啤酒酵母的扩大培养论文研究

一、实验目的： 学习酵母菌种的扩大培养方法，为实验室啤酒发酵准备菌种。 二、实验原理： 在进行啤酒发酵之前，必须准备好足够量的发酵菌种。在啤酒发酵中，接种量一般应为麦芽汁量的10%（使发酵液中的酵母量达1×107个酵母/mL），因此，要进行大规模的发酵，首先必须进行酵母菌种的扩大培养。扩大培养的目的一方面是获得足量的酵母，另一方面是使酵母由最适生长温度（28℃）逐步适应为发酵温度（10℃）。 三、实验器材： 恒温培养箱，生化培养箱，显微镜等。 四、实验步骤： 本次实验拟用60升麦芽汁，因此应制备6000 mL含1×108个酵母/mL的菌种，以每班10个组计算，每个组应制备约600 mL菌种。建议流程如下： 菌种扩大: 麦汁斜面菌种→麦汁平板—28℃，2天→镜检，挑单菌落3个，接种 50mL麦汁试管（或三角瓶）—20℃，2天（ 每天摇动3次）→550mL麦汁三角瓶—15℃，2天（每天摇动3次）→计数备用。 1. 培养基的制备 取协定法制备的麦芽汁滤液（约400 mL），加水定容至约600 mL，取50 mL装入250 mL三角瓶中，另550 mL至1000 mL三角瓶中，包上瓶口布后， Mpa灭菌30分钟。 2. 菌种扩大培养 按上面流程进行菌种的扩大培养（斜面活化菌种由教师提供）。注意无菌操作。 五、注意事项：灭菌后的培养基会有不少沉淀，这不影响酵母菌的繁殖。若要减少沉淀，可在灭菌前将培养基充分煮沸并过滤。 六、思考题：菌种扩大过程中为什么要慢慢扩大，培养温度为什么要逐级下降？

（1） 实验室扩大培养阶段斜面原菌种——→斜面活化——→10ml液体试管 ——→100ml培养瓶 ——→1L培养瓶 ——→5L培养瓶 ——→25L卡氏罐 （2） 生产现场扩大培养阶段 25L卡氏罐—→250L汉生罐 —→1500L培养罐 —→100hL培养罐 —→20m3繁殖罐—→0代酵母 扩培过程中要求严格无菌操作，避免污染杂菌，接种量要适当。

一,谷氨酸发酵的菌种扩大培养斜面菌种→一级种子培养→二级种子培养→发酵罐1,斜面菌种的培养菌种的斜面培养必须有利于菌种生长而不产酸,并要求斜面菌种绝对纯,不得混有任何杂菌和噬菌体,培养条件应有利于菌种繁殖,培养基以多含有机氮而不含或少含糖为原则.(1) 斜面培养基组成葡萄糖 蛋白陈 牛肉膏 氯化钠 琼脂 PH (传代和保藏斜面不加葡萄糖)(2) 培养条件:33~34℃,培养18~24h2, 一级种子培养一级种子培养的目的在于大量繁殖活力强的菌体,培养基组成应以少含糖分,多含有机氮为主,培养条件从有利于长菌考虑.(1) 培养基组成葡萄糖 尿素 硫酸镁 磷酸氢二钾 玉米浆 (按质增减)硫酸亚铁,硫酸锰 各2ppmPH (2) 培养条件 用1000mL三角瓶装入培养基200mI,灭菌后置于冲程,频率96次/min的往复式摇床上振荡培养12h,培养温度33~34℃(3) 一级种子质量要求种龄:12h pH值:± 光密度:净增OD值以上残糖:以下 无菌检查:(-)噬菌体检查: (-)镜检:菌体生长均匀,粗壮,排列整齐革兰氏阳性反应.3, 二级种子培养为了获得发酵所需要的足够数量的菌体,在一级种子培养的基础上进而扩大到种子罐的二级种子培养.种子罐容积大小取决于发酵罐大小和种量比例.(1) 培养基组成(2)培养条件接种量:培养温度:32~34℃培养时间:7~8h通风量50L种子罐1:搅拌转速340r/min;250L种子罐1:搅拌转速300r/ min500L种子罐1:搅拌转速230r/ min(3)二级种子的质量要求种龄 7~8hpH 左右OD值 净增左右无菌检查 (-)噬菌体检查(-)二,啤酒酵母的扩大培养一般可采用三级扩大培养,扩大倍数:第1级到第2级为8-10倍,第2级到第3级为4-6倍. 1,实验室扩大培养2,车间扩大培养

应为大生产麦汁的温度比较低，一般就8到10度给酵母一个适应的过程