的小苗应勤补水, 中苗或大苗根据干湿程度浇水; 一般情况下, 在盆内基质表面已变干, 盆面水草微发白时再浇水。春季可4～5天浇水1 次, 保持盆内基质潮湿即可。浇水时要让整个基质湿透。浇水时间以上午或清晨为佳。幼苗移栽初期不可施肥, 定植后1 个月,可喷施液肥。