PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!
技术的研究进展
摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。
关键词 PCR技术;研究进展;应用
中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02
PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。
1 PCR技术原理
PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。
2 PCR技术的分类
在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。
2.1 实时荧光定量PCR技术
1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。
荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。
2.2 多重PCR技术
多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。
在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。
2.3 单分子PCR技术(SM-PCR)
单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。
单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。
3 PCR技术的应用
3.1 PCR技术在水产上的应用
基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。
3.2 PCR技术在微生物检测上的应用
1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。
4 展望
传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。
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前言部分，主要是说明写作的目的，介绍有关的概念及定义以及综述的范围，扼要说明有关主题的现状或争论焦点，使读者对全文要叙述的问题有一个初步的轮廓。
主题部分，是综述的主体，其写法多样，没有固定的格式。可按年代顺序综述，也可按不同的问题进行综述，还可按不同的观点进行比较综述，不管用那一种格式综述，都要将所搜集到的文献资料归纳、整理及分析比较，阐明有关主题的历史背景、现状和发展方向，以及对这些问题的评述，主题部分应特别注意代表性强、具有科学性和创造性的文献引用和评述。
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问题六：求一篇关于建筑施工安全管理的文献综述 20分 持之以恒地确保建筑施工的安全。具体做法:
第一是制定施工安全管理总结标准化格式,并纳入到建设工程竣工验收条件中去。
第二是建立健全施工安全管理总结档案,以便规范和指导项目工程管理人员的日常施工安全管理工作。
第三是建立施工安全管理总结内容的警示及监督体制,以确保施工安全管理体系在项目工程建设中的顺利开展。第四是实行施工安全管理总结的宣讲及测评公示制度,促使好的施工安全管理经验得到应用推广,并认真地吸取施工安全管理中的问题及经验教训。
七、通过安全教育、培训和规章制度来规范班组人员的行为，提高自我保护意识，减少和控制人的不安全行为和物的不安全状态，使施工作业人员的生命安全和财产得到保障。 1 监理对安全工作的控制
(一) 监理安全工作的主要内容《建设工程安全生产管理条例》的公布与施行，对我国建设工程监理工作提出了新的要求， 增加了履行监理安全责任的内容。
不仅要注重对施工质量、进度和投资的控制， 而且要对施工安全生产进行相应的管理，促进施工单位在安全生产方面重视施工组织设计的编制、临时用电方案的编制、专项施工方案的编制，重视安全隐患的整改和处理，使施工单位能够严格按照国家强制标准施工，提高工程建设水平。根据该条例的规定，监理安全控制的重点主要进行三个方面的工作：（1） 审查有关方案与专项安全技术措施；（2） 发现事故隐患要及时处理或向有关部门报告；（3）执行国家、行业或地方的强制性标准。
（二） 建立安全管理制度该条例对监理工作和监理人员提出了更高的要求，在制定、编制监理规划与监理细则时， 一定要反映安全方面的工作内容，建立安全处理机制和责任，强化安全技术措施，落实具体的人员分工及明确职责，把安全管理纳入日常监理工作中，并作为一项重要内容来抓。重点检查人的不安全行为和物的不安全状态，监理人员在巡视或检查后详细记录有关安全检查方面的内容，发现安全隐患及时处理，避免工伤事故的发生。监理安全管理制度的内容主要包括：（1） 安全技术措施审查制度；（2） 专项施工方案审查制度；（3）严重安全隐患报告制度；（4）执行安全法律法规与标准的监理制度。 （三）施工安全控制措施对策
按建筑施工的特点，根据人的不安全行为和物的不安全状态，进行综合分析，找出事故产生的易发性及其规律性，把人的原因及与工作有关的原因，通过归类比较，可以发现施工现场的不安全因素主要存在于高处作业、交叉作业、垂直运输、使用电气机具以及基础工程作业中。因此，在施工现场的安全控制是多方面的，针对易发事故和常见事故发生的部位、工序和环节，采取保护措施，消除这些部位存在的隐患及不安全因素等，减少和预防事故的发生。
1. 易发事故原因分析及防护根据多年的事故类别分析， 高处坠落、物体打击、触电、机械伤害、坍塌，这五个方面构成了施工现场的主要危险点，必须制定相应的防护措施，把“纵向到底、横向到边” 的安全方针真正落到实处。
（1） 高处坠落建筑施工中涉及到高处作业的范围是相当广泛的，主要是在建筑物或构筑物结构范围以内的各种形式的洞口与临边性质的作业、悬空与攀登作业、操作平台与立体交叉作业、在主体结构以外的场地上和通道旁的各类洞、桩、沟、槽等的作业；脚手架、井架（龙门架）、施工电梯、模板的安装拆除、各种起重吊装作业等。凡在基准面2 m以上（含2 m）高处进行作业，都称为高处作业， 均应按高处作业的要求进行防护，避免作业人员从高处坠落。
（2） 物体打击由于施工现场上下交叉作业和流动性频繁，组织不良时会有很多物体从上面落下来，打到下面或旁边的作业人员，......>>
问题七：地铁施工组织设计的论文综述怎么写 地铁施工组织设计
文献综述的吗
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工程项目管理是20世纪50年代后期开展起来的一种方案管理办法。1957年美国杜邦公司把这种办法初次应用于设备维修，使维修停工时间由12小时锐减为7小时；1958年美国人在北极星导弹设计中，应用工程项目管理的根本理论，使设计阶段的竣工期缩短了两年，尔后工程项目管理的理念惹起了人们的高度注重。目前，西方兴旺国度曾经在工程项目管理方面构成了比拟完善的科学体系。
随着我国经济的持续、快速开展，我国建立部与国度计委、经贸委意欲尽快出台《关于进一步推行工程总承包与工程项目管理的指导意见》和《工程项目管理（效劳）方法》，以制定工程总承包与项目管理（效劳） 的施行细则，标准其根本做法，进一步促进其科学化、标准化和法制化，从而指导我国工程总承包与工程项目管理工作的展开，进步项目管理程度，与国际惯例接轨。
项目经理（PM）在我国已成为新世纪的黄金职业，项目管理师职业资历认证工作已开端试点。为完成21世纪我国的新开展，进步我国的产业竞争力，就必需剖析和研讨当前国内外项目管文科学体系开展的现状，理解和控制国际通行的形式、程序和规范，扬长避短,与时俱进。这关于我国企业特别是石化企业具有重要的理想意义。
1 国外工程项目管理概略
1.1 目前国外工程项目管理的主要方式
国外企业的工程项目管理主要有项目管理承包(Project Management Contractor 缩写为PMC)、项目管理组（Project Management Team 缩写为PMT）和施工管理 ( Constriction Management缩写为 CM)等方式。
（1） 项目管理承包（PMC）
PMC是指项目管理承包商代表业主对工程项目停止全过程、全方位的项目管理，包括停止工程的整体规划、项目定义、工程招标、选择EPC（EPC是英文Engineering Procurement Construction的缩写，即设计、采购、施工总承包）承包商，并对设计、采购、施工过程停止全面管理，普通不直接参与项目的设计、采购、施工和试运转等阶段的详细工作。PMC的费用普通按工时费用+利润+奖励的方式计取。
PMC是业主机构的延伸，从定义阶段到投产全过程的总体规划和方案的执行，对业主担任，与业主的目的和利益坚持分歧。
对大型项目而言，由于项目组织比拟复杂，技术、管理难度比拟大，需求整体谐和的工作比拟多，业主常常都选择PMC承包商停止项目管理承包。作为PMC承包商，普通更注重依据本身经历，以系统与组织运作的手腕，即：业主首先拜托一家有相当实力的国际工程公司对项目停止全面的管理承包；其次，把项目分红两个阶段来停止，第一阶段叫做定义阶段，第二阶段叫做执行阶段。在项目定义阶段，PMC的任务是代表......>>
问题九：山城是哪个地方？ 重庆和青岛!都被称为山城!
