中国肿瘤生物治疗杂志参考文献

细胞名称 BEL-7402人肝癌细胞 描述 BEL-7402细胞株是1974年从临床肝癌手术标本中建立的。 细胞群体倍增时间为20小时。 移植到处理过的wistar大鼠中的能形成肿瘤结节。 细胞形态呈上皮样细胞。 在电子显微镜下亦显示上皮细胞所具有的桥粒和张力原纤维，与临床肝癌细胞相似。 分瓶培养第四天时，其有丝分裂指数约为7%。 BEL-7402细胞的染色体数为不足三倍体，有一个异常的近端着丝点染色体。 间接免疫荧光法测BEL-7402细胞内的AFP为阳性反应。 LDH同工酶谱显示与成年人肝细胞不同，而与人胚肝及临床肝癌相近。 动物种别 人 性别 男 组织来源 肝癌 形态 上皮细胞样 培养基和添加剂 RPMI 1640 + 10% 胎牛血清或新生牛血清。 供应限制 A。仅供研究之用。 REFERENCE Bioorg Med Chem Lett. 2006 Mar 1;16(5):1282-5. Epub 2005 Dec : 16338237 Int J Cancer. 2006 Mar 15;118(6):1539-44. PMID: 16184552Cancer Immunol Immunother. 2006 Jan;55(1):56-60. Epub 2005 Oct 27. PMID: 16091933J Inorg Biochem. 2006 Jan;100(1):36-43. Epub 2005 Nov : 16289294 Eur J Cell Biol. 2006 Jan 7;PMID: 16406609 Fitoterapia. 2006 Jan;77(1):28-34. Epub 2005 Oct : 16242269 Arch Pharm Res. 2005 Dec;28(12):1341-4. PMID: 16392666J Asian Nat Prod Res. 2005 Dec;7(6):: 16308192 Nat Prod Res. 2005 Dec;19(8):: 16317831 World J Gastroenterol. 2005 Nov 7;11(41):6512-7. PMID: 16425425 Cancer Biol Ther. 2005 Nov;4(11):1240-7. Epub 2005 Nov : 16177565 World J Gastroenterol. 2005 Oct 28;11(40):: 16419156 Bioorg Med Chem Lett. 2005 Oct 15;15(20):: 16112860 Bioorg Med Chem Lett. 2005 Oct 15;15(20):: 16112860 Virus Res. 2005 Sep;112(1-2):100-7. Epub 2005 Apr : 16022904 Cancer Biol Ther. 2005 Sep;4(9):993-7. Epub 2005 Sep : 16082190 World J Gastroenterol. 2005 Sep 14;11(34):: 16149132 World J Gastroenterol. 2005 Sep 21;11(35):: 16222756 Cancer Biol Ther. 2005 Sep;4(9):993-7. Epub 2005 Sep 23. PMID: 16082190 World J Gastroenterol. 2005 Sep 14;11(34):5277-82. PMID: 16149132 World J Gastroenterol. 2005 Sep 21;11(35):5561-4. PMID: 16222756 Biomed Environ Sci. 2005 Aug;18(4):265-72. PMID: 16274109 BMC Cancer. 2005 Aug 5;5:96. PMID: 16080799 Biomed Environ Sci. 2005 Aug;18(4):: 16274109 BMC Cancer. 2005 Aug 5;5:: 16080799 Biochem Biophys Res Commun. 2005 Aug 5;333(3):: 15963945 Peptides. 2005 Aug 26; PMID: 16129512 Planta Med. 2005 Jul;71(7):666-72. PMID: 16041654 J Gastroenterol. 2005 Jul;40(7):716-21. PMID: 16082588 Bioorg Med Chem Lett. 2005 Jul 1;15(13):3233-6. PMID: 15913996 World J Gastroenterol. 2005 Jul 14;11(26):3980-4. PMID: 15996019 Bioorg Med Chem Lett. 2005 Jul 15;15(14):3417-22. PMID: 15953727 Science in China,12:1225-1233,1979 Oncogene 23: 1939-1949,2004 Hepatology,39(5):1371,2004 Cancer Research 63:3775-3782,2003 Acta Biochimica et Biophysica Sinica 35(1):64-70,2003 Chinese Journal of Biochemistry and Molecular Biology 19(5):630-635,2003 Acta Universitis Medicinalis Secondae Shanghai 23(1):5-9,2003 Research in Tumor Prev Treat 30(4):300,2003 China J Cancer Prev Treat 10(3):256-258,2003 Journal of Capital University of Medical Sciences 24(1):1-3,2003Prog. Biochem. Biophys. 29(5):781-785, 2002 Chinese Journal of Cancer 21(4):351-355, 2002 Acad J SUMS 23(1):40-43,2002 Chin J Oncol. 24(2):123-125,2002 Natl Med J China 82(8):564-567,2002 Acta Biochimica et Biophysica Sinica 34(2):226-230,2002 The FASEB Journal 16:294,2002Chinese Science Bulletin 9：434，1975 中文名称 人肝癌细胞

YSL对BEL7402荷瘤裸鼠NK细胞杀伤活性的影响[4] 无菌条件下取中各组小鼠脾脏，用MTT法检测YSL对BEL7402荷瘤裸鼠NK细胞杀伤活性的影响，实验步骤同。 统计学方法 使用SPSS统计软件，各组资料采用方差分析，两两比较采用leastsignificant difference（LSD）检验，以P <为有显著性差异。 2 结 果 YSL对正常小鼠NK细胞杀伤活性的影响 YSL剂量为160μg/(kg·d)及80μg/(kg·d)时能够增强正常小鼠NK细胞杀伤活性，剂量为160μg/(kg·d)时与生理盐水组比较具有显著性差异（P <），结果见表1。 YSL对人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤的影响 YSL剂量为160μg/(kg·d)时能够抑制人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤的生长，与生理盐水比较具有显著性差异(P <)，肿瘤抑制率为。YSL剂量为80μg/(kg·d)时对BEL7402有一定的抑制作用，抑制率为，但与生理盐水组比较无显著性差异(P >)，结果见表2。 YSL对BEL7402荷瘤裸鼠NK细胞杀伤活性的影响 YSL剂量为160μg/(kg·d)时能够增强人肝癌BEL7402荷瘤裸鼠NK细胞的杀伤活性，与生理盐水组比较有显著性差异（P <），结果见表3。 3 讨 论 原发性肝胆癌症的发病及致死率很高[5]。大约90%成人原发性肝癌为肝细胞癌[6]，故本课题采用BEL7402人肝细胞肝癌细胞株制备裸鼠移植瘤模型展开研究，结果显示YSL可以显著抑制人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤的生长，给药剂量为160μg/(kg·d)与80μg/(kg·d)时，抑瘤率分别为、。目前多肽类药物的抗肿瘤作用，正在引起专家学者们的广泛重视[7]，如4个氨基酸的小肽Tuftsin在体情况下可以抑制肝癌、胃癌、黑色素瘤和裸鼠胆管癌的生长[8] ；从肝素结合细胞因子（HGP）中β链区域合成的五肽或六肽，表现出抗肿瘤细胞增殖的作用，在播散早期应用还能抑制肝转移的发生 [9]。YSL是一种新型短肽类抗肿瘤药物，其抗肿瘤作用机制尚不十分清楚。 肿瘤的发生和发展与机体免疫功能具有十分密切的关系。免疫力低下的人群肿瘤发生率高，恶性肿瘤发生后又能产生免疫抑制因子抑制宿主的免疫功能[10,11]。小分子肽类药物可以作用于机体的免疫系统，充分调动机体自身免疫系统的主动性，发挥抗肿瘤作用[12,13]。机体的抗肿瘤免疫学机制十分复杂，其中由T淋巴细胞、NK细胞、巨噬细胞介导的细胞免疫，在抗肿瘤免疫中起主要作用[14]。NK细胞杀伤肿瘤细胞不受MHC限制，也不需预先与抗原接触或显示任何记忆反应。NK细胞对肿瘤的杀伤优势表现为直接溶解和分泌细胞因子两个方面，其杀伤肿瘤既可通过穿孔素又可通过Fas 配基。NK细胞可以产生TNFα、IFNγ和IL1，这些细胞因子在NK细胞抗癌反应中有十分重要地位[15]。本研究证实，YSL可以增强正常小鼠NK细胞对肿瘤细胞的非特异性杀伤活性，抑制人肝癌BEL7402裸鼠移植瘤的生长，同时增强人肝癌BEL7402荷瘤裸鼠NK细胞的杀伤活性。裸鼠是一种先天无胸腺或仅有胸腺残迹或异常上皮的免疫缺陷动物。T细胞不能正常分化，缺乏成熟T细胞的辅助、抑制系杀伤功能，细胞免疫力低下，其体内非依赖T细胞免疫机制如NK及巨噬细胞具有较高活性 [16]。因此，YSL可能是通过增强NK细胞对肿瘤细胞的杀伤能力来抑制肿瘤的增殖。【参考文献】 [1] 傅正, 陆融, 李国立, 等. 酪丝亮肽对人肝癌BEL7402细胞钙稳态影响的实验研究[J]. 中国科学C辑:生命科学, 2005,35(3)262-268. [2]邱爽, 陆融, 赵岚, 等. 三肽化合物酪丝亮肽抗肿瘤作用及对单核巨噬细胞激活作用机制的研究[J].中国肿瘤生物治疗杂志, 2005,12(2): 129-133.[3] 徐叔云, 卞如濂, 陈修. 药理实验方法学[M].第3版. 北京：人民卫生出版社, 2002. 1785-1786.[4] 章元沛, 苏怀德. 药理学实验[M].第2版. 北京：人民卫生出版社, 1998, 137-138.[5] 韩锐. 抗癌药物研究与实验技术[M]. 北京:北京医科大 学中国协和医科大学联合出版社, .[6]American Cancer Society. Cancer facts ＆ figures 2004. The American Cancer Sociey，s publication [M]. USA: American Cancer Society Inc. 2004.[7] Janin YL. Peptides with anticancer use or potential[J]. Amino Acids, 2003,25:1-40.[8] 雷新, 韩本立. Tuftsin 的合成及对裸鼠胆管癌模型的作用[J]. 第三军医大学学报, 2002, 22:75-77.[9] Fazekas K,Raso E, Zarandi M, et al. Basic HGFlike peptides inhibit generation of liver metastases in murine and huma tumor models[J]. Anticancer Res, 2002, 22:2575-2579.[10] Ma D, Gu MJ. Immune effect of tumor infiltrating lym phocytes and its relation to the survival of patients wothovarian malignancies[J]. Tongji Med Univ, 1991, 11(4):235-239.[11] Maehara Y, Tomisaki S, Oda S, et al. Lymph node metastasis and relation to tumor growth potential and local immune response in advanced gastric cancer[J]. Int J Cancer, 1997, 74(2):224-228.[12] Koji Teramoto, Keiichi Kontani, Yoshitomo Ozaki, et al. Deoxyribonucleic Acid(DNA) encoding a panmajor histocompatibility complex class Ⅱ peptide analogue augmented antigenspecific cellular immunity and suppressive effects on tumor growth elicited by DNA vaccine immunotherapy[J]. Cancer Res, 2003, 63:7920-7925.[13] Matsuzaki A, Sumioe A, Hattori H, et al. Immunotherapy with autologous dendritic cells and tumorspecific synthetic peptides for synovial sarcoma[J]. J Pediatr Hematol Oncol, 2002, 24(3):220-223.[14] Koh CY, Ortaldo JR, Blazar BR, et al. NKcell purging of leukemia:superior antitumor effects of NK cells H2 allogeneic to the tumor and augmentation with inhibitory receptor blockade[J]. Blood, 2003, 4067-4068.[15] 蒋灿华, 陈万涛, 张志愿. NK细胞抗肿瘤免疫效应机制研究进展[J]. 国外医学肿瘤分册, 2004, 31:486-487.[16] 魏泓. 医学实验动物学[M]. 成都：四川科学技术出版社, 1998. 412.

最近，医药界出了一个大新闻：美国食品药品监督管理局（FDA）批准了一种新型的抗癌药物，Vitrakvi（Larotrectinib）。有媒体报道称，这种新药不但广谱，可以治疗肺癌、甲状腺癌、胰腺癌等17种不同的癌症，而且高效，治愈率则达到75%。

图相关报道（图片来源：微信）

其实，医药界经常出现“爆炸性”新闻，滴血验癌啦、艾滋病疫苗啦，诸如此类。有些成为了病人救星，有些则渐渐淡出人们的视野再无下文，甚至出现“反转”，被斥为。之所以命运不同，关键在于原理，即它是如何生效的，符不符合疾病规律。

在Vitrakvi的官方网站上，可以找到药物介绍，其中提到四个大写字母“NTRK”。

Vitrakvi的介绍（图片来源：）

在美国国立癌症研究所（NCI）的网站上，也检索到Vitrakvi的信息。注意看，上面反复出现三个字母“Trk”。

Vitrakvi的介绍（图片来源：NCI）

那么，NTRK是什么呢，Trk又是什么呢？

NTRK就是所谓的原癌基因之一，[1]每个人生下来就有。这种基因，一种有三种亚型，NTRK1、NTRK2、NTRK3，正常情况下，它们会编码正常的Trk蛋白，而正常的Trk蛋白主要分布在神经系统内，对神经系统的发育有着重要作用。

NTRK1基因（图片来源：）

打个比方的话，我们可以把神经细胞看成一座核电站，NTRK是操作核电站的员工，Trk是操作面板。按下一个按钮，便可以激活相应的控制电路，每一条电路，又会激活对应的设备、调控核电站的运作。也就是说，健康人体内，Trk扮演着控制核心的角色，通过激活特定的信号通路，调控细胞的增殖、分化、代谢、凋亡。

Trk调控细胞示意图[2]

正因为Trk如此重要，所以正常情况下NTRK总是小心翼翼的，不该操作的时候不操作、不需要表达的时候不表达。

好莱坞电影里，常常有坏人收买公司员工的桥段。NTRK也可以被收买，收买的方式是与其他基因结合、发生变异。被收买的NTRK基因，会胡乱操作产生异常的Trk蛋白。

癌细胞有三个特点：第一，不受控制地增殖，第二，可以在人体内转移，第三，能够避开免疫系统的攻击。所以癌症很可怕，一个癌细胞很快会发展为一群癌细胞，而这一群癌细胞，很快会攻占全身各大组织。研究显示，异常的Trk不再局限于神经细胞内，它们出现在多种正常组织中，接着持续激活下游的信号通路，使细胞的增殖失控；当肿瘤增大到一定程度后，Trk又会雪中送炭，帮助肿瘤形成血管，更好地纂夺营养，甚至促进肿瘤向周围组织浸润，方便其进行转移。[3]

上个世纪八十年代便有学者发现某些癌症患者的NTRK存在异常，不过因为发生率不高，一直没有引起足够的重视。直到2007年，才掀起了一轮研究热潮。2012年，Bertrand等对变异的Trk蛋白进行检测，发现这些蛋白的结构高度相似都有一个铰链状的区域；而这个铰链区域，正是Trk激活下游通路的关键。[4]

Trk蛋白结构

于是，一个想法很自然地产生了：合成一种可以与铰链区域结合的小分子物质。正所谓“一个萝卜一个坑儿”，当患者服用小分子物质后，异常Trk的铰链区被小分子占领，便失去了激活下游通路的能力，癌症也就被阻断了。

Trk靶向药物机理示意图

说完原理，关于Vitrakvi的很多困惑，也就解开了。

1，这种药物有效么？

有效。临床试验显示，Vitrakvi对多种癌症都有改善效果。

2，治愈率真的达到了75%？

不是。所谓“75%”，指的是总体有效率，它包括完全缓解（CR）和部分缓解（PR）两种情况。

完全缓解和部分缓解如何判断呢？

2000年，美国国立癌症研究所、欧洲癌症研究和治疗组织共同提出了ＲECIST标准，测量试验前后的肿瘤大小，评估实验效果，效果分为完全缓解、部分缓解等数级。[7]换句话说，这套标准强调实验对肿瘤的改善情况。而临床上说的治愈率，一般指五年生存率，即相当长一段时间内，接受某一治疗方案的患者，有多少可以顺利存活。二者不是一个概念，不可等同。

3，每个人都可以用？

不是。如前所说，vitrakvi是Trk抑制剂，而异常Trk，来源于变异的NTRK基因。所以只有存在NTRK基因异常的肿瘤患者，才有可能受益。

会出现NTRK基因变异的癌症极多，但是，具体到某一种癌症，NTRK基因变异的几率，并不一致。有些癌症跟NTRK基因高度相关，有些则不那么明显。

会出现NTRK基因变异的癌症[8]

以肺癌为例，按照vitrakvi官方网站上的说法，大约的患者，存在NTRK基因变异的情况。

各癌症中，NTRK基因变异的发生率（图片来源：）

总而言之，开头提到的17种癌症中，不管哪一种，只要患者存在NTRK基因融合，便可能有效；反之，则无效。

不幸的是，FDA虽然批准了vitrakvi，却还没有批准NTRK基因融合检测办法。

所以，vitrakvi是有效的，是人类抗癌历史上的一次重要胜利，它表明，深入研究癌症机理，一定可以找到有效的预防、治疗方案；但是在运用层面，还有着不少限制。

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参考文献

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作者：赵言昌

2018年11月26日，抗癌药物Vitrakvi已经在美国正式上市。Vitrakvi用于治疗携带NTRK基因融合（(gene fusion)）的成人和儿童，局部晚期或转移性实体瘤患者，并且没有产生已知的抗性突变，是转移性的或手术切除可能导致严重发病率，没有有效替代治疗方案的。2018年2月新英格兰医学杂志（NEJM）在线发表了Vitrakvi同时进行的三项安全性和有效性研究结果，研究显示对于年龄为4个月至76岁的患者，针对17种不同癌症治疗总体反应率为75％。建议见诊香、港肿瘤科医生，医生会进行用药判断和指导。