蒽酮比色法测定可溶性糖如下:
一、实验目的
1、掌握蒽酮法测定可溶性糖含量的原理和方法。
2、学习植物可溶性糖的提取方法。
二、实验原理
糖在浓硫酸作用下,可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛,生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物,在一定范围内,颜色的深浅与糖的含量成正比,因此可以用于糖的定量测定。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为620nm。
三、实验材料
任何植物鲜样或干样。
四、药品试剂
1、80%乙醇。
2、葡萄糖标准溶液(100μg/ml):准确称取100mg分析纯无水葡萄糖,溶于蒸馏水并定容至100ml,使用时再稀释10倍(100μg/ml)。
3、蒽酮试剂:称取1g葱酮,溶于80%浓硫酸(将98%浓硫酸稀释,把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中)1000mI中,冷却至室温,储于具塞棕色瓶内,冰箱保存,可使用2~3周。
五、实验器材
分光光度计、分析天平、离心管、离心机、恒温水浴、试管、三角瓶、移液管、剪叨瓷盘、玻棒、水浴锅、电炉、漏斗、滤纸。
六、实验方法
1、样品中可溶性糖的提取:称取剪碎混匀的新鲜样品零点五到一克,放入大试管中,加入15 ml蒸馏水,在沸水浴中煮沸20分钟,取出冷却,过滤入100 ml容量瓶中,用蒸馏水冲洗残渣数次,定容至刻度。
2、标准曲线制作:取6支大试管,从0~ 5分别编号,按表1-3加入各试剂。
注意事项
1、蒽酮试剂含有浓硫酸,使用时应小心。
2、蒽酮要全部取自同一瓶,以保证条件一致性。