未来微生物检测发展论文

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高数论文 什么是微积分？它是一种数学思想，‘无限细分’就是微分，‘无限求和’就是积分。无限就是极限，极限的思想是微积分的基础，它是用一种运动的思想看待问题。比如，子弹飞出枪膛的瞬间速度就是微分的概念，子弹每个瞬间所飞行的路程之和就是积分的概念 如果将整个数学比作一棵大树，那么初等数学是树的根，名目繁多的数学分支是树枝，而树干的主要部分就是微积分。微积分堪称是人类智慧最伟大的成就之一。从17世纪开始，随着社会的进步和生产力的发展，以及如航海、天文、矿山建设等许多课题要解决，数学也开始研究变化着的量，数学进入了“变量数学”时代，即微积分不断完善成为一门学科。整个17世纪有数十位科学家为微积分的创立做了开创性的研究，但使微积分成为数学的一个重要分支的还是牛顿和莱布尼茨。 从微积分成为一门学科来说，是在17世纪，但是，微分和积分的思想早在古代就已经产生了。公元前3世纪，古希腊的数学家、力学家阿基米德（公元前287—前212）的著作《圆的测量》和《论球与圆柱》中就已含有微积分的萌芽，他在研究解决抛物线下的弓形面积、球和球冠面积、螺线下的面积和旋转双曲线的体积的问题中就隐含着近代积分的思想。作为微积分的基础极限理论来说，早在我国的古代就有非常详尽的论述，比如庄周所著的《庄子》一书中的“天下篇”中，著有“一尺之棰，日取其半，万世不竭”。三国时期的刘徽在他的割圆术中提出“割之弥细，所失弥少，割之又割以至于不可割，则与圆合体而无所失矣”。他在1615年《测量酒桶体积的新科学》一书中，就把曲线看成边数无限增大的直线形。圆的面积就是无穷多个三角形面积之和，这些都可视为典型极限思想的佳作。意大利数学家卡瓦列利在1635年出版的《连续不可分几何》，就把曲线看成无限多条线段（不可分量）拼成的。这些都为后来的微积分的诞生作了思想准备。 17世纪生产力的发展推动了自然科学和技术的发展，不但已有的数学成果得到进一步巩固、充实和扩大，而且由于实践的需要，开始研究运动着的物体和变化的量，这样就获得了变量的概念，研究变化着的量的一般性和它们之间的依赖关系。到了17世纪下半叶，在前人创造性研究的基础上，英国大数学家、物理学家艾萨克·牛顿（1642－1727）是从物理学的角度研究微积分的，他为了解决运动问题，创立了一种和物理概念直接联系的数学理论，即牛顿称之为“流数术”的理论，这实际上就是微积分理论。牛顿的有关“流数术”的主要著作是《求曲边形面积》、《运用无穷多项方程的计算法》和《流数术和无穷极数》。这些概念是力学概念的数学反映。牛顿认为任何运动存在于空间，依赖于时间，因而他把时间作为自变量，把和时间有关的固变量作为流量，不仅这样，他还把几何图形——线、角、体，都看作力学位移的结果。因而，一切变量都是流量。 牛顿指出，“流数术”基本上包括三类问题。 （l）“已知流量之间的关系，求它们的流数的关系”，这相当于微分学。 （2）已知表示流数之间的关系的方程，求相应的流量间的关系。这相当于积分学，牛顿意义下的积分法不仅包括求原函数，还包括解微分方程。 （3）“流数术”应用范围包括计算曲线的极大值、极小值、求曲线的切线和曲率，求曲线长度及计算曲边形面积等。 牛顿已完全清楚上述（l）与（2）两类问题中运算是互逆的运算，于是建立起微分学和积分学之间的联系。 牛顿在1665年5月20目的一份手稿中提到“流数术”，因而有人把这一天作为诞生微积分的标志。 莱布尼茨使微积分更加简洁和准确 而德国数学家莱布尼茨（G．W．Leibniz 1646－1716）则是从几何方面独立发现了微积分，在牛顿和莱布尼茨之前至少有数十位数学家研究过，他们为微积分的诞生作了开创性贡献。但是池们这些工作是零碎的，不连贯的，缺乏统一性。莱布尼茨创立微积分的途径与方法与牛顿是不同的。莱布尼茨是经过研究曲线的切线和曲线包围的面积，运用分析学方法引进微积分概念、得出运算法则的。牛顿在微积分的应用上更多地结合了运动学，造诣较莱布尼茨高一筹，但莱布尼茨的表达形式采用数学符号却又远远优于牛顿一筹，既简洁又准确地揭示出微积分的实质，强有力地促进了高等数学的发展。 莱布尼茨创造的微积分符号，正像印度——阿拉伯数码促进了算术与代数发展一样，促进了微积分学的发展，莱布尼茨是数学史上最杰出的符号创造者之一。 牛顿当时采用的微分和积分符号现在不用了，而莱布尼茨所采用的符号现今仍在使用。莱布尼茨比别人更早更明确地认识到，好的符号能大大节省思维劳动，运用符号的技巧是数学成功的关键之一。

时光与微风一样一而吹过，它没有留下任何东西，却只留下风吹过后的平静，那一股温度。时间亦是如此，它没有留下什么，却只留下生活的丝丝变动。此时此刻它是如此，下一秒它是那样。留下的是上一秒的回忆，和这一秒的点点滴滴，有人曾经计算过我们现在所生活了7000多个日子，倘若用秒计时，那么我们现在存活的时间将是很大的一个数字。但是每一秒我们又得到了什么，我们学会的什么，我们又放下了什么。这是我们值得考虑的问题。让自己的人生更加充实，而不是留下自己的悔恨。过去的那段有我们的伤痕的记忆，也有我们快乐的日子，那一幕幕如电影一般总是浮现在我们的脑海里。再次回眸过去，想永远停留在那一秒，但是有想永远忽略那一段。回眸过去的自己让我再次认识了自己，清楚地了解自己。为了更好的活出自己的价值，必须冷静的分析自己。回眸过去，重拾自信，展望未来。相信我的未来不是梦。我的未来不是梦，因为我相信命运是掌握在自己的手中，只有那些不掌握自己的人，他的命运才所被人摆布，才会抱怨他人，抱怨天的不公。所以我要做一个将自己的命运掌握在自己手中的人，而不是被人所操控的。我相信自己。做一个坚强的，有毅力的人。. 心志要坚，意趣要乐 一人立志，万夫莫敌人的一生可能燃烧也可能腐朽，我不能腐朽，我愿意燃烧起来！ ——奥斯特洛夫斯我不愿意腐朽一生，因此做做好的自己不亏待自己。加油。咿呀学说话，跌跌撞撞的学走路，认真的鞋子，读书。那些点点滴滴的成长记录早已在我的脑海变得零零碎碎甚至早已部记得了。但是他们是我这本人生阅历书的某一章节。它丰富的我的生活。它是我的调味剂，是我的生活变得有酸的甜的苦的辣的。小学时的我是一个羞涩的女孩。不喜欢与陌生人玩，不知道为什么，总是害怕陌生人。可是我又是一个爱玩的女孩子。是一个两重性格的人。有时让人捉摸不透。爸妈有时感到奇怪。儿童时期的我是一个不爱学习的人，在自己眼中只认为玩是首要的事，只知道玩的乐趣。总是把学习抛至脑后。不玩累是不会休息。爸妈看我不喜欢读书，很担心。总想困住我爱玩的心。但是所有的计策在我的身上一点却一点都没用。小时候的我是爱玩飞机，爱玩汽车，总是把这些东西拆开来组装称自己喜欢的模具。喜欢玩很多游戏却没有自己擅长的。时间慢慢过去了，妈妈突然怀孕了，告诉我有妹妹了，当时，我的心一下子沉下来、我怕爸妈给我的爱，不再给我，会给与我的妹妹，或者是他们给与我的爱与温暖，将与我的妹妹一起分享，当时的我是多么的不愿意。我哭着闹着。爸妈一直劝我，妹妹可以一直陪你，爸妈的爱不会减，永远爱着我。我被他们说服了。终于妹妹出生了。妹妹真的很可爱，我发现我真的很喜欢她，渐渐我也发现我的肩上的重担越来越重，因为爸妈的工作的变得好多，还有他们的的工作压力也变大了。慢慢的发现我不能在顾自己玩，懂得了学会照顾妹妹。几年后妹妹也长大了，我也从懵懂的小学时代的我，长大成一个初中生，渐渐的学会了好多，长大了好多。同时好强心渐渐萌芽，我开始认真读书。我发现我很喜欢在老师和同学中爱表现自己。总是在意老师和同学对我的看法，我总是把每件事做到最好，使同学和老师肯定我。可是有时总是力不从心，总是想把事做到最好，可是总是做的很糟糕，总是受到很大挫败。不过我还是站起来，擦了擦自己的汗水。像是执着的牛，向前进。但是那些挫败，总让我不尽如意。总是感到自责和失落，就如跌入深邃的低估，摔的粉身碎骨。记得一次月考后的家长会，而且那次月考我的一次败笔，回想妈妈每天辛苦的工作，每天都是那么的疲惫，我的心时不时的一酸，那是我偷偷的流下了眼泪，我知道流眼泪是无济于事的。可是一看到妈妈，一想到她每天工作那么辛苦。还为 *** 心，好多头发变白了。有时就自问自己，为什么我努力了那么多却得到的确实这个结果。我安慰自己不断抚平自己，努力不一定成功但是，不努力永远不会成功。即使会碰一鼻子灰，但是我还是会不断努力，鼓励自己。我相信我的命运掌握在自己手中，我的未来不是梦。做一个坚强的，有毅力的人。我是最棒的，我一定会成功。我永远相信这些。石看纹理山看脉，人看志气树看材 志之所向，金石为开，谁能御之？ 志坚者，功名之柱也。登山不以艰险而止，则必臻乎峻岭 心志要坚，意趣要乐 一人立志，万夫莫敌终于我初中毕业时没有让父母失望。进入高中生活后，一切都变了。读书的节奏一下子变得好快。总是跟不上老师的节奏，不断的探索自己的学习方法，终于有所见效，老师对自己也很指导我，因此不断努力。严格要求自己，打老师所交下来的任务总是将她做的最好，不过有些还是没有得到自己的想象的结果。同学说我的要求太高了。或许吧。当班干部肩上的责任重了很多，不断的探索如何将自己的班级的凝聚力增强。只单单自己的努力总是不够，发现班级的凝聚力是很重要的。在管理班级的同时，我还认真的学习。认为学习还是首要的位置，毕竟高考时最重要的战场。不过高考挺让人失望的。没有自己理想的成绩，那时我很懊恼，和想不通，为什么命运要这样对待我。不明白，也想不通为什么我所得到的总是不如人意。我的未来，将是怎样的。但是老师的一些话让我放开了，不管在多么恶劣的环境，只只要自己那颗坚持和永不言弃的心仍存在，再怎么经历怎么的挫折都不会阻碍自己前进，不管有多恶劣的环境，都能闯出自己的天空。现在的我，是一个大学生。或许我现在还不是很成熟，但是经过这几年的锻炼，一定能有属于自己一片天。因为我永远相信命运掌握在自己手中，我的未来不是梦。我的大学生活才刚开始，我相信我未来的路还有好长，或许还有更多的意想不到的挫折，或许也有很多意外等着我，所以我会以最好的心态来迎接他们的到来。明确自己人生的大目标，对把握好目标有直接的促进作用。认真策划人生每一步。有道是："凡事预则立，不预则废"，千真万确。对自己做的或将要做的事没有任何准备，就是在为失败做准备。 对自己的充分认识自己才会更好的面对生活。我班级群众基础好，交流能力强，开朗活泼，有良好的组织能力。有耐心，善于观察周边的事物。我的性格是比较诚实、正直的，相对谦虚但不乏张狂，在做事情时认真勤奋责任心强。善于倾听别人的意见。及其别人的烦心事，是一个不错的倾听者。有强烈的求知欲. 做事认真负责,有始有终适应环境能力的能力强,有广泛的兴趣干很多事情.但是还有许多要改进的地方。加强与他人的交流沟通，增加自己的社交范围，积极参加各种场合各项有益的活动，使自己多一份自信、激扬，少一份沉默、怯场。人是更多的朋友，增加更多的经验。有时要看场合，如果要大声讲话是就该大声，但有时不应该时，就不应该大声讲话，要严格约束自己的行为，严以律己。加强锻炼，增强体质。我对我的学习情况和未来有很大的展望，我在高中时努力学习，进入大学，我的学习的那股劲仍存在，我努力学习文化知识，掌握专业技能，同时看关于各国的经济与文化，有利于为以后的学习打下扎实的基础。认真完成老师布置的任务。在担任科研委员之后，我认真完成课题研究。我希望经过我的努力能够得到我想要的成果。我积极参加课余活动，积极参加班级组织的各项活动，及其学生会的比赛，参加社团，拓宽自己的社交范围。同时看一些名著，杂志，增加自己的视野，提高自己的的人生观，世界观，价值观。成为四有公民，成为优秀的当代大学生。我会不断改进自己，改变自我，不断的充实自己，丰富自己的生活，改正自己的缺点，完善自己的优点。使自己变得更加有自信，有 *** ，有信心，有毅力。提高自己的人生观，世界观，价值观。不断的锻炼自我，提高自我。不荒废自我，荒废自己的人生，并且相信自己的命运掌握在自己的手中，相信我的未来不是梦。学校只是外部因素，要真正的也好一门专业是要靠自己的，不是吗？自己的人生是自己做出来的，不能抱怨，不能埋怨。只有用自己的心，自己的信念去改变自己的命运。我觉得我们的学校是挺好的，有优秀的老师，有许多优秀的同学，可以互相学习，互相指导，还有优美的风景。非常的怡人。是一个很好的学习环境。在大学我还是必须努力学习，扎实的掌握知识，为以后的工作打下扎实的基础，因为我知道以后的找工作的旅程将是辛苦的历程，我们必须现在抓紧为自己充电，以后才不会碰壁。回眸我的过去，我重拾我的自信，我相信我的命运是掌握在我自己的手中的。引用奥斯特洛夫斯的话；人的一生可能燃烧也可能腐朽，我不能腐朽，我愿意燃烧起来！我相信经历四年大学的洗礼，我会变得更有自信，我将会以最美丽的微笑来面对我所面临的每一个挫折。自信是我最强有力的盾牌。加油，我的未来不是梦。

微生物检验技术试验教学是重要的组成部分,该学科具有较高的实践应用性,下面我给大家分享微生物检验技术论文，大家快来跟我一起欣赏吧。

微生物检验技术在感染控制中的应用

摘要：目的：对微生物检验技术在感染控制中的应用价值进行探讨和研究。

方法：选取我院2012年1月-2013年6月收治的尿路感染患者288例，经中段尿培养临床分离的大肠埃希氏菌288株，随机分成两组，每组144株，其中进行常规治疗的同时进行微生物检验的一组设为观察组，另一组只进行常规治疗设为比对组。对微生物检验的临床感染控制中的应用价值进行研究和探讨。

结果：观察组患者的感染率、感染程度均明显低于比对组患者，P<，差异具有统计学意义。

结论：微生物检验对感染的发生率有明显的降低，对临床感染的控制和治疗有明显的提高，具有较好的临床价值，值得在临床中广泛推广和应用。

关键词：微生物检验感染控制监测

【中图分类号】R9 【文献标识码】B 【文章编号】1671-8801(2013)09-0470-02

随着现代医学技术的不断提高，许多化学药物治疗、介入性治疗和放射性治疗等在临床中的应用也日益广泛，而这些治疗容易引发耐药菌株的出现，导致医院感染的发生率逐年增高。患者在医院治疗的过程中，发生感染，并且出现感染的临床症状，这便是医院感染，这种感染一般情况下，具有一定的潜伏期，因此，只要患者的感染症状具备医院感染的范畴，都属于医院感染。医院感染已经成为医学领域亟待解决的重要问题，我院于2012年1月-2013年6月，选取收治的尿路感染患者288例，对微生物检验技术在感染控制中的临床应用效果进行研究，效果显著，现报道如下。

1资料与方法

一般资料。选取2012年1月-2013年6月，我院收治的尿路感染患者288例，经中段尿培养临床分离288株大肠埃希氏菌，随机分成两组，每组144株。其中，男性患者156例，女性患者132例，年龄在2-58岁，平均年龄为(±)岁。住院时间平均(±)天。两组患者在年龄、性别和住院时间等临床资料都没有没有明显的差异，P>，具有可比性。

方法。观察组的144例患者采集的144株大肠埃希氏菌，采用微生物检验技术进行检测。具体操作如下：①采用ID32E试条，对大肠埃希氏菌标本进行纯菌种后，进行细菌鉴定;②采用ATB-5试条进行药敏实验;③检测时使用法国梅里埃半自动微生物分析仪进行;④采用K-B法进行确诊实验;⑤观察组患者根据检验结果进行药物治疗，比对组进行常规治疗。

统计学处理。软件;t检验;P<，具有统计学意义。

2结果

观察组患者经过微生物检验结果显示，感染程度和感染率均低于比对组患者，P<，具有统计学意义，详见表1和表2。

3讨论

随着各种化学药物治疗、介入性治疗以及放射性治疗、抗生素等在临床中的频繁应用，致使医院感染现象频发，发生率逐渐增高，严重影响着患者的健康，因此，对于医院感染的诊断势在必行。目前，诊断最为精确地方法是微生物检验技术，通过检验可以为医生提供更多，更准确的诊断信息，为医生制定进一步治疗的科学依据。尿路感染的诊断标准为：患者出现尿频、尿急和尿痛、以及尿不尽等现象，但是情况不严重，只是偶尔出现，尿液中细菌尿、血尿、气尿和脓尿等情况都只是微量的，患者也出现比较轻微的腰部酸痛，这种情况为轻度感染;患者出现经常性的尿频、尿急、尿痛和尿不尽，尿液中出现细菌尿、血尿、气尿和脓尿等现象比较多，患者出现腰部酸痛，但是还能够忍受，这种情况为中度感染;患者开始出现频繁的尿急、尿频、尿痛和尿不尽现象，患者甚至无法自身控制，尿液中细菌尿、血尿、气尿和脓尿等现象严重，患者腰部酸痛无法忍受，这种情况为重度感染。

微生物检验已经成为当前医学领域研究的重要方向，成为最重要的生命科学之一。通过微生物检验可以对临床感染进行有效的监测，指导进一步的临床感染的诊治，以及抗生素的合理使用。控制医院感染的重要途径，要从传染源、传播途径和易感人群三个方面进行，才能有效的控制感染的发生率。在医院里，不管是患者，还是医生、护士，甚至是医院的环境都可能是感染源，因此，医院要做好每天的消毒工作，不可忽视。医护人员也要注意个人卫生，经常洗手消毒，医疗器械等用品也要进行灭菌消毒，减少感染媒介。医院里聚集了多种病原体，病原体适合存活于潮湿的环境下，因此，要对医院的环境进行控制，保持空气畅通，降低医院感染发生率。另外，医院里的患者，身体都比较弱，容易感染，多为易感人群，因此，一定要在进行病房环境保持的同时，加强患者的病原菌的耐药性监测，以及环境细菌的监测。

本研究中，观察组采用微生物检测结果显示，不管是患者感染程度还是感染率都低于比对组，两组比较，P<，具有统计学意义。可见，微生物检测在医院感染控制方面有明显的效果，能够对病原菌和易感人群进行有效的监测，同时，对传播途径也起到很好的预测作用。通过本研究，充分显示了微生物检验技术在感染控制中的应用作用，有着不可代替的位置，是进一步治疗的理论依据，有效降低了医院感染的发生率，具有显著的临床价值，值得在临床中广泛应用和推广。

参考文献

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PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!

技术的研究进展

摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。

关键词 PCR技术;研究进展;应用

中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02

PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。

1 PCR技术原理

PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。

2 PCR技术的分类

在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。

实时荧光定量PCR技术

1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。

荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。

多重PCR技术

多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。

在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。

单分子PCR技术(SM-PCR)

单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。

单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。

3 PCR技术的应用

PCR技术在水产上的应用

基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。

PCR技术在微生物检测上的应用

1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。

4 展望

传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。

5 参考文献

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