阿胶的毕业论文大全

2018春节期间，“全国12320卫生公益热线”发布了一条微博说：“阿胶在保健品中的段位一直很高，有种种功效的光环加持：补血、止血、养颜、安胎、抗疲劳、抗癌……不过，请透过现象看本质，阿胶只是‘水煮驴皮’。驴皮的主要成分是胶原蛋白，而这种蛋白质缺乏人体必需的色氨酸，并不是一种好的蛋白质来源。”告诉大家不值得去买阿胶。网上一直有人质疑阿胶的功效，但是由卫生部门官方微博出面质疑，还是头一次，引起了轰动。这条微博很快就被删除，引起了更多的猜测和议论。中国中药协会发表声明说：“阿胶传承千年，疗效确切。无论是传统中医理论还是现代药理研究，都证明了阿胶的疗效。此微博言论否定阿胶的功效，并没有证据支撑，这对于公众和消费者都是一次不负责任的误导。”随后“全国12320卫生公益热线”发表声明做了道歉。中国中药协会是一个中药行业组织，阿胶企业的老板就是这个协会的副会长，他们当然只能说阿胶的好话了。但是他们为阿胶辩解的理由经不起推敲。他们的第一条理由是：“阿胶传承千年，疗效确切。”这是为中医中药辩护常见的理由。但是一个药物或疗法有没有疗效，和传承时间长短没有关系。很多新药、新疗法传承时间很短，不能就说它们无效，而跳大神传承的时间比阿胶长得多，难道能说疗效更加确切？即使是“传承千年”的说法也大有问题。中药协会称阿胶首载于中国最早的药物学专著《神农本草经》，中医代表性典籍中303部有阿胶的应用记载。但是中医典籍中记载的阿胶和现在销售的阿胶并不一致。现在的阿胶都是用驴皮熬制的，用其他动物皮熬制的被认为是无效的假货。但是阿胶在古代最早是牛皮做的。南北朝陶弘景《名医别录》：“（阿胶）生东平郡，煮牛皮作之。出东阿。”后来各种牲畜的皮都被用来煮胶，但认为牛皮、猪皮最好，驴皮、马皮、骡皮较差，见北魏贾思勰《齐民要术·煮胶第九十》：“沙牛皮、水牛皮、猪皮为上，驴、马、驼、骡皮为次。其胶势力，虽复相似，但驴、马皮薄毛多胶少，倍费樵薪。”李时珍《本草纲目》改动了《齐民要术》说法，将猪皮和驴皮调换了位置：“凡造诸胶，自十月至二三月间，用沙牛、水牛、驴皮者为上，猪、马、骡、驼皮者次之，其旧皮、鞋、履等物者为下。”这说明到明朝驴皮地位上升，但是牛皮自古以为就有的地位也没动摇，所以李时珍和稀泥说：“大抵古方所用多是牛皮，后世乃贵驴皮。”到了清朝，阿胶才变成了只能用驴皮来做了。清代周岩《本草思辨录》：“阿胶以济水黑驴皮煎炼而成。”阿胶改用驴皮制作的原因，可能以明、清时候严禁杀耕牛导致牛皮缺乏有关。不管怎样，阿胶以驴皮为正品的历史只有短短的一两百年，中药协会如果真的那么相信“传承千年”，那么就应该让阿胶恢复用牛皮来做。中药协会为阿胶辩护的第二条理由是：“无论是传统中医理论还是现代药理研究，都证明了阿胶的疗效。”这个理由也完全站不住脚。药物的疗效是不能通过中医理论和药理研究来证明的。药物的疗效只能通过严格设计的随机、双盲、对照临床试验来证明，药理研究只是为了说明为什么药物有疗效。如果药物并没有被证明有疗效，理论解释和药理研究就失去了意义。中药协会称，有关阿胶的学术论文累计已有5707篇，其中国外发表学术论文近20篇，也就是说几乎都是在国内期刊发表的论文。中药协会也知道在国内期刊自娱自乐发表的论文再多也没有说服力，所以特地强调有近20篇是发表在国外的，还特别提到：2016年，广州中医药大学第一附属医院妇儿中心科研团队在临床中观察到阿胶可以改善轻中度β-型地中海贫血孕妇的临床症状和血红蛋白状况，研究结果发表在《国际血液学杂志（International Journal of Hematology）》上。他们说“这标志着对于阿胶的现代药理研究已被国际社会所接受”。我在国际生物医学期刊数据库pubmed搜了一番，和阿胶有关的英文论文其实总共只有11篇，其中有6篇是对阿胶的成分做化学分析的，和疗效或药理研究都没有什么关系。剩下的5篇才是中药协会说的药理研究。这5篇中，有1篇是韩国东方医学研究所的人写的，通过体外实验和动物实验证明阿胶中含有抗菌成分，算是要为阿胶开发新用途，但国内关于阿胶功效的宣传都没有把它当成天然抗生素，我们就不去研究这篇论文了。另外的4篇都是中国研究人员做的，想要证明阿胶能够促进造血或者能够抗衰老，这倒是阿胶宣传中所突出的功效。这些论文都是近年来才出现的，都发表在非常偏僻的国外杂志上，例如《美洲中国医学杂志》《民族药学杂志》，就是专门发表证明草药有效的论文的，门槛很低。而且论文内容还互相打架。例如关于阿胶能够补血，有的论文说是能够增加红细胞、白细胞的数量，但有的论文说是增加血球蛋白的数量，完全不是一回事。这些论文都是不可信的。就拿中药协会重点介绍的那篇论文来说吧，发表在《国际血液学杂志》上，名头听上去很大，其实是日本办的一本杂志，影响因子只有1点几，很少有人看的非常低档的杂志。这篇论文的实验设计很成问题。它把轻中度β-型地中海贫血孕妇分成两组，一组吃阿胶，一组作为对照组什么都不吃，然后对比两组的血液成分。这样的实验设计病人知道自己有没有在吃药，就没法排除安慰剂效应，也没法排除阿胶里非特殊成分的作用，例如阿胶里含有蛋白质，说不定两个组的差别就是因为阿胶组多吃了蛋白质造成的。比较合理的实验设计应该是这样的：中药协会不是说阿胶不是水煮驴皮吗？那就一组病人吃阿胶，一组病人吃水煮驴皮，但是要把水煮驴皮做成和阿胶外形一样，这样病人不知道自己吃的是什么，才能避免安慰剂效应。研究人员在做检测时也不能知道病人的分组情况，以免在判断效果时出现主观偏差。这就是双盲对照。所以，仅仅根据一个设计有严重缺陷的实验结果，一篇发表在档次极低的期刊上的论文，怎么能说“这标志着对于阿胶的现代药理研究已被国际社会所接受”呢？怎么能说阿胶的疗效已经被证明了呢？阿胶的疗效并没有被临床试验证明，恰恰相反，我们用现代医学理论可以证明它不可能有疗效。阿胶最主要的卖点是“补血”。“补血”是什么意思呢？一种说法是用于治疗出血症，意思是如果受伤出血，吃阿胶就能帮助身体把血补回去。其实如果出血量不多，少掉的那点血对身体并无不良影响，身体自然会自己造血补充；如果出血量太多，那就要输血救命了。不管怎样，出血后都不需要吃特殊的药品、食品来“补血”，也没有什么药品、食品能够加速身体补充损失的血液的代谢过程。所以吃阿胶是无助于治疗出血症的。另一种说法是用于治疗贫血。导致贫血的因素很多，其中最常见的是缺铁性贫血。阿胶的宣传品声称治疗缺铁性贫血效果良好，我们如果了解缺铁性贫血的病因，就知道这是无稽之谈。红细胞中的血红蛋白需要跟铁结合才能起到携带氧气的作用，如果体内缺铁，血红蛋白功能失灵，就会导致贫血。所以预防缺铁性贫血要吃富含铁的食物，而治疗缺铁性贫血则要吃铁制剂。但是阿胶中几乎不含铁，不仅治疗不了缺铁性贫血，也预防不了缺铁性贫血。阿胶的主要成分是胶原蛋白。胶原蛋白是一种蛋白质，和其他蛋白质一样，吃它都会在消化道里被消化成各种氨基酸才被人体吸收进体内，并不能直接进入人体发挥作用。所以吃阿胶和吃其他蛋白质并没有什么差别，只是能起到补充氨基酸的营养作用。而且由于胶原蛋白缺乏人体必需的氨基酸，并不是优质蛋白质，吃它还不如吃富含优质蛋白质的鸡蛋、牛奶、肉类，还要便宜得多。有人会说，除了主要成分，还有次要成分啊，焉知阿胶的次要成分里没有能够“补血”的神奇物质？目前并没有发现动物皮里含有什么神奇物质，如果有的话，含量必定极低，吃它在体内也不会起到作用——一种物质要做体内起作用，需要达到一定的浓度才行。如果你真的相信在动物皮里含有含量极低的神奇物质而且还能在体内起作用，那就直接吃动物皮好了，何必吃昂贵的阿胶？有人可能会说，阿胶不是简单的动物皮，是经过熬制的，焉知在熬制过程中不会发生某种化学反应，产生原先没有的神奇物质？其实熬制阿胶只是普通的煎煮、浓缩，在这种温度条件下只是让胶原蛋白发生水解反应，变成比较短的多肽和氨基酸，是不可能出现神奇的化学反应产生神奇的物质的。对阿胶成分进行化学分析的结果也表明，它基本上就是由胶原蛋白及其部分水解产物组成，并没有任何特殊物质。但是普通消费者是不了解或不接受科学解释的，他们更相信的是传说和广告宣传。近年来对阿胶的广告宣传攻势极其凶猛，消费人群大增，阿胶价格也就随之大涨。2001~2016年期间，东阿阿胶(, , )的阿胶产品零售价从每千克130元涨到5400元，涨幅超过40倍。东阿阿胶总裁还曾表示，东阿阿胶的涨价是价值回归，目标价位为6000元/斤。阿胶变成了风靡全国的奢侈品，驴也就跟着遭殃，杀再多的驴也满足不了中国市场需求。据估计，每年需要400万~1000万张驴皮才能满足阿胶市场的需要，而全球市场能够供应的只有每年大约200万张。驴的繁殖能力不强，怎么生也难以满足市场需求，结果就是驴的数量急剧下降。1990年中国大约有1100万头驴，到2014年只剩下大约600万头。中国的驴全杀了也不够一年的市场需求，只能去国外杀，尤其是非洲。因为中国商人去非洲大量采购驴皮，非洲驴的价格飘升十倍，诱发了众多偷盗事件。在非洲贫困地区，驴是重要的劳动、交通工具，却经常发生大批的驴被偷杀剥了皮卖到中国的事件。因为驴在非洲价格也高到成了奢侈品，贫困家庭的驴被偷杀后，没钱买新驴，给他们的生活造成很大的困难。偷驴者通常是给驴注射毒药杀死，剥了皮带走，驴的尸体扔在草原上，食腐动物却不吃，让人疑惑不知用了什么毒药，会不会因此污染阿胶，让“进补”成了吃毒。所有哺乳动物的皮成分都相似，驴皮具有的成分，牛皮、猪皮、马皮、羊皮、狗皮都有，驴皮并不具有特殊性，吃驴皮与其他哺乳动物皮一样，不会有什么差别。认为吃驴皮做的阿胶才有功效，吃其他皮做的假阿胶就无效，这是荒唐的，也与古代记载不符。如果真的相信古人的智慧，那么就应该用牛皮和其他皮来做阿胶，给世界各国的驴一条生路。上个世纪70年代中国驴的数量稀少时，中药企业曾经推销过用猪皮做的“新阿胶”，号称和驴皮做的阿胶效果一样。所以，对用猪皮、牛皮做的假阿胶，不仅不应该查处，反而应该鼓励。不管用什么皮做的阿胶，都没有特殊功效，对身体也不会有害处，但不法厂家如果采用皮革下脚料作为原料来熬制，由于在皮革处理过程中会用到含重金属的物质，其中的重金属残留就很可能有害健康了。总之，如果吃到真阿胶，对身体并没有特殊的滋补、治疗作用，只是在昂贵地补充劣质蛋白，而如果吃到用皮革下脚料熬制的假阿胶，反而对身体会有危害，那么又何必冒险吃阿胶？

中医学不是自然科学的分支 ,它一直与中国古代哲学交融在一起 ,中医学有着自己对生命本体的认识 ,有着自己特定的思维方式与思维过程。下文是中医毕业论文范文大全，欢迎大家阅读参考!

中医毕业论文范文大全【1】

试谈中医学专业的生理学教学改革

摘 要：在医学课程中，生理学是一门非常重要的基础课。

根据教学要求，中医学专业学生也要学习生理学。

针对该层次学生，我们认为采取“中西医融合”的教学方法，可以提高教学效率。

关键词：中医学专业 生理学 中西医融合

作为一名生理学教师，面对中医学专业同学，如何能够既突出中医学的特点，又讲好生理学的基础知识，是学好中医学专业的重点。

在中医专业教学工作中，我们逐渐摸索出一些较为有效的方法，即：“中西医融合”。

1 对教师的要求

生理学是研究正常机体功能活动规律的科学。

在中医基础理论中占有重要的地位，也是学好西医的基础。

但中医专业学生在学习生理学之前，往往先学习中医学基础理论，特别是中医学基础的“脏象学”部分，相当于中医的“人体生理学”。

中医学对生理过程的认识自成一套体系，当学生接触到西医生理学时，这两种不同的理论体系会对学生学习和理解造成困难。

因此，作为西医院校毕业的教师，要掌握中医基础理论知识、中药学以及中医诊断学等内容，既可拓展自己的知识层面，又有利于更好地与学生探讨[1]。

另外，教师还需正视一个新问题：如何应对已从网络获得大量信息的学生?它迫切要求高校教师不断补充学术养份、拓展学术视野、更新学术理念，以保持对学术新知的热情，从而主动及时地给自己的学术生命输入新鲜血液[2]。

本教研室要求教师除了课堂教学外，在课余时间也要学习中医的基础理论和相关学科知识，拓展自己的知识层面;另一方面，利用现代网络技术，积极关注前沿学术动态，了解学术热点，参加科研活动，撰写科研文章。

2 理论教学中要做到“中西医融合”

中西医都是科学，只是各自的研究方法、手段、发展背景的不同而形成了两个不同的理论体系[3]。

在理论教学中，尽力寻找到一些生理学与中医学的共通点，在讲授的时候加以结合，以此构建中西医理论体系之间的沟通平台[4]。

第一，我们对中医学和西医学中内涵一致，仅仅是提法不同的内容进行整合。

打个比方，学习绪论这章时，根据内环境稳态内容，把生命活动的对立统一、维持相对稳定状态等普遍存在的规律与阴阳的对立制约、互根互用、消长平衡、互相转化的阴阳对立统一学说相比较，使学生在掌握内环境稳态的基础上，对于中医理论的总纲―“阴阳学说”[3]有了更深刻的认识。

又如，在讲授器官生理作用时，把中医理论中脏腑的相关功能与之相比较：西医中心脏的泵血功能与中医学中心主血脉的功能是一致的;西医中肝的主要功能是：贮血和消化，这与中医学中肝主藏血、主疏泄的功能是一致的;西医中生成尿液是肾脏的主要功能，这与中医学中肾主水的功能是一致的。

通过“中西医融合”的方法将两大理论体系不断互相渗透、互相补充，从而达到融会贯通，为学生架设起一座沟通中西医学的桥梁。

第二，除了比较这些共通点，我们还特别提出中西医之间对器官生理功能和意义理解上的差异，使得学生能够更好理解和记忆。

例如：中医学对心功能的阐述是“藏神，主血脉”，它除去包含西医生理学中心血管系统的功能，其中还囊括神经系统的部分功能。

3 实验教学的“中西医融合”

生理学是一门实验性科学，其一切理论都源于实验[5]。

实验教学可以培养学生的实际操作能力。

如动脉血压调节实验中，学生通过给家兔耳缘静脉注射肝素、乌拉坦等药品，随后进行颈总动脉插管，就可以掌握静脉注射、动脉插管等操作方法。

同时通过牵拉、夹闭颈总动脉以及电刺激迷走神经等操作，来验证降压反射的相关理论，使学生对此知识点理解得更透彻，记得更牢固。

实验教学是最能培养学生的实际操作能力和科研思维，教师不仅要引导学生如何做好生理实验，如何通过实验得出相应的理论知识。

同时，在常规的实验项目中，我们还特地加入一些中医药学内容，以提高中医系同学的兴趣。

例如，实验5：调节动脉血压中，可以建议同学观察三七这种中药对动脉血压的影响;还可以观察中药木香对小肠平滑肌的影响。

4 根据不同专业区别对待

在我校，中医专业学生既有文科生，又有理科生，学生起点差异比较大，而且生理学教学课的时间有限。

因此，作为生理学教师，要根据学生的不同专业、知识掌握的不同水平，对教学内容有所侧重，当然是在保证掌握基本内容的前提下。

例如：生物电现象的形成机制，对于药学专业，这部分内容熟悉即可，并不要求学生掌握其详细过程;但对于中医专业，该部分内容要求全面理解和掌握。

通过这种不同专业和层次的区别对待，在有限的课时内，既做到了生理学基本原理和知识点的覆盖，又突出各专业的特色和重点。

5 抓住重点，突破难点

对于中医学专业学生而言，生理学内容较多，而课时少，如果采取“填鸭式”的讲授方法，学生接受起来比较困难。

所以在要使学生有限的时间内最大程度地掌握好基本知识，作为教师必须抓住各章重点，突破难点。

抓住重点就是对教学大纲中所要求掌握的重点知识，进行详尽地讲解。

如呼吸运动的调节重点在于呼吸的反射性调节，而其中又以化学感受性反射尤为重要。

因此授课时主要讲授化学因素CO2，O2和H+对呼吸的影响，这样才能突出重点，做到层次分明。

也利于引导学生把握住重点进行自学和复习。

至于难点内容，也就是学生认为难以理解、难于掌握的内容，可采取比喻的方法，从而化难为易。

教学中抓住了重点，突破了难点，学生在学习过程中也就能抓住要点，分清主次，更深入地了解主要内容。

参考文献

[1] 余畅，余华荣.“中西医结合”在生理学教学中的运用[J].中医药管理杂志，2012，20(4)：339-340.

[2] 文菊华，陈懿，邓冰湘，等.五年制中医学专业生理学教学的体会[J].医药教育，2011，18(3)：116.

[3]李保兰，韩曼.我校中医实验班生理学教学模式改革之探究[J].中国社区医师，2013，15(8)：363.

[4] 肖爱娇，闵建新，伍庆华.PBL教学法运用于中医院校医学专业生理学教学的研究[J].宜春学院学报，2013，35(3)：154-156.

[5] 刘海梅，闫福曼，徐进文，等.中医院校生理学推行TBL教学法的探讨[J].基础医学教育，2012，14(7)：489-491.

中医毕业论文范文大全【2】

浅析中医临床医学面临的挑战及策略

【摘 要】中医临床基础医学成立至今，尽管在学科建立方面做了大量工作，但目前的现状并不容乐观，尤其在学科性质、学科定位、课程设置等方面存在明显问题。

因此，面对现状，应当有策略、有计划的积极应对在现有基础上，强化经典以弥补不足，并尽可能发挥学科原有的优势，大胆进行改革，努力推陈出新，以促进学科的迅速发展。

国务院学位委员会对中医学科专业目录进行了调整，将《伤寒论》、《金匮要略》、温病学三门传统经典课程合并组建为中医临床基础学科。

此后，各中医院校以此为模式，纷纷进行了学科的改革，以新的.中医临床基础学科来开展各项工作。

尽管临床基础学科从组建开始就有各种不同的看法，但教学、科研、临床等工作依然按此方式在进行着。

回顾新学科成立后近8年的时间，其在各方面均取得了新的进步，尤其学科的整体面貌有灿然一新之感。

但若从各方面的具体情况而言，其现状不容乐观。

【关键词】中医临床医学;现状;对策

1 学科现状的客观评价

临床基础学科成立至今，从学科发展的总体状况来看，应该说是利弊共存、喜忧参半。

对此作一客观的评价和分析，是目前学科发展中不可回避的重要工作。

学科面临的困境

临床基础学科成立后虽然对中医学的发展产生了一些有利的影响，但也明显地存在着严重的问题。

归纳起来说，主要面临三方面的困境。

其一，《伤寒论》、《金匮要略》、温病学的合并是行政划分的结果，合并之前应该进行过科学的论证。

但到目前为止，在实际工作中，仍然是“三家”分而行之，基本与合并之前无太大变化。

因此，远远没有达到产生“合力”的效果。

其二，由于历史的原因，各校原来的《伤寒论》、《金匮要略》、温病专业的发展是不平衡的，有的伤寒专业实力雄厚，有的可能在金匮、温病专业方面研究水平较高。

而简单地合并之后，就冲淡了三门课程的原有优势。

也许初衷是以优促建，以好带动全体共同前进。

但结果却是相互牵扯制约，干扰了学科的发展进程。

其三，没有新的统一的教材，教学还是保持着原貌，因而完全不能表现出“临床基础”的特色或独特之处。

三门课程的合并，结果就象是“拼盘”一样，只有形式，没有贯穿整体的核心内容。

学科长处面面观

任何新生事物均有生机勃勃的一面，因此，临床基础学科以新学科的形式出现，也具有一定的优势。

以理推之，其优势主要体现在三方面。

其一，拓宽了专业范围。

由于临床基础学科涵盖了《伤寒论》、《金匮要略》、温病学三门课程的丰富内容，所以其研究的范围较之原有学科明显扩大，在研究的内容方面则可更为灵活。

《伤寒论》、《金匮要略》、温病学均有独特的理论体系和治疗学内容，但在外感热病及内伤杂病的诊治方法上，又有着一定的相通之处。

因此，打破原有的学科框框，可以对这些交叉内容进行深人的研究，改变以往此类研究较少的现象。

其二，更新了原有的学术思维模式。

以前三门课程单独而立时，在学术思维方面也大多是各不相干的。

比如，虽然温病学理论的形成与《伤寒论》有密切关系，但在具体的研究思维方面，却很少联系到《伤寒论》来展开思考。

再如，《伤寒论》与《金匮要略》同为张仲景所作，尽管各自涉及的重点不同，但学术思想是完全一致的。

然而从这一方面进行学术研究的学者却并不多见。

所以，三门课程合并之后，对学术的发展可以起到良好的推动作用，尤其对仲景学说的深人研究具有重要意义。

其三，为该领域研究生整体能力的提高提供广阔的空间。

温病学是研究外感热病的专门学科，《伤寒论》中亦有许多有关外感热病的理论和方法，前者主要探讨感受温热病邪引起的温病，后者则主要研究感受寒邪引起的外感热病。

二者在这一点上既有共同之处，又各有所长，分而研究均不全面。

在原有学科之中，研究生在选题时，理论、实验及临床研究必然会受到学科研究领域的限制，因而对其整体学术水平和能力的培养都是不利的。

而学科合并之后，突破了这个“瓶颈”，研究生在论文的撰写过程中，将站在一个新的高度，导师也将从外感热病辨治的角度进行培养，从而使研究生实际诊治疾病的能力和科研能力均得以提高。

2 学科困境的原因探析

要想从根本上改变临床基础学科目前存在的问题，找出其关键环节至关重要。

笔者认为，当前临床基础学科不良现状的主要原因是学科性质模糊、学科定位不准、课程设置僵化。

药学毕业论文开题报告篇3 题 目 名 称： 番泻叶对小鼠尿量的影响 研究现状： 一、普鲁兰酶 普鲁兰酶(Pullulanase，. 2. 1. 41)是一种能够专一性切开支链淀粉分支点中的α糖苷键，从而剪下整个侧枝，形成直链淀粉的脱支酶。普鲁兰酶还可以分解普鲁兰多糖，普鲁兰酶来源于微生物，R-酶则来源于植物。普鲁兰酶最初是由Bender和Wallenfels于1961年通过产气气杆菌Aerobacter. aerogenes}(典型菌为肺炎克雷伯氏杆)发酵获得，他们报道了该酶良好的酶学性能。之后，各国的科研人员经过广泛深入研究，从不同的地区、微生物中获得该酶，掀起了开发普鲁兰酶的高潮。 在淀粉加工工业中，α淀粉酶最为常用，它的功能是水解淀粉的α-1,4糖苷键，单独用它时，产物中含有大量分支结构的糊精，其中就含有大量的α-1,6糖苷键。假如不把淀粉的α-1,6糖苷键彻底分解的话，势必会造成很大的浪费。自然界中，存在有能分解淀粉的α-1,6糖苷键的酶，通称为解支酶。如寡α-1,6葡萄糖苷酶( , Oligo-l,6-glucosidase )，普鲁兰酶( )，异淀粉酶( , Isoamylose )，支链淀粉一6-葡聚糖酶( )，其中普鲁兰酶要求的底物分子结构最小，故而可以将最小单位的支链分解，导致可以最大限度的利用淀粉，所以在淀粉加工工业中有着重要的用途和良好的市场前景。故而许多国家都争相开发，但是到现在为止，只有丹麦的NOVO公司具有普鲁兰酶的生产能力。我国只有向其进口，但是其价格昂贵，限制了普鲁兰酶在我国的应用。其实，我国早在七十年代就开发普鲁兰酶的产生菌，但是该菌的酶学性质不适合生产，至今我国在普鲁兰酶的国产化方面还没有报道。 在淀粉的加工行业上，对普鲁兰酶的酶学性质的要求是耐酸耐热，其原因是因为通常使用外加酶化法，由于所用酶类的限制，普鲁兰酶的添加可以在两步反应的任何一步，但必须满足上述的反应的条件。因此所开发的普鲁兰酶的酶学性质必须满足现有的酶法水解制糖的条件，也就是耐酸耐热。 二、普鲁兰酶的研究现状 1.产普鲁兰酶的微生物 普鲁兰酶最初是由Bender和Wallenfels于1961年通过产气杆菌(Aerobacter aerogenes)发酵获得。他们报道了该酶的良好性能之后，各国的科研人员经过广泛深入的研究，从不同的地区的微生物中获得该酶，掀起了开发普鲁兰酶的高潮。但是迄今为止，尽管发现许多微生物能够产普鲁兰酶，但是由于当今工业生产条件(酸性，温度)，大多数微生物所产的普鲁兰酶并无商业价值。以下便介绍一下普鲁兰酶的生产菌种。 蜡状芽抱杆菌覃状变种(Bacillus cereus ) 由日本的ToshiyukiTakasaki于1975年发现。该菌同时产生两种淀粉酶:β-淀粉酶和普鲁兰酶。最佳作用条件为pH6～，温度50℃，最大转化率(淀粉水解产生麦芽糖)大约为95%.酶学研究中发现，此酶在pH5，温度60℃依然保持大部分活性，该菌的营养细胞呈棒杆状，聚集成长短不等紊乱链状，无运动性，格兰氏阳性，产芽抱时细胞无明显膨胀。该菌最适生长温度30℃～37℃ ,最高生长温度在41℃～45℃，可以利用葡萄糖，甘露糖，麦芽糖，海藻糖，淀粉和糖原。 嗜酸性分解普鲁兰多糖芽抱杆菌() 上世纪八十年代初，丹麦Novo公司获得此菌，此菌所生产的普鲁兰酶耐热 (60℃)，耐酸()。该公司经过投入巨资开发研究，1983年Nov。公司在日本和欧洲市场同时商业化销售，商品名Prornozyme。如今，它是应用最广，产量最大的普鲁兰酶。呈棒状，深层发酵几小时后，可观察到类原生质体的膨胀细胞，较稳定，饱子呈圆柱体或椭圆体。格兰氏反应阳性，37℃生长良好，45℃以上和pI-1高于以上不长，在以普鲁兰糖为碳源的培养基(( ～)上生长良好。 枯草芽饱杆菌(Bacillus subtilis) 1986年，日本的Yushiyuki Takasaki报道了一株能产生耐热耐酸普鲁兰酶的菌种，被命名为Bacillus subtilis TU。此菌种所产生的酶为普鲁兰酶和淀粉酶的混合物，可水解淀粉为麦芽三糖和麦芽搪.水解普鲁兰糖为麦芽三糖，其中普鲁兰酶最佳作用pH为～，但在时亦有约50%的酶活，此普鲁兰酶最佳作用温度60℃。 耐热产硫梭菌(Clostridum Themosulfurogenes) 1987年.德国的等报道了一株能同时产a淀粉酶、普鲁兰酶和葡萄糖淀粉酶的菌种:耐热产硫梭菌。该菌种所产普鲁兰酶有较广的温度适应范围(40℃～85℃)，在～有较高的活性，在如此广的范围内都有较强活力无疑将扩大该普鲁兰酶的应用领域. Bacillusnaganoensis,Bacillus deramificans, 上世纪九十年代，Deweer发现了普鲁兰酶产生菌Bacillus naganoensis;Tomimura筛选出Bacillus deramifrcans。这两株菌所产的普鲁兰酶的酶学性质与Bacillus. Acidopullulyticus的酶学性质相似。这两株菌都是中度嗜酸菌，在以上就不生长，温度超过45℃以上同样也不生长。这两株普鲁兰酶产生菌的发现，进一步拓宽了普鲁兰酶的应用。 产普鲁兰酶的高温菌菌种 自上世纪八十年代以来，人们逐渐意识到在通常的自然条件下，很难筛选得到极端耐热的普鲁兰酶生产菌种，于是各国的科学家便把目光转移到温泉嗜高温细菌的筛选，而且现在已经取得较多的成果。Bacillus如vorcaldarius所产普鲁兰酶的最适温度和pH分别是75～85℃, , Thermotoga maritime的最适温度和pH分别是90℃, , Thermurs caldopHilus的最适温度和pH分别是75℃,, Fenidobacterion pernnavoran最适温度和pH分别是80～85℃, 2.普鲁兰酶的分子结构 至今为止，许多普鲁兰酶的基因己经被克隆，但是还没有见到任何有关普鲁兰酶结构的报道，但是在根据序列相似性对糖普键水解酶的分类，普鲁兰酶属于第13家族，α淀粉酶家族，这个家族中包含了30多种酶，可以分为水解酶，转移酶。异构酶三大类。这些酶能够水解和合成α～,α～,α～,α～,α～,α～糖苷键。其中很多酶的结构已经被报道，它们都采取了(β/α)8的结构，通过生物信息学的研究，这个家族的蛋白都有一个共同的结构，酶的活性中心都是(β/α)8折叠筒的结构，命名为结构域A。第13家族的大多数酶还具有结构域B，它是位于(β/α)8折叠筒中，第三个β片层与第三个α螺旋之间的一段序列，其特点是结构和长度差异较大，推测其功能是与底物的结合有关。在紧接着(β/α)8折叠筒后，还有C结构域，紧接C结构域，部分家族成员还有结构域D。 3.普鲁兰酶的应用 普鲁兰酶，在食品工业中是一种用途广泛的酶制剂和加工助剂。它能专一性分解淀粉中的支链淀粉和糖原分子及其衍生的低聚糖分支中的α～l, 6糖苷键，使分支结构断裂，形成长短不一的直链淀粉。因此，将该酶与 其它 淀粉酶配合使用时，可使淀粉糖化完全。近年来，普鲁兰酶己作为淀粉酶类中的一个新酶种，应用于淀粉为原料的食品等工业部门，在食品工业中有如下几方面的作用: 单独使用普鲁兰酶，使支链淀粉变为直链淀粉 直链淀粉具有凝结成块，易形成结构稳定的凝胶的特性，因此，可作为强韧的食品包装薄膜。这种薄膜对氧和油脂有良好的隔绝性，又因涂布开展性好，故适合于作为食品的保护层。它还适合于淀粉软糖制造，也可用作果酱增稠剂，用于装油脂含量高的食品，以防止油的渗出以及肉食品加工。近年来在食品工业中提倡使用可被生物降解的薄膜，直链淀粉在这些方面具有较大的发展前途。豆类直链淀粉含量较高，因此绿豆淀粉制成的粉丝韧性比其它淀粉好，如果用普鲁兰酶处理谷物淀粉，再制成直链淀粉后，可以制成高质量的粉丝。一般谷物淀粉中，直链淀粉含量仅占20%，支链淀粉含量约为80%。工业上每生产1吨直链淀粉就有4吨副产品的支链淀粉。美国虽然通过遗传育种的方法.得到含直链淀粉60%玉米新品种，但不大适于大量生产。国外已采用普鲁兰酶改变淀粉结构，可使支链淀粉变为直链淀粉。据报道，采用此法收率可达100%.制造直链淀粉的方法为，先采用普鲁兰酶分解经液化的分支部分，使其转变为直链淀粉，并以丁醇或缓慢冷却法沉淀淀粉。再回收含少量水分的晶型沉淀物，最后通过低温喷雾干燥法制成粉状的直链淀粉。 普鲁兰酶与β～淀粉酶配合使用生产麦芽搪 饴糖是我国传统的淀粉糖产品，其中所含部分麦芽糖，广泛用于糖果、糕点等食品工业。目前生产方法是以α～淀粉酶进行液化，再用β～淀粉酶水解支链淀粉，这样只能水解侧链部分。接近交叉地位的α～糖苷键时，水解反应停止。但如果使用普鲁兰酶共同水解，便能使分支断裂，提高淀粉酶水解程度，降低了β极限糊精的含量，大大提高了麦芽糖的产率，有利于生产麦芽搪浆。目前对加普鲁兰酶进行糖化己作了较大规模的试验。 试验条件为。每批投料量约为900公斤碎米，粉浆浓度为15～16Be°数皮用量(对碎米计)，β～淀粉酶活性2,000单位/克以上，;普鲁兰酶活性45,000～55,0 00单位/克，系由产气气杆菌生产，每批用量为1公斤。试验结果表明，加入普鲁兰酶糖化的试验糖与对照糖品相比，还原糖平均增加，麦芽糖含量平均增加了，糊精含量平均减少了高浓度麦芽糖浆较之高浓度葡萄搪浆，具有不易结晶，吸湿性小的特点，所以高浓度麦芽糖浆在食品工业中有着广泛的用途。采用普鲁兰酶与p一淀粉酶配合使用，成本低廉，麦芽糖收率达到70%左右，其至更高。 用于啤酒外加酶法糖化 啤酒生产中麦芽，既是酿造啤酒的主要原料，也为酿造过程提供了丰富的酶源。在啤酒酿造的糖化过程中，麦芽中分解淀粉的主要酶是α～淀粉酶、β～淀粉酶和分解淀粉α～1. 6糖瞥键的R一酶(植物普鲁兰酶或植物茁霉多糖酶)。β～淀粉酶与另两种淀粉酶协同作用，可使淀粉分解成麦芽糖(也包括少量的麦芽三糖和极少量的葡萄糖)和低分子糊精。使麦芽汁有比较理想的糖类组成。在工业生产中为了节约麦芽用量，采用所谓外加酶法糖化，即在减少麦芽用量的前提下，增加淀粉质辅助原料的比率，并加入适当种类的酶制剂进行搪化。要使大麦及其它辅助原料糖化完全，需要外加a一淀粉酶和分解α～糖苷键的普鲁兰酶制剂等。单独使用a一淀粉酶时产生麦芽糖和麦芽三搪是很不完全的。假如分解淀粉α～糖苷键的酶活性不足，淀粉分解就不完全，其结果是可发酵性糖含量低，制成的啤酒发酵度达不到要求。若采用能分解α～和α～糖苷键的糖化型淀粉酶，则其反应产物为葡萄糖，容易使酒味淡薄。采用普鲁兰酶与α～淀粉酶协同，效果良好，其分解产物主要是麦芽糖和少量的麦芽多糖。采用外加酶法糖化时，加入酶制剂的用量为:淀粉酶6～7单位/克大麦及大米:蛋白酶，60-80单位/克，并配合以菠萝蛋白酶10ppm，普鲁兰酶50单位/克大麦。以上三种酶制剂均添加于糖化或酒化开始。 总之，普鲁兰酶无论作为酶制剂和食品工业的加工助剂均有广阔的发展前途。 研究目的和意义： 酶制剂工业是上世纪七十年代就己经形成的一个重要的产业，目前世界酶制剂总产值达100亿美元，我国的产值约为100亿人民币，并且随着其应用领域的不断扩大以及新酶种的开发，这一市场正在迅猛发展。但是全球酶制剂产业几乎被几家外国公司所垄断，其中丹麦的NOVO公司几乎占全球总销售额的一半。本研究对普鲁兰酶的开发，对酶制剂产业的发展有重要的意义。 其次我国自从七十年代开始便对普鲁兰酶进行研究开发，但是所开发得到的普鲁兰酶，既不耐热也不耐酸，这就使其在工业化应用中受到了局限。为了改变我国对进口产品的依赖，填补我国这一领域的空白，寻找一条国产化的道路，本研究的目的是利用自然微生物资源，普鲁兰酶，提高我国淀粉原料的利用率，从而提高整个淀粉加工行业的生产率，这对我国淀粉加工产业的意义是不言而喻的。 研究内容(内容、结构框架以及重点、难点)： 一.普鲁兰酶产生菌的筛选 (1)样品的采集; (2)菌种初筛; (3)菌种复筛; (4)菌种保藏方法; (5)酶活力测定方法的建立。 二.产普鲁兰酶菌株的产酶条件的研究 (1)碳源，氮源对发酵产酶的影响; (2)初始PH对发酵产酶的影响; (3)接种量对发酵产酶的影响; (4)发酵温度对产酶的影响; (5)金属离子对产酶的影响。 重点或关键技术： (1)纯菌株的分离; (2)菌株的鉴定方法的选择。 研究方法、手段： 一.普鲁兰酶产生菌的筛选 (1)样品的采集：选择适合产生的地点(面粉厂.菜地.果园等)采集土样 (2)菌种初筛：在采集的土样用无菌水稀释后，在含有淀粉类的培养基中做平板涂步， 37℃培养48h后，用碘液进行显色反应，将有淀粉酶产生的菌落接于斜面中保存。 (3)菌种复筛：将前期分离的能产生淀粉酶的菌株涂步于普鲁兰糖平板上，37℃培养48h后用95%乙醇进行透明圈实验。有透明圈产生说明菌株产生普鲁兰酶，将产生透明圈的菌落挑于斜面培养基培养。 (4)菌种保藏方法： 采用4℃低温保藏。 (5)酶活力测定方法的建立：采用发酵培养液经过离心后利用DNS显色法 520nm测定吸光值，测定标准葡萄糖标准曲线，利用标准曲线计算普鲁兰酶酶活大小。 二.产普鲁兰酶菌株的产酶条件的研究 (1)碳源，氮源对发酵产酶的影响：采用不同碳源，氮源培养基培养一段时间，测定酶活力。(其他条件相同：接种量，装瓶量，初始PH值，转速，培养时间。) (2)初始PH对发酵产酶的影响：采用相同发酵培养基，在不同初始PH下接种等量种子液。在相同条件下培养，测定发酵液的酶活。(其他条件相同：接种量，装瓶量，转速，最佳培养温度，最佳培养时间。) (3)接种量对发酵产酶的影响：在发酵培养基中分别接入2%，4%，6%，8%， 10%，14%，18%的种子培养液于最佳碳源，氮源，最佳初始PH的培养基中，在相同条件下培养，分别检测酶活。(采用以上确定的最佳碳源，氮源，最佳初始PH。) (4)发酵温度对产酶的影响：采用相同培养基，在不同温度下(25℃，30℃，35℃，40℃，45℃)培养一定时间，测定酶活力。 (5)金属离子对产酶的影响：在基础培养基中加入少量不同金属离子，发酵后测酶活。(金属离子有： 锰离子，钙离子，锌离子，镁离子，铁离子，铜离子。) 研究进度 ：完成项目总体进度30%，样品土样的采集及前期的准备工作,菌株的初筛，包括(样品土样原液的涂步培养及摇床培养，产支链淀粉酶菌株的挑选及斜面培养)。 ：完成项目总体进度50%,菌株的复筛，包括(产普鲁兰酶菌株的筛选及斜面培养),葡萄糖标准曲线的测定,酶活测定方法的建立,并以酶活大小对菌株进行再次筛选。 ：完成项目总体进度80%,产酶条件的研究。包括：碳源，氮源，初始PH值，接种量，发酵温度，金属离子。并通过各中单因素试验确定发酵培养基的最佳碳源，氮源，初始PH值，接种量，发酵温度，金属离子。 2009、4—2009、5 ：完成项目总体进度100%,课题总结，撰写论文。 文献综述(包括：国内外研究理论、研究方法、进展情况、存在问题、参考依据等) 自从1961年Bender H.等人在研究一株产气气杆菌Aerobacter aerogenes(典型菌为肺炎克雷伯氏杆菌)时首次发现普鲁兰酶后，国际上对产生这种酶的微生物进行了广泛研究，发现许多微生物可以产生此酶，并筛选出一些适用于工业化生产的优良菌株。随着该酶的应用发展，对耐热性普鲁兰酶的研究也逐渐增多，已成功克隆并表达了该酶的基因。国内1976年开始对一株产气气杆菌(Aerobacteraerogenes 10016)的普鲁兰酶进行研究，对该菌株的产酶条件、酶的分离提取及酶学性质作了报道，并研究了该酶的食品级提取技术。此外，陈朝银、刘涛等人从云南温泉水样中筛选到一株产普鲁兰酶高温栖热菌菌株，通过诱导等实验将该酶的酶活从提高到170u/mL，酶产量提高了近2500倍左右，酶的最适作用温度及pH分别是75℃和，具有一定的耐热和耐酸特性。 陈金全等从温泉水样中筛选到一株产耐热耐酸普鲁兰酶的野生菌株，并根据形态、生理生化特征、细胞化学组分分析及16SrDNA序列比对、基因组DNA的G+C摩尔百分含量、同源性比对等实验，鉴定其为脂环酸芽抱杆菌属(Alicyclobacillus)的一个新种，所产酶最适作用温度为60℃，最适pH值，具有较好的耐热耐酸特性。杨云娟等利用毕赤酵母成功构建了普鲁兰酶表达量较高的基因工程菌，摇瓶发酵酶活可达，最佳发酵条件下产量可达 .酶的最适作用温度为600C，最适pH值，具有较好的耐热耐酸性。目前我国仍没有具备独立生产普鲁兰酶能力的厂商，要实现低成本、国产化的生产，还有很长的路要走。 技术应用于耐热脱支酶的研究，使耐热异淀粉酶的研究有了很大发展。Coleman等人将嗜热厌氧菌T. brockii普鲁兰酶基因克隆到中得到的克隆子分泌的普鲁兰酶数量高于出发菌株，Okada等人将Bacillus Steanther, onhiu:中编码热稳定异淀粉酶的基因克隆到:中，得到的转化菌株其异淀粉酶能在60 ℃稳定15分钟。Burchadf将。ostridium thermosulf urogenes DSM38%的嗜热异淀粉酶基因克隆并在中表达，所得酶的最适pH和最适温度与出发菌相同，而且在高温下仍能保持活性.Antranikiam等人将Pyrococcus舟riousous的异淀粉酶基因克隆到中并分离得到了酶蛋白。尽管如此，目前尚未有已将转基因的耐热性异淀粉酶工程菌应用到工业生产中的报道。众所周知，利用物理和化学诱变剂单独或复合处理微生物细胞是选育高产变种菌株行之有效的经典方法，它在为培育多种抗生素、氨基酸、核苷酸激酶(尤其是蛋白酶和淀粉酶)的高产变种菌株方面曾经起过极为重要的作用，至今仍然是方便易行和行之有效的方法之一。 主要参考文献： [1][美]惠斯特勒等编王雏文等译.淀粉的化学与工艺学[M].北京：中国食品出版社，1988 [2]张树政.酶制剂工业[M]. 北京: 科学出版社，1998 [3]邬显章.酶的工业生产技术[M]. 吉林: 吉林科学技术出版社，1988 [4]Taniguchi H, Sakano Y, Ohnishi M, Okada G(1985) Pullulanase[J].TanpakushitsuKakusan Koso. 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毕业论文，泛指专科毕业论文、本科毕业论文（学士学位毕业论文）、硕士研究生毕业论文（硕士学位论文）、博士研究生毕业论文（博士学位论文）等，即需要在学业完成前写作并提交的论文，是教学或科研活动的重要组成部分之一。其主要目的是培养学生综合运用所学知识和技能，理论联系实际，独立分析，解决实际问题的能力，使学生得到从事本专业工作和进行相关的基本训练。其主要目的是培养学生综合运用所学知识和技能，理论联系实际，独立分析，解决实际问题的能力，使学生得到从事本专业工作和进行相关的基本训练。毕业论文应反映出作者能够准确地掌握所学的专业基础知识，基本学会综合运用所学知识进行科学研究的方法，对所研究的题目有一定的心得体会，论文题目的范围不宜过宽，一般选择本学科某一重要问题的一个侧面。