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人类 *** 瘤病毒（Infection with human papillomavirus, HPV）感染可引起女性和男性的某些癌症，但HPV疫苗在预防致癌种类的HPV感染相当有效。新的《英国临床药理学杂志 (British Journal of Clinical Pharmacology) 》审查发现二价HPV疫苗在上市后未出现任何新的或未预期的安全问题。
作者分析了2009-2017二价HPV疫苗接种后提交给疫苗不良事件通报系统 (Vaccine Adverse Event Reporting Systems, VAERS) 的报告。虽然美国在此期间大多使用的HPV疫苗四价HPV疫苗，但是仍使用了720,000剂的二价HPV疫苗。VAERS在二价HPV疫苗接种后收到241份不良事件报告; 95.8％的报告被归类为非严重报告。
此调查结果应可为患者、父母和医疗服务提供者提供安全性的确认。
亚特兰大疾病控制和预防中心的主要作者Tiffany Suragh说：「二价HPV疫苗在全球134个国家使用。这篇综述提供了额外的证据，表明二价HPV疫苗是安全的，并且大多数不良反应都是轻微的，且可快速自行缓解」。
疫苗研制方面的较高级别的杂志，收录SCI（IF=3.557），主要是发表有关疫苗与预防免疫方面的文章。Vaccine is the most comprehensive and pre-eminent journal for those interested in vaccines and vaccination, serving as an interface between academics, those in research and development, regulatory and governmental agencies, charities, and health and industry professionals.Types of paper Vaccine publishes primary research papers, review articles, short communications and letters on the following topics:Human Vaccines - infectious diseasesHuman Vaccines - non-infectious diseasesVeterinary VaccinesImmunology and Animal ModelsVectors, Adjuvants and Drug DeliveryProduction, manufacturing and SafetyRegulatory, Societal and Legislation Aspects
分离细胞膜蛋白的方法：1 冰上刮下细胞后将细胞溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液A中，于室温与液氮罐中反复冻融2次。2 5000转4度离心，驱除核及未裂解的细胞。3 取上清12000转4度离心10分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液B中。4 12000转4度离心10分钟取沉淀溶于有蛋白酶抑制剂的缓冲液C中提取后测蛋白浓度,SDS-PAGE电泳，分装后-20度保存备用。buffer A : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4)buffer B : 1mMkcl,5mMNacl,3mM Mgcl2,50mM Hepes,1mM DTT,0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf(PH=7.4) 1mM EGTAbuffer C : 0.5ug/ml Leupeptin,20uM pmsf,50mMTris-cl(PH=7.0), 分离细胞膜蛋白的方法：1）细胞放在冰上，去除上清，用pH7。4的冷磷酸盐缓冲液洗涤单层细胞两次2）加入1ml2%TritonX溶液冰浴15min3)刮下单层细胞，4度下10 000g 5min离心4）溶液37度水浴 10min以分离水相和去污剂相，然后37度下2 000g离心5min5)收集水相留作分析6）用500ul冰冷的buffer C溶解去污剂相沉淀，冰浴2min后加温，在按步骤6再次离心7）按步骤8再次抽提去污剂相，用buffer C将洗涤后的去污剂相稀释到初始体积8）用等量的buffer A分别稀释水相与去污相，并进行免疫沉淀实验试剂：1）2%tritonX114:2%TritonX114、50mmol/L Tris HCl（pH7。5）、蛋白酶抑制剂2）缓冲液A（含0。5mol/LNaCl的RIPA buffer)3)buffer C10mmol/L Tris HCl(pH7.5)150mmol/L NaCl5mmol/L EDTA(PH7.5)分离细胞膜蛋白的方法：7M urea2M thiourea4%chaps2.5%sb3-101000000个细胞，可用此 buffer 1ml。 冰浴匀浆。冰上置30分钟。4度高速低温离心30min。取上清-20保存。分离组织膜蛋白的方法：1）取组织，加入10ml Buffer A 于冰上充分匀浆。2）J6-HC离心机800rpm，4℃离心10min后，所得上清液转入超速离心管。3）100000g，4℃离心1hr。弃去上清，沉淀用适量的 Buffer B重悬，冰上孵育2hr后分装至EP管， Eppendorf台式离心机10000rpm，4℃离心30min。4）收集所得上清液即为膜组份。Buffer A：0.32M 蔗糖，5mM Tris-HCl（PH 7.5），120mM KCl，1mM EDTA,1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。冰上预冷。Buffer B：20mM HEPES（PH 7.5），10%甘油，2% Triton X-100, 1mM EDTA, 1mM EDTA, 0.2mM PMSF, 1ug/ml Leupeptin, 1ug/ml Pepstatin A, 1ug/ml Aprotinin。 冰上预冷。分离组织膜蛋白的方法：RIPA1XPBS1%NP400.5去氧胆酸钠0.1%SDS以下用时加入10mg/ml PMSF异丙醇（终浓度10ul/ml)Aprotinin（30ul/ml)1000mM Sodium Orthovandate（10ul/ml)冰冻组织100mg/细胞1000000个，可用RIPA buffer 1ml。 冰浴匀浆。冰上置30分钟。4度高速离心30min，20000转低温离心最佳。取上清-20保存。分离细菌膜蛋白的方法：① 于20ml 营养肉汤中过夜培养细菌，37℃，200rpm。② 10000g、20min、4℃离心，去上清。③ 20ml预冷的Tris-Mg缓冲液重悬，同样条件离心，再重悬于预冷的Tris-Mg缓冲液。④ 超声波破碎细菌。⑤ 3000g，10min、室温下离心去除未破碎细菌。小心吸取上清（含有胞质成分和细菌外被成分）。⑥ 超速离心I：100,000g，60min，4℃，去除上清（胞质成分），收集细菌外被成分。⑦ 用10ml含2％的SLS的Tris-Mg 缓冲液重悬沉淀物，室温温育20-30min。⑧ 超速离心II：70,000g，60min，室温沉淀收集外膜蛋白，去除上清（含细胞质膜）。重复⑦、⑧两步。⑨ 充分吸除上清，并根据沉淀体积大小用0.1-0.2 ml的ddH2O重悬沉淀物。根据公式：蛋白浓度(mg/ml)=1.450 D280-0.740 D260测定外膜蛋白浓度，调节蛋白浓度至40ug/ul，该蛋白质样品-70℃贮存。试剂① Tris-Mg 缓冲液10mM Tris-Cl5mM MgCl2pH 7.3，4℃保存② 2%(w/v)十二烷基肌氨酸钠 (SLS)如何进行亚细胞结构的分离？亚细胞构造的离心分离一）简介：用简易的差分离心结合各种型式的密度梯度离心可以分离和纯化各种亚细胞器。研究者也可以根据自己的设备情况对实验 参数作一定的改动，也可以更多地利用速率--区带密度梯度离心或等密度离心来简化实验过程和提高分离纯度。二）实验：匀浆制备：鼠肝12克加入0.25M蔗糖与5mM Tris-HCL (PH7.4)共45ml用"概论"中建议的匀浆设备与方法制备成匀浆待用。鼠肝匀浆的差分分离程序该实验流程中沉Ⅰ：细胞核、质膜大片断，重线粒体，少量未破碎细胞及极少量沉Ⅱ→沉Ⅳ的成份沉Ⅱ：重线粒体、质膜片断，及少量沉Ⅲ→沉Ⅳ成份。沉Ⅲ：线粒体、溶酶体，高尔基膜，部分粗内质纲及极少量沉Ⅳ成份沉Ⅳ：所有的细膜质可溶部份。离心Ⅰ：低速冷凝冻离心机，50ml管。离Ⅱ，离Ⅲ为高速冷冻离心机8×50ml角转头。离Ⅳ为超速机或高速机8×50ml角转头。ii)从沉Ⅱ中纯化线粒体：匀浆保持在200mM甘露醇，50mM蔗糖，1mM EDTA, 10mM Hepes-Naoh (PH7.4)中，全部操作均应使匀浆在冰溶中，产生沉Ⅱ后去除上清表面以及离心管壁部的脂肪（这一点很重要）加20ml保持液到沉Ⅱ中稀释到30ml，3000g×10分再次离心并重复以上过程二次以上，最后的沉淀保持在10ML保持液中。iii)从沉Ⅳ中部份纯化光滑微粒体：保持液为0.25M蔗糖，5mM Tris-Hcl (PH7.4)沉淀中光滑微粒体成松软状态位于紧密状态的粗糙微粒体沉淀之上。小心地倒掉上清Ⅳ后，在沉Ⅳ中加入2~3ml保持液，轻摇，大部份光滑微粒体（沉ⅣA）将分散到清液中，而沉Ⅳ（B）（粗糙微粒体，紧密沉淀）仍在沉降中，倒出沉Ⅳ（A），余下的沉Ⅳ B加入2~3ml保持液即完成。iii)从沉Ⅰ中部份纯化质膜：保持液用 1mM NaHCO3鼠肝加25ml保持液在研钵中锺击15次，仍用1mMNaCHO3稀释在100ml，搅拌2分钟并用孔径力75μm的尼龙布过滤。然后离心得到Ⅰ加5ml 1mM NaHCO3到沉Ⅰ中再放入匀浆器，慢速往复2~3次。再用1mM NaHCO3稀释到15ml，用甩平转头10ml玻璃锥形管，1200g离心10分钟，不用制动减速到停车，沉淀很明显由三层组成。轻轻摇动或搅动即可使最上层的线粒体溶入上清液。中间层富含质膜，最下层是细胞核。倒去上清加5ml1mM NaHCO3轻摇使中间层进入溶液，注意要尽可能少地扰动最下层核沉淀。将再次倒出的上清液稀释到15ml并重复以上离心过程即可进一步纯化质膜。iv)从上Ⅲ中分离粗糙和光滑微粒体：从已经去掉线粒体的上Ⅲ中可以比从沉Ⅳ中更有效地分离粗糙及光滑微粒体，配置溶液0.6M蔗糖，5mM Tris-HCL, (PH8.0)15mM CSCL, 1.3M蔗糖，0.25M蔗糖用角式转头，10~13ml厚壁PC（聚碳酸脂）离心管，先注入3ml 1.3M蔗糖-5mM Tris-HCL再注入1.5ml 0.6M蔗糖-5mM Tris-HCL从而形成了一个在离心管下部的阶梯形密度梯度。在梯度上部注入上Ⅲ直至充满离心管。100000g×90分钟。离心后得到二个主要部份：在0.6M蔗糖界面处或稍下一点是光滑微粒体，沉淀是粗糙微粒体。要针筒吸出光滑微粒体。沉淀用三倍空积的5mM Tris-HCL(PH8.0)稀释后再次离心160000g×30分，得到粗糙微粒体沉淀，再用2-3ml的0.25M蔗糖与5mM Tris-HCL(PH8.0)稀释即可。V）从匀浆中纯化细胞核：配制溶液：0.25M蔗糖在TKM（0.05M Tris-HCL,PH7.5）中及2.3M蔗糖在TKM中，25mM KCL, 5mM Mgcl2将鼠肝放在研钵中加0.25M蔗糖-TKM，冲研10~15二次，用纱布过滤后加入二倍容积的2.3M-TKM，这样就使蔗糖的浓度为1.62M（该浓度最好用光折射仪检测确认，20℃时折射率约为1.4115, 5℃时，1.4137）。将此溶液9ml注入PC离心管，在溶液下属注入3~4ml 2.3M蔗糖-TKM。 130000g×30分，5℃，甩平转头。离心后倒去上清液即为核沉淀。它可以根据研究者需要用合适的缓冲剂稀释。vi)从沉Ⅰ中纯化细胞核：取沉Ⅰ，用旋涡混合器分散沉淀并加入等睇容积的60%（W/W）蔗糖--TKM，放入匀浆器上下抽动2~3次，继续加入60%（W/W）蔗糖-TKM直至蔗糖浓度达到56%（W/W），用折射仪检测（5℃折射率1.4356，20℃时，1.4328）。取该溶液9ml移入14ml聚碳酸脂（PC）离心管管下部铺3~4ml60%(W/W)蔗糖液，在甩平转头中120000g 5℃离心30分钟，倒去上清液。余下的核沉淀可用合适的缓冲液稀释。为了消除沉淀中的膜，在制备匀浆时可用0.5% Triton x-100清洗。这种做法既消除了膜，又不影响核的结构。vii)从沉Ⅰ中纯化质膜配制溶液：60%（W/W）蔗糖液，37.2%(w/w)蔗糖液均分别加在5mM Tris-HCL(PH8.0)中将已制备好的沉Ⅰ乘余的缓冲液一起用温旋混合器混合后再加入60%（W/W）蔗糖使蔗糖终浓度为48%，并用折射仪检测（5℃，1.4181; 20℃, 1.4158）。取以上溶液6ml注入14ml PC离心管，上铺6ml 37.2%w/w蔗糖液以1m PH7.4缓冲液。在甩平转头中160000g, 5℃,离心3小时。质膜聚集在37.2%w/w蔗糖液的上部，用注射器吸出，并用三倍容积的5mM Tris-HCL(PH8.0)稀释后再在100000g, 5℃离心40分钟，沉淀即为质膜。viii)从沉淀Ⅰ中纯化重体粒体配制溶液：0.25M蔗糖，10mM Hepes-NaOH(PH7.5), 1mM EDTA, 1mM Mgcl2,2.4M蔗糖，将沉Ⅰ用0.25M蔗糖，10mM Hepes-Naoh (PH7.5)，1mM Mgcl2稀释到15ml。要尽可能避免动及沉淀最底部的红色部份。将已稀释部份倒出，混匀后加入23ml 2.4M蔗糖，10mMHepes-Na(OH)(PH7.5),1mM Mgcl2。所得到的最终蔗糖浓度力1.0M 。用光折射仪测定（5℃，1.3827;20℃,1.3812）如需要，进行调节，将此液体倒入一个50ml PC管，上铺8ml 0.25M蔗糖，10mM Hepes-Naoh(PH7.5)在35000g, 5℃离心10分钟，倒去上清液重擦净沾在离心管壁上的物质。沉淀很清楚有二层，须离心管内壁加入10ml 0.25M蔗糖10mM Hepes-Naoh (PH7.5), 1mM EDTA，轻轻晃动并稀释沉淀的上部褐色重线粒体层。对于其他组织材料的线粒体纯化问题，请参照"Methods in Enzymology)第55卷。Ⅸ）从沉Ⅲ中纯化溶酶体及粒体：配制溶液：0.3M,1.1M,2.1M蔗糖分别溶入1mM EDTA与5mM Tris-HCL (PH7.0)在14mlPC管中制备好二个10ml，1.1M,2.1M蔗糖的线性梯度可以用梯度形成仪做成，也可以用不连续梯度(1.1M,1.4M,1.7M,2.1M，每种2.5ml)在5℃静量12~16小时也会形成连续的1.1~2.1M近线性梯度。在沉Ⅲ中加入10ml,0.3M蔗糖液，轻摇，慢慢地可以看到离心管底部沉积了暗褐色的沉淀（溶酶体）倒去上清，加入4ml 0.3M蔗糖液在匀浆器中磨匀（注意：活塞与器壁要松一些）。取2ml以上匀浆置于线性梯度(1.1M~2.1M蔗糖)之上，轻搅匀浆使其与梯度液之间的界面尽可能减少密度的不连续，在甩平转头中95000g,5℃孙心4小时。离心后，溶酶体区带形成于1.20~1.26 g/cm3密度之间（在离心管下部）而线粒体则形成于1.17~1.21g/cm3密度之间（在离心管中部。溶酶体区带中密度较高的部份相对较纯。用光折射仪测定（5℃，1.3827;20℃ 1.3812）如需要进行调节，将此液体例入一个50ml PC管，上铺8ml 0.25M蔗糖，10mM Hepes-NaOH(PH7.5)在35000g,5℃离心10分钟，倒去上清液重擦净沾在离心管壁上的物质。沉淀很清楚有二层，顺离心管内壁加入10ml 0.25M蔗糖10mM Hepes-NaOH (PH7.5) 1mM EDTA，轻轻晃动并稀释沉淀的上部褐色重线粒体层。对于其他组织材料的线粒体纯化问题，请参照"Methods in Enzymology)第55卷。Ⅸ）从沉Ⅲ中纯化溶酶体及线粒体：配制溶液：0.3M,1.1M,2.1M蔗糖分别溶入1Mm edta与5mM Tris-HCL(PH7.0)在14ml PC管中制备好二个10ml, 1.1M,2.1M蔗糖的线性梯度可以用梯度形成仪做成，也可以用不连续梯度(1.1M,1.4M,1.7M,2.1M,每种2.5ml)在5℃静置12~16小时也会形成连续的1.1~2.1M近线性梯度。在沉Ⅲ中加入10ml,0.3M蔗糖液，轻摇，慢慢地可以看到离心管底部沉积了暗褐色的沉淀（溶酶体）倒去上清，加入4ml 0.3M蔗糖液在匀浆器中磨匀（注意：活塞与器壁要松一些）。取2ml以上匀浆置于线性梯度(1.1M~2.1M蔗糖)之上，轻搅匀浆使其与梯度液之间的界面尽可能减少密度的不连续，在甩平转头中95000g,5℃离心4小时。离心后，溶酶体区带形成于1.20~1.26 g/cm3密度之间（在离心管下部）而线粒体则形成于1.17~1.21g/cm3密度之间（在离心管中部。溶酶体区带中密度较高的部份相对较纯。Ⅹ）从沉Ⅱ及沉Ⅲ中纯化高尔基膜：配置梯度溶液：38.79,36%,33%,29%(w/w)蔗糖液每种均加入5mM Tris-HCL(PH8.0)用上清Ⅰ离心，10000g,5℃ 20分钟待到沉Ⅱ+沉Ⅲ用5ml 0.25M蔗糖，5mM Tris-HCL(PH8.0)稀释沉淀，恒湿搅拌并使溶液的蔗糖浓度上升到43.07%(w/w)，用光折射仪检测（5℃，1.1979;20℃,1.1957）在PC离心管中(13ml)由下往上依次铺设如下层次：3ml样品（蔗糖浓度43%w/w）,4ml 38.7%蔗糖液，2ml 36%蔗糖液，2ml 37%蔗糖液，2ml,29%蔗糖液。在甩平转头中160000g,5℃离心1小时，用注射器收集含有高尔基膜的上部二个区带。我们也可以用这个方法从全匀浆中来分离纯化高尔基膜，匀浆中蔗糖浓度配到43.7%,然后用以上不连续梯度来分离纯化，但是大于大容量匀浆，直接法是不合适的。小结：以上典型实验(1)鼠肝匀浆为原料，以差分离心为主，辅以蔗糖的连续或不连续梯度分离各种亚细胞器，方法简单易行，或本也较低。我们也可以用Ficoll,percoll, Metrizamide,Nycodenz,……等等梯度材料来分离纯化亚细胞器。参考文献：（i）J. Graham "I solation of subcellular organelles and Membranes" IRL press. 1984(ii)W.H.Evans "I solation and characterizationof membranes and cell organelles"Oxford University press.(iii)G.J.Wagner Methods Enzymol, 148,55,1987(iv)Rickwood. D等Anal, Biochem, 187,318,1990(v)余兴明"离心技术"设备与方法1993
基因工程是在分子生物学和分子遗传学综合发展基础上于 20 世纪 70 年代诞生的一门崭新的生物技术科学。下面是由我整理的基因工程学术论文，谢谢你的阅读。 基因工程学术论文篇一 摘 要：基因工程是在分子生物学和分子遗传学综合发展基础上于 20 世纪 70 年代诞生的一门崭新的生物技术科学。基因工程是一项很精密的尖端生物技术。可以把某一生物的基因转殖送入另一种细胞中，甚至可把细菌、动植物的基因互换。当某一基因进入另一种细胞，就会改变这个细胞的某种功能。这项工程创造出原本自然界不存在的重组基因。它不仅为医药界带来新希望，在农业上提高产量改良作物，并且对环境污染、能源危机提供解决之道，甚至可用在犯罪案件的侦查。基因工程的发展现状和前景是怎么样呢，而又有哪些利弊? 关键词：基因工程;发展现状;发展前景;基因工程利弊 一、基因工程 (一)基因工程的概念及发展 1.概念 基因工程又称基因拼接技术和DNA重组技术，是以分子遗传学为理论基础，以分子生物学和微生物学的现代方法为手段，将不同来源的基因按预先设计的蓝图，在体外构建杂种DNA分子，然后导入活细胞，以改变生物原有的遗传特性、获得新品种、生产新产品。 2.发展 生物学家于20 世纪50 年代发现了DNA 的双螺旋结构，从微观层面更进一步认识了人类及其他生物遗传的物质载体，这是人类在生物研究方面的一次重大突破。60 年代以后，科学家开始破译生物遗传基因的遗传密码，简单地说，就是将控制生物遗传特征的每一种基因的核苷酸排列顺序弄清楚。在搞清楚某些单个基因的核苷酸排列顺序基础上，进而进行有计划、大规模地对人类、水稻等重要生物体的全部基因图谱进行测序和诠释。 (二)基因工程的发展现状及前景 1.发展现状 (1)基因工程应用于农业方面。运用基因工程方法，把负责特定的基因转入农作物中去，构建转基因植物，有抗病虫害，抗逆，保鲜，高产，高质的优点。 下面列举几个代表性方法。 ①增加农作物产品营养价值如：增加种子、块茎蛋白质含量，改变植物蛋白必需氨基酸比例等。 ②提高农作物抗逆性能如：抗病虫害、抗旱、抗涝、抗除草剂等性能。 ③生物固氮的基因工程。若能把禾谷等非豆科植物转变为能同根瘤菌共生，或具固氮能力，将代替无数个氮肥厂。④增加植物次生代谢产物产率。植物次生代谢产物构成全世界药物原料的 25% ，如治疗疟疾的奎宁、治疗白血病的长春新碱、治疗高血压的东莨菪碱、作为麻醉剂的吗啡等。 ⑤运用转基因动物技术，可培育畜牧业新品种。 二、基因工程应用于医药方面 目前，以基因工程药物为主导的基因工程应用产业已成为全球发展最快产业之一，前景广阔。基因工程药物主要包括细胞因子、抗体、疫苗、激素和寡核甘酸药物等。对预防人类肿瘤、心血管疾病、遗传病、糖尿病、包括艾滋病在内的各种传染病、类风湿疾病等有重要作用。我们最为熟悉的干扰素(IFN)就是一类利用基因工程技术研制成的多功能细胞因子，在临床上已用于治疗白血病、乙肝、丙肝、多发性硬化症和类风湿关节炎等多种疾病。 并且应用基因工程研制的艾滋病疫苗已完成中试，并进入临床验证阶段;专门用于治疗肿瘤的“肿瘤基因导弹”也将在不久完成研制，它可有目的地寻找并杀死肿瘤，将使癌症的治愈成为可能。 三、基因工程应用于环保方面 工业发展以及其它人为因素造成的环境污染已远远超出了自然界微生物的净化能力，基因工程技术可提高微生物净化环境的能力。美国利用DNA 重组技术把降解芳烃、萜烃、多环芳烃、脂肪烃的4 种菌体基因链接，转移到某一菌体中构建出可同时降解4 种有机物的“超级细菌”，用之清除石油污染，在数小时内可将水上浮油中的2/3 烃类降解完，而天然菌株需 1 年之久。90 年代后期问世的DNA 改组技术可以创新基因，并赋予表达产物以新的功能，创造出全新的微生物，如可将降解某一污染物的不同细菌的基因通过PCR 技术全部克隆出来，再利用基因重组技术在体外加工重组，最后导入合适的载体，就有可能产生一种或几种具有非凡降解能力的超级菌株，从而大大地提高降解效率。 (一)发展前景 基因工程应用重组DNA 技术培育具有改良性状的粮食作物的工作已初见成效。重组DNA 技术的一个显著特点是，它注往可以使一个生物获得与之固有性状完全无关的新功能，从而引起生物技术学发生革命性的变革，使人们可以在大量扩增的细胞中生产哺乳动物的蛋白质，其意义无疑是相当重大的。将控制这些药物合成的目的基因克隆出来，转移到大肠杆菌或其它生物体内进行有效的表达，于是就可以方便地提取到大量的有用药物。目前在这个领域中已经取得了许多成功的事例，其中最突出的要数重组胰岛素的生产。 重组DNA 技术还有力地促进了医学科学研究的发展。它的影响所及有疾病的临床诊断、遗传病的基因治疗、新型疫苗的研制以及癌症和艾滋病的研究等诸多科学，并且均已取得了相当的成就。 (二)基因工程的利与弊 1.基因工程的利 遗传疾病乃是由于父或母带有错误的基因。基因筛检法可以快速诊断基因密码的错误;基因治疗法则是用基因工程技术来治疗这类疾病。产前基因筛检可以诊断胎儿是否带有遗传疾病，这种筛检法甚至可以诊断试管内受精的胚胎，早至只有两天大，尚在八个细胞阶段的试管胚胎。做法是将其中之一个细胞取出，抽取DNA，侦测其基因是否正常，再决定是否把此胚胎植入母亲的子宫发育。胎儿性别同时也可测知。 基因筛检并不改变人的遗传组成，但基因治疗则会。目前全世界正重视发展永续性农业，希望农业除了具有经济效益，还要生生不息，不破坏生态环境。基因工程正可帮忙解决这类问题。基因工程可以改良农粮作物的营养成分或增强抗病抗虫特性。可以增加畜禽类的生长速率、牛羊的泌乳量、改良肉质及脂肪含量等。 2.基因工程的弊 广泛的基因筛检将会引起一连串的社会问题。虽然基因筛检可帮助医生更早期更有效地治疗病人，但可能妨碍他的未来生活就业。基因工程会产生“杀虫剂”的作物，也可能对大环境有害，它们或许会杀死不可预期的益虫，影响昆虫生态的平衡。转基因食品不同于相同生物来源之传统食品，遗传性状的改变，将可能影响细胞内之蛋白质组成，进而造成成份浓度变化或新的代谢物生成，其结果可能导致有毒物质产生或引起人的过敏症状，甚至有人怀疑基因会在人体内发生转移，造成难以想象的后果。转基因食品潜在危害包括：食物内所产生的新毒素和过敏原;不自然食物所引起其它损害健康的影响;应用在农作物上的化学药品增加水和食物的污染;抗除草剂的杂草会产生;疾病的散播跨越物种障碍;农作物的生物多样化的损失;生态平衡的干扰。 四、结束语 随着社会科技的进步，基因工程的发展将成为必然。尽管它会给我们带来一些危害但是仍然为我们带来了很多好处。不仅为我们提供了新的能源而且促进了各国的经济的发展，所以在我们发展基因工程的同时应该尽力避免一些危害，而让有利的方面尽可能应用。 参考文献： [1]陈宏.2004.基因工程原理与应用.北京：中国农业 出版社 [2]胡银岗.2006.植物基因工程.杨凌.西北农林科技大学出版社 [3]刘祥林.聂刘旺.2005.基因工程.北京：科学出版社 [4]陆德如.陈永青.2002.基因工程.北京：化学工业出版社 [5]王关林.方宏筠.2002.植物基因工程.北京：科学出版社 基因工程学术论文篇二 基因工程蛋白药物发展概况 【摘要】近些年，随着生物技术的发展，基因工程制药产业突飞猛进，本文就一些相关的重要蛋白药物的市场概况和研究进展作一概述。 【关键词】基因工程 蛋白药物 发展概况 中图分类号：R97 文献标识码：B 文章编号：1005-0515(2011)6-255-03 基因工程制药是随着生物技术革命而发展起来的。1980 年，美国通过Bayh-Dole 法案，授予科学家 Herbert Boyer 和 Stanley Cohen 基因克隆专利，这是现代生物制药产业发展的里程碑。1982 年，第一个生物医药产品在美国上市销售，标志着生物制药业从此走入市场[1]。 生物制药业有不同于传统制药业的特点：首先，生物制药具有“靶向治疗”作用;其次，生物制药有利于突破传统医药的专利保护到期等困境;再次，生物制药具有高技术、高投入、高风险、高收益特性;此外，生物制药具有较长的产业链[1]。生物制药业这一系列的特点决定了其在21世纪国民经济中的重要地位，历版中国药典收录的生物药物品种也是逐渐增多[2](图一)。 当前生物制药业的发展趋势在于不断地改进、完善和创新生物技术，在基因工程药物研发投入逐年增加的基础上，我国生物制药的产值及利润增长迅猛， 2006-2008年三年就实现了利润翻番[2](表一)。随着研究的深入，当前生物药的热点逐渐聚焦到通过新技术大量生产一些对医疗有重要意义且成分确定的蛋白上。研究表明，在我国的基因工程药物中，蛋白质类药物超过50%[3]。而这些源自基因工程菌表达的蛋白，如疫苗、激素、诊断工具、细胞因子等在生物医学领域的应用主要包括4个方面：即疾病或感染的预防;临床疾病的治疗;抗体存在的诊断和新疗法的发现。利用基因工程技术(重组DNA技术)生产蛋白主要有三方面的理由：1.需求性，天然蛋白的供应受限制，随需求的不断增加，数量上难以满足，使它得不到广泛应用;2.安全性，一些天然蛋白质的原料可能受到致病性病毒的污染，且难以消除或钝化;3.特异性，来自天然原料的蛋白往往残留污染，会引起诊断试验所不应有的背景[4]。 以下将介绍一些基因工程产物的市场概况和研究发展。 1 促红细胞生成素 是细胞因子的一种，在骨髓造血微环境下促进红细胞的生成。1985年科学家应用基因重组技术，在实验室获得重组人EPO(rhEPO)，1989年安进(Amgen)公司的第一个基因重组药物Epogen获得FDA的批准，适应症为慢性肾功能衰竭导致的贫血、恶性肿瘤或化疗导致的贫血、失血后贫血等[5,6]。 2001年，EPO的全球销售额达21.1亿美元，2002年达26.8亿美元，2003年全世界EPO的年销售额超过50亿美元。创下生物工程药品单个品种之最，是当今最成功的基因工程药物。用过EPO的大多数病人感觉良好，在治疗期间无明显毒副作用或功能失调。重组体CHO细胞可以放大到生产规模以满足对EPO的需求。 2 胰岛素 自1921 年胰岛素被Banting 等人成功提取并应用于临床以来，已经挽救了无数糖尿病患者的生命。仅2000年，胰岛素在全球范围内就大约延长了5100万名I型糖尿病病人的寿命。20世纪80年代初，人胰岛素又成为了商业现实;80 年代末利用基因重组技术成功生物合成人胰岛素，大肠杆菌和酵母都被用作胰岛素表达的寄主细胞[7]。 国内外可工业化生产人胰岛素的企业只有美国的礼来公司、丹麦的诺和诺德公司、法国的安万特公司和中国北京甘李生物技术有限公司等，胰岛素类似物也仅在上述4个国家生产，且每个公司只能生产艮效或速效类似物巾的个品种，主要原因是要达到生物合成人胰岛素产业化的技术难度特别大，若无高精尖的高密度发酵技术、纯化技术和工业化生产经验是无法实现的[8]。 3 疫苗 在人类历史上，曾经出现过多种造成巨大生命和财产所示的疫症，而在预防和消除这些疫症的过程中疫苗发挥了十分关键的作用。所以疫苗被评为人类历史上最重大的发现之一。 疫苗可分为传统疫苗(t raditional vaccine) 和新型疫苗(new generation vaccine)或高技术疫苗( high2tech vaccine)两类,传统疫苗主要包括减毒活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗,新型疫苗主要是基因工程疫苗。疫苗的作用也从单纯的预防传染病发展到预防或治疗疾病(包括传染病) 以及防、治兼具[2]。 随着科技的发展，对付艾滋病、癌症、肝炎等多种严重威胁人类生命安全的疫苗开发取得巨大进展，这其中也孕育着巨大的商业机会[9]， 2007年全球疫苗销售额就已达到163亿美元，据美林证券公布的一份研究报告显示，全球疫苗市场正以超过13%的符合增长率增长。而我国是疫苗的新兴市场，国内疫苗市场发展潜力巨大，年增长率超过15%。 在以细胞培养为基础的疫苗、抗体药物生产中，Vero细胞、BHK21细胞、CHO细胞和Marc145细胞是最常用的细胞，这些细胞的反应器大规模培养技术支撑着行业的技术水平[4]。建立细胞培养和蛋白表达技术平台，进一步完善生物反应器背景下的疫苗生产支撑技术是当前国际疫苗产业研究的重点。 4 抗体 从功能上划分，抗体可分为治疗性抗体和诊断性抗体;从结构特点上划分，抗体可分为单克隆抗体和多克隆抗体。抗体可有效地治疗各种疾病，比如自身免疫性疾病、心血管病、传染病、癌症和炎症等[10,11]。抗体药物的一大特点在于其较低甚至几乎可以忽略的毒性。另外一个优势是，抗体本身也许既可被当作一种治疗武器，也可被用作传递药物的一种工具。除了全人源化抗体以外，与小分子药物、毒素或放射性有效载荷有关的结合性抗体也已经在理论上显示出了强大的潜力，尤其是在癌症治疗方面[12]。 治疗性抗体是世界销售额最高的一类生物技术药物,2008 年治疗性抗体销售额超过了300 亿美元,占了整个生物制药市场40%。在美国批准的99 种生物技术药物中,抗体类药物就占了30 种;在633 种处于临床研究的生物技术药物中, 有192 种为抗体药物,而在抗癌及自身免疫性疾病的治疗研究中,治疗性抗体占了一半[2]。截止2007年，美国FDA批准上市的抗体药物见表二[13]。 参考文献 [1] 章江益, 孙瑜, 王康力. 美国生物制药产业发展及启示[J]. 江苏科技信息. 2011, 1(5): 11-14. [2] 王友同, 吴梧桐, 吴文俊. 我国生物制药产业的过去、现在和将来. 药物生物技术[J]. 2010, 17(1): 1-14. [3] 吴梧桐, 王友同, 吴文俊. 21世纪生物工程药物的发展与展望[J]. 药物生物技术. 2000, 7(2): 65-70. [4] 储炬, 李友荣. 现代工业发酵调控学(第二版)[M]. 化学工业出版社. [5] Koury MJ, Bondurant MC. Maintenance by erythropoietin of viability and maturation of murine erythroid precursor cell[J]. Cell Physiol, 1988, 137(1):65. [6] Cuzzole M, Mercurial F, Brugnara C. Use of recombinant human Erthro-poietin outside the setting of uremia[J]. Blood, 1997, 89(12): 4248-4267. [7] 李萍, 刘国良. 最新胰岛素制剂的研究进展概述[J]. 中国实用内科杂志. 2003, 23(1): 19-20. [8] 张石革, 梁建华. 胰岛素及胰岛素类似物的进展与应用[J]. 药学专论. 2005, 14(11): 21-23. [9] 徐卫良. 生物制品供应链优化与供货提前期缩短问题研究――基于葛兰素史克(中国)疫苗部的实例分析(硕士学位论文). 上海交通大学, 2005. [10] Presta LG. Molecular engineering and design of therapentic antilodies[J]. Curr Opin Immunol, 2008, 20(4): 460. [11] Liu XY, Pop LM, Vitetta ES. Engineering therapeutic monoclonal antibodies[J]. Immunol Rev, 2008, 222: 9. [12] 陈志南. 基于抗体的中国生物制药产业化前景. 中国医药生物技术[J]. 2007, 1(1): 2. [13] 于建荣, 陈大明, 江洪波. 抗体药物研发现状与发展态势[J]. 生物产业技术. 2009, 1(3): 49.看了"基因工程学术论文"的人还看: 1. 高中生物选修三基因工程知识点总结 2. 高二生物基因工程知识点梳理 3. 浅谈基因工程在农业生产中的应用 4. 植物叶绿体基因工程发展探析 5. 关于蔬菜种植的学术论文
BEL-7402 细胞是一种肝癌细胞.肝肿瘤的主要组成细胞
是斯里兰卡当地人文环境主题 斯里兰卡位于亚洲南部
《泰坦尼克号》女主角真实存在。
海伦·丘吉尔·坎迪，是影片《泰坦尼克号》女一号原形，但与电影中女一号露丝不一样，她并不是青春女孩，反而是中年熟女。《泰坦尼克号》中凄惨的感情故事以前打动了成千上万人，但坎迪的死前回忆公布：泰坦尼克感情故事和真实故事截然不同。
虽然已年近半百，但坎迪风韵犹存。上船后，坎迪吸引住了商务舱内最少6名男性的留意，这种绅士竞相向坎迪投怀送抱。死里逃生的坎迪，为英国的一家杂志期刊写出了自身在泰坦尼克上的感情故事，这也变成后来电影《泰坦尼克号》的艺术创作素材图片。
在坎迪的回忆中描绘道，当泰坦尼克号撞到冰川的一刹那，是休伍伦第一个赶来了她身旁：“它用手揽住了我的肩部，这帮我一种出乎意料的归属感。”
影片女主简介：
露丝（青年）演员凯特：·温斯莱特当时身处在一个虚有其表社会下的名媛，准备要与和自己兴趣完全不符的卡尔结婚，以解决家族衰败的现况，后碰到与自己心意相合的杰克，原准备下船后与他一同生活，却不幸遇到沉船。
露丝（老年）演员格劳瑞亚·斯图尔特：于1996年造访泰坦尼克号宝物探测队的船，时年101岁。在电视中看到泰坦尼克号探测队发现的那幅当初杰克为露丝素描的图画，而引出当时那已无人知晓的故事。
1.TIME时代 美国1923年创刊即便是它在今年的美国“国家期刊奖”中一个提名也没有获得，话语惯性与品牌传统以及以红框构成的各式封面积累仍然维系着《时代》的地位。的确，品质沉淀是这本至尊杂志的最可贵底蕴，每年年底的“年度风云人物”评选也许永远都是其最荣耀的时刻。2.National Geographic国家地理杂志 美国1888年创刊财力物力惊人并不是造就《国家地理杂志》殿堂的根本，不懈的职业态度与拓展性极大地推动了这本超级王牌杂志发展，国家地理频道以及众多衍生产品共同织造着其殿堂的不断扩充。新作“泳衣百年”特刊，显示其锐意改革切合时下市场的难得新派作风。3.FORTUNE财富 美国1930年创刊为全球人熟知的两个杂志运营品牌“财富论坛”和“500强”仍然在继续维持着它们在财经领域的话语霸权。杂志本体操作得仍然让人看不出其有任何老态，即便是在前些年那些锐意改变一切的新经济杂志面前，《财富》仍然保持着可贵的新鲜。4.VOGUE美国1892年创刊老牌VOGUE的时尚集团地位已不容置疑，在学者中，VOGUE亦已化身为时尚影像历史的代表物。VOGUE在意大利获得更值得称道的发展，结合ITALY人的时尚与热情诞生了时尚杂志超级模范，VOGUE ITALIA发展至今已经建立了5本同样出色的子刊，昭示着VOGUE的惊人魅力。
首先要明确朋友发表文章的用途，
二是要确定合适的正规刊物，
三是要看对方信誉如何。
英语类的国家级刊物很多，但大多很难上，可以选择要求较低的刊物
1.TIME时代 美国1923年创刊 即便是它在今年的美国“国家期刊奖”中一个提名也没有获得，话语惯性与品牌传统以及以红框构成的各式封面积累仍然维系着《时代》的地位。的确，品质沉淀是这本至尊杂志的最可贵底蕴，每年年底的“年度风云人物”评选也许永远都是其最荣耀的时刻。 2.National Geographic国家地理杂志 美国1888年创刊 财力物力惊人并不是造就《国家地理杂志》殿堂的根本，不懈的职业态度与拓展性极大地推动了这本超级王牌杂志发展，国家地理频道以及众多衍生产品共同织造着其殿堂的不断扩充。新作“泳衣百年”特刊，显示其锐意改革切合时下市场的难得新派作风。 3.FORTUNE财富 美国1930年创刊 为全球人熟知的两个杂志运营品牌“财富论坛”和“500强”仍然在继续维持着它们在财经领域的话语霸权。杂志本体操作得仍然让人看不出其有任何老态，即便是在前些年那些锐意改变一切的新经济杂志面前，《财富》仍然保持着可贵的新鲜。 4.VOGUE 美国1892年创刊 老牌VOGUE的时尚集团地位已不容置疑，在学者中，VOGUE亦已化身为时尚影像历史的代表物。VOGUE在意大利获得更值得称道的发展，结合ITALY人的时尚与热情诞生了时尚杂志超级模范，VOGUE ITALIA发展至今已经建立了5本同样出色的子刊，昭示着VOGUE的惊人魅力。 5.The Economist经济学家 英国1843年创刊 其严谨作风已使其成为这个时代最值得信赖的政经观察家。在全球范围内搭建的观察员队伍素质超群，并在其每年年初发布的全年预测中组成强大的战线；组建各种研究工作机构监测各个经济地区的营商环境和人居环境，都在散布着这本杂志的话语权。 6.PLAYBOY花花公子 美国1952年创刊 仍然是知名度极高的老牌杂志，有着51年历史的成人杂志，如今更有改版做主流男人杂志的决心，值得尊重的传奇创始人海夫纳是否在考虑PLAYBOY品牌难得，资源优势不应是耗在与《阁楼》以及新兴的MAXIM上？应该更明确地去追逐主流广告商？ 7.VANITY FAIR名利场 美国1913年创刊 依然出色地扮演着“从新星到巨星”的全球最华贵舞台提供者的角色，更让人佩服的是，它在国家杂志评奖中在最佳杂志、摄影、专栏、随笔和评论上均获提名。这种浮于华丽世界中却扎实经营杂志本体的内容建设的用心值得称颂。 8.Newsweek新闻周刊 美国1933年创刊 相信没有人会忽视这本新闻杂志这两年在新闻报道上作出的富有开拓性的贡献，独家、周密、侧击、旁敲、独到、新知等各种报道模式层出不穷，市场上更积极地开拓着远东市场，学术上在美国期刊奖中屡有斩获，影响力正飞跃提升。 9.ELLE 法国1945年创刊 国际版本达70份的惊人扩充能力，代表着法国桦榭集团的最强实力。相对于VOGUE与Bazaar的较年轻作风，以及贴近时下年轻女性的时尚需求，加上“女性都向年轻看齐”的心理暗合自然法则，ELLE全球开花的经济效益策略正日见其影响力。 10.WIRED连线 美国1993年创刊 曾经被视为是新经济杂志一员的《WIRED》如今证明了它更重大的贡献在于培养了一大帮“技术派”，这本杂志崇尚无线技术及数码并长期坚持此道，实在值得大批数码热血青年的热烈追捧，文化评论家已经把它等同于1960年代由《滚石》带动的一代。 11.FHM男人帮 英国1985年创刊 近年全球杂志界扩展速度最神速的杂志之一，英国Emap杂志集团的先锋，凭借最畅快淋漓的编辑思路迅速拉拢男性读者的兴趣，俨然成为男人阅读市场这两年来最叱咤风云的新力军。宛如电视传播方式的全新杂志编辑思路如今已经深受追捧。 12.THE FACE脸孔 英国1980年创刊 以颠覆效果著称的英国青年时尚文化杂志，在1980年到2003年间坚持不懈地在青年文化运动中作着The Face式的发言。今年更在Neil Stevenson领导下进行改版试验，显示这本最代表英伦风格的杂志应对时尚全球化的全新编辑思路。 13.ROLLINGSTONE滚石 美国1967年创刊 曾是一代热爱摇滚文化左派分子的代言杂志，代表了杂志媒体在音乐领域的权威声音。今年挖来FHM杂志原主编埃德·尼达姆酝酿改版调整以适应新阅读趣味的策略，可见其要维系《滚石》作为文化代表之心不息。 14.The New Yorker纽约客 美国1925年创刊 它精于透析文化动脉，在政治、文学、艺术各领域中充当思潮流行的先驱角色，其杰出之处是以长久的文学品格与知识分子气质的坚持换取全球大多数欣赏者的崇敬之心，尽管从没有推出其他语种的海外版本，却总会有人来为之作免费杂志文化理念宣传。 15.Forbes福布斯 美国1917年创刊 以人为报道造榜之脉的Forbes，一个“富豪榜”足以让这本杂志大吃四方。其近年最惹人注目的是在亚太地区声音的增强，热衷于“中国富豪榜”的发布及“全球CEO(首席执行官)会议”，瞄准香港更显示其司马昭之心。 16.PEOPLE人物 美国1974年创刊 全球定位最精确又最有效的杂志之一，聚焦主流的风云人物，八卦而不媚俗，强调短小文章迎合时代阅读习惯，由于其编辑方向的精确，便被封为最适合在厕所阅读的主流杂志，足见《人物》阅读适应性之广。 17.i-D 英国1980年创刊 杂志领域标识性最强的刊物，一直坚持的半闭眼封面已成为杂志界之佳话。虽近来编辑思路稍嫌堕入自身之俗套，但仍然以扎实的时尚摄影报道功底与在青年文化之中的敏锐触角占据着最优质青年文化时尚杂志之一的江湖地位。 18.Business Week商业周刊 美国1928年创刊 仍然是商业界最权威的声音，前几年最杰出的贡献是创造了“新经济”的“伟大”概念。《商业周刊》作为美国工商界的最权威刊物，不可避免地与工商界之命运联系起来共荣共辱，也许正是因为经济的低迷导致杂志自身声音的微弱。 19.Wallpaper*墙纸 英国1996年创刊 这本代表建筑室内设计尖端品位，以前专注于建筑家具的圣经杂志在经历了创办人Brule离开事件后,决意改版，成为一本更全面的时尚品位杂志。方针转移后的Wallpaper，本来可以在本榜占据更高的位置，可惜。 20.Brutus Casa 日本 日本杂志资讯搜集能力的升级版：添加了主题运作之方略。每期无处不在的搜刮技能和无微不至的主题编辑思路加上取经Wallpaper*的全球“设计感报道领域”同盟的策略，Brutus Casa已经在亚太地区建造最受建筑界、设计界、时尚界和出版界瞩目的杂志。 21.DER SPIEGEL明镜 德国1947年创刊 德国最主流最代表德国的时事期刊，绝妙之处是，即便是老牌时事杂志，仍然会保持对新生领域报道题材关注的敏感，如今已是人们在感知美国时事期刊之外，另外一家最须知道的声音。 22.PREMIERE首映 美国1987年创刊 去年度过15周年生日的PREMIERE，杂志如其名“首映”，率先报道已成为其新鲜火辣报道的宗旨。主力报道好莱坞电影市道的《首映》贵为好莱坞首席杂志媒体，杂志每年发布的“好莱坞权力榜”、“暑假档期预测”从来就是好莱坞人气的风向标。 23.LIFE生活 美国1936年创刊 本榜唯一已停刊杂志。依然上榜的原因在于其延续至今的影响力，登上LIFE封面已成为经典殿堂的通行证。如今转而发展网络业务及影像专集出版业务的LIFE，由于其经典传奇及影像编辑领域的权威地位，全球卖座力依然。 24.Stern明星 德国1948年创刊 在德国政坛最热爱搞事的时事杂志，去年便以“总统施耐德裸照封面风波”名震一时。对照另一本行事正统的《明镜》，《明星》的作风是每期封面报道做文章增强零售量并以每期覆盖性极高的杂志报道领域与题材打压其他对手。 25.PARIS MATCH巴黎竞赛 法国1949年创刊 作为法国发行量最大的杂志，虽然被人议为带有右派审美趣味，但仍然以其在法国时事报道领域作风严谨，不缺失宫廷秘录、影星名模的生活百态的报道，占据着法文杂志在时事杂志阵营的最强音。 26.GQ 美国1952年创刊 这几乎是一本没有任何缺点的杂志，总会不过不失，每个男人都会在其中得到自己想得到的，市场上也是夹在MAXIM和ESQUIRE之间。而作为一本男人时尚杂志在2003美国期刊奖评选中竟有4项提名，可见GQ在内容上用心建设的日久见人心。 27.COLORS 意大利 已超越了贝纳通店刊作用的COLORS，如今正成为杂志工业中的模范杂志，并以一系列打动人心的反映人文精神的题材在人居、种族、艾滋病、饥饿等话题上塑造着属于全球大同的话题影响力。COLORS今年主打的“饥饿计划”便是连同联合国进行的高调行动。 28.Visionaire视觉 美国1991年创刊 全球杂志金字塔中位于最尖顶端的杂志，Visionaire构建于LV、Gucci、Hermes和FENDI等顶级时尚品牌的时尚工业包装意念下，每每超越杂志工艺可能的制作成为杂志界、时尚界的话题。Visionaire代表着一种超顶端制作带来的影响力。 29.Esquire君子 美国1933年创刊 70年历史的老牌男人杂志，坚持：一、决不办给男孩而是办给男人看，二、决不在封面上比基尼女郎。全球思维最正统的男人杂志，是哈斯特集团下相对应Cosmo的战略品，作风虽嫌老套但江湖地位依然。 30.Time Out 英国1968年创刊 它与超级城市相互寄生，35年的创办历程，以实用、专业、权威与切入城市生活的命脉作风逐步占据全球超级城市的首席城市生活指南杂志地位。今年，Time Out杀入北京，更显示其影响力开拓的步伐。 31.DETAILS细节 美国 本年度“美国期刊奖”最佳设计奖之得主，足见其编排设计之深厚功力。与《GQ》作为Conde Nast旗下仅有的两本男人杂志，Details在美国本土的成就已经人所共知，剩下的工作是如何进行品牌输出出版海外版了。 32.Numero 法国2000年创刊 新法式时尚杂志，其以页码数字为版面设计中心、简约清晰的独特杂志美学一时惹来众家学习。Numero的要核在于其不拘于传统时尚杂志之模式，今年推出的数码CG制作的封面及时尚摄影报道更是领风气之先。 33.Conde Nast Traveler旅游者 美国 2003年度“美国期刊奖”最佳摄影奖之得主，击败的对手包括国家地理杂志、GQ与名利场。借“行者”概念在纯地理概念杂志与旅游杂志之间找到平衡点，并以“50必游地”的号召力找到自己的最容易形成购买点的位置。 34.Sports Illustrated体育画报 美国1954年创刊sportsillustrated.cnn.com 在如今崇尚短小文体的时代，罕有仍然坚持长篇描述报道传统的杂志，今年更凭借记者加里·史密斯的《伏击》获取“人物写作奖”。除却其在扎实文风上的贡献外，《体育画报》每年度引领泳装风尚的“泳装特刊”更是每年夏季的一件盛事。 35.Cosmopolitan大都会 美国1886年创刊 自1996年创办，集合销售、推广、展销、时尚秀的“Cosmopolitan show”在时尚界已有“最佳市场及销售活动”美誉。作为哈斯特集团的旗舰杂志，以大胆、风趣的美国风格出道的COSMO在全球已经凭借一种“成功而时尚的女性”的共同语言打开市场通道。 36.Reader's Digest读者文摘 美国1922年创刊 在经营上毫无疑问，这是一个杂志王国，缔造者德威特·华莱士的个人能力也非常值得后人敬仰。更重要的是，由于速效年代的不断深入，《读者文摘》式的“一针见血而精简的文章主义”仍然会行而有效，当然读图时代及娱乐心态是其最大的敌人。 37.MAXIM箴言 英国1997年创刊 英伦杂志在美国受落的又一代表，Dennis出版公司荣誉贡献。这本诞生于1997年4月1日的“愚人”杂志如今已是独一无二的男性文化时尚类杂志，大胆的作风深受年轻男性的欢迎，在美国销量达250万份更令其他美国本土同类杂志汗颜。 38.OK! 英国1993年创刊 在先后夺得贝克汉姆夫妇与道格拉斯夫妇这两个世纪婚礼的独家拍摄报道权后(后者还在去年引起官司，《OK！》更乘机告倒在婚礼报道上侵权的《HELLO》)，这本英国八卦报纸俨然成为顶级名流豪门的最佳指定合作媒体，只有他们能这样不惜一切。 39.U.S.News美国新闻与世界报道 美国1948年创刊 美国三大新闻周刊之一，由于其过于注重美本土事件报道及海外推广策略的失误，在外之影响力一直有限。最为人熟知的便是其每年耗尽心机制作的“美国最佳大学榜”，因其权威地位和切入美国教育业已成为每年的一件盛事。 40.The New York Times Magazine纽约时报杂志 美国 虽自称为《纽约时报》星期天的最佳搭配品，其实已经是一本独立于日报，而且操作得非常出色的时事生活杂志，把时事题材融合于生活中之功力惊人，每期在封面报道制作上便常常挖空心思，犀利之处是往往能在各类常规时事封面报道中出人意表。 61.BRUTUS 日本1980年创刊 一本适合男士阅读场的流行资讯杂志，日本主题结集式周刊最杰出代表，内容主题式操作与广告营销浑然一体，并已在多年经营中建立属于自身表达方式的潮流报道处理手法，诸如Cross Over、特集、列举等手法都娴熟不已，已是日本杂志中的资讯搜集首席高手。 62.Four Four Two 442 英国1993年创刊 来自足球鼻祖的销量最大的足球杂志，创刊10年来，《442》报道之专业已为业内所推崇，它独创了时髦，蕴含人生哲学而充满智慧的全新足球写作文风，报道质素与影像质素兼顾，表明这本杂志制造的高档足球阅读品质的努力。 63.PENTHHOUSE阁楼 美国1969年创刊 一本风波不断的成人杂志，去年与库尼科娃、贝纳通家族爆发的“裸照风波”虽然惹来举世关注，只是得恶名远播之效。随着读者市场的萎靡，《阁楼》更一度面临无力偿债、营收下滑等重大利空冲击，显得危机重重。 64.The Nation国家 美国1865年创刊 令人印象深刻的简约型封面是它无约束的特质外表，带上自由派内核的它一直是美国无党派政治舆论的堡垒，2003年更以犀利语言的专栏击败《纽约客》夺取“美国期刊奖”最佳专栏奖。 65.HELLO! 英国1988年创刊 隶属西班牙出版大亨Eduardo Sanchez Junco，却在英国打拼，全因此处有最出色的“狗仔队工业”。15年来坚持贩卖名流私生活，甚至影响了后来者《OK!》使用买断策略，如今的境况是后者在贩卖中的口气更大，去年更以“道格拉斯婚礼官司案”败北自找负面影响。 66.Harper's Bazaar哈泼时尚 美国1867年创刊 主导知性女性概念，自我提倡对衣着、时尚文化的思辨、反省能力，杂志气质表现较其他主流女性时尚杂志更为内敛、高修养，贵为全球最老牌的时尚杂志，自1867年延续至今实属不易，惜见在如今推崇“年轻即时尚”的年代有老气之相。 67.TV Guide电视指南周刊 美国1953年创刊 50年历史，美国詹姆斯达电视指南公司主办。每每位列美国杂志销售榜前列的TV Guide，实际上是美国肥皂电视文化的纸媒代表物，庞大的电视消费群拉动这本紧贴电视业发展电视节目最热状态的刊物一路行情看涨。 68.BUSINESS 2.0商业2.0 美国1998年创刊 “2.0”这个名字组合实在妙绝，难怪在当年会被评为“新经济媒体第一黑马”，2001年借以时代华纳并购机会与eCompany后，全新版本向传统商业报道回归，并以擅长传统企业与新技术企业之间的融合报道充当了中介角色，恰恰非常受落。 69.The New York Times Book Review纽约时报书评 美国1896年创刊 一本在出版界和学术界享有盛名的刊物，凭借母体《纽约时报》的气质，继续以“公正无偏”的招牌开拓时报传奇，其在1942年便制定的“畅销书排行榜”实际上已经主宰业内命脉，1896年便创办的“百年传奇”更是这本已被人挖苦为“无味书评”的最珍贵资本。 70.Purple紫 法国 可谓世界上最优雅的杂志，小八开独特开本，简约雅致的设计风格衬托出Purple风格的影像之美。另有Purple散文版，更显脱俗。如今已成为格调酒吧、咖啡馆最代表其品位的杂志读物。 71.money金钱 美国1972年创刊 时代华纳在理财领域的唯一杂志，与同门《财富》专做知名人物明显区别的是，《金钱》注重报道普通人，提供最独到最合理的理财服务指南，在理财本领更显重要的今时今日，大玩股票、基金投资方略的《金钱》，话语权已不只存于荷包。 72.SPOON 英国 几乎是一本定期发行的时尚摄影画册，通篇均由视觉冲击力先行的时尚影像构成其杂志逻辑。其实早期SPOON更为夸张，试过以铁皮作封面，如今回归主流装订(开本仍然是特别的横幅杂志)，显示其霸占商业时尚摄影杂志最有煽动力杂志地位之心。 73.Focus焦点 德国1993年创刊 与《明镜》、《明星》并列德国三大时事新闻杂志，为弗戈媒体集团旗下拳头杂志。Focus在长期的“三国”竞争中积累了相当成功的经验：创立意大利Focus在欧洲建立声音同一通道，制作德国大学排行创办杂志奖学金等都是其妙着。 74.seventeen 17岁 美国1994年创刊 17岁其实是个非常理想的读者销售年龄。Seventeen以此为名号便确意为女人的少女时代出谋划策，内容涉及少女关心的偶像、时尚服饰和情感建议等。在如此早熟的年代，Seventeen其实早已不是一本幼稚杂志，其声音甚至会进入成人世界。 75.Mother Jones琼斯母亲 美国 由密歇根社会人文政治文化机构“琼斯母亲”主办，被称为稍稍左倾的研究和思想的杂志，在今年伊拉克战争开战前后均是态度强烈的反战派杂志。琼斯母亲机构是一个综合性文化机构，设有针对摄影界的“琼斯母亲文献奖”，一直以推动各项变革力量而存在。 76.HARPER'S Magazine哈泼斯 美国1850年创刊 这本创刊于1850年的超老牌政论杂志是“美国期刊奖”的常客，今年则夺取“最佳专题写作奖”。《哈泼斯》直至如今仍然把目录摆在杂志封面的传统坚持便已很值得尊重。杂志发行人约翰·麦克阿瑟如今更成为这本老杂志的一面新旗帜。 77.Nonno与Mens Nonno侬侬、男人侬侬 日本1984年创刊 日本最为人熟知的女性与男性时尚指南杂志，凭借全方位、密集化而看得见的权威一直是同类杂志之榜样，销售威力更已远播中国。《男人侬侬》更因为竞争者的相对薄弱，一度在亚太区占据男士服饰话语势力的最重要地位。 78.ARENA竞技场 英国 英国经典男性杂志之一，一度是经济学家借以研究男性消费主义的观察媒介。Arena号称有着“最多的男士时尚报道，最高杂志品质”，并坚持使用可以用“稀奇”形容的影像构筑全球化的时尚生活。 79.New York纽约杂志 美国1968年创刊 蜚声纽约并一直受落于纽约人和新移民，这本杂志唯一做的事情是“如何在纽约生存”，与纽约地铁的合作更显其眼光独到。《纽约》专注于城市导航所达到的登峰造极功力已在全球范围内被同行引为楷模。 80.Maclean's麦克林斯 加拿大1950年创刊 这本杂志是政治弱势国家打造新闻杂志品牌之榜样，在一定程度上，Maclean's充当着加拿大在时事杂志领域的门脸。 81.allure吸引 美国 新兴美容、时装、发型与健康女性刊物，强项是：美容柜台小姐都自愧不如的美容产品专业推荐报道，主打现代职业女性的定身度做内容和动用名人明星的示范效应。 82.Ray瑞丽 日本 代表日本少女时尚潮流及亚洲哈日风潮的最杰出刊物。其亲历亲为打造御用模特，并将其化身为读者耳熟能详的杂志女角，进而成为瑞丽“活招牌”,这种内容整合广告的运营模式，已确见其妙。 83.Outside外面 美国1978年创刊 2003“美国期刊奖”最佳生活服务奖得主，与如今遍及全球倡导户外活动的自然生活方式不谋而合。Outside之卖点在于强势的专题式操作模式，美丽外景结合美妙的描写手笔，关于旅行装备与健康无微不至的指导。 84.Q 英国1986年创刊 独立、权威而提炼精华，作为流行乐坛重要基地的英伦三岛最知名的音乐杂志，《Q》自傲自己操作的音乐报道访谈和独家报道无人能及，如此傲气其实更建筑于极度认真严肃的制作态度上。 85.I.D 美国1954年创刊 美国制造的设计界权威刊物，领域涉及设计的多个层面并强调深度文章来迎合专业读者诉求，每年举办设计回顾展及进行“年度最佳设计大奖”评选活动，为设计界制作年度纪录的不懈努力令I.D在行内的影响力斐然。 86.Gas Book 日本 最特别的是在封面上围绕第几期的数字做文章，作为“日本版的Visionaire”之江湖地位存在，难得的是仍然保持着创作的原生态，从来就是日本以至亚太区最受追捧的创作圣经。 87.Dutch荷兰人 荷兰 以“荷兰人”为号的这本荷兰杂志，以其不让意大利VOGUE专美的创作态度和大批量并能保持一贯质素的影像生产力，已成为欧洲较有影响力的时尚杂志之一。 88.Title标题 日本 在日本与Brutus在专辑制作上可以一较高低的生活品位杂志，相比之，Title专注于在品位世界中做文章，专辑往往以欧洲、咖啡和顶级汽车为关键词。以此为线索的Title迅速在品位资讯发烧友中占据重要地位。 89.CAR车 英国1962年创刊 历史悠久的英国Car是英国Emap集团运作极为成功的旗舰级杂志之一，这本车坛著名杂志无论是赞誉有加还是贬斥有加都已习惯性地受汽车工业尊重，全因它有着最权威的测试标准，最敏锐的汽车新闻报道以及毫不逊色于汽车商业摄影的华丽影像。 90.New Republic新共和 美国1914年创刊 带上自由派色彩的《新共和》是全美话语权力极高的“意见杂志”。可惜近年频频出现领导层更迭，更爆发副主编文章报道失实丑闻，不仅导致言论作家的流失影响杂志品质，名声亦在下跌。 91.V Magazine 美国 可以说是以相对年轻方式操作的更新版《W》杂志，同样是如今罕有的大开本杂志，同样主打服装题材，附设艺术、设计、音乐及其他流行时尚资讯，应用明快的色彩构造标题与版面，令人印象深刻。 92.No.ABCD....Z 比利时 来自比利时的新派时尚杂志，全球独家的A-Z线索，每期以被报道设计师姓名字母为缘由，每期均是大部头制作，颇费心血并以精美独特的西欧新贵风格慑人，着实染上该国近年设计界新兴时尚偶像“安德卫普六君子”之气质。 93.POP 英国 源自The Face、同属英国Emap杂志集团，封面女郎的硬派风格让人印象深刻，无它，因为POP便提倡top-notch的视觉语言。由著名艺术家、知名摄影师和“任性”设计师组成的重量级创作队伍同样拔尖，只是由于每年只出刊两期不免让人遗憾。 94.Village Voice村声 美国 这份根源于纽约格林威治村的“村报”伴随当年“垮掉派”的风云而名声在外，尽管这只是一份反映纽约曼哈顿下城的文化观念以及非主流艺术状态，外加租房广告服务的小报，但由于其历史影响力的延续仍然在此榜占据一席。 95.House & Garden家园 美国 Conde Nast集团制作，中产家庭园艺情趣的最佳读品，内容专注于家庭装修与花园建设，编辑策略是既有高级设计师、建筑师的大家之作又有适合读者亲历亲为的DIY指南。 96. US Weekly 美国 和People一样，这本杂志证明世界上总会有人热爱关心明星名流的举动，这便是US瘾君子。US遍及娱乐的所有类别，八卦涉及绯闻与穿着，强项便是针对名人的深入剖析报道。 97.花椿 日本1940年创刊 日本美妆王国资生堂创办的杂志，本榜唯一入选源自品牌的商业刊物。全因资生堂遵循的“东西方文化兼收并蓄”理念同样体现在《花椿》的编辑思路中，如今连同庞大的“花椿俱乐部”已成为资生堂的最佳文化表达体，影响力甚至远及花都巴黎。 98.Stockholm New 99.IDN 100.Re-Magazine
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