肌红蛋白是目前人类研究最多的蛋白质之一。曾有报道发现当将马心肌红蛋白表面44位氨基酸从天冬氨酸突变为赖氨酸后,突变肌红蛋白与细胞色素b5之间的电子转移速率提高了一个数量级,但这一蛋白表面氨基酸对马心肌红蛋白结构稳定性及功能的影响未见报道。
为了进一步了解肌红蛋白Mb表面44位天冬氨酸对肌红蛋白结构和功能的影响,本论文以野生肌红蛋白表达质粒pGYM为模板,设计特异突变引物,通过PCR定点突变的方法将肌红蛋白(Mb)基因上的第44位酸性氨基酸天冬氨酸(D)的密码子GAT变成碱性氨基酸赖氨酸(K)的密码子AAA,获得肌红蛋白突变体D44K的基因。将带有突变体的目的基因克隆在肌红蛋白表达质粒pGYM上,经热激转化大肠杆菌BL21,大肠杆菌发酵使突变蛋白D44K大量表达、收集菌体。酶法裂解细菌,依次用硫酸铵沉淀、离子交换柱层析、凝胶柱层析分离纯化突变蛋白,其纯度可达96﹪。用圆二色谱和紫外可见光谱分别研究野生型肌红蛋白及突变体(D44K)的耐热、耐酸及盐酸胍诱导的变性过程,实验结果表明:用碱性氨基酸Lys取代酸性氨基酸Asp44残基,增强了肌红蛋白耐热、耐酸变性能力,导致蛋白质的热变性中点温度Tm由71.9℃提高到75.1℃、酸变性中点(pH)1/2从3.95降到3.88,但在盐酸胍溶液中,突变体易变性,其变性中点浓度Cm从1.88mM降为1.75mM。以愈创木酚为底物分别测定了不同条件下Mb(WT)和Mb(D44K)的过氧化物酶活性,实验结果表明:以愈创木酚为底物时,Mb(D44K)的Km为1.9mM而Mb(WT)的Km为3.3mM。Mb(WT)和Mb(D44K)过氧化物酶的最适温度均为50℃,在相同温度下,Mb(D44K)的过氧化物酶活性高于Mb(WT),且其过氧化物酶的热稳定性高于Mb(WT)。同时实验结果表明:Mb(D44K)过氧化物酶的最适pH为5.0,且在宽的pH范围内仍保持高过氧化物酶活性,而Mb(WT)过氧化物酶的最适pH5.5,在相同pH下,Mb(D44K)过氧化物酶对酸碱的稳定性高于Mb(WT),且两者在碱性溶液中其酶活性受到抑制。
土壤重金属污染在全球范围内正在变成不可忽视的环境问题,植物修复法拥有无二次污染和实施方便等特点,使该法在未来具有极佳的发展空间。
使用螯合剂配合植物修复则可以解决植物提取重金属效率过低的问题,从而大大提升植物修复的应用价值。但是目前大多数螯合剂都存在难以降解或螯合力低等种种问题。聚天冬氨酸因其可螯合重金属且可降解的属性在这一领域具有先天的优势。本论文在实验室利用水相法制备了聚天冬氨酸及其三种衍生物,在环境友好的基础上为聚天冬氨酸接枝了有不同官能团的侧链。
同时利用计算机分子动力学的方法模拟了几种螯合剂对重金属的吸附行为,对实验起到了指导作用。水溶液实验证明了几种聚天冬氨酸螯合剂对四种重金属离子良好的螯合性能,对重金属离子的去除率最高达95%以上,这几种螯合剂对pH和温度等条件有不同的敏感性。通过紫外分光光度法测定的聚天冬氨酸对重金属的螯合稳定常数均高于105,是优秀的螯合剂材料。土柱淋洗实验结果表明,聚天冬氨酸及其改性物可以出去土柱中50%以上的重金属。盆栽实验证明,本论文合成的新型螯合剂通过活化重金属以及促进植物生长方面作用,可以将玉米富集重金属的总量提高2.2倍至7倍不等。
天门冬氨酸(artic acid;Asp)的化学名称为2氨基4羧基丁酸,它是一种脂肪族的酸性的极性α氨基酸[1]。天门冬氨酸是人体的非必需氨基酸和生糖氨基酸,是神经递质[1]。
天冬氨酸是构成蛋白质的基本单位,是组成人体蛋白质的21种氨基酸之一,氨基酸除了脯氨基酸为亚氨基酸外,其他氨基酸均为α氨基酸。组成蛋白质分子的氨基酸都是L氨基酸,但近年内证实了它们可以异构为D氨基酸,具体机制还未研究。根据R基团的不同,氨基酸可分为3大类:含有二羧基一氨基的氨基酸为酸性氨基酸,如天冬氨酸和谷氨酸;含有二羧基一羧基的氨基酸为堿性氨基酸,如赖氨酸、精氨酸和组氨酸;含有一羧基一羧基的氨基酸为中性氨基酸,如甘氨酸、丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、酪氨酸、苏氨酸和丝氨酸等。由于它们在同一pH环境中,各类氨基酸的带电状态不同,即它们具有不同的等电点(PI),这是电泳法和色谱法分离氨基酸的原理。氨基酸种类繁多,理化性质相似,并同时存在于各种生物样品中,因此检测各个氨基酸时必须先将它们分别检测。20世纪40年代出现的离子交换树脂色谱分离法由Moore和Stein发明。20世纪50年代未他们又设计了自动装置,但分析一个样品需一周。20世纪60年代的仪器将分析时间缩短为一天。20世纪70年代再缩短为几小时和一小时左右。同时样品量也从mmol减少到nmol,使灵敏度提高千、万倍,并采用了自动化分析仪,使得各种生理体液,如血浆、血清、尿液、脑脊液、羊水、房水、 *** 、乃至细胞内液(如红细胞、白细胞和肌肉)的用量只需数十至数百微升,在2~4h内,即可得出天冬氨酸的含量。
天冬氨酸;Asp
天门冬氨酸
血液生化检查 > 氨基酸、氮化物、有机酸测定
同氨基酸自动分析仪测定。
同氨基酸自动分析仪测定。
同氨基酸自动分析仪测定。
30~69μmol/L。
升高:慢性肾功能衰竭、婴儿腹泻。
(1)正常人血浆氨基酸浓度呈昼夜性波动,以早晨8~10时为高峰,午夜为低谷。抽血测定时,要避免食物消化吸收后的影响,应在清晨空腹采血为好。
(2)若标本溶血不宜采用,否则可导致测定结果假性升高。
天冬氨酸又称天门冬氨酸,是一种α-氨基酸,天冬氨酸的L-异构物是20种蛋白胺基酸之一,即蛋白质的构造单位。它的密码子是GAU和GAC。它与谷氨酸同为酸性氨基酸。天冬氨酸普遍存在于生物合成作用中。它是生物体内赖氨酸、苏氨酸、异亮氨酸、蛋氨酸等氨基酸及嘌呤、嘧啶碱基的合成前体。它可作为K+、Mg2+离子的载体向心肌输送电解质,从而改善心肌收缩功能,同时降低氧消耗,在冠状动脉循环障碍缺氧时,对心肌有保护作用。它参与鸟氨酸循环,促进氧和二氧化碳生成尿素,降低血液中氮和二氧化碳的量,增强肝脏功能,消除疲劳。
老年痴呆症发病常很隐匿,不为人们所注意,因此,正确认识痴呆早期症状,使病人得到及时治疗,延缓进展,就显得非常重要。为此,下面我整理了预防与治疗老年痴呆症的方法以供大家阅读。
预防老年痴呆症的方法
一级预防
指预防认知功能正常的个体未来出现痴呆。AD的危险因素中,有些因素是无法改变的如年龄、性别和基因型,有些是可以改变的,包括血管性危险因素高血压、吸菸、糖尿病、心房颤动和肥胖和头部外伤,而保护因素包括使用降压药、非甾体类抗炎药、他汀类药物、激素替代治疗、高等教育、节食、锻炼及参与社会益智活动。因为AD的病因尚未阐明,主要应减少危险因素的影响,对易感人群进行监测。
二级预防
指预防已经表现出一些认知损伤的非痴呆个体发展为AD。早发现、早诊断、早治疗对延缓老年痴呆的发展有非常重要的意义。具体措施包括指导特定人群的家庭成员及相关人员掌握痴呆的常见早期症状,讲解痴呆的预防知识,指导特定人群定期进行精神状态及智慧状况的自我评定,力争做到痴呆的早发现;并对检查发现的可疑患者做好其本人和家属工作,就近及时到专科医疗机构进行检查,早诊断,早治疗;定期进行家庭访问,提供相应的咨询服务和健康指导。
轻度认知损害MCI被认为是AD的危险状态,每年有10-12%的人群发展为AD,对MCI人群进行积极干预有望预防AD的发生。但目前研究尚未发现预防MCI向AD演变的特定方法。
治疗老年痴呆症的方法
药物治疗
国内外批准用于阿尔茨海默病治疗的药物主要有胆碱酯酶抑制剂和谷氨酸受体拮抗剂两类:
1胆碱酯酶抑制剂:通过抑制胆碱酯酶而抑制乙酰胆碱降解并提高活性,改善神经递质的传递功能。胆碱酯酶抑制剂是目前唯一得到验证的能够改善AD患者症状的药物。
常用药物及用法:
①多奈哌齐donepezil:起始剂量2.5-5mg/d,每天一次,睡前口服;4-8周增至10mg/d,此为最大推荐剂量。服药后出现严重失眠的患者可改为晨服。
②重酒石酸卡巴拉汀rivastigmine:起始剂量1.5mg,每天2次。如果能耐受,可逐渐加量;最大剂量6mg,每天2次。如果漏服或多服,可能会出现不良反应。当出现不良反应时,可考虑减量至前一能耐受的剂量。
③加兰他敏galantamine:口服,一日2次,建议与早餐及晚餐同服。起始剂量: 推荐剂量为一次4mg,一日2次。治疗过程中保证足够液体摄入。医师在对患者临床疗效及耐受性进行综合评价后,可以将剂量逐渐提高到临床最高推荐剂量,一次12mg,一日2次。
胆碱酯酶抑制剂一般耐受良好,但常见胃肠道不良反应如恶心、腹泻和呕吐,有时可能会导致部分患者停药。
2谷氨酸受体拮抗剂:
盐酸美金刚memantine是N-甲基-天冬氨酸NMDA受体激动剂,目前也已批准用于AD。其药物机制尚未完全清楚,可能与其非竞争性地激动NMDA受体,从而保护胆碱能神经元免受兴奋性氨基酸毒性破坏有关。可用于中晚期AD患者,研究显示对中重度患者整体转归、日常生活能力和行为有明显作用,其中妄想、激越或攻击性和易激惹是改善最明显的症状。该药的不良反应较少,包括幻觉、意识模糊、头晕、头痛等。发生率低的不良反应有焦虑、肌张力增加、呕吐、膀胱炎、 *** 增加。为了减少副作用的发生,应注意逐渐加量达到维持剂量:自每日 5mg半片,晨服起,每周递增5mg剂量,每日最大剂量20mg。
美金刚与胆碱酯酶抑制剂联合用药可能比单独应用胆碱酯酶抑制剂更有效,但还需进一步研究证实。
3其他药物
很多其他药物,如吡拉西坦、尼麦角林、司来吉兰、长春西汀、维生素E和己酮可可碱等也治疗AD的报道,但疗效尚未得到证实。
草药制剂包括银杏叶提取物和石杉碱甲,银杏叶提取物用于治疗AD的报道相互矛盾。目前倾向于无效。石杉碱甲是中草药中分离得到的石杉碱类生物碱,是一种天然的胆碱酯酶抑制剂,在我国已经在临床使用,但其疗效有待进一步证实。
4对行为和精神症状BPSD的治疗
对出现BPSD的患者,首先应仔细查询诱因和或 加重因素,包括环境因素、生理问题感染、便秘、药物、抑郁和或精神病。如有可能应首先尝试使用安全的非药物管理教育、锻炼、芳香治疗、感觉 *** 、个性化音乐等,症状可能会在短时间内自然消失。
①抗精神病药物:可以减少精神行为症状,尤其是利培酮对激越攻击性精神症状已证实有效。但抗精神病药物都有较严重的不良反应,包括增加脑卒中危险、增加病死率、运动障碍及认知障碍,用药需谨慎,只有对中到重度症状的患者才能进行低剂量、短期用药,并应仔细评价风险收益关系,并与看护者、如有可能与患者讨论后才能用药。
②情感稳定剂:卡马西平可能对缓解攻击性行为有帮助,但多数丙戊酸试验结果显示没有疗效。
③抗抑郁药:对AD患者有抑郁、焦虑表现者建议应用抗抑郁药,如5-羟色胺再摄取抑制剂SSRIs类药物治疗,改善抑郁相关的神经精神症状,传统三环类抗抑郁药如阿米替林,丙咪嗪有抗胆碱能不良反应,应该避免使用。
④苯二氮卓类药物:苯二氮卓类药较抗精神病药有更多的不良反应,只偶尔用于有些患者的激惹或焦虑较突出时,应该避免长期使用,不良反应包括过度镇静、增加跌倒、呼吸抑制、认知功能恶化、谵妄及增加情绪低落的风险,还可能出现苯二氮卓类药物依赖。
心理社会治疗
是对药物治疗的补充。应鼓励早期患者参加各种社会活动和日常生活活动,尽量维持其生活自理能力,以延缓衰退速度,但应注意对有精神、认知功能、视空间功能障碍、行动困难的患者提供必要的照顾,以防意外。患者如外出活动无人陪同时需要随身携带身份证明或联络方式,以防走失。鼓励家庭和社会对患者多予照顾和帮助,进行康复治疗和训练。 如何防治老年痴呆症的人
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