在平时的学习、工作或生活中，大家都接触过作文吧，作文根据体裁的不同可以分为记叙文、说明文、应用文、议论文。还是对作文一筹莫展吗？下面是我帮大家整理的做核酸检测作文，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。
妈妈带着我和妹妹来到体育中心做核酸检测。
虽然现在已经是秋天了，但天气还是跟三伏天似的。大中午的太阳像一个超级大的火球一样，炙烤着大地，阳光是那么强烈，整个世界都笼罩在一片耀眼的光芒之中。
到了体育中心，只见做核酸检测的队伍像一条条长龙，一眼望不到边，每人间隔一米，大家井然有序地排着队，等待做核酸检测。
左等右等，终于轮到我了。我手拿身份证给工作人员登录信息。登记完之后，我就往前走，由另一位医人护人员给我做核酸检测。我打量着眼前这位医护人员，她顶着炎炎烈日，身上穿着密不透风的防护服，只见她拿出一支棉签让我张开嘴巴。这时，我很紧张。医护人员看我很紧张，便安慰我：“检查真不可怕，只是有点痒。”然后，我照着她说的做了。这时，我仔细观察这位医护人员，她被防护服包得很紧，紧得和一个在蒸笼里的一个包子一模一样，她的汗水像豆子般滴下。哦，在这样闷热的如包包子似的医务人员，对待我们却还却还是那样有耐心。她们真了不起。
在这里，我想说：“医护人员们，你们辛苦了！谢谢你们顶着炎炎烈日给我们做核酸检测。谢谢你们！”
一阵阵秋风吹落了金黄的树叶，带来了丝丝寒意，同时也没收了我的健康。看到体温表上37。3度的数字，我的心怦怦直跳，心想：“按照学校的要求，我必须做核酸检测。”
于是，我被衣服包成了一个大圆球和妈妈飞快的来到人民医院发烧门诊。下了楼远远望去在干净明亮的大厅我们看见有三四名小朋友在等待。我走到那个可怕的地方，一看见白大褂就想起了姐姐说的话太吓人了！正好，我透过窗户看见美丽的喷泉，心想：“这应该能让我变得不害怕吧。”但是我刚看了一会儿，就想，“我是小孩儿，应该不会从鼻子里吧。”我自言自语的说。但是，该干啥还得干啥，我只能面对现实。
只见那位医生拿出一个大概有1分米长的棉签，直向我嘴巴冲去，“哦，兴好，兴好，不是从鼻子眼儿里捅到嗓子眼儿里，如果是的话我就该跑了。”我正想着，一边张大嘴巴，当那根又细又长的棉签，捅到我嗓子眼儿那一刻，我都快吐了，那个味儿是真的难受，现在回想起那个味儿还想吐呢，等他把那根又细又长又难闻的棉签拿出来时，我的心情由阴变成了晴，心从紧张到放松，我心想，啊，终于结束“战斗”了，终于不用在难受了。但是啊，我觉得核酸检测并不疼，就是恶心，其他也到没有我想的那么怕。
这件事让我知道了在生活上其实有些事并不像想象的那样可怕，一定要面对现实。
突然爆发的疫情打破了往日的宁静，为防控疫情，烟台市全体市民要做核酸检测。8月4日，妈妈接到了村里的通知，说是明天早上在村广场做核酸检测。听到这个消息，我又惊又喜，心想：做核酸会不会很痛呢？
8月4日傍晚，跟着妈妈到广场排队拿号。我看到敬爱的医护人员，穿着防护服，戴着护目镜和口罩，早就做好了准备。不一会下起了大雨，我们赶紧找地方躲避。一会儿，雨停了，我们回到广场等候。激动的心，颤抖的手，我的心像打鼓一样砰砰直跳。“我的妈呀，做核酸检测疼不疼呀！”我非常忐忑，心里直犯嘀咕。我的腿就像灌了铅一样，一步都不想往前迈，可是医生的检测真是神速，不一会儿就轮到我了。
首先要登记，负责登记的志愿者对我说：“贺玉利，你害不害怕啊？”正在我疑惑之际，我发现原来是我们学校老师在跟我说话，看着穿防护服的老师，顿时我觉得不那么害怕了。登记之后，医生让我坐下，和蔼地对我说：“小朋友，把口罩摘下来吧。”哎呀！把我吓得都忘了摘口罩了，我飞快地摘下口罩。医生又说：“把嘴巴张开，啊——”我照着做了，医生拿出棉棒，向我口中伸去，直达咽部，在喉咙里转了一圈儿，我的喉咙里痒了一下，很快就好了。“小朋友，你可以走啦。”抬起头，看到医护人员浸湿防护服，看到志愿者老师忙碌的身影，我不由得一阵心酸，情不自禁的打了一个庄严的队礼。他们真不容易，我真盼望疫情早点儿结束！
今天是8月19日，妈妈接到了通知，说是明天早上7：45准时到达学校做核酸检测。妈妈告诉了我，我又惊又喜，心想：做核酸会不会很痛呢？但是能和好朋友一起学习，玩耍，能和老师相遇，再痛我也不怕！
一大早我就起来了，听见外面正在下着倾盆大雨，即使再大的雨也阻挡不了我的脚步。我和爷爷打着伞往学校走去。到了学校，我看到了一个小篮球厂，大树的叶子非常茂盛，到了教室，老师说了几句话，就去楼道找家长排队，我站在第十三个，过了一会儿，终于走到了做核酸的地？方了，我往前面看到了医护人员在准备，我快坚持不住了，心里还是特别的紧张，老师告诉我不要害怕，一点儿都不痛，只是拿着棉签往嘴里搅一圈，就好了。轮到我了，医护人员首先拿出一根棉签伸到我的嘴里。搅一圈，然后又拿出来把它放到小瓶子里，最后把它弄断。我感到很恶心，想吐，爷爷说我很坚强！
其实一点儿都不可怕，我希望结果早点儿出来，这样我就能和好朋友一起学习、玩耍，还能跟老师相遇，还能学习更多的知识！
“啊……”你问我为什么要“啊”，接着往下看，你就明白了。
今天一大早，我就被妈妈叫醒了。唉，我的梦还没做完呢！我还想再睡一会儿，但是今天得做第二次全民核酸检测（放假前做了第一次核酸检测），所以我只好慢悠悠地起床。起床后，我想吃完饭再去，妈妈说：“做完核酸检测，再吃饭吧！”于是，我就和妈妈戴上口罩出发了。
来到学校门口，这里已经有许多人在排队了。忽然，一位老奶奶说：“啊，身份证忘拿了！”她这么一说，妈妈才想起来我们也没带证件。“苍天啊，为什么你也忘带了？！”我感叹了一声，赶紧和妈妈回家去拿。
等我们再次来到学校时，人已经所剩无几，我们连忙跑过去，正好十个人。走进校门，只见许多阿姨坐在椅子上，她们是给我们统计信息的。轮到我做核酸检测了。我先张开嘴巴，“啊……”了几声，医生用棉签在我的喉咙里转了几圈，就放进了一个管子里，我有点想吐的感觉。听妈妈说，这些管子都要统一送到城里去做检测，一天以后才能出结果。
但愿这是我们定州最后一次做全民核酸检测，希望病毒早日被消灭，人们重新过上安居乐业的生活。
前段时间郑刚刚经历了一小场千年不遇的暴雨，汛情还未结束，疫情又来势汹汹，让我们的城市雪上加霜，为了能够尽快控制疫情，郑州市全员进行核酸检测。
今天下午，我们一家人也来到了小区的检测点。离检测点还有很远我就看见了一条“长龙”，爸爸妈妈带着我连忙加入了检测大军。我抬头一看，根本就看不到队首，心想：这要等多长时间才能轮到我呀！
10分钟过去了，30分钟过，一个小过去了还没有轮到我，我等得不耐烦了，于是就问爸爸：“什么时候到我们呀？我都快热死了，站了这久我又累又热，难受死了，我不想检测了，咱们回家吧。”爸爸看了我一眼说：“不行疫情当前，我们要严格遵守国家规定，这也是为抗疫做出自己的贡献。”我点了点头，又继续等待。
又过了半个小时，终于轮到了我。我坐在座位上，看到了身穿防护服的白衣天使，突然想起了我刚才的抱怨，羞愧万分。炎炎烈日这些白衣天使牺牲了自己的休息时间，穿着密不透风的防护服为我们检测，她们不累吗？她们不热吗？我有什么理由抱怨呢？她们才是最辛苦的。做完检测我站了起来向她们深深地鞠了一躬说道：“您们辛苦了，谢谢！”
回到家，爸爸表扬我，说我长大了，懂得感恩了。疫情当前，人人有责！作为小学生应该积极响应国家号召，遵守国家规定，就是为抗疫做出贡献。
今天早上，妈妈说要带我去做核酸检测，我有点紧张，因为我听说核酸检测要戳到我的喉咙。
我们来到检测点，人非常非常多。妈妈说，核酸检测其实就是用一根棉签往嘴里一搅就好了，很简单的。我一听，原来就是在喉咙里捣鼓几下嘛，有什么好怕的，心里顿时安定了许多。
马上要轮到我了。我看到前面一个人正在做核酸检测。医生刚把棉签伸进她的嘴巴，她就往后一缩。医生又把棉签伸进去，她还是一缩，也不知道最终医生到底有没有采到样。我想，我要做得更好一点，做一个大人都佩服的榜样。于是，我就大踏步走向前，很快就轮到我了。
可是想起来容易做起来难，我还是紧张起来了。医护人员拿出一根棉签，要往我嘴里塞。我感觉这根棉签像一条毒蛇要钻进我的嘴里。“别怕！”我一边默默给自己打气，一边张开了嘴巴。一开始，棉签在我的舌头根部搅和着。我平时有个小癖好，喜欢用舌头在自己的嘴巴里卷来卷去，医生搅和的这个地方我平时好像都卷过，我感觉不怎么难受，稍微有点梗，就像感冒时鼻腔堵塞的那种感觉。接下来，就来点猛料了。棉签突然往我喉咙里一戳，我感觉我的后脑勺好像被戳出了一个洞。正当我快承受不住的时候，医生把棉签拿了出来。呀，终于好了，我松了口气。我看到医生在棉签上涂了点红药水，放进了一个试管里，大概是要拿到医院里去做检查吧。
唉，虽然核酸检测没有我想象中那么恐怖，但是也有点儿难受的。真希望疫情赶快过去，让我们能开开心心地过一个暑假。
5月17日，早上八点，外婆带着我去做核酸检测，地点在金水农场幼儿园。
我们来到幼儿园，就发现一条长龙似的的队伍，从幼儿园的办公室门口一直延伸到幼儿园的大铁门，我们跟着队伍排在后面。每个人都要站在同一条黄线上，并且要保持一米的距离。
大约站了二十分钟的时候，一位穿着防护服的医务人员来到我的身旁，核对我的身份信息，给我一张写着我名字的小纸条。另一位医务人员用消毒液在我身上喷了一下。
又过了五分钟的时刻，终于轮到我做检测了。只见一位穿着防护服的医务人员让我把身份证给她看，她核实信息之后，就把身份证还给了我。还递给我一个小药瓶和一根棉签。
接着，一位医生叫我坐在椅子上，仰起头，张开嘴，她用那根棉签在我口腔里刮了几下，核酸检测就做完了。
一开始，我很害怕，做完之后，才发现并没有我想象中的那么可怕。
在回家的路上，我想：这么热的夏天，我就只穿着一件单衣服，都感到很热，那些穿着像大熊猫的医生们，一定会很难受的。长大以后，我也要当一位医生，治好病人，保护大家!
第一次做核酸检测，真兴奋！
妈妈一大清早就去当志愿者了，我起床后只喝了一杯牛奶，吃了几片面包，然后跟随爸爸去他们学校做核酸检测。由于学校在村里，自然少不了走山路。
公路像一条带子，沿着山坡，或者就搭在坡上，车子一会儿左拐弯，一会儿右拐弯，一会儿上坡，一会儿下坡，很颠簸。车子前行，只见一座一座山躲到了我的后面，一、二、三，我默默地数着山，不一会儿就睡着了……
车停了，我被惯性震了一下，顿时清醒起来。我打开车门，深吸了一空气，农村的气息好清爽！周围都是矮矮的居民房，一个院子一户人家，像极了老家村里的样子，太亲切了。我不觉兴奋起来，可我要保持冷静，因为爸爸顺便稍上了同事家的老奶奶和一个小女孩，要注意形象。我双手插兜，挺胸抬头，佯装自若，尽量把自很己装得很帅很酷。
今天村里要检测的.人不多，我们很快排上了队。排在前面的人也就有五六个。医护人员的操作真熟练，从录入信息到咽拭子检测不到三分钟，挺快的。可是不知为什么检测突然中止了，我向前瞄去，只见几个医护阿姨正拿着手机点着一个系统，可半天也没动静。于是，爸爸上前去帮助，掏出手机登录那个系统，可还是不行，听说是登录用户太多，系统正在抢修升级。此刻，我仿佛看到了很多网络工程师忙碌的身影。
我前面只剩一个人了，虽然近在咫尺，可又仿佛遥隔千里！没办法，等，再等，还是没办法。很快到午饭时间了，大家只好作罢，各自离去。
爸爸带我到了学校食堂，狼吞虎咽地吃了满满一大碗面条。吃完了，我就去找那个女孩儿玩，不一会儿，我们熟悉了，我们玩捉迷藏，跳方格，玩健身器材，玩得很开心。
下午时间到了，医护阿姨又来了，系统也修好了，不一会儿就到轮我了，我坐在椅子上，仰头张嘴，喉咙里发出“啊……”阿姨拿着一根像棉棒的细长木棍，在我的嗓子眼里桶了几下，顿时感觉嗓子里翻江倒海，恶心想吐！眼泪也瞬间涌出了眼眶，不疼，有点难受而已。“好了”，只见医护阿姨把细棍子折断，有棉的一截给放进了玻璃管里。
啊！终于完了，再回头看看医护阿姨，她们依旧在忙碌，医护阿姨可真伟大！
疫情期间“核酸检测”是我们经常听到的一个词，那你们知道做核酸检测时，是会感到舒服，还是会感到疼痛呢？是用什么工具进行检测呢？会不会打麻药呢？今天，就让这个刚刚做完检测的我，给大家提个醒吧！
最近鼻子总是一到晚上睡觉就容易堵塞，呼吸不畅，妈妈今天决定带我去医院做个检查。因为需要做鼻腔镜检查，必须先做核酸检测，没有问题才能去做进一步检查，我怀着一颗既忐忑又期待的心跟着妈妈去缴费。不一会就来到专门做核酸检测的小帐篷前排队。
“韩欣格来了吗？”随着工作人员的叫喊声，我也被妈妈“推”到了医生面前，其实我一开始也跟别人一样满怀期待地在小帐篷前排队等候。但当我看到前面检测的人满脸恶心地从帐篷里出来时，我那期待的眼神在下一秒就凝固了。“到你啦！快过去啊！”妈妈把我往前推了推，“这个……我……”我开始犹豫了，可妈妈的力气就像大力水手，一下子就把我送到医生面前，我知道，这场灾难甩不掉了。
只见一位医生冲我微微一笑，但在我心里，这个微笑让我浑身一颤。随后她拿出一根长长的棉签，对我保证地说：“一定不会痛的，我会很轻哟！”可在我心里，长长的棉签仿佛一根长针，迎接我的必定是强烈的疼痛感，我身体紧绷的站着。一切准备就绪后，那位医生拿起“针”慢悠悠地伸进我的喉咙，不停地搅动，搞得我满脸通红，十二分的难受，恶心的感觉慢慢向我袭来。可那医生完全没有停下来的意思，哎，算了，忍不住了“呕！呕！不行了——”看着我那狼狈的样子，妈妈也是哭笑不得。
这就是我惊心动魄的全部检查过程，现在，你们还对核酸检测感兴趣吗？
莆田，敲响了抗疫的警钟，还启动全市核酸的方案。这个方案一确定下来，我家楼下和小区里的人，不管是老幼妇孺都从四面八方涌向马路。那空荡荡的马路一眨眼的工夫就排起了一条长龙。于是我们决定明天再去做核酸检测。
可到了晚上凌晨一点左右，正在睡梦中的我被一个电话吵醒了，是姑姑打来的电话。她说：“赶紧起床下来做核酸，这个时候人不会多。"于是我揉了揉眼睛爬下了床，很不情愿地下楼来到了马路上。一看，虽然人没有白天那么多，但还是排着一条“龙”。刚排没一会儿，我和妹妹就开始有些不耐烦了，妹妹一直吵着要睡觉，这时妈妈把手机给了她，并让我边排队边照看妹妹，妈妈就飞奔到楼上搬了把椅子下来，让我和妹妹坐在旁边等待。
不知过了多久，队伍慢慢地移动到了学校门口，工作人员要求十人一组出示健康码才可以入校。进入校内，我们来到第一个帐蓬前，工作人员要求将身份证放在胸前拍照登记，随后我们便来到护士面前，我有些紧张地四处张望，有正在排队的，有在维持程序的，还有一些不肯配合哭闹的幼小儿童……终于到我了，只见穿着密不透风的防护服的护士将一根一次性的棉签伸入我的嘴里不停搅动后，拿出来放入装着药水的瓶子里折断，我和妈妈、妹妹做完核酸检测便火速离开了现场。
回家路上，我边走边想，这些护士太伟大了！她们冒着危险、不眠不休、加班加点地给我们做核酸检测，我才是半夜排了一会儿队都不耐烦，可她们还要从早忙到黑地为我们做核酸检测啊！我真想对她们说:“谢谢您们！您们辛苦了！”
当你第一次做一件事之前，可能会觉得很难，但在你真正去做的时候，可能会发现并没有想象中的那么难。
记得上学的一天，全体学生要核酸检测。我是第一次做核酸检测，所以并不知道核酸检测是怎样的。我便提心吊胆，想着核酸检测是什么样？：打针？吃药？量体温？……这些我并不害怕，但是打针和吃药让我有一点点紧张，想着想着，我变得又害怕，又紧张！
排队的时候，我紧张地在原地踱步，突然看见一间教室里有几名“白衣战士”不知道，在给学生干什么？有几个学生从后门走出去，边走边擦眼泪。啊！他们一定非常痛苦吧？他们到底遭受了怎样的痛苦呢？走进教室，我的心“怦怦，怦怦”的打起鼓来，脚步也变得沉重了，不敢再往前移，真想打退堂鼓。
这时，一名“白衣战士”对我说：“小朋友，过来。”他那没有学生了，我坐在椅子上，张大嘴巴，只感觉喉咙痒痒的。不一会儿，“白衣战士”就说好了，耶，终于好了！我高兴地回到了教室，原来核酸检测就一下子，几秒钟而已，把嘴巴张大，说个“啊”字就结束了，而且一点也不疼！
我明白了一个道理：一些事情看起来很难，但只要勇敢去面对，就会发现这并没有自己想象中的那样可怕。
从十五号起，小区的广场上就总有一长条队伍，也不知到是干什么的。后来我才知道楼下在做核酸检测。
今天是周末，所以我还在床上睡懒觉。睡到了十点多才起来。我赶紧洗漱了一下就来吃早餐了。刚吃完早餐，我们就接到了爸爸的电话。“吴佳璇，赶紧叫妈妈他们准备准备，马上就要去做核酸检测了，快点换好衣服下楼吧!”我跟妈妈报告：“妈，爸爸叫我们下楼做核酸检测。”“那你先叫弟弟去换衣服，我马上好。”
我们做好了准备，拿上身份证就下楼了。在去核酸检测的路上，我问妈妈：
“妈，啥是核酸检测啊?”
“就是拿一根很长的棉签在你喉咙里转来转去。”
“那会不会把我弄吐吧!”
“有可能。”
听到这里，我有点害怕了，因为我以前一吐就要把胆汁也吐出来，嘴里还非常苦，所以我非常怕我吐。
我们来到“长龙”的“尾巴”那里，排了进去，后面还有人不断的排过来。队伍中的人们看上去很轻松的样子。我却表现得很沉重，因为我从来没有做过核酸检测。眼看我马上就要成为“龙头”了，因此，我非常紧张。我只好找吴佳烨(我的弟弟)玩“石头剪刀布”来缓解。我俩玩的很开心，一下就把紧张抛到了九霄云外。排着排着，我们来到了一个棚子底下妈妈在帮我们登记。我又开始紧张了：完了完了，马上要做核酸检测了我肯定要吐了，到时候可不要丢人啊!妈妈带着我们来到检测处，我拿着一个小瓶子，想着：它是干嘛的?难道是放样品的?还是抽血的?我来到了另一个棚子下，棚子下有一个医护人员，旁边有一个牌子，上面写着“二号检测处”。由于我害怕，就让弟弟先去检测。弟弟出于好奇，就真的走过去检查，没有犹豫一下。只见医务人员拿出了一根比普通棉签长两倍的棉签伸到弟弟嘴里搅，然后又拿出来，把它放在小瓶子里，然后把它弄断。我看弟弟一下就做完了，我也去做。也就是把棉签伸到喉咙里转。然后就是喉咙有点干。
其实核酸检测也不是很恐怖，只不过是我的心理作用而已……
一场突如其来的疫情防控阻击战，需要全国人民的参与，让我们一起打赢它!下面是我收集整理的关于疫情的议论文800字，欢迎阅读参考！
究竟什么是人类命运共同体?如果之前还有人存在疑问，如今应该有了深刻感触。
这个世界，各国相互联系、相互依存的程度空前加深，人类生活在同一个地球村里，生活在历史和现实交汇的同一个时空里，越来越成为你中有我、我中有你的命运共同体。
每一场疫情都是对全人类全方位的考验。病毒，地球上最古老的存在之一。它已诞生数十亿年，但是直到100多年前，人类才借助仪器观察到它的模样。从100多年前的西班牙大流感，到近20年来的SARS病毒、甲型H1N1病毒、MERS病毒、埃博拉病毒和新型冠状病毒……人类与病毒的斗争从不曾停止。但是，迄今为止，人类对病毒的认识依然少得可怜。
灾难来袭，呼唤担当。
信息分享透明高效，防控机制坚决有力，中国完成了一个个貌似不可能的任务：以前所未有的速度甄别出病原体并第一时间同世界分享有关病毒基因序列、10天建成两座医院、对近6000万人实施封锁……这是处于疫情中心的中国“做好自己事情”的担当。
“岂曰无衣，与子同袍”，从近邻日本到非洲兄弟赤道几内亚，从俄罗斯到西班牙，一架架带着爱心的航班飞抵中国。这是“风雨同舟”的担当。
知己知彼，方能百战不殆。应对病毒，离不开专家的专业能力。“逆行”人群中，有德国专家，有俄罗斯专家，有世界卫生组织牵头成立的国际专家组。这是“守望相助”的担当。
“凡是不能杀死我的，终将使我更强。”面对疫情，反思必不可少。随着人类社会的发展，全球气候开始发生意想不到的变化、野生动物的栖息地不断被挤压、城市化居住与日益频繁的人员流动则让病毒的传播防不胜防。有人说：“在把其他物种推向灭绝的过程中，人类也在忙着锯断自己栖息的那根树枝。”因此，不要把每次疫情当做单独事件处理，人类需要思考如何与自然和谐共处。这是“命运与共”的担当。
“面对疫情，我们都是中国。”德国小伙在“爆款”视频中声援中国。“留下来!跟中国朋友一起奋战!”法国人朱利安用留在中国表达信心。这是“患难与共”的担当。
宇宙只有一个地球，人类共有一个家园。疫情突袭，人们更加深刻地体会到人类命运共同体的内涵。“感谢中国，避免疫情进一步传播。”四面八方，感激之情，发乎内心。“全力支持”、“共同努力”，温暖之意，溢于言表。
这个世界，人与人命运相连，国与国命运相通。面对疫情，隔岸观火，要不得;恶意攻击，更是有悖人类良知。积极担当、共克时艰，才是正解。
已亥末，庚子春，荆楚大疫，染者数万计，众惶恐，举国防，皆闭户，南山镇守江南都，率白衣郎中数万抗之，且，九州一心，共战疫，待疫尽去，国泰民安。
这是一个不平凡的一年，又是一个极具特殊意义的年份，这一年，是全面建成小康社会和“十三五”规划收官之年，是5G商用元年，是奥运之年是……但这一切的一切都被突入而来的疫情给打破了……
从新年前夕当如今，我相信大多数同学和我一样，不断地从电视网络上接受前方的信息，也不断的冲击着我们认知的上限和下限，与十七年前不同的是，如今讯息密度达到每时每刻都在刷新，期间无数的负面消息，无疑是在放大我们的恐惧与愤怒。
但与十七年前相同的是，那些被冠以英雄称号的人们，他们依然在，是谈及人们在大街上唱国歌而哽咽的钟南山院士，是防疫一线人员与9岁女儿的隔空拥抱，是不辞辛苦给医疗队送蔬菜的秦师傅，是给警局送口罩不愿透露姓名的小伙子，是等妻子归来承包一年家务泣不成声的丈夫，是征集核酸检测小组直面危险时的.那简简单单的三个字“我做过”，是雷神山，火神山上那日夜兼程的工人师傅们，是奋战在防疫一线那累到虚脱的医生护士，是每一位被阴霾笼罩下的坚强的人们，他们都有一个共同的标签“伟大的中国人民”。
其实我本人是比较反感那些什么梦想、未来、希望这些被念叨很多次的词汇，但是有些东西，在灾难面前，谁真的又有勇气直面这样的危险？是啊，不是我这种每天呆在家，只能干揪心的人，更不是靠那些害虫蛀虫、“键盘侠”的那些人，靠的是那些“伟大的中国人民”。
人啊，总是要仰望些什么，那高远、崇高的又与市井不那么挂钩信念，我可能帮不上什么忙，只能为那些在防疫一线的工作人员加油，但只要有信仰在，没有什么困难在之面前能称之为困难，做好自己改做的事，相信他们，伟大的中国民万岁！
在为全国流感监测网络实验室提供甲型H1N1流感病毒实验室检测技术方案，不用作商业活动或赢利目的。一、标本的采集种类和要求1、推荐采集的呼吸道标本种类疾病发病后应尽快采集如下标本：鼻拭子、咽拭子、鼻腔吸取物、鼻腔冲洗液。气管插管的病人也应收集气管吸取物。标本应置于无菌病毒采样液，并立即用冰块或冰排保存或置于4 ℃ （冰箱），并马上送至实验室。（临床样品采集人员及实验室检测人员的感染控制指导请见相关文件。） 采样同时填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单。（附表1）2、拭子的选择标本应使用头部为合成纤维的拭子（例如，聚酯纤维），用铝或塑料做柄。不推荐棉拭子和木柄。标本采集管应包含3毫升病毒采样液（含有蛋白质稳定剂，阻止细菌和真菌生长的抗生素，缓冲液）3、临床标本储存要求保存在4℃（不能超过4天）或者-70℃或-70℃以下。有条件的实验室均应保存在-70℃或-70℃以下。不应保存在-20℃。4、标本的分装处理标本送至实验室后，立即进行处理，避免反复冻融。将原始标本分为三份，一份用于核酸检测，一份用于病毒分离，一份保存待复核。5、标本的运输疑似人感染甲型H1N1感染病例列为 A类，用UN2814包装运输。填写疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单（附表2）。二、核酸检测基于PCR原理的核酸检测方法是一种快速有效的诊断方法，在突发传染病应急工作中发挥了巨大作用。1、基于real-time RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物和探针序列为美国CDC设计）：4月29日WHO网站上公布了美国CDC设计的针对此次甲型H1N1流感病毒的real-time RT-PCR引物和探针，此实验用于检测疑似甲型H1N1流感病例的呼吸道样本, 因此，用此real-time RT-PCR的方法，建议首先筛选甲型流感病毒并排除季节性流感病毒和H5N1禽流感病毒。real-time RT-PCR方法参见附件3（中文翻译版），附件4（英文原版）。2、基于RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒（引物序列为国家流感中心设计）：目前国家流感中心设计了RT-PCR方法检测新的甲型H1N1流感病毒。RT-PCR的方法参见附件5。三、病毒分离鉴定可采用鸡胚和/或MDCK细胞进行流感病毒分离。具备相应条件的网络实验室在收到标本后24h内进行病毒接种。具体方法参见附件6和7。四、适用于实验室工作人员的甲型H1N1流感病毒生物安全（一）实验室级别及个人防护1、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的诊断性实验工作，在BSL-2实验室内进行。所有样本操作均应在生物安全柜（BSC）内进行。遵循生物安全三级个人防护。2、对采集自属于感染甲型H1N1流感病毒疑似病例的患者的临床标本进行的病毒分离培养工作，应在BSL-3实验室内进行，并遵循生物安全三级个人防护。（二）健康监测1、所有人员均应自测发热及其他症状。2、感染甲型H1N1流感病毒的症状包括咳嗽、喉咙痛、呕吐、腹泻、头痛、流鼻涕和肌肉疼痛。如有不适，应立即向上级报告。3、如有人员在无防护情况下暴露于甲型H1N1流感确诊病例的临床标本或活病毒，应考虑在暴露后的7天时间里使用奥司他韦或扎那米韦进行抗病毒药物预防。五、附表和附件附表1 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本采样单附表2 疑似人感染甲型H1N1感染病例标本送检单附件3： real-time RT-PCR方法检测甲型H1N1流感操作规程(2009版)（中文）附件4： real-time RT-PCR方法检测甲型H1N1流感操作规程(2009版)（英文）附件5： RT-PCR方法检测甲型流感病毒附件6：甲型H1N1流感病毒鸡胚分离方法附件7：甲型H1N1流感病毒MDCK细胞分离方法附表1疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本采样单 姓名 性别 年龄 职业※ 现住址 发病日期 标本#种类 标本量（g或ml） 采集日期 备注 ※选项：参照传染病报告卡。#选项：A鼻咽拭子、 B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）采集人员： 采集单位（盖章）：附表2疑似人感染甲型H1N1流感病毒病例标本送检单 姓名 性别 年龄 职业※ 现住址 发病日期 标本#种类 标本量*（g或ml） 采集日期 备注 ※选项：参照传染病报告卡#选项：A鼻咽拭子、 B鼻咽吸取物、C鼻腔冲洗液、D鼻腔吸取物、E气管吸取物、F其他（如为其他，请在表格中注明）*标本量：如果同一份标本有多个包装请注明。填表人员： 送样时间： 单位（盖章）：附件3real-time RT-PCR方法检测甲型H1N1流感操作规程中文翻译版（请同时参考英文原版）请注意：体系建立请参照所使用试剂盒供应商所提供的使用说明。本规程中的体系仅供参考。美国CDC实时RTPCR(rRTPCR)检测猪流感操作规程(2009版)本规程所有权归属疾病控制中心，紧急状态时授权各公共卫生实验室使用。本规程不用作商业活动或赢利目的。一、概 述（一）前提本规程基于对rRT-PCR方法的基本掌握。（二）实验原理实时荧光定量RTPCR(rRTPCR)法检测猪流感的方案是用一组寡核苷酸引物和双重标记的TaqMan®探针，对呼吸道样本或体外培养的猪流感病毒进行定性检测鉴定。InfA引物和探针为检测出甲型流感病毒而设计，swInfA引物和探针可特异性地检测出所有的猪甲型流感病毒，swH1引物和探针可特异性检测猪流感病毒H1亚型。本实验用于检测甲型流感阳性的疑似猪甲型流感感染病例的呼吸道样本。（三）使用条件一步法定量RT-PCR 96孔板热循环系统。（四）生物安全要求样本处理应在相应的生物安全实验室完成。（五）样本要求1、呼吸道样本支气管肺泡灌洗液，气管抽吸物，痰，鼻咽或口咽洗液或拭子。拭子样本所用的拭子顶端应为人造材质（如聚脂或涤纶）、柄为铝制或塑料。不推荐使用棉头木柄的拭子。藻酸钙拭子采样不可取。2、排除标准1）未在2－4°C (≤4 天)或-70°C及以下保存的样本2）以上未列的其它不当样本（六）核酸提取RT-PCR扩增效能依赖于样本模板RNA的质与量。RNA提取操作需经过检验核酸的纯度合格之后，再用于样本实验。商业化的操作程序中包括QIAamp® 病毒RNA提取试剂盒，RNeasy®小试剂盒 (QIAGEN公司)，罗氏MagNA Pure Compact RNA分离试剂盒, MagNA Pure LC RNA分离试剂盒II, 和罗氏MagNA总核酸纯化试剂盒，在推荐的操作程序下，可提取高纯度的RNA。（七）免责声明：提到的厂家名仅用作举例，并不表示疾控中心认可。二、实验材料（一）试剂1、一步法荧光定量RT-PCR探针试剂盒；2、分子级无菌蒸馏水 (无RNA酶和DNA酶)；3、正反向引物 (40μM)；4、双重标记探针(10μM)；5、阳性对照。（二）供给1、实验室标记笔；2、微量离心管格栅，96孔0.2ml PCR反应管；3、20μl 和 200μl 可调节移液器及滤芯枪头；4、0.2ml PCR 反应管盘；5、光学反应盖板；6、无菌,无核酸酶的1.5 ml微量离心管；7、一次性无粉手套。（三）仪器设备1. 微量离心机；2. 漩涡振荡器；3. 实时荧光定量PCR检测系统，含96孔的热循环反应板。三、操作程序（一）准备工作1. 避免样品污染由于fluorogenic 5’核酸酶测定的敏感性，应特别注意假阳性产生。推荐以下预防污染的方法：1）实验准备与核酸提取使用独立区域；2）实验准备与核酸提取使用专用设备（如移液器，微量离心机）和耗材（如微量离心管，吸头）；3）实验开始后穿清洁工作服，并使用新的一次性无粉手套；4）不同样本操作之间，以及怀疑可能污染的情况下均更换手套；5）试剂和反应管的盖子应尽量关闭。2、仪器准备工作台、移液管、离心机必须清洁，用去污剂净化，例如5%的漂白剂、“DNAzap”或者“RNase AWAY®”来减小核酸交叉污染的风险。3、试剂准备注意：在试验过程中，保持所有的试剂在冰架上保持低温。1）引物和探针（1）分装好的冰冻的引物和探针进行融化（已融的探针避光2-8℃可保存多达3个月，不要对探针反复冻融）；（2）涡旋振荡引物和探针；（3）瞬时离心引物和探针，之后置于冰架上。2）Real time RT-PCR的试剂（1）将Master Mix和酶置于冰架上；（2）融化2×的Reaction Mix；（3）颠倒混合2×的Reaction Mix；（4）瞬时离心2×的Reaction Mix和酶，置于冰架上。4、对RT-PCR的每一步过程均进行检测1）每个样品的RNA提取物通过分别的引物和探针进行检测：InfA, swFluA, Swine H1 (swH1) 和RNaseP (RP)。RNaseP引物和探针是以人的RNaseP基因为靶基因的，因此对于人的核酸可以作为内部阳性对照。2）对于每一个过程中包括的所有引物和探针，均设立无模板对照（NTC）和阳性模板对照（PTC）。3）人类样本对照（HSC）提供了次级阴性对照，以便确认核酸提取过程和试剂的完整性。5、建立反应反应检测混合物充分混合后加入到96孔板中。然后在适当的实验反应和对照中，加入水和提取的核酸或者阳性模板对照（PTC）。1）为每一个引物和探针标记一个1.5ml的微量离心管；2）对每一个建立的反应确定反应数（N）。考虑到NTC、PTC、HSC反应和吸量误差，制备过量的反应混合物是必要的。具体如下：（1）如果包括对照，样品的数量（n）为1到14，那么N=n+1；（2）如果包括对照，样品的数量（n）大于15，那么N=n+2。3）Master Mix:计算加到每个引物/探针反应混合物中的各个试剂的量。计算如下：* 体系建立请参照所使用试剂盒供应商所提供的使用说明。4）加入水之后，通过上下吹打混匀反应混合物，不要涡旋振荡。5）离心5s使混合物聚集管底，然后将管子置于冰架上；6）准备板状的反应管子或者96孔板，置于冰架上；7）每一个master mix吸取20μl到每一孔中，每排按顺序进行，如下图：实验建立举例：实验样本举例：注意：在任何样本被加入之前，应该首先加入阴性模板对照（NTC）（第1列），用来检验master mix中的污染。HSC应该在待测样本之后加入（第11列），用来检验在样本准备或者加入过程中的交叉污染。阳性模板对照（PTC）应该在所有样品和阴性模板对照（NTC）之后被加入。8）在将培养板移到核酸处理区域之前，在试验设定区域，在反应板的第一列将NTC反应进行。如上所述。9）吸取5μl的nuclease free water到NTC孔，将NTC孔盖上。10）将反应板盖上，移到核酸处理区域。11）将含有样品的管子涡旋振荡5s，瞬时离心5s；12）将提取的核酸样本置于冰架上；13）如上所述，样品应该按列加入，吸取5μl的第一种样本到所有标记这种样品的孔中（例如，样本“S1”如上表格所示）。不同样本之间需更换枪头操作。14）加完样本的孔要盖住，这将会帮助防止样品的交叉污染，并且能够使操作人员记录其加样的具体进程；15）为了避免交叉污染，必要时更换手套；16）对剩下的样本，重复步骤13-15；17）加入5μl的HSC样品加到HSC孔中（第11列）。将HSC孔盖盖。18）最后，加5μl阳性模板对照RNA到所有PTC孔中，将PTC孔盖上。19）如果使用8个管子的条状板子，每一条都要做标签标记，来指明每一个样品的位置（不要在反应管子的顶部标记！）。瞬时离心条状管子10－15s，然后置于冰架上。如果使用培养板，4℃，500g离心30s，置于冰架上。6、RT-PCR扩增条件反应体系为25ul，反应条件如下：注：在55度这一步骤中要收集荧光信号（FAM）。* 具体扩增条件请参照所使用试剂盒供应商所提供的使用说明。7、解释说明/检验1）探针/引物的阴性对照反应中得到的荧光增长曲线不应该超过阈值线。如果一个或者多个引物和探针的阴性反应出现了假阳性，则样品可能已经被污染。那么整个实验过程是无效的，严格的按照步骤规则重新实验。2）在37个循环处或者37个循环之前，所有的临床样本的RP反应曲线都应该超过阈值线，这表明从人类RNase P基因扩增到足够量的RNA，也表明了样本质量合格。然而，可能有些样本会由于初始临床样本中的细胞数量较少而无法出现阳性结果。同时，从动物/禽类体内或者经细胞培养得到的样本，经常会RP反应没有结果或者结果很弱。如果在所有临床样本中检测RNase P都阴性，则说明：（1）从临床材料中对核酸的不适当的提取导致RNA的损失或者来自临床标本的RT-PCR抑制剂的残留污染；（2）没有足够的人类细胞以备检测；（3）方法建立和实施不当；（4）试剂和仪器原因。3）在40个循环之内，HSC组中InfA，swFluA，swH1探针的荧光增长曲线不应该超过阈值线。如果任何其中任何一个流感特异性探针的增长曲线超过了阈值线，那么有以下解释：（1）可能由于RNA提取试剂污染。在实验前确保RNA提取试剂无误。（2）RNA提取过程或建立反应加样过程发生交叉污染。严格遵照操作程序的要求进行重复实验。（3）在40个循环之前，PTC反应的InfA, swInfA, swH1和RP反应应出现阳性结果。如果没产生预期的阳性结果则视为无效，应严格遵照操作程序进行重复实验。确定PTC反应失败原因，订正并记录错误原因及更改方案。不再使用没产生预期结果的PTC试剂。（4）当所有对照都满足要求后，如果InfA反应增长曲线与阀值线在40个循环内有交叉时，则样本被视为A型流感病毒阳性。如果A型流感病毒反应呈阳性，那么Univ SW 和/或 SW H1也可能呈阳性。如果样本InfA和特异亚型反应（swInfA和swH1）的反正增长曲线与阈值线在40个循环内有交叉，则视该样本为猪流感病毒A/H1阳性。如果样本只有InfA和一个亚型的反应阳性或只有InfA阳性，请联系CDC做进一步指导。（5）在所有对照都满足要求的前提下，如果在40个循环内，待测样本的所有InfA反应阴性则视该样本为阴性。8、限制规定1）实验员在实际操作之前应进行操作程序和试验结果分析的培训，熟练掌握后方可进行试验。2）当样本量不足可能会产生假阴性结果，造成的原因可能是不当的收集，运输或处理。3）如果反应中存在过量的DNA / RNA模板时也可能出现假阴性。如果某样本的RP反应被抑制，则可以将提取的RNA进行2倍或更大倍数的稀释（例如1：10或1：100）来重复试验。9、备注引物和探针参见英文版P7。附件4real-time RT-PCR方法检测鉴定甲型H1N1流感操作规程（英文版）附件5基于RT-PCR的方法检测新的甲型H1N1流感病毒一、目的对采集的可疑病例标本进行检测，筛选甲型H1N1流感病毒并排除季节性H1N1流感病毒。二、引物 NIC引物 引物名称 碱基组成 目的片段大小 备注 FluA FluA-M-F30 TTCTAACCGAGGTCGAAACG 235bp 甲型流感病毒M基因通用检测引物 FluA-M-R264 ACAAAGCGTCTACGCTGCAG H1HA H1 F1147 AAGAGCACACATAATGCCAT 527bp H1N1亚型检测通用引物 H1 R1673 CCATTRGARCACATCCAG HuH1HA H1HA F768 ACTACTGGACTCTGCTGGAAC 327bp 人季节性流感病毒H1N1亚型检测引物 H1HA R1094 CAATGAAACCGGCAATGGCTCC SWH1HA-1 SW-H1 F786 AATAACATTAGAAGCAACTGG 153bp 此次甲型H1N1亚型流感病毒引物 SW-H1 R920 AGGCTGGTGTTTATRGCACC RnaseP RnaseP F AGA TTT GGA CCT GCG AGC G 约80bp 与real-time PCR中RnaseP引物一致 RnaseP R GAG CGG CTG TCT CCA CAA GT 三、材料及仪器1、 RNA 提取试剂盒QIAGen RNeasy Mini Kit （catalog #74104）2、β－巯基乙醇（SIGMA β-Mercaptoethanol Lot 062K0115）3、70%乙醇4、RT-PCR Kit：QIAGEN One step RT-PCR Kit（catalog #210212）5、RNasin Ribonuclease Inhibitor （Promega catalog #N2111）6、检测引物7、Axygen 1.5mL离心管，货号：MCT-150-C8、Axygen 0.2mL PCR管，货号：PCR-02-C9、Axygen 10μL，100μL，200μL，1000μL带滤芯枪头10、10μL，100μL，200μL，1000μL加样器11、可调转速14K离心机：12、旋涡混合器：13、生物安全柜：二级生物安全柜14、PCR仪：15、琼脂糖：Biowest Agarose Distributed by Gene Tech（Shanghai）Company Limited Lot No. 10168516、核酸染料：17、电泳液：5×TBE电泳缓冲液 cat No. 9009032718．电泳槽、电泳仪四、实验步骤（一）RNA提取1、根据标本数量分装RLT液：从Kit中取出RLT液，用1.5mL离心管分装，每管500μL（在体系配制区操作）。2、在生物安全柜内将采样液（鼻拭子、咽拭子、胸水等）或病毒培养物（鸡胚尿囊液或细胞培养液）取100μL加入RLT液管中，充分混匀。3、每管分别加入5μL β-巯基乙醇，混匀后依次加入600μL 70%的乙醇，充分混匀。4、从Kit中取出带滤柱的2mL收集管，打开包装将其做好标记。取步骤（3）中的混合液600μL加入滤柱中，12000rpm，离心15s，弃收集管中的离心液。5、滤柱仍放回收集管上，将步骤（3）剩余的混合液全部吸入滤柱中，12000rpm，离心15s，弃离心液。6、于滤柱中加入700μL Wash Buffer RW1液，12000rpm，离心15s。7、从QIAGEN RNeasy Mini Kit中取一支干净的2mL收集管，将离心后的滤柱移到新的收集管上，于滤柱中加入500μL Wash Buffer RPE液，12000rpm，离心15s。8、弃收集管中的离心液，再于滤柱中加入500μL Wash Buffer RPE液，13000~14000rpm，离心2min。9、将滤柱移到一个干净的1.5mL eppendorf管上，向滤柱中加入30~50μL的Rnase-free Water，室温静置1~3min。10、12000rpm，离心1min，收集离心液即为提取的病毒RNA，立即做实验或-20℃以下保存。注意：Buffer RPE使用之间加44mL无水乙醇。（二）反应体系配制1、实验设计：检测标本RNA质控参数：阴性对照：无菌水（标本RNA提取时，跟标本同时提取无菌水。）阳性对照：已知病毒RNA2、PCR反应体系配制（在体系配制区配反应液）1）按下表加入试剂：PCR反应体系 组 分 体 积（μL） RNase Free Water5×RT-PCR Buffer 11.9×n5×n 10mM dNTP Mixture 1×n Enzyme Mix 1×n RNase Inhibitor 0.1×n 上游引物 0.5×n 下游引物 0.5×n Total 20×n 对每一个建立的反应确定反应数（n=拟进行的PCR管数，包括阴性，阳性对）。考虑到阴性无模板对照，阳性对照，误差，制备过量的反应混合物是必要的。具体如下：（1）如果包括对照，样品的数量（n）为1到14，那么N=n+1；（2）如果包括对照，样品的数量（n）大于15，那么N=n+2。2）将上述反应液混匀，分装到0.2mL PCR小管中，每管20μL，分别做好标记。3）加RNA模板（在核酸提取区）将上述分装好的PCR小管分别加入模板。首先加入阴性对照管（5μL无菌水），然后分别加标本RNA（每管5μL），最后加入阳性对照RNA（每管5μL）。3、RT-PCR反应将上述加好模板的反应管混匀，短暂离心后放入PCR仪进行RT-PCR扩增，反应程序如下： 温度 (C) 时间 循环数 60℃ 1min 1 42℃ 10min 50℃ 30min 95℃ 15min 94℃ 30s 35 52℃ 30s 72℃ 1min 72℃ 7min 1 4℃ 保存 4、RT-PCR产物检测1）2.0%琼脂糖凝胶制备：称取2.0g Agarose，倒入耐热玻璃瓶内，再加入电泳液（1×TBE）100mL，轻轻混匀后加热，使Agarose完全熔化。待Agarose胶温度降至50～60℃左右，加入核酸染料，轻轻混匀（不要产生气泡）。待胶温度降至50℃左右时，将其倒入制胶板，插好电泳梳子。待胶完全凝固（约30～60min）之后，将梳子拔出。2）将制备好的电泳胶放入电泳槽（带梳子孔的一端在阴极），倒入电泳液（1×TBE）浸过胶面即可。3）PCR产物各取10μL，加入2μL上样缓冲液（6×Loading Buffer），混匀后加入电泳胶孔内（先加Marker（DL－2000）5μL，然后依次加标本PCR产物，再加阴性对照，最后加阳性对照产物）。4）电泳电压100V，约30～40min后看结果。5）将电泳胶放入凝胶成像系统观察结果并照相。5、结果判断在系统成立，即阴阳性参考均正常的条件下，各引物所代表意义如下： PCR引物 待检样品1 待检样品2 待检样品3 待检样品4 待检样品5 待检样品6 FluA _ + + + + +/- H1HA _ _ + + + +/- HuH1HA _ _ + _ _ +/- SWH1HA-1 _ _ _ + _ +/- RnaseP + + + + + _ 结果判断 非甲型流感病毒 甲型流感病毒非H1N1亚型 人季节性H1N1亚型流感病毒 猪H1N1亚型流感病毒送国家流感中心复核 送国家流感中心检测 标本不是人源标本/标本中细胞量少/实验或仪器问题
