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近日，中国学者熟知的PLOSONE和PLOSBiology在投稿指南里指出，7月1日起，要求所有作者提供WB相关的原始数据，并存放在可用的数据库中，提供可查询的信息。在《JBC》的作者投稿要求中也需要提供原始数据作为评审…
转膜篇1.转一张膜需准备6张7.0～8.3cm的滤纸和1张7.3～8.6cm的硝酸纤维素膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。将切好的硝酸纤维素膜置于水上浸2h才可使用。要领：（1）用镊子捏住膜的一边轻轻置于有超纯水的平皿里，要使膜浮于水上，只有下层才与水接触。
这是小生觉得上看到的最值得读的文章，很佩服作者的精神，故转过来以鼓励自己。分子生物学实验，寂寞又辛酸，你们懂的！~1.抗体的选择对于国内的大多数实验室来讲，做westernblot实验选择抗体是个头疼的...
分析测试百科最近要做westernblotting磷酸化蛋白和未磷酸化蛋白，因为样本珍贵，想要跟大家交流一下同一张膜如何重复使用的问题。我也看了一些战友的帖子，多使用膜剥脱液，如下：62.5mMTris-Hcl,PH6.72%SDS7ml巯基乙醇总体积100ml...
这时通过左侧工具栏，点击裁剪图标，然后选择合适大小区域进行裁剪，点击Enter键确认后，点击[文件]-[另存为]，将做好的WB图存储为图片格式，一般选择TIFF位图格式进行存储，图像质量更高。.下面就是做好的WB图片，两张膜边缘对齐，图片看起来也更漂亮...
一般来说，体积大一点效果会好一些。因为一抗、二抗一般都是过量的，我们实验室的一抗都是反复使用的。你好我们是在杂交袋里边儿孵育的我的膜有3cm×9cm吧我们实验室其他博士建议我用8ml说1.5ml都太少了想听下您的建议
2化学发光底物化学发光底物最常用的是鲁米诺（Luminol），化学发光法由于仅在酶和底物都存在的时候才会发光，不同于生色反应，所以特别适合在同一张膜上对不同的目标蛋白分别进行多次检测。目前最高检测灵敏度已经达到低飞克（Femto）级别，成为安全且灵敏度最高的WB检测方法。
一般的marker分子量范围在10-130kDa之间，都可以满足正常蛋白的需要。但有些分子量范围较广的marker，比如说6-250kDa，虽然说它范围很广，可中间的蛋白分子量并没有区分的很细，只适用于大分子或小分子蛋白，而对于30-70kDa的蛋白并不是很适用。
方法1：如果你的蛋白很多，多跑几板胶，整张膜只上一个抗体，而且坚持用同一产品Marker同一浓度的分离胶,多做几次就能确定目的蛋白相对与marker的位置。.方法2：如果蛋白样不多时，整张膜先上一个最重要的抗体；发光后用stripbuffer洗，然后再上第二种抗体...
熟悉流程后进一步实验，依旧面临了不少问题：比如最近，我们要在同一张膜上研究多个蛋白的表达，用什么实验方法就把我难住了。.第一时间想的是裁膜，但师兄提醒：现在越来越多的期刊要求提供未剪切的Blot图。.Stripping&Reprobing？.师兄说：这种办法因...
近日，中国学者熟知的PLOSONE和PLOSBiology在投稿指南里指出，7月1日起，要求所有作者提供WB相关的原始数据，并存放在可用的数据库中，提供可查询的信息。在《JBC》的作者投稿要求中也需要提供原始数据作为评审…
转膜篇1.转一张膜需准备6张7.0～8.3cm的滤纸和1张7.3～8.6cm的硝酸纤维素膜。切滤纸和膜时一定要戴手套，因为手上的蛋白会污染膜。将切好的硝酸纤维素膜置于水上浸2h才可使用。要领：（1）用镊子捏住膜的一边轻轻置于有超纯水的平皿里，要使膜浮于水上，只有下层才与水接触。
这是小生觉得上看到的最值得读的文章，很佩服作者的精神，故转过来以鼓励自己。分子生物学实验，寂寞又辛酸，你们懂的！~1.抗体的选择对于国内的大多数实验室来讲，做westernblot实验选择抗体是个头疼的...
分析测试百科最近要做westernblotting磷酸化蛋白和未磷酸化蛋白，因为样本珍贵，想要跟大家交流一下同一张膜如何重复使用的问题。我也看了一些战友的帖子，多使用膜剥脱液，如下：62.5mMTris-Hcl,PH6.72%SDS7ml巯基乙醇总体积100ml...
这时通过左侧工具栏，点击裁剪图标，然后选择合适大小区域进行裁剪，点击Enter键确认后，点击[文件]-[另存为]，将做好的WB图存储为图片格式，一般选择TIFF位图格式进行存储，图像质量更高。.下面就是做好的WB图片，两张膜边缘对齐，图片看起来也更漂亮...
一般来说，体积大一点效果会好一些。因为一抗、二抗一般都是过量的，我们实验室的一抗都是反复使用的。你好我们是在杂交袋里边儿孵育的我的膜有3cm×9cm吧我们实验室其他博士建议我用8ml说1.5ml都太少了想听下您的建议
2化学发光底物化学发光底物最常用的是鲁米诺（Luminol），化学发光法由于仅在酶和底物都存在的时候才会发光，不同于生色反应，所以特别适合在同一张膜上对不同的目标蛋白分别进行多次检测。目前最高检测灵敏度已经达到低飞克（Femto）级别，成为安全且灵敏度最高的WB检测方法。
一般的marker分子量范围在10-130kDa之间，都可以满足正常蛋白的需要。但有些分子量范围较广的marker，比如说6-250kDa，虽然说它范围很广，可中间的蛋白分子量并没有区分的很细，只适用于大分子或小分子蛋白，而对于30-70kDa的蛋白并不是很适用。
方法1：如果你的蛋白很多，多跑几板胶，整张膜只上一个抗体，而且坚持用同一产品Marker同一浓度的分离胶,多做几次就能确定目的蛋白相对与marker的位置。.方法2：如果蛋白样不多时，整张膜先上一个最重要的抗体；发光后用stripbuffer洗，然后再上第二种抗体...
熟悉流程后进一步实验，依旧面临了不少问题：比如最近，我们要在同一张膜上研究多个蛋白的表达，用什么实验方法就把我难住了。.第一时间想的是裁膜，但师兄提醒：现在越来越多的期刊要求提供未剪切的Blot图。.Stripping&Reprobing？.师兄说：这种办法因...
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