论细胞生物学的发展 悠悠300余年，关于细胞的研究硕果累累；近50年来更进入了分子水平，老树又绽新花。许多研究成果已经或将要走进我们的生活：植物细胞在培养瓶中悄然长成幼苗；动物体细胞核移植诞生了克隆动物；不同生物细胞间DNA的转移创造出新的生物类型及其产品；病危的生命期盼着干细胞移植的救助…… 现在，生物学在人类的生产生活中的使用愈加广泛。美国细胞生物学家威尔逊曾经说过：“每一个生物科学问题的答案都必须在细胞中。”这句话明显说明了细胞生物学对整个生物科学的研究有着怎样的重要性。细胞生物学的发展，越来越受到人们的重视。 谈起细胞生物学，不得不提的是建立于19世纪的《细胞学说》。《细胞学说》的建立可谓是自然科学史上的一座丰碑。《细胞学说》的两位建立者——德国科学家施莱登和施旺。经过长时间不断的探索和研究，分别从结构、功能和分裂三个方面对细胞进行了探究，并从中提炼出了三个要点，构成了《细胞学说》的主体。《细胞学说》的建立，不仅为达尔文的《进化论》奠定了基础，更为后人对细胞生物学的研究，做出了巨大贡献。 在细胞学说创立的100年间，人们对细胞的研究基本停留在简单观察和形态描述的水平，细胞在生物学家的眼中多多少少还像一团胶状物，里面杂乱地散布着一些含混不清的东西。此时出现了一名科学家——美国的细胞生物学科学家克劳德，他决心把细胞内部的组分分离开，探索细胞内组分的结构和功能。当时分离细胞器所遇到的困难是今天的人们难以想象的。许多人对他冷嘲热讽，认为把好好的细胞弄碎是毫无意义的。但是克劳德坚信，要深入了解细胞的秘密，就必须将细胞内的组分分离出来。经过艰苦的努力，他终于摸索出采用不同的转速对破碎的细胞进行离心的方法，将细胞内的不同组分分开。这就是一直沿用至今的“转速离心法”。 如果说《细胞学说》是通往细胞生物学的一扇门，那么我认为克劳德的“转速离心法”便是这扇门的钥匙。这种方法的发现，使人类对细胞内部的进一步探究，有着非常重要的意义。 随着对细胞内更深入的探究，人类发现了细胞中一个新的世界。细胞中每个组分如此精巧，一个个小小的细胞器，在细胞中都起到了非常关键的作用。霍中和院士在《细胞生物学》中写到：“我确信哪怕最简单的一个细胞，也比迄今为止设计出的任何只能电脑更精巧。”人类也曾经试图组装出一个细胞。1990年，科学家发现人体生殖道支原体可能是最小、最简单的细胞。1995年，美国科学见文特尔领导的研究小组，对这种支原体的基因组进行了测序，发现它仅有480个基因。如果在480个基因中辨认出对细胞生活必不可少的“基本基因”，那么就有希望人工合成这些基因——一段不很长的DNA分子。 文特尔的方法是破坏一个又一个的基因，看那些基因是绝对不可或缺的，终于筛选出了300个对生命活动必不可少的基因，但其中100个基因的重要性尚不清楚。 文特尔以及其他一些科学家认为，如果能人工合成这300个基因的DNA分子，再用一个细胞膜把它和环境分隔开，在培养基中培养，让他能够生存、生长和繁殖，组装细胞就成功了。科学家现在已经能够合成长度为5000个碱基因对的DNA片段，文特尔估计生殖道支原体的DNA的碱基对比这要多100倍，因此，DNA的人工合成还需要方法上的创新。怎样给DNA分子包上细胞膜也是一个难题。他们的设想是，把生殖道支原体细胞的DNA破坏掉，再把人工合成的基因组“注入”支原体细胞。 有关实验还在进行中，不过可以确信的是，人类对细胞生物学的研究愈加深入，对人类今后的发展就愈加有利。通过不断的科学探究和深入研究，我相信在不久的将来，细胞生物学将成为一个重要的科学领域，会吸引更多的人去探索、研究。它也会绽放出他耀眼的光辉，来迎接着这崭新的时代！
生物学主要是研究生物的普遍规律,医学分为基础医学和临床医学.基础医学主要是研究这些普遍规律在人身上的具体规律,和生物学有相关的内容.比如说：同样对于生物化学,生物学研究的是普遍的代谢过程.而基础医学研究的是人得代谢过程,比较具体.临床医学则是解决临床生病人出现的症状,为病人解决痛苦.
用生物学了解了生物之后，对其病症会有更好的措施，这种措施就是医学
基础医学啊，这是你作为医生必须了解的一些东西。讲道理，作用可能并不多但是学好对你以后的职业生涯和个人水平还是蛮有帮助的
细胞生物学与医学有何关系 关系当然有,应该说细胞生物学是医学的基础课,特别是代谢的关的疾病与细胞生物学就有很多联络,要不就没法解理了
一般，微生物和免疫学时放到同一科目下进行教学的。医学病原学和微生物学是同一学科。
药物制剂的生产比方说发酵工艺，质量控制比方说微生物检测，以及抗生素等药物的临床应用比方说抗菌谱，都和微生物学密不可分的。
检验没有准入制，随便挂靠一些医院甚至不挂靠，医学类专业几乎都能来考，甚至还有一些社会人员。
生理学，细胞生物学、分子生物和生物化学是比较靠生物学的，其余其他学科比如微生物更倾向于医学微生物而不是正统的微生物学知识。当然更有生物学根本不开设的科目：病理学、病理生理、人体解剖等
铃铃铃”下课 *** 响了，同学们纷纷排好队伍走出教室。我站在队伍的第一排，慢慢地往外走。突然，站在我后面的张浩然冲到我前面，由于门太小，站不下两个人，他又跑得太快，，我一下子被拌倒在地。唉哟，真疼！旁边的同学好像都没看到我摔倒在地，像一只只快乐的小鸟在我眼前飞快地闪过。这时，一双可爱的小手温柔地把我扶起来，轻轻地帮我拍掉衣服上的灰尘，然后又把我扶到座位上，说：“林书帆，你没事吧！”“没事。”我抬头一看，白皙的脸蛋映入我的眼睛，圆圆的头上扎着一条长长的马尾辫，高高的鼻梁上架著一副眼镜，眼睛里闪烁著温柔的光芒。原来是她-----陈铭源。 陈铭源是我的好同学。一年级刚入学时，她是我们班的“识字大王”，我们有什么字不认识，都纷纷跑去向她请教，她也很耐心地教我们。她还是我们班有名的“高嗓子”，平时老师上课读作文都请她来读。她的声音很响亮，读起作文琅琅入口，大家都听得入迷了。她平时很爱集体，乐于帮助同学，象这样帮助同学的事情不止一次发生在她身上，比如，今天李硕故意打到我的肚子，又是陈铭源第一个跑过来扶着我，还严肃地批评了李硕。 虽然陈铭源的年纪比我小几个月，但是在我的心目中，她好像是我的好姐姐，保护着我。你们说，这么好的同学，应不应该去夸夸她呢
一、心理健康及其衡量标准健康的概念古而有之。最初，人们所说的健康是指身体健康，强调身体没有缺陷和疾病。随着社会的发展和科学技术的进步，人们对自身的认识不断深化，从而深刻地意识到人体是生理与心理的统一体，心理健康是健康概念中不可分割的组成部分。1946年第三届国际心理卫生大会上，心理健康被界定为：“心理健康是指在身体、智慧以及情感上与他人的心理不相矛盾的范围内，将个人心境发展成最佳的状态。”这个定义强调如果一个人与其他人比较，符合同年龄阶段大多数人的心理发展水平，那么这个人的心理状态就是健康的，反之就是不健康的。后来，国内外学者对心理健康有许多论述，由于每位学者研究的出发点、侧重点各不相同，各执一词，使心理健康至今尚无一个公认的定义。在理解心理健康的概念时，要注意两点：第一，一个人心理是否健康与一个人是否有不健康的心理不是一回事。前者侧重描述一个人的整体状态，是侧重人，后者侧重描述一个人就某事而言的情况，是侧重事。偶尔出现一些不健康的心理，并不意味着心理不健康，心理健康与否是指在较长一段时间内持续存在的心理状态，而不是短暂的、偶尔的现象。第二，心理健康状态不是静止的、固定的，而是动态的、变化的。这意味着一个人的心理既可以从不健康变为健康，也可以从健康变为不健康。此外，心理健康状态从健康到不健康是一种连续的状态。许多情况下，异常与正常之间并没有明确的界限。因此，心理健康的状态与其说是正确与异常这种型别上的差异，不如说是程度上的差异。如何才能知道学生的心理是否健康？什么是心理健康的标准？由于心理健康缺少像生理健康那样较准确的指标，所以关于标准问题在心理学界还存在很大分歧。将已有的中西方学者关于心理健康的标准的界说加以比较，就会发现我国学者倾向于生存标准，而西方学者在重视生存标准的同时，还倡导发展标准。所谓生存标准是立足于个体生命的存在，目标是最有利于储存与延长生物学寿命，故强调无条件适应环境，顺从文化主流；而发展标准则着眼于个人与社会的发展，希望最有价值地创造生活，强调主动地适应和改造环境，通过挖掘个人最大身心潜力求得身心的满足，成为崇高、尊严、自豪的人。这两种标准，在我们确定学生心理健康的标准时都有重大的参考价值。尤其是发展标准的引入，对学校心理辅导工作具有现实意义。一方面从学生身心特点看，发展性问题是比较突出的一个问题，有些表面上看来属于适应的问题，实际是发展受阻的一种变态反应。另一方面，它能够对学生心理辅导与教育实践加以正确引导，顺应当前世界的新趋势。学生心理健康的基本标准应该包括如下几个方面： 1、智力正常智力是学生进行正常生活最基本的心理条件。一个弱智学生是无从谈心理健康的。正常的智力使人在认识世界、认识环境、认识自我时持客观的态度，正确地看待各种事物，不会“自我中心”；在与他人交往时对他人的内心活动有较敏锐的观察力，不会经常误解他人的言行；能够顺利地完成学业。2、能够正确表达自己的情绪情绪在心理健康中起着重要作用。心理健康的人能经常保持积极情绪，对生活中所遭受的冲突和挫折具有必要的忍耐力，对不良情绪能适度宣泄，既不会逆来顺受压抑情绪，也不会为所欲为放纵情绪。尤其对中学生来讲，情绪处于激荡期，更有必要提高情绪的控制力。3、能够悦纳自我心理健康的人具有积极的自我形象，能现实地评价自己的长处与短处，不会过分掩饰自己，不会刻意取悦于人，能够实事求是地看待别人的评价与议论。4、良好的人际关系和谐的人际关系既是心理健康不可缺少的条件，也是获得心理健康的重要途径。心理健康的人乐于与人交往，能与人合作，有正确的交往态度和有效的人际沟通技巧，宽以待人而不失其独立人格，人际关系范围广而稳定，有知心朋友，有亲密家人。5、有较强的自制力自制力是人能动性的体现。心理健康的人学习工作目标明确，自觉性高，能主动克服困难，有毅力。6、保持人格的完整与健康心理健康的最终目标是使人保持人格的完整性，培养健全人格。人格完整健康的主要标志包括人格各个结构要素的全面和谐发展，具有创造性，以及积极进取的人生观。7、能动地适应现实环境不能有效处理与周围现实环境的关系是导致心理障碍的重要原因。心理健康者对现实环境不会单纯抱怨，束手无策，而是能动地适应与改造，对周围现状有较准确的认知，很快调整自己的行为。二、对心理健康教育的三点认识心理健康教育在中小学越来越受到重视。它的理论价值和实践意义也越来越得到证实。为此，对心理健康教育的地位和作用提出三点认识。首先，心理健康教育是素质教育的基本点。在第三次全国教育工作会议上， *** 中央国务院作出了《关于深化教育改革全面推进素质教育的决定》。素质教育的根本宗旨是全面提高国民素质，核心是加强和改进德育工作，重点是培养创新精神和实践能力，基础是健康教育，其中包括身体健康和心理健康。 *** 早年曾写过一篇文章，强调身体健康的重要性，他把身体比喻为“载智之舟”和“寓德之舍”，进而得出结论：“无体即无德智也。”由此引申开来，我们有理由认为“无心既无德智也”。如果一个人心理不健康，再好的德性，再高的智慧，也难以实现其应有的价值。其次，心理健康教育是德育的生长点。随着改革开放和市场经济的发展，人们的心理压力越来越重，心理问题凸显出来。经济发展不平衡造成人们收入差距的扩大，离婚率的上升造成单亲家庭子女的增多，升学、择业的竞争造成了心理负担过重，使得青少年特别是高中生出现一系列心理问题，诸如自卑、孤独、紧张、恐惧、猜疑、忧郁、嫉妒、报复等不良心理状态，造成神经衰弱、精神分裂，甚至出现离家出走、杀人、自杀等恶性事件。实践证明，解决这些问题，不是政治教育、思想教育、法纪教育、道德教育可以完全奏效的，需要加进心理健康教育。心理健康教育针对不同年龄阶段学生的心理特点和心理问题，进行有针对性和实效性的心理健康和心理发展教育，重点是增强学生的心理适应能力、心理承受能力和心理调节能力，以一种健康的心理、良好的心境、积极的心态面对学习和生活。第三，心理健康教育是德育与智育的结合点。过去，德育与智育往往存在“两张皮”的现象。德育工作者曾经试图解决这个问题，但总是收效甚微。现在，心理健康教育找到了解决这一问题的突破口。这是因为，心理健康教育既有德育心理又有智育心理，这二者相互依存，相互转化，互为条件，互相补充，辩证统一，相得益彰。智力活动的过程是观察、注意、记忆、想像、思维的过程。而这一过程必然伴以兴趣、爱好、情感、意志，乃至理想、信念、价值观。前者是智力因素，后者是非智力因素，二者的结合才是心理活动的全过程。健康的心理有助于智力因素和非智力因素的共同发展。可以认为，德育中的思想教育、政治教育、道德教育和法纪教育对智力的发展虽然有关系，但不具有完全正相关的关系，而心理健康则对智力的发展具有完全正相关的关系。因此，心理健康教育是德育与智育最好的结合点。三、心理咨询与心理治疗（一）咨询的特征及内涵咨询在国外是一个涵盖非常广的概念。涉及职业指导、教育辅导、心理健康咨询、婚姻家庭咨询等生活的各个方面。各种各样的咨询虽不尽相同，但都具有某些共同的特征。共同的特征之一是咨询体现著对来访者进行帮助的人际关系。咨询过程是建立在咨询与来访者良好的人际关系基础之上的。经过专业训练的咨询者利用其专业技能及所创造的良好咨询气氛，来帮助人们学会以更为有效的方式对待自己、对待他人和生活中的难题。许多咨询工作者认为，定义心理咨询必须涉及与来访者的关系，这与在咨询中使来访者产生变化是同样不可缺少的。他们认为咨询中最根本的核心条件就是共情、理解和尊重来访者。他们所关注的不仅是咨询者的技能，同样也注意咨询者对来访者的基本态度或对他人关心的能力。共同的特征之二是咨询是一系列心理活动的过程。从咨询者的角度看，帮助来访者更好地理解自己，更有效地生活，其中包含有一系列的心理活动在内。咨询过程中，咨询者所运用的有关理论与技术，也是以心理学为基础的。从来访者的角度看，来访者在咨询过程中需要接收新的资讯，学习新的行为，学会解决问题的技能及作出某种决定，这也涉及一系列的心理活动。咨询的第三个共同特征是它属于一个特殊的服务领域。在咨询过程中，咨询者可以帮助来访者认识自己，确定目标，作出决定，解决难题。特殊的咨询，还可提供有关职业、学业、疾病的康复、心理卫生、婚姻家庭、性问题、宗教和价值观的选择，事业的发展，以及其他一些有关问题的咨询服务。在一些发达国家，咨询心理学家活跃进中小学、大学、医院、诊所、康复中心、工矿企业、社会服务机构以及各个社群之中，以帮助人们在个人、社会、教育、职业等方面达到更有效地发展及取得更大的成就。在了解了咨询所具有的上述特征之后，我们又重新面对咨询的定义问题。我国的阮芳赋先生曾推荐里斯曼1963年对咨询所下的定义：“咨询乃是通过人际关系而达到的一种帮助过程、教育过程和增长过程”。这一定义基本表达了咨询的实质内容。以此定义为基础，结合我们前面所谈到的咨询的几种特征，在这里，我们可以给咨询作如下定义：咨询是通过人际关系，运用心理学方法，帮助来访者自强自立的过程。这是我们根据对咨询的实质的理解作出的定义。这一定义涉及到了我们对咨询特征的认识，（1）咨询须建立良好的人际关系；（2）咨询是在心理学的有关理论指导下的活动；（3）咨询是对来访者进行帮助的活动过程。此外，这一定义还涉及到咨询的根本目的；（4）帮助来访者自强自立。这一目标着眼于帮助来访者认清自己的问题所在，通过咨询，能提高应付挫折和各种不幸事件的能力，使之能够自己面对和处理自己人生中的问题，即使其能够自强自立。在这里，帮助的过程实际上就是一种教育的过程和使来访者产生某种转变，促使他们成长的过程。（二）心理治疗一种极有影响的观点是沃尔培格1967年的定义：心理治疗是针对情绪问题的一种治疗方法，由一位经过专门训练的人员以慎重细虑的态度与来访者建立起一种业务性的联络，用以消除、矫正或缓和现有的症状，调解异常行为方式，促进积极的人格成长和发展。北京大学陈仲庚教授认为，心理治疗是治疗者与来访者之间的一种合作努力的行为，是一种伙伴关系；治疗是关于人格和行为的改变过程。美籍华裔学者曾文星、徐静认为，心理治疗是指应用心理学的方法来治疗病人的心理问题。其目的在于：通过治疗者与病人建立的关系，善用病人求愈的愿望与潜力，改善病人的心理与适应方式，以解除病人的症状与痛苦，并帮助病人，促进其人格的成熟。从上述的几种定义中，我们不难发现，这些定义或多或少都涉及了下述几个方面，即：（1）治疗是一个过程；（2）是治疗与来访者的关系；（3）治疗者运用有关的心理治疗理论对来访者进行帮助；（4）以消除或缓解来访者存在的问题或心理障碍，促进人格的健康发展。这几个方面，的确反映了心理治疗的工作特点及主要目的。在综合考察了上述几种观点的基础上，我们提出的心理治疗定义如下：心理治疗是在良好的治疗关系基础上，由经过专业训练的治疗者运用心理治疗的有关理论和技术，对来访者进行帮助的过程，以消除或缓解来访者的问题或障碍，促进其人格向健康、协调的方向发展。（三）心理咨询与心理治疗的同异咨询与心理治疗的确有许多重要之处相互重叠，令人感到难解难分。相似之处有：（1）二者所采用的理论方法常常是一致的。例如：咨询心理学家对来访者采用的来访者中心治疗的理论与方法或合理情绪疗法的理论与技术和心理治疗家采用的对同种理论与技术别无二致。（2）二者进行工作的物件常常是相似的。例如：心理咨询人员与心理治疗工作者可能都会面对来访者的婚姻问题。（3）在强调帮助来访者成长和改变方面，二者是相似的。咨询与心理治疗都希望通过帮助者和求助者之间的互动，达到使求助者改变或增长的目的。（4）二者都注意建立帮助者与求助者之间的良好的人际关系，认为这是帮助求助者改变和成长的必要条件。尽管有上述相似之处，尽管一些咨询工作者也做了一些心理治疗工作，一些心理治疗家也在做咨询工作，在咨询与心理治疗之间还是能够找到一些不同点的。结合一些文献中的看法，我们认为咨询与心理治疗的主要区别有如下几点：（1）心理咨询的工作物件主要是正常人，正在恢复或已复原的病人。心理治疗则主要是针对有心理障碍的人进行工作的。（2）心理咨询所着重处理的是正常人所遇到的各种问题，主要问题有日常生活中人际关系的问题，职业选择方面的问题，教育过程中的问题，婚姻家庭中的问题等等。心理治疗的适应范围则主要为某些神经症、某些性变态、心理障碍、行为障碍、心身疾病、康复中的精神病人等。（3）心理咨询用时较短，一般咨询次数为1次至几次；而心理治疗费时较长，治疗由几次到几十次不等，甚至次数更多，经年累月才可完成。（4）心理咨询在意识层次进行，更重视其教育性、支援性、指导性工作，焦点在于找出已经存在于来访者自身的内在因素，并使之得到发展；或在对现存条件分析的基础上提供改进意见。心理治疗的某些学派，主要针对无意识领域进行工作，并且其工作具有对峙性，重点在于重建病人的人格。（5）心理咨询工作是更为直接地针对某些有限的具体的目标而进行的；心理治疗的目的则比较模糊，其目标是使人产生改变和进步。 回答完毕。。
细胞工程论文
细胞工程是生物工程的一个重要方面。总的来说，它是应用细胞生物学和分子生物学的理论和方法，按照人们的设计蓝图，进行在细胞水平上的遗传操作及进行大规模的细胞和组织培养。下面是我为大家整理的细胞工程论文，欢迎阅读。
【摘要】 目的制作去细胞肌肉组织工程支架，并检测其与人羊膜上皮细胞的生物相容性。方法 采用TNT和十二烷基磺酸钠结合的化学萃取方法制作去细胞肌肉组织工程支架，冰冻切片观察其结构。将人羊膜上皮细胞种入支架培养7 d后，用免疫组化检测羊膜上皮细胞的增殖活性、NT3及BDNF的表达,扫描电子显微镜观察其超微结构。结果 支架中细胞去除完全，其主要结构为平行排列的管状结构。细胞外基质的主要成分弹性纤维和胶原纤维保持完好。羊膜上皮细胞在支架里有增殖活性，并呈现NT3、BDNF免疫反应阳性。扫描电镜显示，羊膜上皮细胞在支架中分布均匀，生长良好。结论 成功的制作了去细胞肌肉组织工程支架，其与人羊膜上皮细胞有良好的相容性。
【关键词】 去细胞肌肉;人羊膜上皮细胞;生物相容性
近年来组织工程研究的重要进展之一就是采用自体或异体移植物制作天然生物降解材料的组织工程支架。其中去细胞移植物与机体有良好的生物相容性。去细胞肌肉支架可作为生物工程支架支持神经细胞轴突再生。Mligiliche等〔1〕把去细胞肌肉移植入大鼠坐骨神经缺损处,4 w后发现有大量神经轴突长入去细胞肌肉支架中。由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限，去细胞肌肉支架要发挥更大的作用往往需要向支架中植入种子细胞〔2，3〕。研究表明羊膜上皮细胞可分泌多种神经因子〔4，5〕，促进神经元轴突的生长，是一种良好的治疗神经系统疾病的种子细胞。本研究利用化学去细胞的方法制成去细胞肌肉支架，并把羊膜上皮细胞种入去细胞肌肉支架内，探究两者的相容性，为开展组织工程治疗神经系统方面的疾病提供新的途径。
1 材料与方法
1.1 材料
1.1.1 实验动物 Wistar 大鼠由吉林大学白求恩医学院实验动物中心提供。
1.1.2 试剂 IMDM培养基及小牛血清由Hyclone 公司提供。5′溴尿嘧啶核苷(BrdU) 及BrdU 单克隆抗体购自Neomarker公司;神经营养素(NT)3,脑源性神经营养因子(BDNF)兔抗人多克隆抗体购自武汉博士德公司，SABC免疫组化试剂盒购自福州迈新生物公司。人羊膜上皮细胞株为本实验室保存。
1.2 方法
1.2.1 去细胞肌肉支架的制备 参考 Brown等〔6〕去细胞膀胱的制作方法制备去细胞肌肉支架，简述如下：取Wistar大鼠腹锯肌，放入蒸馏水中，在摇床中以37℃、50 r/min摇48 h后,转入3%的TritonX100溶液,摇床中37℃、50 r/min摇48 h。然后放入蒸馏水中，摇床37℃、50 r/min摇48 h。换成1% SDS溶液，摇床37℃，50 r/min摇48 h。PBS洗24 h。PBS中4℃保存备用。
1.2.2 支架形态结构的观察及成分鉴定 肉眼观察去细胞肌肉的形态。去细胞肌肉用4%多聚甲醛PBS固定1 h，5%蔗糖90 min，15%蔗糖90 min，30%蔗糖过夜以梯度脱水，OCT包埋，冷丙酮速冻，之后放入-70℃冰箱保存。恒冷箱切片机切片，HE 染色，观察其内部结构。此外对切片进行Van Gienson(VG)染色和 Weigert染色(VG+ET染色)检测支架的细胞外基质成分。
1.2.3 人羊膜上皮细胞的培养 人羊膜上皮细胞在DMEM培养液中(含10%胎牛血清，100 U/ml青霉素，100 mg/ml链霉素，200 μg/ml的谷氨酰胺)，37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，待单层培养细胞生长至80%汇合后，传代培养。
1.2.4 人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架相容性的鉴定
1.2.4.1 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合，弃去培养液，0.25%胰蛋白酶消化，当胞体回缩，细胞间隙变宽时，用血清终止消化，反复轻吹瓶壁细胞，制成单细胞悬液于离心管中，1 000 r/min，离心3 min。用DMEM重悬细胞。用1 ml注射器吸入细胞悬液，以2×106/ml 密度注入去细胞肌肉支架中分装至24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养，隔天换液，培养1 w。掺入Brdu(终浓度为10 mg/L)，继续培养1 d后，恒冷箱切片机切片(方法同前)。切片经PBS 洗后，3% H2O2灭活内源性过氧化物酶10 min，血清封闭20 min;一抗用BrdU(1∶1 000稀释)单克隆抗体，BDNF和NT3多克隆抗体(1∶100稀释)4℃孵育过夜，PBS 洗后，二抗37℃孵育30 min，PBS 洗后，SABC37℃孵育30 min，DAB显色。光镜下观察。
1.2.4.2 扫描电子显微镜鉴定羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架上的生长情况 取生长良好的人羊膜上皮细胞，80%细胞接近融合时，用上述方法消化下来后，把羊膜上皮细胞种植到去细胞肌肉支架中，放在24孔板中，在37℃、5 % CO2及饱和湿度条件下的细胞培养箱中培养7 d后，用2%戊二醛固定后，梯度乙醇脱水，CO2临界点干燥，镀膜，采用扫描电子显微镜观察并拍照。
2 结 果
2.1 支架的组织结构与成分 去细胞肌肉外观呈乳白色,半透明,质地柔软。从大体上看，肌肉去细胞前后整体大小与形状无显著变化。支架纵切面的HE染色观察可见骨骼肌细胞成分消失,而纤维网架结构保持完整，支架内主要为平行管道。VG+ET染色证明支架成分主要为胶原纤维和弹力纤维等细胞外基质成分，胶原纤维为红色波浪状结构，弹性纤维为蓝色丝状结构，见图1。
2.2 羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架的兼容性 见图2，HE染色显示人羊膜上皮细胞在支架中生长良好，分布均匀(图
图1 去细胞肌肉支架大体与组织切片染色
图2 去细胞肌肉支架的病理图片2A)。免疫组化染色显示，BrdU阳性细胞数目多，提示支架中的人羊膜上皮细胞有增殖能力(图2B)。抗NT3和BDNF染色显示，支架中的人羊膜上皮细胞含有NT3、BDNF阳性颗粒，呈棕褐色分布在细胞质中(图2C，2D)。JSM5600LV扫描电子显微镜显示，在支架内部分布有大量细胞，细胞在支架中分布比较均匀，生长状态良好(图2E)。
3 讨 论
理想的支架材料应与细胞外基质类似，与活体细胞有良好的生物相容性〔7，8〕。去细胞肌肉作为治疗神经损伤的生物工程支架材料有如下优势：(1)去细胞肌肉的细胞外基质成分对组织细胞的'迁移、黏附、生长代谢都有重要作用，研究表明再生的轴突可以很好的黏附在去细胞肌肉支架上〔9〕。(2)去细胞肌肉的排列结构与神经膜管类似,仅在直径上略大于神经膜管〔10〕，它们提供了轴突可生长穿过的足够空间〔9〕，该结构对于诱导神经轴突再生是十分重要的。 Fansa等比较了接种施万细胞的不同去细胞生物材料(肌肉，静脉，神经外膜)桥接缺损的外周神经的结果，发现缺乏神经膜管样结构的去细胞肌肉支架(静脉和神经外膜支架)中的再生轴突是无序和排列混乱的，而有神经膜管样结构的去细胞肌肉支架中的再生轴突是有序排列的〔11〕。这种轴突再生的有序性对神经损伤的轴突再生同样也是十分重要的。(3)去细胞肌肉引起的免疫排斥反应较小〔9，12〕。这些优势都说明去细胞肌肉可作为治疗神经损伤的理想的材料。本研究采用的制作去细胞肌肉的方法主要用来减少异种移植材料的免疫排斥反应。该方法能有效的去除脂膜和膜相关抗原以及可溶性蛋白，并能有效的保留细胞外基质成分的原始空间结构。肌细胞正常呈平行分布，其细胞外基质成分也是平行分布的，从支架纵切面的结果看支架的纤维成分也是平行排布的，VG+ET染色结果显示细胞外基质的主要成分胶原纤维和弹性纤维保持完好。这些结果进一步证实此方法可成功制备去细胞肌肉支架。
由于单独应用去细胞肌肉支架治疗神经系统疾病的效果有限〔13〕，去细胞肌肉的生物相容性也有待验证。本研究用人羊膜上皮细胞作为种子细胞种入去细胞肌肉支架以探讨其相容性。研究表明，羊膜上皮细胞中含有多种生物活性因子，包括黏蛋白、转移生长因子、前列腺素E、表皮生长因子样物质,IL1，IL8 等因子，另外，还可分泌BDNF和NT3等重要的神经营养因子〔4〕。其中层黏蛋白、BDNF和NT3等生物活性因子对神经损伤的治疗具有十分重要的作用。羊膜上皮细胞可作为一种较理想的种子细胞，与去细胞肌肉支架结合可能成为治疗神经系统疾病的一个理想的组织工程材料。本实验观察到人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中分布均匀，抗BrdU、BDNF及NT3免疫组化显示去细胞肌肉支架中羊膜上皮细胞有良好的增殖能力，并能表达BDNF和NT3，说明羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中保持了良好的生物学活性。以上结果一方面证明了本研究制作的去细胞肌肉支架有良好的生物相容性，另一方面为应用羊膜上皮细胞和去细胞肌肉支架结合治疗神经系统疾病提供了理论和实验基础。
总之 ，本研究成功制备了去细胞肌肉支架，并证实人羊膜上皮细胞在去细胞肌肉支架中能分泌重要的神经营养因子，人羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体为神经缺损再生提供了基底膜、神经营养因子等种种有利因素，构成了良好的神经再生微环境，有利于使神经缺损得到较好地修复，为进一步研究羊膜上皮细胞与去细胞肌肉支架桥接体治疗神经损伤奠定了一定的实验基础。
【参考文献】
1 Mligiliche N，Kitada M，Ide C.Grafting of detergentdenatured skeletal muscles provides effective conduits for extension of regenerating axons in the rat sciatic nerve〔J〕.Arch Histol Cytol，2001;64 (1):2936.
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