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我国旅游电子商务问题及对策分析[2010-02-28 05:39] 摘要:从我国旅游电子商务的发展现状入手,分析目前存在的问题,并针对存在的问题提出了相应的发展对策。 关键词:旅游电子商务;现状;问题;对策 1旅游电子商务的概念及特点 旅游电子商务是指旅游企业应用电脑和现代通讯技术,通过互联网调整企业同消费者、企业同企业以及企业内部之间的关系,从而扩大销售,拓展市场,并实现内部电子化管理的全部商业经营过程。它具有以互联网为依托,消费者直接参与,信息源庞大,支付手段方便快捷等特点。 2我国旅游电子商务的发展现状 我国旅游电子商务网站从1996年开始出现,目前具有一定旅游资讯能力的网站已有5000多家。其中专业旅游网站300余家,主要包括地区性网站、专业网站和门户网站的旅游频道三大类。地区性网站主要是当地景点、景区风光的介绍,总体实力较差,信息量少,效益难以保证。专业旅游网站主要进行旅游中介业务,包括传统旅行社建立的网站和专业电子商务网站两类。前者有中青旅网、国旅网等,康辉还开通了国内第一家出境旅游网站(介绍出境旅游报名参团、办理护照、签证、边防、海关等知识)。 2002年,我国国家旅游信息化工程——金旅工程以建设“旅游目的地营销系统”作为电子商务部分的发展重点,旨在将其建成信息时代中国旅游目的地进行国内外宣传、促销和服务的重要手段。经过努力,全国“旅游目的地营销系统”的中心平台建设已初具规模,广东、香港、澳门、大连、三亚、珠海、南海、深圳、厦门、苏州等十余个区域城市的“旅游目的地营销系统”也已投入运营或正在建设之中,在旅游宣传促销方面发挥了重要作用。在此基础上国家旅游局预计用两年左右的时间,逐步完成138个优秀旅游城市的系统建设,并逐步辐射到其他城市。 可见,我国旅游电子商务已形成了各类旅游企业(包括目的地旅游服务企业、旅游中间商)网站和旅游目的地营销机构(DMO)网站、全球分销系统(GDS)和计算机预订系统(CRS)、专业旅游网站及旅游电子商务平台功能互补、相互竞争、共同发展的多元化格局。 3我国旅游电子商务存在的问题 交易安全性较低,缺乏信用保障 交易的安全性仍然是影响旅游电子商务发展的主要因素。在开放的网络上处理交易,如何保证传输数据的安全成为旅游电子商务能否普及的最重要的因素之一。调查公司曾对旅游电子商务的应用前景进行过在线调查,当问到为什么不愿意在线购物时,绝大多数的人的答案是担心遭到黑客的侵袭而导致信用卡信息丢失。因此,交易安全成为旅游电子商务发展中最大的障碍。此外,我国目前还没有建立完善的信用制度,使得电子支付成为网上交易的瓶颈问题。 旅游网站内容简单不完整,缺乏个性服务 国内旅游网站与国外旅游网站相比普遍存在内容陈旧、没有明显的旅游标志、景点介绍单调、缺乏图片和动态演示等内容上的问题。旅游信息管理系统也不完善,存在地域不完整、内容不完整等问题。旅游网站的主要访问者是商务旅行者,而商务旅行和私人旅行这两类旅游在对交通工具、住宿餐饮、旅途活动等方面的需求都不尽相同,在旅行时间方面更是差异很大。目前国内的大部分网站所提供的服务内容都是针对私人旅游的,如机票、饭店的预定服务,由于服务方式和价格体系相似,缺乏个性化的服务,所以对客户的吸引力不大,旅游网站的利润也非常有限。 经营模式雷同 旅游网站主营的电子商务业务有机票、酒店、旅行团预订三大项,每个旅游网站都有。当网站把自己看成旅行社的时候,发现所提供的这些服务跟传统旅行社、酒店预订中心、机票销售公司相比没有太大的优势可言,因此,旅游网站必须提供一种更好的服务、更好的产品,或者寻求新的立足点与发展契机,或使销售额迅速地扩大,才有可能赢利,在没有明确的更佳的发展模式时,网站就迷失了方向。 网站市场细分不明确 市场细分不明确是目前国内旅游网站中普遍存在的一个问题。通过观察我们可以发现,大多数旅游网站所发布的信息和旅游产品“老少皆宜”。网络访问者多种多样,不同访问者的兴趣爱好、文化背景、经济能力、职业和年龄不一样,因此访问者的旅游需求也就有所不同。如果不顾不同层次的需求有针对性地进行市场细分,很难引起访问者的旅游欲望,旅游网站的供给与消费者的个性化需求便难以实现有效对接。4我国旅游电子商务发展对策 建立支付平台,实现电子支付 国外电子商务发展迅速,与网络和信用卡的普及密不可分。网上交易必须通过信用卡或银行账户来完成,并且直接使用信用卡完成交易是网上支付手段的发展方向。在中国,如果不普及信用卡,电子支付方式不被社会广泛接受,那么电子商务的发展将面临重重障碍。因此,各大银行应抢占先机,尽快介入旅游电子商务,为旅游企业网络营销提供信用担保。企业也应当积极参与合作,借鉴和学习发达国家的成功经验,使电子支付变得更安全、快捷。 加强网站建设和管理 网站好比虚拟的“橱窗”,网站的内容就是“橱窗”上的商品。因此,网站提供的信息必须丰富多彩,及时更新,才能够吸引顾客。其次,网页设计要有特色,还要定期更新,不能一成不变。例如,“青旅在线”在建成的一年多时间里,页面曾多次更新,每一次都增加许多新的内容和板块,给人耳目一新的感觉。除了及时更新信息,旅游网站还应建立在线旅游咨询和信息服务体系,根据客户的出游意向、个人兴趣、支付能力和时间等要求,及时生成不同的方案供客户选择。对客户提出的问题予以及时解答,充分体现人性化和情感化。 建立赢利新模式 结合自身条件走符合自己的发展模式。针对不同规模不同特点的旅游网站,应有不同的选择。大型旅游网站由于规模大、知名度高、有庞大的用户群,这使网站介入电子商务比较方便,可立足旅游信息收集处理,向虚拟旅游交易市场转型,成为网上旅游中介商。小型旅游网站可凭特色服务吸引特定的用户群,或立足地方旅游信息资源的开发利用,成为地方性的旅游中介商,成为大型旅游网站的分站点、合作伙伴等,以便为消费者提供更周到的商务。 向个性化的方向发展 旅游电子商务网站应像传统市场营销一样,做好旅游市场(旅游中间商和旅游者)调查,进行市场细分和目标市场选择。在这方面一些网站有成功策划与营运的先例,如“梦幻之旅”、“网络之旅度令营”、“南方快车驶进大西北”等特色旅游深受游客欢迎;潜力巨大的自助游,以自定行程、自助价格、网络导航、网际服务特征,适应了人们个性化的要求。“白领畅想游”、“合家欢乐游”、“新婚度假游”等潜在市场也很大。 参考文献 [1]�魏敏.我国旅游电子商务的现状及发展态势[J].宁波广播电视大学学报,2006,(09). [2]�卢永忠.我国旅游电子商务存在的问题与对策[J].全国商情(经济理论研究),2007,(10). [3]�黄琴,黄瑛.中国旅游网站发展中的问题及其对策研究[J].经济与社会发展,2006,(07). [4]�陈信祥,孙江宁,汪旭,等.电子商务网站建设[M].北京:清华大学出版社,2000. [5]�罗霞李,卫宁.我国旅游电子商务浅论[J].民族论坛,2008,(01). [6]�张建,王克起.试析旅游咨询中心[J].旅游科学,2000,(02). [7]�陈薇.试论中国旅游电子商务发展现状和对策[J].常德师范学院学报,2003,(2).
其实是复旦附中的一老头。。曹JS高级教师 上海最顶尖的物理教师 竞赛获奖情况全市第二都退休10年了 他的徒弟王贱现在在复旦附中教书。。。 现在曹JS周末在同欣学校上大课 东光明也带课的
是 曹云天么?可能是这个人吧
厦门市儿童医院依托复旦大学附属儿科医院优势资源，从4个层面构筑人才培养体系，促进医教研全面发展：启动黄国英名医工作室、周文浩名医工作室和郑珊名医工作室，传承复旦大学附属儿科医院名医名科血脉；聘请曹云、黄瑛、董岿然三位教授担任特聘主任，带动学科发展；聘请24位学术主任，每月从上海来厦坐诊、手术；建立专科医师导师制，医院选拔68名研究生、本科生到上海总部接受3年住院医师规范化培训，从“黄埔军校”学成归厦后，仍长期接受总部专家导师的指导，逐渐成长为医院的业务骨干和支柱力量。此外，医院还先后派出245人去上海总院进修，学习先进的技术、理念和管理方法。
一名出生仅仅5天的新生儿，即因受益于胎儿结构畸形诊治平台而获得救治。该名男患儿萌萌（化名）还在妈妈肚子里的时候，就被诊断得了巨大骶尾部肿瘤，这无疑给萌萌的爸爸妈妈增添了沉重的心理压力。
“孩子的病到底能不能治好？”，“肿瘤是恶性的还是良性的？”，“会不会留有后遗症？”等等一系列困惑涌向萌萌父母的心头。然而面对弱小的新生命，强大亲情战胜了恐惧心理，坚强的父母并没有选择终止妊娠，决定将萌萌生下并做进一步治疗。
胎儿结构畸形诊治平台助力
患瘤新生儿获多学科团队保驾护航
“一部分骶尾部畸胎瘤胎儿肿瘤实质成分多及增生血管丰富，孕期可发生盗血现象，导致胎儿水肿与心功能衰竭，同时也会对母亲产生不良影响，因此在孕期需要通过多学科合作对母亲和胎儿进行密切规范监测，尽早发现与处理孕期出现的一切异常情况，避免不良预后的发生。”国家儿童医学中心出生缺陷临床中心主任、复旦大学附属儿科医院外科主任郑珊教授介绍说。
早在2006年，在郑珊教授的倡导下，由复旦大学附属儿科医院与复旦大学附属妇产科医院等上海多家产院合作建立包括新生儿外科，产科，新生儿科等多学科的胎儿结构畸形围产期管理与诊治平台，先后救治了长段缺失型食管闭锁，重症膈疝，巨大骶尾部畸胎瘤，胎粪性腹膜炎、肠闭锁、各种严重直肠肛门畸形，先天性巨结肠等多种消化道及腹裂、脐膨出等腹部严重结构畸形，并获良好疗效，大大提高了先天结构畸形患儿的生存率与预后。
此次，该多学科合作平台再次发挥优势。萌萌父母选择在复旦大学附属妇产科医院分娩，该院为其制定了精准个体化的围产期监测与孕期不仅随访胎儿肿瘤大小变化，也同时随访胎儿心功能、胎儿水肿等情况，一旦出现孕期肿瘤相关并发问题，可及时相关处理。萌萌出生后即被转入复旦大学附属儿科医院。新生儿重症监护室团队在曹云主任和张蓉副主任的组织下立即组成专门诊疗团队，紧张而有序的对萌萌进行生后全面性评估，据张蓉副主任介绍，萌萌的肿瘤巨大且位于骶尾部，容易产生皮肤压疮导致肿瘤破溃，同时肿瘤靠近肛门口，极易引发感染。护理团队通过采取俯卧位和侧卧位体位交替方式及利用造瘘袋隔离收集粪便的方法，保证了肿瘤表面及周围皮肤完整与清洁，为萌萌手术的顺利实施创造了最佳条件。
“肿瘤表面皮肤可见异常迂曲的血管，同时肿瘤质地偏硬，需要考虑肿瘤以实质性成分为主且血供丰富。”诊治新生儿骶尾部畸胎瘤经验丰富的新生儿外科沈淳主任，结合检查判断萌萌的肿瘤更为复杂。“肿瘤周围被密集的异常增生血管所包绕，这给手术带来了巨大风险，稍有疏忽就会造成术中大量失血，直接威胁生命。” 放射科龚英副主任医师解释道。
高精准选择性血管阻断微创手术
1小时完整切除600克肿瘤
术前的评估结果无疑对手术的精准性提出了更高的要求。外科团队在儿科医院党委副书记董岿然教授及外科主任郑珊教授的带领下制定周密的手术计划。通过多次多学科讨论，反复模拟推演，决定采用腹腔镜微创技术，经腹部及骶尾部联合手术切除萌萌的巨大肿瘤。
与传统的单一经骶尾部肿瘤切除手术相比，联合腹部手术有助于肿瘤腹盆腔部分的游离，同时对于血供丰富肿瘤可选择先于肿瘤切除前经腹离断肿瘤滋养血管，最大程度上降低肿瘤切除时的出血风险。但由于传统经腹手术为开放手术，手术创伤大，同时对于肿瘤的部分供血血管无法达到精准性阻断，限制了该类手术在新生儿患儿中的应用。
“考虑到萌萌的肿瘤血供丰富，如果经腹先行阻断肿瘤供血血管，将极大限度降低手术失血对萌萌生命的威胁。”董岿然教授介绍说，“我们利用腹腔镜微创技术在降低手术创伤同时，可以精准实施肿瘤滋养血管的高选择性阻断手术。”
2020年9月30日，该名男婴出生的第5天，在麻醉科通力配合下，由新生儿外科沈淳主任与朱海涛副主任医师为萌萌实施了骶尾部肿瘤手术。“手术完全按照术前计划顺利实施。”沈淳主任介绍，“我们克服了新生儿腹腔空间小，手术视野受限等困难，通过腹腔镜手术对肿瘤的主要滋养血管包括骶中动脉与右侧髂内动脉分支实施了精确阻断，同时避免损伤直肠，输尿管等盆腔脏器，也保障了下肢和盆会阴正常血供不受影响。”由于先行阻断了肿瘤的主要供血血管，大大降低了肿瘤切除时的出血风险，使得肿瘤切除过程快速而顺利，不超过1小时重量达600g的肿瘤即被完整切除。整个手术进展顺利，术中没有大的出血，手术过程生命体征平稳。
目前，萌萌已度过术后危险期，病情稳定，不久即可出院。
新生儿骶尾部畸胎瘤并不可怕
新生儿骶尾部畸胎瘤是新生儿期最常见的实体肿瘤之一，随着产前筛查技术的发展，骶尾部畸胎瘤的产前诊断率可达90%以上。“骶尾部畸胎瘤的病理性质有良恶性之分，但是庆幸的是绝大多数的新生儿骶尾部畸胎瘤为良性肿瘤，对于产前诊断为骶尾部肿瘤的患儿不应盲目进行引产”，沈淳主任介绍道，“患有畸胎瘤患儿如果能在包括产科，新生儿科及小儿外科等多学科团队的密切监测下，并在生后及时得到规范手术治疗并完整切除肿瘤，绝大多数的宝宝能够在生后经治疗达到痊愈。” “当然，骶尾部畸胎瘤约有10%左右的复发率，因此建议对巨大或未成熟性骶尾部畸胎瘤患儿术后至少定期随访3-5年以上”沈淳主任进一步介绍道，“隐匿性骶尾部畸胎瘤因肿瘤对盆底、直肠、膀胱有压迫，术后可能影响排尿排便功能，因此术后长期规范的排尿排便功能评估及早期干预康复可实现良好预后。”
萌萌成为了胎儿结构畸形围产期管理与诊治平台救治的又一例复杂病例。手术的完全成功表明复旦大学附属儿科医院外科团队在救治新生儿实体肿瘤方面处于国际先进水平。
院长;张俊德教授张骏德现任上海建桥学院新闻传播学院院长、教授，原为复旦大学新闻学院博士生导师。研究方向为：新闻学、实用传播学、广播电视学。1964年7月于复旦大学新闻系（5年制）毕业留校任教，历任复旦大学新闻系采访写作教研室主任、广播电视新闻系主任、教育部文科重点科研基地复旦大学信息与传播研究中心副主任等职。现为教育部学位与研究生教育专家库成员，上海市考试院专家组成员，上海市新闻高级专业技术职务任职资格审定委员会成员，上海市广播电视学会学术理事等。主持与参与过国家级与省部级科研项目8个，出版教材与学术专著《新闻采访与写作》、《新闻采访原理与技法》、《新闻写作创新与技巧》、《报纸评论》、《摄影基础知识与技能》、《新闻心理学》、《当代广播电视新闻学》、《中国新闻改革论》、《新闻报道改革与创新》等20多部，发表学术论文200多篇。其中教材《当代广播电视学》获1997年上海市教委优秀教材奖；专著《中国新闻改革论》获2008年上海市哲学社会科学优秀著作奖（上海市政府奖）；论文《试论采访中的心理感应规律》、《论广播电视业的法制化管理》分获1997年、1999年“中国新闻奖（论文）”二等奖。副院长、党总支书记陆佩耀陆佩耀现任上海建桥学院新闻传播学院副院长、党总支书记。毕业于华东师范大学政教系。 历任上海第二工业大学团委书记、党委宣传部长、基础学院党总支书记兼副院长等。曾两次被评为上海市教育系统优秀党务工作者。新闻系主任：高东教授新闻系主任高东，新闻学专业主任，男，笔名阿东，主任编辑，副教授。1958年12月10日出生，江苏无锡人。毕业于复旦大学新闻学院，硕士学位。历任《新民晚报》记者、编辑、评论员，《新民晚报》驻美国记者，《新民晚报》美国版主编；洛杉矶华文报纸《中国乡情报》总编辑；《上海家庭报》总编辑助理兼编辑部主任；消费日报《完全生活周刊》主编；《IT时报》副总编辑。1995年作为中国记者代表出席大阪亚太记者论坛并发表演讲；受上海市委宣传部委托，执编《新闻工作者必读》；出版专著《报纸创办实务》、《阿东新闻评论选》，在核心期刊发表论文多篇。2005年7月至今，任上海建桥学院文化传播系新闻专业主任，主讲《新闻编辑学》、《新闻评论学》等课程。教学博客“高东的新闻教学课堂” 获2009年上海市师德建设优秀项目提名奖副院长、传播系主任 卢宁教授卢宁，现任新闻传播学院副院长、传播系主任。2001年于复旦大学中文系获博士学位，2007年入复旦大学新闻学院博士后流动站，2010年出站。研究方向为新闻史与传播学。发表文章十余篇，出版专著一部。新闻系副主任 阿娜教授阿娜，蒙古族，现任上海建桥学院新闻传播学院新闻系副系主任、副教授。国际型、双师型教师的代表，不仅在国内外接受过新闻教育，而且曾在海内外从事记者工作。从教以来，主要从事新闻采访与新闻写作的教学与研究，获得上海市科教系统“三八红旗手”等荣誉称号。秘书系主任：冯修文教授冯修文1971生，副教授。中国翻译协会会员，中国比较文学学会翻译研究会会员。上海外国语大学硕士研究生，上海外国语大学高级访问学者。从事涉外文秘基础英语、剑桥商务英语（BEC）、基础翻译等教学。2004年全校青年教师教学竞赛二等奖，2008年校教学成果二等奖。多次获得院教学一等奖，三次获得院“工作积极分子”称号。主编《文秘英语实训》等6部实用专业英语教材，参编的《商务函电》获上海市优秀教材三等奖。在核心期刊及国家级期刊发表学术论文近20篇，承担市部级课题3项，其中一项为上海市语委“十一五”重点课题。 现任新闻传播学院秘书系主任。传播学学科带头人钱晓文博士、教授钱晓文，传播学学科带头人，上海建桥学院新闻传播学院副教授，传播学学科带头人，复旦大学新闻传播学博士。从事传媒研究与教学工作十余年，主要涉及传媒经济、网络传播、新闻史等领域，已在全国学术期刊包括核心期刊上发表论文30篇，出版学术专著《当代传媒经营管理》（中山大学出版社2008年3月出版)，参与编撰《中国新闻事业史新编》（高等学校新闻传播专业基础课程教材）、《上海新闻志》等，主持相关课题若干个。近年来多次获得上海建桥学院教学优秀奖，钱晓文负责的《媒介管理》课程被评为上海市教委重点课程。传播学知名教授：王晶红教授王晶红，新闻传播学院讲师、新闻传播学副教授、博士。研究方向：新闻传播学、广播电视学、文化产业学。教学与相关学科实践经历：2000年到2003年就职于辽宁电视台任中级记者职务，2006年到2008年执教于上海视觉艺术学院。曾获得荣誉：2003年作为第一主创人员摄制电视新闻专题节目《人鸟之战》，获得中国广播电视学会社教专题类三等奖；同一作品，获得2002年辽宁省广播电视学会新闻专题节目二等奖。广告学知名教授：颜志刚教授颜志刚，1948年10月生。原复旦大学教授,在复旦大学新闻学院从事教学32年。曾任复旦大学新闻系副主任,广告专业主任。2008年退休后任建桥学院专职教师和建桥学院原文化传播系（现新闻传播学院）应用传播教研室主任。1990年曾赴美国“夏威夷大学新闻系”与“美国东西方研究中心”研修新闻学1年，1995曾赴日本“电通”研修广告学半年。开设的课程有《新闻摄影》、《广告摄影》、《摄影专题》、《摄影技艺》和《摄影基础》等。已出版《摄影技艺教程》、《数码摄影教程》、《摄影百科辞典》等专著8本。编写了《辞海》（2000年版）中的全部摄影类条目。其中，《摄影技艺教程》荣获国家教委高校优秀教材二等奖。上海新闻摄影学会副主席、中国新闻摄影学会理事、中国摄影家协会会员。
PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!
技术的研究进展
摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。
关键词 PCR技术;研究进展;应用
中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02
PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。
1 PCR技术原理
PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。
2 PCR技术的分类
在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。
实时荧光定量PCR技术
1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。
荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。
多重PCR技术
多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。
在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。
单分子PCR技术(SM-PCR)
单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。
单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。
3 PCR技术的应用
PCR技术在水产上的应用
基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。
PCR技术在微生物检测上的应用
1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。
4 展望
传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。
5 参考文献
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桂永浩，男，汉族，1958年10月生于上海。教授，主任医师，博士生导师，中共党员。1982年毕业于上海医科大学医学系。此后在儿科医院长期从事医疗科研教学工作。1991－1995年在美国宾州大学费城儿童医院做高级访问学者。1997-1999年获洛克菲勒奖学金并取得临床流行病学硕士学位。2002年、2003年分别以高级访问学者身份出访日本大阪大学和德国柏林心脏中心。2002-2004年毕业于中欧商学院“医院管理”文凭课程。2011年4月28日任复旦大学副校长，兼任上海医学院院长。
基本上医学上将在儿科就诊的孩子，称为患儿，非儿科的患病人群，叫做患者。以前，这个年龄限制在14岁左右，但是由于18岁以上才称为成人，所以现在，将18岁以下的人群，都可以在儿科收治，也就是都可以称为患儿。据复旦大学附属儿科医院院长桂永浩教授解释说，延长挂号年龄是与国际惯例划定的0-18岁的儿童年龄接轨。 我国儿童年龄传统上定为0－14岁，但从医学角度来说，14－18岁的人虽然在生理上接近成年人，但其心理仍然属于儿童，而且该年龄段是一些先天性疾病发病的高峰期，这些疾病特点又不同于成人患的同一类疾病，成人门诊一般不收治该年龄段的病人。【问题解析】所以，以往，将0-14岁的病人叫做患儿，18岁以上的病人称为患者，现在可以将0-18岁的病人叫做患儿。
清明有力温柔慈悲来自沈茜。根据相关内容查询所显示，沈茜发布清明有力，温柔慈悲经典句子，沈茜主任医师，复旦大学附属儿科医院肾脏科主任，硕士生导师。