, 双吡啶姆, 1 4 简称 PQ)以烟草逾伤组织为原材料,在其叶绿素系统中产生的电子使 PQ 还原 为游离型的 PQ, 而后者可以和 O2 反应生成 O2-,进而可以诱导机体组织产生 SOD 酶,实验证明,来自耐 PQ 逾伤组织的 SOD 其酶电泳条带为单一条带,其酶活 性要比一般的烟叶 SOD 活性高的多,日本人还提出了利用固体培养基法使 SOD分泌到菌体外的工艺, 例如利用青霉属,毛霉属或者曲霉属进行固体培养均可以 使 SOD 分泌到菌体外而获得 SOD, 在基因工程方面, 国外也取得不少进展 【7】 , 例如日本人将含有 SOD 重组 DNA 的基因工程菌悬浮培养物在含有铜盐和锌盐 的缓冲液中,以超声波处理一段时间获得 Cu,Zn-SOD,而美国在利用基因工程 技术生产 SOD 方面是更为先进。2.国内研究现状当前,国内对 SOD 的粗分离和纯化工艺的研究也日益深入,但其应用方面远远 比不上国外, 国外已有多种药用 SOD 应用于临床,国内对 SOD 的应用多集中于 食品和保健品方面,如张波【8】等人以牛血为原料用沉淀,热变,再沉淀,上 DEAE-SephadexA-50 柱等一系列步骤进行纯化,牛血 SOD 比活由 1834u/mg 提 高到 2325u/mg,Cui-Luan Yao【9】等以虾为原料,采用热变性,硫酸铵盐析,层 析纯化来提纯 SOD,Cheryl L.Fattman【10】等人采用琼脂糖层析来纯化鼠肺细胞 外 SOD 粗酶液的纯化,张书文【11】等采用二次热变性方法,免除了使用氯仿 等有机溶剂,孙永君【12】等以大蒜(植物)为原料,采用磷酸盐缓冲液提取法 和热变性方法,制备 SOD 粗酶液,在基因工程方面,我国四平市科学技术研究 院经过多年的努力,开发出 SOD 项目,它是提取人体 SOD 基因,经过 PCR 扩 增,构建人体 cDNA,进而构建质粒,然后将质粒转到受体细胞中,在受体中进 行大量表达,该院是国内唯一一家基因重组人源化的 SOD 生产厂家。在利用生 物工程和基因工程技术生产药用 SOD,国内在这方面的研究和国外相比仍有一 定的差距。三 研究意义在现有的 SOD 纯化过程中, 粗分级工艺是不可避免的环节,其中必须使用大 量的有机溶剂(如乙醇,氯仿等)或无机盐(如硫酸铵,磷酸盐等) ,通过有机 溶剂和无机盐的分级沉淀去除大部分杂蛋白,获得粗品 SOD。然后才能使用后 续工艺,如丙酮沉淀、超滤浓缩、透析、柱层析等,进行深入提纯。首先,使用 分级沉淀法提取目标蛋白后, 废弃液中常常含有高浓度的有机溶剂或无机盐,这 些有毒/有害物质的回收非常困难,而一旦排放又会对环保造成巨大压力;其次, 有机溶剂和无机盐分级沉淀法操作周期长,提取液经常要在低温下静置过夜;另 外,为了促使蛋白质沉