草莓的组织培养主要是茎尖培养,由一个茎尖培养成为一个完整的草莓植株,需要进行如下程序:
(1)配制培养基 培养基是向培养植物提供养分的基质,由植物生长所必须的大量元素、微量元素、有机物质、蔗糖、琼脂等物质组成,称为基本培养基。 为了调节培养物的生长和分化,还需要附加不同的植物生长调节剂,如萘乙酸、吲哚丁酸、6-苄基嘌呤、2,4-D等。将各种物质配制好,装入三角瓶或试管中,高压消毒后备用。
(2)外植体的处理和接种 选择强壮的草莓匍匐茎顶芽,采下后带到室内,除去外叶,用流水冲洗~1小时,用75%的酒精灭菌5分钟,用无菌水冲洗3~5次,再用升汞浸泡3~5分钟,最后用无菌水冲洗5~6次。将消毒后的顶芽,在超净工作台上切取~毫米匍匐茎茎尖(所取茎尖越小,脱毒效果越好,但成活率也越低。各地经验证明,以带一个叶原基的生长点,长度为~厘米为宜,成活率较高,脱毒效果也较好),接种到装有配制好的新鲜培养基的三角瓶内。草莓茎尖培养所用分化培养基,以MS作基本培养基,附加一定浓度的BA和NAA,以诱导茎尖组织的分裂和生长。接种后将三角瓶放在培养室的培养架上,室内温度一般保持在23~25℃,用光强为2000勒克斯的日光灯照射,光照时间为16小时。在这样的条件下培养30天以上,即可分化长出~2厘米高的无根小苗(芽丛)。
(3)继代培养 为了扩大繁殖系数,将培养出的无根小苗(芽丛)进行分离,转换新鲜培养基(培养基成分与分化培养基相同),分别放入5~10瓶培养基中进行扩大繁殖,经过20天左右,每个瓶中又可长满无根小苗。经过多次继代培养,使增殖的数量达到一定的要求后,即可将无根小苗转入生根培养基上,使其生根,形成完整植株。
(4)生根培养 将生长健壮,苗高~3厘米的无根苗移到生根培养基上进行培养,诱导生根。生根培养基与增殖培养基的不同之处是降低了细胞分裂素类激素的浓度,加入了有利于生根的激素,如吲哚丁酸(IBA)等。一般无根苗在生根培养基中培养2~4周后便可生根。当生根幼苗长到3~4厘米时即可进行驯化移栽。
(5)驯化移栽 打开生根小苗瓶口,在温室内放置2~3天,取出后洗净根部的培养基,移栽到2/3腐殖土加1/3河沙的炼苗基质上,温度保持在15~25℃,相对湿度85%~90%,并适当遮荫。后期逐渐通风,增加光照,2~3周后即锻炼培养成组培苗,一般不带病毒,可移栽到田间,进入育苗圃培育。据试验,经上述方法炼苗,成活率可达90%以上,且无缓苗期,秧苗生长旺盛。