1 、杭青梨试管苗移栽前后叶片与根部形态结构之电镜观察。莱阳农学院学报，1987年，第2期，戴洪义、沈德绪、林伯年。2、砂梨品种的试管繁殖。植物生理学通讯，1988年第2期，戴洪义、沈德绪、林伯年。3、葡萄81-8单系的倍性鉴定。莱阳农学院学报，1988年第4期，孙敏、戴洪义。4、砂梨茎尖与叶芽的离体培养。浙江农业大学学报，1988年第4期，戴洪义、沈德绪、林伯年。5、枣疯病热处理脱毒之初步研究。落叶果树，1988第4期，戴洪义、沈德绪、林伯年。6、果树组织培养繁殖的研究进展。莱阳农学院学报，1988年第3期，戴洪义、孙敏。7、中国梨同物异名地方品种鉴定方法。国际园艺植物种质资源会议论文集（英文版），万国学术出版社，l989年，辛淑亮、戴洪义、王奎先。8、中香梨授粉品种选择。落叶果树，1990年第1期，戴洪义。9、葡萄染色体倍性与气孔性状的相关及其判别分析。葡萄栽培与酿酒，1990年第2期，戴洪义、孙敏、商传明。10、苹果果皮细胞膜结构分化与虎皮病的关系。果树科学，第9卷第4期，1992年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义。11、葡萄资源的研究进展。葡萄栽培与酿酒，l992年第4期，戴洪义、于士梅、刘玉军。12、PP333对梨果实生长和酚类物质合成的影响。园艺学报，1993年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义。13、苹果酚类物质合成的调节及其对果实品质的影响。中国农业科学，261（4），1993年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义、刘润进。14、接种物形式和寄生植物对丛枝菌真菌发育的影响。植物生理学报，1994年第1期，戴洪义、刘润进、祝军。15、低温对苹果储藏过程中H202水平的影响。果树科学，1994年，鞠志国、原永兵、刘成连、戴洪义。16、矮樱桃的茎尖培养与快速繁殖。园艺学进展，农业出版杜，1994年11月，王然、戴洪义、周爱琴。17、柱型苹果的生物学特性。园艺学进展，农业出版社，1994年11月，戴洪义、王善广、于士梅、王然。18、莱阳梨花期晚霜冻害调查。烟台果树，l994年第4期，戴洪义、姜润丽。19、去病毒大樱桃砧木‘Colt’的试管繁殖。植物生理学通讯：第3l卷第1期，1995年，戴洪义、王然、周爱琴。20、果树综合生产一一国外果树生产新潮流。世界农业，1995年第一期，戴洪义。21、层积和预处理对Wenbo（拼音）和木瓜种子发芽到影响。中国科协第二届青年学术年论文集，1995，戴洪义、Frank H. Alston。22、Research on Quince as a rootstock for pear。纪念吴耕民教授诞生100周年论文集，中国农业科技出版社，1995年4月，戴洪义、Frank H. Alston。24、柱型苹果研究进展及其发展前景。果树科学，第13卷第一期，1996年，戴洪义、于士梅。25、柱型苹果引种研究。果树科学，15（1），1998，戴洪义、王善广、于士梅、王然、于秀敏。26、苹果梨品种资源的研究利用及其开发前景。落叶果树，1998年第三期，戴洪义、王然、王彩虹。27、柱型苹果的研究和利用现状。河北林果研究，2000，15（12），王彩虹、田义轲、戴洪义。28、苹果基因组AFLP分析的DNA模板的制备技术体系的建立。山东农业大学学报，2001（2），王彩虹、王倩、戴洪义等。29、与苹果柱型基因（Co）相关的AFLP标记片断的克隆。果树科学，2001，18（4），王彩虹、王倩、戴洪义等。30、加快高等教育的改革和创新。发展论坛，2001（9），70－71，戴洪义。32、与苹果柱型基因（Co）紧密连锁的分子标记的筛选。农业生物技术学报，2001年（2），187-190，王彩虹、王倩、戴洪义等。33、苹果柱型基因Co的一个AFLP标记的SCAR转换。园艺学报，2002，29（2）：100-104，王彩虹，戴洪义等。34、A report on breeding columnar apple varieties，果树学报，2003年，Vol.20 No.2（2）79-83，戴洪义、王彩虹等。35、果树自交不亲和性的研究进展。莱阳农学院学报，2002年,Vol.19，No.3，王爱华、戴洪义36、甜樱桃胚培养研究。莱阳农学院学报，2003，Vol.20，No.3，王爱华、戴洪义、于士梅37、一个与苹果柱型基因（Co）连锁的RAPD标记。西北植物学报，2003，Vol.23 No.12（2）田义轲，王彩虹，张继树，戴洪义，初庆刚等。39、甜樱桃品种红灯与佐藤锦的 S 基因型测定。山东农业科学 2004 第5期25-26，戴洪义、王爱华40、苹果柱型基因RAPD标记的克隆及序列分析。莱阳农学院学报，2004，21（4）：265-268，田义轲、王彩虹、张继树、戴洪义、赵静。41、辣椒体表茸毛与抗蚜虫关系的研究。莱阳农学院学报，2004，21（4）：293-295，尚宏芹、刘建萍、戴洪义等42、品种权申请公告?苹果属。农业植物新品种保护公报，2004，（3）：41~46，戴洪义、祝军、王然、王彩虹、于士梅、王成荣等。43、12个苹果新品种简介。中国果树，2004，（6）：7~8，祝军，戴洪义。44、菊苣组织培养。植物生理学通讯，2005，41（2），201，尚宏芹、焦红良、，戴洪义。45、拥有我国自主产权的6个苹果新品种。落叶果树，2005，37（1）20-21，祝军、戴洪义。46、Mapping Co，a Gene Controlling Columnar Phenotype of Apple Tree，with Molecular Markers，Euphytica，2005，145，181~188，Yi-Ke Tian，Cai-Hong Wang，Ji-Shu Zhang,Celia James&Hong-Yi Dai（戴洪义，通讯作者）47、浓缩苹果汁非酶褐变的研究进展.莱阳农学院学报，2006，23（1）:23-26.周亚平，刘洪涛，戴洪义(通讯作者)48、苹果制汁新品种鲁加4号浓缩汁储藏过程中稳定性的影响因素。果树学报，2006年，Vol.23 No.（1）65-68，周亚萍，刘洪涛，何维华，刘春辉，祝军，戴洪义（通讯作者）49、与苹果果皮红色性状相关的RAPD分子标记的筛选。果树学报，2006，23卷。第2期，165-168，赵静，田义柯，王彩虹，戴洪义，王 东50、西洋梨矮化资源的生物学特性研究。莱阳农学院学报，2006，23（2），119-121，王彩虹，田义柯，戴洪义，代庆海，殷召学，杨晓芹51、苹果浓缩汁美拉德反应有关影响因素的研究。食品科学，2007，28卷，第四期，39-43，周亚萍，王成荣，于士梅，祝军，王然，王彩虹，戴洪义*（通讯作者）52、苹果浓缩汁后混浊的研究进展。饮料工业，2007，第10卷，第7期，3-6，孙海蜂，孙家财，周亚萍，戴洪义*（通讯作者）53、高效液相色谱法同时测定苹果汁中6种酚类物质。分析化学，2007，35卷，第10期1425-1429，吕海涛，孙海峰，曲宝涵，戴洪义54、菊苣的组织培养繁殖的研究。青岛农业大学学报，2007，24卷，第1期，31-34，尚宏芹，于士梅，戴洪义*55、扎实开展整改，巩固评建成效。高等教育研究与实践，2007，第1期，17-19，戴洪义56、实施教育质量与教学改革工程，全面提高人才培养质量。高等教育研究与实践，2007，第2期，1-3，戴洪义57、苹果汁色泽相关性状遗传的研究。果树学报，2008，25卷。第2期，157-161,何维华，周亚平，曲凌慧，刘春辉，于士梅，祝 军，戴洪义*58、苹果果肉中原花青素超声波的辅助浸提。食品与生物技术学报，2008， 27卷第1期，80-83，刘春辉，周亚萍，祝军，戴洪义*59、HPLC法测定苹果浓缩计中的多酚类物质。食品科学，2008，29卷，第4期，314-317，孙海峰，吕海涛，周莎莎，代庆海，周亚萍，戴洪义*60、矮生西洋梨（Pyrus communis L）茎尖离体培养研究。青岛农业大学学报，2008，25卷，第1期，17-20，代庆海，王彩虹，梁美霞，王亮，戴洪义*61、苹果优良酵母菌株的筛选。青岛农业大学学报，2008，25卷，第1期，28-33，杨晓英，丁立孝，梁美霞，戴洪义*62、苹果原汁褐变有关因素的研究。青岛农业大学学报，2008，25卷，第2期，81-83，周莎莎，周亚萍，冯耀祖，戴洪义*63、梨杂交后代果实主要有机酸遗传动态的研究。青岛农业大学学报，2008，25卷，第3期，231-235，王宏伟，王成荣，于淼，戴洪义 王然*64、 梨矮化基因pcDw的SSR标记定位。果树学报，2008，25（3）：404-407，田义柯，王彩虹，，贾彦利，王 亮，戴洪义65、平邑甜茶与M7离体叶片不定芽再生的研究。青岛农业大学学报，2009，26卷，第2期，103-108，魏国芹，梁美霞，李鼎立，孙海峰，戴洪义*66、酚类物质和可溶性蛋白对苹果浓缩汁后浑浊的影响。食品与发酵工业，2009，35卷，第6期，23-27，孙海蜂，孙家财，于士梅，周亚萍，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）67、苹果原生质体培养再生愈伤组织。中国农学通报，2009，第25卷，第20期，179-186，魏国芹，李鼎立，梁美霞，戴洪义*68、柱型与普通型苹果叶片结构与叶绿体超微结构比较。园艺学报，2009，36（10），1504-1510，梁美霞，葛红娟，戴洪义*（通讯作者）69、??离体培养繁殖的研究。山东农业科学，2010，1：5-9，魏国芹，戴洪义，孙玉刚，梁美霞，安淼70、鲜食制汁兼用型苹果优系选育初报，青岛农业大学学报，2009，26卷，第3期，197-202，邵秀红，梁美霞，冯耀祖，祝军，戴洪义*（通讯作者）71、高等教育质量问题与对策研究。高等教育研究与实践，2009，第2期，3-572、.组培和大田条件下苹果叶片结构和表皮特征的比较. 果树学报, 2009,26(06)：781-785，梁美霞，葛红娟，戴洪义*（通讯作者）73、苹果组培苗离体叶片诱导不定芽分化研究 湖南农业大学学报 2009，35（05）：470-473，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）.74、抗生素对菊苣子叶离体分化的影响. 分子植物育种， 2009,7(2):371-374. 梁美霞，戴洪义*（通讯作者）.75、. 菊苣子叶离体培养与植株再生的研究. 北方园艺 2009,03:72-74，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）76、葛红娟.苹果叶片解剖结构和表皮特征的生态适应性.园艺学报(增刊),2009,36（36）:1873，梁美霞,戴洪义*（通讯作者）77、农杆菌介导柱型苹果“鲁加6号”遗传转化体系的建立, 分子植物育种, 2009,7(6):1130-1136，梁美霞，祝军，戴洪义*（通讯作者）.78、玻璃化与正常苹果试管苗的叶片和茎的显微结构比较。植物生理学通讯，2010,46.3.223-227，葛红娟，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）79、优势醋酸菌株QA-9号选育及其初步鉴定。中国酿造，2010,3.46-48，张赞，梁美霞，席超，阎振华，戴洪义*（通讯作者）80.、壳聚糖澄清苹果酒的工艺优化及其效果评价。食品与发酵工业，2010，第36卷第4期，126-129席超，张赞，闫振华，魏国芹，戴洪义*（通讯作者）81、苹果浓缩汁中酚类物质提取方法。 食品研究与开发，2010,第31卷第6期，139-141闫振华，徐坤，张赞，席超，戴洪义*（通讯作者）82、普通型与矮生型梨叶片显微结构比较。西北植物学报，2010,30（8）：1584-1588，葛红娟，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）83、苹果品种华翠果实制汁性评价。中国果树，2010（5）：18-20，康国栋，张玉刚，田义，刘艳艳，丛培华，戴洪义（第二单位，戴洪义为第二通讯作者）84、柱型苹果和矮生型梨组培苗叶片表皮结构研究. 果树学报， 2010， 27（01）：1-7，梁美霞，葛红娟，戴洪义*（通讯作者）.85、利用自动电位滴定法测定果汁中的维生素C含量。果树学报， 2010， 27（06）：1-7，董月菊，梁美霞，戴洪义*（通讯作者）86、苹果玻璃化试管苗生理特性的研究。果树学报， 2010， 27（专刊22-24葛红娟，梁美霞，张玉刚，董月菊，王 英，戴洪义*（通讯作者）87、‘嘎拉’ב特拉蒙’杂交后代中柱型和普通型苹果叶片光合特性比较.果树学报， 2010， 27（专刊）：35-37。张玉刚，梁美霞，祝军，戴洪义*（通讯作者）88、沸石负载壳聚糖对高酸苹果发酵酒的澄清工艺。食品科学，2010，31（22）：164-169.席超，张赞，闫振华，戴洪义*（通讯作者）
⑴Wang Lei,Baskin Carol,Baskin Jerry,Huang Zhenying (通讯作者） and Dong Ming(通讯作者）. Germination of dimorphic seeds of the desert annual halophyte Borszczowia aralocaspica (Chenopodiaceae),a C-4 plant without Kranz -anatomy. Annals of Botany (published online)⑵Yang Huiling,Baskin Carol,Baskin Jerry,Cao Zhiping,Zhu Xuanwei,Huang Zhenying (通讯作者） ,Dong Ming （通讯作者）. 2008. Responses to soil salinity of caryopsis germination,early seedling growth and ramet clonal growth of Bromus inermis ,a dominant perennial grass inhabiting the Otindag Sandland,semiarid China Plant and Soil (in press)⑶Yang Huiling,Zhu Xuanwei,Huang Zhenying (通讯作者） ,Dong Ming（通讯作者）. 2008. Effects ofsoil moisture level on seedling establishment in the psammophyte Hedysarum laeve in the semiarid Otindag Sandland,China . Journal of Arid Environments,accepted. (27) 郝丽珍，杨忠仁，张凤兰，王萍，黄振英（通讯作者）．沙葱种子萌发过程中几种重要营养物质动态变化．林业科学 , ( 接受 ) ． (28) 王宏飞，魏岩，黄振英． 2007. 散枝猪毛菜的种子多型性及其萌发行为． 植物生态学报 , 31 （ 6 ）： 1046-1053 ． (29) 杨慧玲，朱选伟，黄振英（通讯作者），董鸣，曹志平． 2007. 沙埋对无芒雀麦种子萌发、出苗和幼苗生长的影响．应用生态学报（印刷中）(30) 杨慧玲，朱选伟，黄振英（通讯作者），董鸣，曹志平． 2007 ．浑善达克沙地无芒雀麦的空间分布格局。生态学报 , 27(7): 2765-2773.(31) 杨慧玲，朱选伟，黄振英（通讯作者），董鸣，曹志平． 2007 ．克隆整合对浑善达克沙地固沙禾草无芒雀麦忍受沙埋能力的影响．生态学报 , 27(5): 1723-1730.(32) 朱雅娟，阿拉腾宝，董鸣，黄振英（通讯作者）.2007. 养分与水分 对羊柴种群 有性与克隆繁殖权衡的影响 . 植物生态学报 , 31 (4): 658 ～ 664 ．(33) 朱雅娟，董鸣，黄振英（通讯作者）． 2006 沙丘植物种子萌发和幼苗生长发育对环境的适应机制。应用生态学报， 17 （ 1 ）： 137-142 ．(34) 渠晓霞 ,黄振英（通讯作者）.2005. 植物种子萌发及幼苗生长对盐生环境的适应对策 . 生态学报 25 （ 9 ） : 2389-2398. (35) 朱雅娟，董鸣，黄振英（通讯作者）. 2005. 沙埋和种子大小对固沙禾草沙鞭的种子萌发与幼苗出土的影响 . 植物生态学报， 29 （ 5 ）： 730 － 739 ． (36) 朱选伟，黄振英，张淑敏，董鸣 . 2005. 浑善达克沙地冰草种子萌发、出苗和幼苗生长对土壤水分的反应 . 生态学报 , 25(2):364-370.(37)黄振英，董鸣，张淑敏． 2005 ，固沙禾草沙鞭种子在沙丘上的萌发策略及幼苗耐旱特性的研究，生态学报 , 25(2): 298-303.(38)黄振英， 2004 ．干旱环境下植物的适应。蒋高明主编：《植物生理生态学》，高等教育出版社， 188-197.(39)黄振英． 2003 ．鄂尔多斯高原固沙禾草沙鞭种子休眠和萌发与环境的关系．西北植物学报， 2003,23(7): 1128-1133 ．(40)黄振英，宋松泉． 2003 ．第七届种子生物学国际会议简介．植物学报， 45: 503 － 504 ．(41) 于顺利，黄振英． 2003 ．以色列植物纵览．植物杂志 , 2: 47-48 ．(42)黄振英，蒋高明，董学军，袁文平． 2002 ．沙柳光合作用和蒸腾作用的日动态变化的初步研究．西北植物学报 , 22(4): 817-823 ．(43)黄振英, Yitzchak GUTTERMAN, 胡正海 , 张新时． 2001 ．白沙蒿种子萌发特性的研究 I. 粘液瘦果的结构和功能．植物生态学报， 25 （ 1 ）： 37 － 43 ． (44)黄振英, Yitzchak GUTTERMAN, 胡正海 , 张新时． 2001 ．白沙蒿种子萌发特性的研究 II. 影响种子在沙土中萌发的环境因素．植物生态学报， 25(2): 239-246 ．(45)黄振英，张新时， Yitzchak GUTTERMAN ，郑光华． 2001. 光照、温度、土壤盐分对梭梭种子萌发的影响．植物生理学报 , 27(6): 275-280 ．(46)黄振英, Yitzchak GUTTERMAN, 胡正海 , 张新时． 2001 ．土壤盐分、水分对Artemisia monosperma种子传播和萌发的影响．生态学报 , 21(4): 676-680 ．(47)黄振英, Yitzchak GUTTERMAN, 胡正海 , 张新时． 2000 ．沙漠植物种子的传播和萌发机制．植物科学进展 , 3:169-178. 北京：高等教育出版社， Spring 出版社．(48)黄振英 , Yitzchak GUTTERMAN, 胡正海 , 张新时． 2000 ．毛乌素沙地固沙植物油 蒿 种子萌发的生理生态学研究． 2000 年中 国 博士后大会论文集 : 医药学与生物学分册， 215-219. 北京：科学出版社．(49)黄振英，吴鸿，胡正海． 1997 ．新疆 30 种沙生植物的结构与沙漠环境的适应关系．植物生态学报， 21(6): 521-530 ． (50)黄振英, 吴鸿，胡正海． 1997 ．新疆主要沙生植物营养器官的结构与沙漠环境的关系．“中国青年学者论环境”， 53 － 57 ，科学出版社． (51)黄振英，吴鸿，胡正海． 1995 ．新疆 10 种沙生植物旱生结构的解剖学研究．西北植物学报， 15(6): 56 － 61 ． (52)黄振英，黄建成， 黎春玉 ，胡正海． 1995 ．陆地棉组织培养中畸形胚的初步形态学观察。西北大学学报（自然科学版）， 25 ： 561 － 563 ． (53)黄振英，胡正海． 1994 ．新疆 6 种沙生植物营养器官旱生结构的研究．植物学通报， 全国结构植物学学术讨论会论文集 .11 ： 77 － 82 ． (54)黄振英，黄建成， 黎春玉 ． 1994 ．棉花体细胞培养中畸形胚的初步形态学观察．植物学通报，第五届全国植物生殖生物学学术讨论会论文集 . 11 ： 63 － 64 ．
植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告
紧张又充实的大学生活即将结束，大学生们马上就要开始最难熬的毕业设计阶段，而我们做毕业设计之前要先写好开题报告，快来参考开题报告是怎么写的吧！以下是我整理的植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告，欢迎大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
毕业论文题目：
菌寄生真菌纤细齿梗孢蛋白酶基因的克隆与表达
姓名： xx 学号： xxxx
年级： xxx 专业： 植物保护
指导教师：姓名 xxx 职称 教授
学科 植物病理
山东农业大学教务处
20XX年x月x日
一、选题依据（拟开展研究项目的研究目的、意义）
菌寄生(Mycoparasitism)是发生在菌寄生真菌与寄主真菌之间的一种寄生方式，是自然界普遍存在的一种真菌与真菌之间的相互作用。一直以来，生物间相互作用及信号传导的分子机制，是当今生命科学研究的热门。利用菌寄生真菌与寄主真菌作为研究的模式系统来揭示生物相互之间的相互作用机制有重要理论和实践意义。李多川(Li,1996)先生发现纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)和串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)的菌寄生关系以来，我们实验室试图通过研究纤细齿梗孢和串珠镰刀菌，来建立菌寄生真菌与寄主真菌相互作用机制研究的模式系统，从而揭示菌寄生真菌与寄主真菌之间相互作用的分子机制。纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是串珠镰刀菌的一种重寄生真菌，该菌是一种接触性活体重寄生菌，离体试验发现其分生孢子只有在串珠镰刀菌细胞壁提取物刺激下才能萌发。这说明两者之间的重寄生关系是建立在二者识别与互作的分子机制上的(Li,2004)。在纤细齿梗孢和串珠镰刀菌相互作用过程中，几丁质酶、蛋白酶等细胞壁裂解酶可能起到重要作用。其中，蛋白酶在木霉属菌寄生真菌中的功能已经得到初步证明，而纤细齿梗孢的蛋白酶的研究还未见报道。因此，克隆纤细齿梗孢蛋白酶编码基因对于从分子水平上研究重寄生真菌和寄主识别和互作机制有着重要的意义。
二、文献综述内容(在充分收集研究主题相关资料的基础上，分析国内外研究现状，提出问题，找到研究主题的切入点，附主要参考文献)
纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是李多川教授分离得到的一种活体营养接触型菌寄生真菌[1~3]，其寄主包括Fusarium moniliformeAlternaria alternata等。近年来，我们实验室一直在努力以其为基础研究菌寄生真菌与寄主真菌之间的相互作用的分子机制。经过多年的研究，人们渐渐认识到真菌细胞壁蛋白在细胞与外界的相互作用过程中扮演着重要的角色。细胞壁蛋白研究已经成为生物间相互识别机制研究的热点。鉴于以上原因，我们实验室成功分离纯化了纤细齿梗孢的寄主之一Alternaria alternata菌丝细胞壁上的一种特异性糖蛋白——凝集素，并初步证明其在A.alternaria和O.tenellum孢子吸附过程中起到识别因子的作用[4]。近年来，菌寄生真菌细胞壁裂解蛋白酶在菌寄生过程中的作用被人们逐渐重视起来。克隆和表达菌寄生真菌的蛋白酶编码基因变得很有意义。本研究试图以菌寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichumtenellum)作为研究材料克隆了其蛋白酶基因。根据氨基酸的保守序列设计兼并引物，然后采用RT-PCR和RACE是一个较为快速、简单和高效的方法。本实验根据同源保守序列设计兼并引物，通过RT-PCR及RACE-PCR的方法，克隆了O.tenellum蛋白酶的编码基因的全长cDNA序列，并对该基因进行了序列分析，为后续试验打下了基础。
由于Olpitrichum tenellum在离开寄主的人工培养基中很难生长，纯化其蛋白酶变得非常困难。因此，我们需要使用外源蛋白表达系统得到蛋白，进一步研究其性质，从而搞清楚其在重寄生过程中的作用。在过去的几十年间，随着DNA重组技术的不断发展，通过构建遗传工程菌株，人们可以较容易地使各种各样的天然酶的基因在微生物系统中高效表达，从而在很大程度上摆脱对天然酶源的依赖。
基因工程的表达系统有原核表达系统和真核表达系统两大类。在原核表达系统中，大肠杆菌表达系统是目前了解最深入，实际应用最为广泛的表达系统。与其他表达系统相比，大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高、培养周期短、抗污染能力强等特点。在基因表达技术中占有重要的地位，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具[5]。
Pichia pastoris基因表达系统经过十几年发展，已基本成为较完善的外源基因表达系统，具有易于高密度发酵，表达基因在宿主基因组中稳定整合，能使产物有效分泌并适当糖基化，培养方便经济等特点。利用强效可调控启动子AOX1，已高效表达了HBsAg、TNF、EGF、破伤风毒素C片段、基因工程抗体等多种外源基因[6]，证实该系统是高效、实用、简便，能提高表达量并保持产物生物学活性的外源基因表达系统。P.pastoris表达系统在生物工程领域将发挥越来越重要的作用，促进更多外源基因在该系统的高效表达，提供更为广泛的基因工程产品[7]。
我们已经分离到O.tenellum蛋白酶的编码基因，本研究中将该基因的去掉信号肽序列的正确阅读框融合于原核表达载体pET-22b(+)和毕赤酵母表达载体pPIC9K上，分别转化E.coli BL21及Pichia pastoris GSxx5，以期在这些菌株中有效表达该基因的编码产物，从而为以后功能研究打下基础。
1 李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.吉林农业大学学报,20：37~65.
2 21.李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.微生物学通报，25：345~347.
3 .李多川，沈崇尧.1997.菌寄生菌物与寄主菌物相互作用的研究进展.西北农业学报，6：94~98.
4 张成省，李多川，孔凡玉.2005.Alternaria alternata菌丝细胞壁凝集素的纯化与特性研究.植物病理学报，35(2)：141~147.
5 .xx.何诚，朱运松.1998.甲醇营养型酵母表达系统的研究进展.生物工程进展,18：7~xx.
6 彭毅，杨希才，康良仪.2000.影响甲醇酵母外源蛋白表达的因素.生物技术通报，4：33~36.
7 韩雪清，刘湘涛，尹双.2003.毕赤酵母表达系统.微生物学杂志，3：35~40.
三、研究方案(主要研究内容、目标，研究方法、进度)：
1、研究内容：
本课题选择纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)做为研究对象，通过RT-PCR及RACE技术分离克隆了其丝氨酸蛋白酶基因，并进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究，为进一步的研究工作打下基础。
2、研究的目标：
克隆了纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)的丝氨酸蛋白酶基因，进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究。
3、研究方法：
将纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)接种到LB培养基上，培养14个小时后，收集菌丝，然后采用总Trizol法提取RNA。再从GenBank数据库中搜索到大量的蛋白酶氨基酸序列，并根据同源性进行分类，分别设计兼并引物。再通过RT-PCR、3’-RACE、5’-RACE获得全长cDNA、DNA克隆，并将其连接到载体上，然后采用电击法将将重组质粒转入到全长cDNA、DNA克隆中，通过透析纯化蛋白酶，最后研究其特性。
四、研究进度：
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆 。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。
五、技术路线：
收集菌丝
总RNA提取
同源序列 设计引物
特性研究
RT-PCR、
3’-RACE、5’-RACE
纯化表达产物
全长cDNA、DNA克隆 转化大肠杆菌、毕赤酵母
四、进程计划(各研究环节的时间安排、实施进度、完成程度)
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。完成实验的1%。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆。完成实验的50%。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。完成实验的95%。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。完成100%。
五、导师对文献综述的评语
签字：
20xx年xx月xx日
六、专业意见
专业主任签字：
20xx 年 月 日
七、学院意见
学院(章)： 负责人签字：
20xx年xx月xx日
摘要：
针对目前浙江农林大学植物保护研究法实验教学方法、内容及手段等方面存在的一系列问题，提出了相关改革对策：优化实验课程内容，整合实验模块，学生自行设计实验方案等教学方法和手段的改革，以及课程考核方式和时间安排的调整，旨在培养学生的科研兴趣及创新能力。
关键词：
植物保护论文
目前，国内外很多农业院校的植物保护专业均开设了昆虫研究法和植病研究法课程。为优化本科培养方案，浙江农林大学通过调整教学大纲，将植病研究法、昆虫研究法和农药研究法合并成一门植物保护研究法课程。植物保护研究法是植物保护专业重要的专业限选课程之一，是植物保护研究的重要组成部分，也是培养和提高学生专业实验技能和学习兴趣的重要课程，是一门专业性、实践性很强的实验学科。通过这门课程的教学，能使学生掌握植物保护研究的基本方法及基本原理，培养植物保护研究常规操作能力，以及查阅资料、设计实验方案和实际操作能力，提高学生的逻辑思维、整理资料、总结归纳和论文撰写的能力。笔者分析了浙江农林大学植物保护研究法实验教学中存在的问题，提出教学改革内容，并总结了改革成效。
1.实验教学存在的问题
1.1传统实验教学的弊端传统实验教学的主要特征是“灌输式”“填鸭式”，学生在2个小时的实验过程中就是简单地按照实验指导书和实验大纲中的实验方法和步骤依葫芦画瓢，实验完成后，又按照统一的模式填写实验报告。在整个实验过程中，学生无需独立思考和分析，更谈不上发挥创新能力了。因此，很难让学生对实验产生兴趣，培养学生的创造性思维就更无从谈起了。虽然这种传统实验模式简明、清晰，有利于学生对相关结论的认可、理解和记忆，也有利于教师对整个教学过程的控制，教师和学生很轻松愉快地就能完成实验教学任务。学生走上工作岗位后，传统实验教学的弊端立即显现。学生缺乏设计实验的能力，在实验过程中缺乏发现问题、分析问题和解决问题的能力，实验后缺乏正确分析实验结果的能力。因此，传统的实验教学模式急需改革。
1.2实验教学内容系统性不强植物保护研究法是植物保护专业本科学生的一门专业课程，其涉及的内容有昆虫研究法、植病研究法和农药研究法。在以往的实验课程中，只是简单地把这3门课的实验合在一起上，并没有把内容紧密联系在一起，如昆虫实验时，指导教师一般是教授昆虫学科的教师;而在进行植病实验时，则由讲授植病学科的教师指导。这样的实验模式难以使植物病虫害系统联系起来，学生学习专业知识不够系统和深入，容易造成理解上的片面性和孤立性，不利于掌握该专业的系统知识和技能。
1.3实验考核不科学以往实验课程成绩评定的主要依据是实验报告，而每次实验课结束后，学生递交的实验报告只是把实验大纲(包括实验口的、原理、仪器与试剂、内容及方法)原文不动地抄一遍，实验结果更是千篇一律，这样实验就变成了预演过程，学生在实验中缺乏思考，不利于培养发现问题、提出问题、分析问题和解决问题的能力，背离了实验课教学的初衷。同时，还会导致每位学生的实验成绩差异微乎其微，不具有良好的区分度。
2.教学改革内容
2.1重视教学环节在以往的实验课程中，实验教学所需要的实验用具和材料大多数都是实验教辅人员提前准备，导致他们的工作量非常大。让学生参与实验材料的准备和管理，一方面提高了教辅人员的工作效率;另一方面可以让学生对实验过程有全面了解，获得整个科研实践过程的训练，从而养成好的实验习惯，在未来的科研工作中做到计划周密、有条不紊地安排和实施实验计划。同时，在实验教学过程中，必须教育学生认真操作、仔细观察、实事求是地记录实验结果，并对实验进行科学分析。一日_发现弄虚作假的学生，一定要严厉批评，同时帮助他们分析失败的原因，找出解决的方法，有条件的情况下，让其重新做实验，让学生充分意识到科学研究允许失败，但是不能有半l从虚假。2.2提高学生的实践能力实践教学是培养和训练学生实践操作能力，独立分析问题、解决问题能力的重要手段，尤其对于学生创新能力的培养，具有其独特的地位和作用。该项口分别以某种农作物病虫害为主轴展开一系列的实践性实验教学，要求学生自主设计实验和执行各项实验内容，指导教师负责答疑和提供技术帮助。学生通过自己分组、调查、取样、鉴定、查阅资料、讨论制订实验方案和动手实验等一系列步骤，不仅可以很好地将课堂上所学的理论知识与实践相结合，而且还有助于提高自学能力、实践能力和团队协作能力，进一步培养科学思维和创新能力。2.3优化实验教学内容结构将整个实验课程设置成一个综合性的大实验：分别以某个农作物上的病虫害发生规律及防治措施贯穿整个课程。将口前昆虫研究法的昆虫标本的采集与制作、昆虫人工饲养技术、昆虫生态学研究方法、昆虫生理生化研究方法、昆虫分子生物学研究方法和害虫综合治理研究方法5个实验和植病研究法的植物病害调查、植物病原菌分离与鉴定技术、植物病原菌分子生物学鉴定技术、植物病原真菌遗传转化技术和植物病害综合治理技术5个实验合并成1个综合性大实验，将植物病虫害研究以故事的形式紧密地整合在一起，让学生将课堂知识与田间实际应用有机地联系在一起，加深对理论知识的理解，提高学习兴趣。整个实验就是以具体的作物病虫害发生为时间轴，具有很强的连贯性和系统性，学生只有认真完成每一个实验，才能很好地保证后续实验的顺利进行，有助于增强学生的责任感和团队合作精神，同时也改变了学生实验报告千篇一律的`现象。2.4改革成绩评定方式实验课成绩一方面是对学生实验完成好坏的肯定，另一方面也对学生起到了一定的督促作用。为了做到对学生的全面评价，实验成绩除实验报告和考勤成绩外，应将实验过程中学生的学习主动性、动手操作能力、实验结果记录规范性量化纳入成绩考核。在实验过程中，教师应主动观察并记录每个学生的实际动手、操作能力，量化后按一定比例记入总成绩，对那些既有独立操作能力，又有创新意识的学生，适当给予创新学分。实验过程中，学生是否遵守实验室规则、是否具有团队合作精神，实验结束后，学生是否打扫卫生、是否清洗实验器材等，这些看似小问题，但也体现着一个人的品质和素养，做得好的学生也可以适当加分。
3.改革成效
3.1提高学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识学生能在同一时间完成植病研究法、昆虫研究法和农药研究法3门实验课程，体现了实验课程很强的连贯性和系统性。学生在实践过程中将这3门课程的相关内容紧密、有机地联系起来，对植物病虫害防治有了更深入的认识，同时也提高了学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识。在实验的过程中，强调把学生的动手能力放在首位，让学生更多地参与到实验中，切身体会到所学专业的意义。
3.2培养学生发现、提出、分析和解决问题的能力植物保护研究法实验教学模式具有系统化和整体化特点，同时涉及昆虫研究法、植病研究法、农药研究法等相关学科课程。在实验过程中，学生在对病虫害的认知及其防治等问题的处理上始终处于主体地位，在独立思考、查找资料、咨询专业教师、综合分析之后，拟定出具体的处理方案，能够融会贯通地掌握植物保护学科的理论知识和基本实践技能。
3.3提高指导教师的业务水平新的实验教学模式综合运用了3门相关课程的理论知识，加强了课程的综合实践环节，因此指导教师自身的知识面、操作技术、实践应用和协调能力都需要提升。所以，这种实验教学模式促使教师在教学过程中同学生一起不断学习，丰富专业理论知识，完善专业实践体系，提高发现、提出、分析和解决问题的能力，了解和掌握学科及相关学科的发展动态、研究的新进展、出现的新技术，从而提高了指导教师的业务水平。
4.结语
植物保护研究法在植物保护专业2013级和2014级本科生实验课程教学中进行了实践，通过问卷调查，95%的学生认为在实验过程中有较多的动手机会，激发了自己对实验的兴趣，提高了自己分析和解决问题的能力。因此，认为该教学方法可以发挥学生的主观能动性、拓展学生的科研思路、激发学生的创新创造力和提高学生的独立应用实践能力，具有良好的教学效果。
