杜鹃花组织培养研究概况论文

一、杜鹃花组培的基本技术环节 杜鹃花组织培养，通常使用的外植体为茎尖、茎节和花蕾等。因花蕾的分化较为困难，周期长；茎尖的取材受到一定限制，故国内多采用茎节为初代培养的外植体。 杀菌处理时，杀菌能力较强的升汞（氯化汞）易造成外植体材料的褐变死亡，不宜使用。试验表明，采用饱和的次氯酸钙液上清液或5％的次氯酸钠液作为灭菌剂，效果较好，处理时间为15至20分钟。为加强灭菌效果，还可加入1％的克菌丹或％的吐温－20（山梨糖醇）配合使用。材料灭菌前的预处理，通常采用70％酒精浸泡，不超过30秒。此外，用中性洗涤剂进行材料的预处理，亦可有效降低其灭菌后的污染率。外植材料灭菌流程为：洗衣粉液浸泡20分钟?流水冲洗至清?70％酒精浸泡30秒?灭菌水冲洗1分钟?5％次氯酸钠浸泡15分钟,灭菌水漂洗3次，每次1分钟。如此，可将外植体污染率降低到15％以下。 杜鹃花组培所用培养基，为Andeson改良MS培养基：将MS培养基中的硝酸铵和硝酸钾用量分别减至1／4，取消了碘化钾成分，铁盐的用量增加一倍。因杜鹃花科植物原产于高山酸性土壤，培养基的pH值宜为至。培养室温度25℃，光照强度3000勒克斯，光照时间12至14小时。 杜鹃花在诱芽培养中使用的激素较一般植物有异，需要活性较强的细胞激动素类物质，才能达到满意的效果。试验表明，使用ZT的诱芽效应最为显著；添加KT的处理几乎无丛芽或侧芽发生，仅是原茎尖的伸长；而选用6－BA处理，则导致培养材料的褐变加剧，效果反不如对照。此外，在其后的增殖培养中，杜鹃花对细胞激动素种类的要求，仍以添加ZT为好。 国外在杜鹃花的组培中多使用2ip作为外源细胞激动素，效果较ZT好。但从经济的角度考虑，仍推荐使用ZT。 二、杜鹃花的初代和继代增殖培养 杜鹃花初代诱芽培养，NAA浓度不得超过／L，ZT用量的增大对诱芽效应有明显促进作用。但提高ZT浓度时，NAA浓度不宜同步增加，ZT／NAA值较大为好。从经济培养的意义出发，初代培养的激素配比以ZT5＋（mg／L）为宜，培养1个月左右时，诱芽率即可达100％，诱芽系数。 杜鹃花继代增殖培养，对细胞激动素要求比初代培养有所下降。虽然增殖效应仍随ZT用量的增加而上升，但已不如初代培养时那么明显。此外，用于增殖培养的材料性质不同，其增殖效应也不尽相同，品种间亦存在显著的差异性。供试品种中，‘小桃红’以采用丛芽为增殖培养体时的增殖系数较高（）；而‘花春雨’则反之，以取用芽条时的反应为佳（）。 杜鹃花组织培养，从接种到诱芽产生，所需的时间明显长于月季和菊花等，故其继代增殖培养的周期也较长。试验中分别以30天和45天为培养周期进行了统计，在各激素水平配比处理中，其增殖芽总数，培养45天要比培养30天的高出50％至80％。所以，杜鹃花组培过程中，过于频繁地切割、转换培养，反达不到快繁的目的。 三、试管苗的生根培养及移栽 杜鹃花的生根培养虽不十分困难，但对培养基的要求仍与一般植物不同。其一，基本培养中无机盐大量元素的用量不能减半；其二，蔗糖的用量仍为30g／L，生长素NAA的添加量以至／L为好，培养45天时的生根率为60％左右。 供生根培养的试管苗，要求高15厘米以上，具7片以上真叶，发育健壮。生根培养2周后始见发根，6周时达最高生根率。试验中曾发现，在增殖培养过程中用KT或6－BA取代ZT时，虽诱芽、增殖效应较差，但芽条发育较粗壮。因此，在增殖培养达到一定群体数量后，用KT或6?BA进行继代培养处理，可使生根率和移栽成活率明显提高。此外，在生根培养基中添加2g／L的活性炭，可使试管苗个体发育显著增强，1个月后生根率可达到90％以上。 国外的研究资料表明，某些常规繁殖（扦插）极难生根的植物，经组织培养后获得的试管苗，生根会容易很多。有些可不经生根培养直接移植到生根介质中，生根率可达100％，3至4周后即可移入温室进行盆栽。这种生根介质为泥炭土、蛭石、珍珠岩的混合物，pH以4至为宜。 生根试管苗的移栽入土，栽培基质为1∶1的泥炭生＋蛭石混合物。表层要求过筛，以利根系附着；下层铺粗粒，以利基质渗水。移栽时用镊子去掉根部附着的培养基（不可损伤根系）。用镊尖将基质拨一小洞，把根系放入，覆土，轻轻压实，浇足水。试管苗移栽成活的关键是保证一定的温、湿条件，移栽环境和试管培养时的条件相差悬殊，常造成移栽苗生长不适或死亡。 试管生根苗的移栽虽然在全年均可进行，但在不具备生根室的情况下，仍以春、秋两季进行较为稳妥方便。 四、组培技术在杜鹃花新品种选育中的应用 试验初期，鉴于杜鹃花外植体灭菌困难，可供试验的接种群体太小，不能满足正常试验的进行。为尽快筛选出合适的培养基配方及相应的培养条件，笔者结合杂交育种，采用杂交种子试管发芽的方法，再用试管实生苗的上胚轴为外植体进行研究，取得了事半功倍的效果。笔者发现，杜鹃花的杂种实生苗常规播种繁殖需3至5年才能开花，而经上胚轴培养的杂种实生苗，移栽后第二年即可开花，大大缩短了杂种实生苗的童期，对加快显花、结果类植物的育种进程具有重要意义。 一般来说，种子的灭菌处理较其他器官或组织容易得多。杜鹃花杂交种子的灭菌处理为：70％酒精表面浸泡1分钟，灭菌水漂洗后转0 ．1％升汞液浸泡10分钟，灭菌水漂洗3次，每次1分钟以上。灭菌后再剖实取籽、接种培养，接种两周始见发芽。出苗后取用上胚轴进行诱芽快繁，繁殖系数较高。成苗后，可取茎尖或茎节再培养，培养条件和方法同前。国内组织培养涉及新品种选育的不多，特别是在观赏园艺植物方面。从发展的角度看，组培技术要保持较强的生命力，就不该离开新品种的选育。因此，有机地将组培技术与杜鹃花新品种选育结合起来，对提高绿地植物景观的建设水平、促进杜鹃花的产业化发展，都是十分有益的。

用茎尖、嫩叶、茎节等作外植体。诱导和增殖都用改良的MS培养基，附加5毫克/千克玉米素和毫克/千克萘乙酸，生根用MS培养基，附加～毫克/千克萘乙酸，每升培养基里加2克活性炭。或诱导用MS培养基，附加毫克/千克6-苄基腺嘌呤和毫克/千克萘乙酸，增殖用1/4MS培养基，附加2毫克/千克6-苄基腺嘌呤。生根用1/4MS培养基。控制光照时间12～14小时。移栽基质用1/2草炭土和1/2蛭石，控制～。

杜鹃花是杜鹃花科杜鹃花属中具有观赏价值的植物总称，全世界有杜鹃花900多种，我国有650余种。别名映山红、照山红、野山红、山石榴、山踯躅、红踯躅、山鹃等。许多种类四季常绿，开花整齐，花、叶兼美，是一种既可观花又可赏叶的花卉。杜鹃花是我国十大名花，是用途最为广泛的木本花卉，就全国而言，在家庭养花中，目前没有哪种木本花卉能够与它媲美。

（1）扦插繁殖。用嫩枝一年四季都可扦插，大量繁殖在夏季，剪取插穗前2天，母株要充分灌水。剪取最健壮的半木质化的新枝，带1小段2年生踵，枝长5～10厘米，剪除下部叶片，保留顶叶2～3片作插穗，如果顶叶面积大，可将每片叶剪去1/3。如果插穗上有花芽，会影响生根，扦插前必须将花芽去掉。扦插前将插穗基部2～4厘米，浸入200毫克/千克吲哚丁酸或ABT生根粉等药液中1～2小时，取出用清水冲洗后扦插。在疏松透气、富含腐殖质的酸性土壤上扦插，适宜pH4～，落叶松土非常适宜，也可用2/3草炭土和1/3沙配制，还可用微酸性的红沙或河沙。按株行距6～8厘米扦插。控温20～28℃，遮荫，但也不能过分遮荫，经常喷雾保湿，控制空气相对湿度在85%以上。毛鹃、东鹃、夏鹃30天左右生根，西鹃60～70天生根。生根后如果阳光不强就不再遮荫了。在无土基质上扦插的生根后及时移植，不能及时移植的应浇营养液。大批露地扦插的应在遮荫棚进行，棚上覆盖塑料薄膜，防止暴雨冲贱，要注意棚四周的通风。生根后施稀薄液肥，除了夏季光照较强的时间外可撤去荫棚。用直径8厘米左右的容器移苗，长大后再移入花盆里，或定植在地上。苗长到适当大小时应剪去顶上的新梢，促其发生侧枝，使将来株形矮壮。

在全光喷雾床上扦插，用珍珠岩作基质，不用遮荫，扦插后20多天生根，生根后必须及时移植。

（2）嫁接繁殖。扦插难以成活的名贵品种用嫁接方法繁殖，或用于1株嫁接多个品种。在1株上嫁接多个品种一般不难，主要是注意不同的花色搭配。用3～6厘米的嫩枝作接穗，将基部用利刃削成楔形，削面长～1厘米，留顶端3～4片小叶。用播种苗，或嫁接成活的小苗，或上盆生长2～3年的毛杜鹃等作砧木，劈接。将砧木嫩梢顶端平削去2～3厘米，摘除附近的叶片，从中心部位纵切1厘米，将削好的接穗插入，使形成层对接准确，用塑料薄膜绑扎，然后放在阴处，用塑料袋将接穗和砧木一起罩住保湿。白天控温20～30℃，夜间不低于15℃，以促进愈合。成活后逐步除去砧木上的枝条。

或用靠接，将栽有砧木的花盆移到接穗处。在二者容易嫁接的部位下刀，对准形成层，至少有一边的形成层要对准，用塑料薄膜绑扎。需100天左右砧木和接穗完全愈合，将接穗切离母株。还可用小苗腹接。

（3）分株繁殖。丛生种类可以用分株繁殖，花后进行分株。将丛生大的植株从母树根系的自然缝隙中带根切割。上盆后放在遮荫和通风处，大约20天左右新株恢复正常生长。

（4）空中压条繁殖。在生长健壮的1～2年生枝条顶端约10厘米处进行环切，宽度1厘米左右，轻轻地去掉皮层。用长10厘米左右、宽8厘米左右的塑料薄膜，在切口下面3厘米左右的地方，把它的一端扎紧，然后向上围成袋状，里面添上扦插用的土壤或苔藓，保持湿润，把塑料薄膜上面适当扎紧，并保证让雨水或喷的水能流入里面。生根后切离母体。

（5）播种育苗。花后6个月左右蒴果成熟，采后放在阴凉通风处。一般随采随播，不宜久藏。可用40%的甲醛100倍液消毒，然后洗净药液。用疏松、细碎的营养土播种，撒播，薄覆土。用塑料薄膜覆盖，控温20℃左右，一般20天左右出苗。出苗后及时将塑料薄膜剪几个小口，既保障通风，又能保持一定的湿度。小苗期用细喷壶给水，苗高2～3厘米时开始第1次移苗，经过几次移植培养成大苗。

（6）组织培养育苗。用茎尖、嫩叶、茎节等作外植体。诱导和增殖都用改良的MS培养基，附加5毫克/千克玉米素和毫克/千克萘乙酸，生根用MS培养基，附加～毫克/千克萘乙酸，每升培养基里加2克活性炭。或诱导用MS培养基，附加毫克/千克6-苄基腺嘌呤和毫克/千克萘乙酸，增殖用1/4MS培养基，附加2毫克/千克6-苄基腺嘌呤。生根用1/4MS培养基。控制光照时间12～14小时。移栽基质用1/2草炭土和1/2蛭石，控制～。