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是这样的，楼主的思维过程是没有问题的，由于分子生物学的发展，16S现在已经是在菌种鉴定中起到非常重要的作用，但是由于序列比对往往相似性非常高，尤其是种和种之间分不开，所以，通常在做试验的时候，通过16S定到属之后，再通过生理生化试验来比较种间的区别，最后确定菌种名称，这是试验操作的顺序和思路。那么写论文就不能这样了，论文主要是三大部分，题目就不用说了，接着是摘要，然后是正文。正文中首先是前言，然后是选题背景，再来是试验方法，接着是试验菌种、设备、仪器，再就是试验操作，结果，讨论。楼主现在应该已经鉴定到种了吧，只是自己没有做形态观察，这一部分可以才伯杰氏手册上翻到，你在试验方法处写上形态观察的方法，在结果处把你所鉴定到的种的形态抄上去就行了，关于生理生化部分的内容一般顺序是，生理部分菌落什么颜色，形状，是否有凸起，微观形态就是菌体形态，大小，是否产芽孢，革兰氏染色，是否有运动性，接触酶，氧化酶等等，生化部分，把你做的糖发酵产酸产气啊，还有什么硫化氢试验啊，硝酸盐的一系列试验什么的都写上，最后总结根据上述试验结果，确定该菌生理生化特征复合什么菌种特征就ok了。写的我累死了哈哈！！！
分子生物技术在微生物降解环境 污染物中的应用 [摘要〕介绍了与环境微生物关键降解酶基因的筛选、克隆及应用相关的分r生物技术，包括聚合酶链式反应技 术、基因重组技术、荧光原位杂交技术和生物信息学等技术，并对这些技术在污染物降解基因检测、筛选和克隆方 面的应用进行了阐述与探讨、 [关键词]分子生物技术;微生物;基因;环境污染物;降解 随着现代j:\地技术的发展，多环芳烃、含氯有 机物和硝基苯类化合物等人工合成井难以降解的 污染物大量排放，造成世界范围内的环境污染和生 态破坏，严重地威胁人类和其他生物的正常生存和 发展。利用微生物修复技术对受污染的水体及土 壤进行处理，凸显了其重要的意义和可行性。研究 人员发现并筛选到一些微生物，它们不仅对环境有 较高的适应性、对污染物有较高的耐受性，而且对 污染物有较强的降解效率和专一性。然而环境中 存在的大量微生物中仅有少于1%可通过传统的培 养方法进行培养、分离和纯化，绝大多数细菌需要 非常严格的营养条件川。因此，为了对修复环境有 所贡献却难以培养的微生物进行更全面了解，也为 了筛选到更多有利于降解环境污染物的微生物菌 种及其关键酶基因，分子生物技术和手段逐渐被广 泛应用到环境可降解污染物及降解机理方面的研 究中。 本文对近年来发展起来的聚合酶链式反应 (PCR)技术、基因重组技术、荧光原位杂交(FISH) 技术和生物信息学等多种分子生物技术进行了介 绍，并总结了它们在污染物降解基因检测、筛选和 克隆方面的应用。 1与环境污染物降解相关的分子生 物技术 及其相关技术 PCR是一种利用脱氧核糖核酸(DNA)半保留 复制原理，在体外扩增位于两段已知序列之间的 DNA区段从而得到大量拷贝的分子生物技术。根 据其模板、引物来源或扩增条件的不同，PcR技术 可分为以下几种:(l)反转录pCR(RT一PeR)技 术，将mRNA反转录为cDNA后再对其进行PCR 扩增，可用来构建cDNA文库，分析不同生长时期 的mRNA表达状况和相关性以及mRNA的定量测 定等;(2)巢式PCR技术，在扩增大片段目的DNA 时，先用非特意性引物扩增再用特意性引物对第一 次扩增产物进行第二次扩增，以获得可供分析的 DNA;(3)竞争PCR技术，是一种定量PCR，向PCR 反应体系中加人人工构建的带有突变的竞争模板， 通过控制竞争模板的浓度来确定目的模板的浓度， 对目的模板作定量研究;(4)实时荧光定量PCR技 术，在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信 号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线 对未知模板进行定量分析，该法已广泛用于基因表 达研究、转基因研究等方面;(5)扩增的rDNA限制 酶切分析技术，根据原核生物rDNA序列的保守性， 将扩增的rDNA片段进行酶切，通过酶切图谱来分 析菌间的多样性;(6)RNA随机引导PCR技术，基 于任意寡核昔酸引物与RNA之间可能的配对，在 低严谨度条件下经聚合酶催化使链延伸，将细胞总 RNA或InRNA作为反转录反应的模板，此技术结 合单链构象多态性，用非变性胶分辨大小相同而构 象不同的片段，可用于诊断遗传突变及分析污染条 件下序列的多态性;(7)随机扩增多态DNA (RAPD)技术，是一种基于PCR检测PCR引物结合 位点序列改变的方法，通常以10bp的寡核昔酸序 列为引物，对基因组DNA随机扩增，电泳分离染色 扩‘增产物，再分析多态性。 技术 FISH技术利用荧光标记的探针在细胞内与特 异的互补核酸序列杂交，通过激发杂交探针的荧光 来检测信号。荧光探针比放射性探针更安全，具有 较好的分辨力，不需要额外的检测步骤。近年来， 由于FISH技术具有灵敏、便捷等优点，迅速发展完 善成为研究环境微生物的有力工具。此外，可用不 同激发和散射波长的荧光染料标记探针，在一步反 应中同时检测几个靶序列。该技术主要包括试样 固定、预处理、预杂交、探针和试样变性、杂交、漂洗 去除未结合的探针、检测杂交信号等步骤。由于 165rRNA具有遗传稳定性，因此成为FISH技术检 测最常用的靶序列。 基因重组技术 基因重组技术是从供体生物的基因组中通过 酶切扩增等手段获取目的基因，与载体连接形成重 组DNA分子，再导入到受体细胞中，让外源基因得 以表达。在已经分离出的许多菌株中，与降解能力 有关的基因多在质粒体上。由于质粒很容易在细 菌的繁殖过程中遗失，对细菌降解能力的长期稳定 非常不利，可将其与污染物降解有关的酶基因重组 到大肠杆菌等微生物中进行表达，以此构建的各种 生物降解特性增强的重组菌可用于污染环境的治 理修复或发酵某些废弃物。 生物信息学 20世纪后期，生物学的迅猛发展，从数量上和 质量上极大地丰富了基因组数据库、蛋白质数据 库、酶数据库和文献数据库等许多生物科学的数据 资源。已有多个国家和国际科研组织建立了生物 信息数据库，如欧洲分子生物学实验室(Eur叩ean MolecularBiologyLaboratory)核酸序列数据库和美 国国家生物技术情报中心(Nationaleente:fo:Bio- technologyInformation，NCBI)基因序列数据库等。 科学家利用计算机及生物信息分析软件分析这些 数据资源，确定大分子序列、结构、表达模式和生化 途径与生物数据之间的关系，区分生物个体间遗传 差异，揭示DNA多样性。例如，基本局部比对搜索 工具(BasieLoealAlignmentSearehTool，BLAST)， 是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似 性比较的分析工具。它基于Altschul等的方法「2〕， 在序列数据库中对查询序列进行同源性比对工作。 BLAST程序可对一条或多条、任何数量、任何形式的 序列在一个或多个核酸或蛋白序列库中进行比对，甚 至将有缺口的比对序列也考虑在内，利用比较结果中 的得分对序列进行相似性说明。基因的序列分析可 揭示出生物物种之间的关系，在污染治理研究中可用 于生物基因组特殊区域或特异基因的测序。 2分子生物技术在环境污染物降解 中的应用 土壤试样总DNA的提取 用适当方法直接从土壤中提取DNA并纯化， 是从分子生物学角度对土壤微生物进行研究的前 提条件，而后可进行酶切、PCR扩增、核酸分子杂交 等分子生物学技术操作。从土壤中提取微生物 DNA主要分为汽接法和间接法}’{。直接法是在 ogram等的方法基础卜发展起来的，其主要包括2 个步骤:(l)原位细胞裂解;(2)DNA提取和纯化。 直接法提取的DNA超过细菌总DNA的60%且省 力，但提取的DNA常常有折断、腐殖酸污染、甚至 提取物中还夹杂有未知的胞外DNA和真核生物的 DNA。最先报道间接法的是Faegri等[‘〕，其主要包 括4个步骤:(l)分散土壤;(2)分离细胞与土壤; (3)细胞裂解;(4)DNA纯化。间接法提取DNA 产量低且费力，但纯度较高、DNA损伤小，提取的 大片段DNA可用来构建cos而d和细菌人工染色体 文库等。 采用PCR及相关技术扩增分析DNA片段 可降解污染物的微生物必然能产生分解代谢 该污染物的酶。selvaratnam等L’l用编码苯酚单加 氧酶dmpN摹因的RT一PCR技术来检测序列间歇 式活性污泥反应器‘{一，降解酚的假单胞菌。检测结 果表明，RT一PCR技术不仅能检测微生物降解酚的 能力，还能测量dmpN基因的转录水平，从而确定假 单胞菌特殊的分解活性，发现了在转录水平下，酚 浓度与通气时间之问存在正相关关系。 将PCR技术和变性梯度凝胶电泳(DGGE)结 合起来，在变性条件适当的情况下能分辨一个碱基 对，分辨率较高。染色后的凝胶用成像系统进行分 析，可在一定程度l几反应试样的复杂性。条带的多 少能反应试样「 一 }1微生物组成的差异，条带的亮度能 反应试样中微生物的多少。基于以上优点，日前该 技术在微生物群落结构的分析和动态研究方面得 到了厂‘泛应用。DGGE可通过分析PCR扩增的基 因点突变来探索微生物的复杂性。徐玉泉等[“〕从 某废水中分离出一株能以苯酚为惟一碳源的菌株 PHEA一2，使用PCR一DGGE技术对该菌165 rDNA进行分析，发现该菌与醋酸钙不动杆菌同源。 M盯sh等r了)利用PcR一DGGE技术获得了活性污泥 中真核微生物的种群变化情况。王峰等下8〕采用 PCR一DGGE技术对城市污水化学生物絮凝处理中 活性污泥和生物膜微生物种群结构进行了分析，结 果表明活性污泥培养前后微生物种群结构发生r 很大改变。 RAPD技术也是一种应用比较广泛的以多态性 引物来扩增某些片段的技术。RAPD技术可用于检 测含有混合微生物种群的各种微生物反应器中微 生物的多样性。用RAPD技术分析检测实验室规 模的油脂淤泥培养料中的细菌菌群发现，用油脂淤 泥改良过的培养料比未改良的更适于不同的微生 物种群生长[9j。vainio等t’。〕从516种孤立的菌落 中提取出165rDNA，经PCR扩增后进行测序，检测 活性污泥中微生物种群的结构。这些组合技术的 应用显著增强r对微生物的检测和鉴定能力，为理 论研究工艺优化及提高生物处理效率提供了条件。 基因重组 基因工程技术应用于环境保护起始于20世纪 80年代。其基本原理是通过基因分离和重组技术， 将目的基因片段，比如可编码降解某种污染物的 酶，转移到受体生物细胞中并表达，使受体生物具 有该目的基因表达显现的特殊性状，从而达到治理 污染的目的。找到特定污染的抗性基因，利用基因 重组技术转基因后也可获得其他抗性植株以及筛 选到可转化污染物的植物，还可开发超量积累植物 进行污染土壤的生物修复。 罗如新等L”〕用放射性同位素标记tfdc基因片 段作探针，Southemblot杂交定位Ll菌株的邻苯二 酚1，2一双加氧酶基因位于Pstl的I片段和BamH I的M、N片段，回收并将其直接克隆至表达载体 pKT230卜，获得的重组子能转化不具开环酶活性 的甲胺磷降解菌P2，得到高于天然宿主21倍的邻 苯二酚1，2一双加氧酶。stingley等{”〕通过构建基 因文库和重组质粒等基因工程方法证实了NidAB 双加氧酶是降解菲的关键酶类，并首次鉴定出此基 因通过磷苯二甲酸实现降解功能。chae等‘”}发现 不能降解苯酚的su如lobusso扣taricu、98/2菌株中 的儿茶酚2，3一双加氧酶基因与能降解苯酚的 sulfolo右u，，o如taricu、咫有[6J源区，分析得知它们 是山共同祖先进化而来。把儿茶酚2，3一双加氧酶 基因克隆到大肠杆菌中表达，可获得有较高降解活 性的双加氧酶。 重金属污染是环境污染的重要方面之一。随 着分子生物学技术的发展，越来越多的修复性蛋白 基因正被从植物、微生物和动物中陆续分离出来， 如汞离子还原酶基因、有机汞裂解酶基因、汞转运 蛋自基因、金属硫蛋白基因、植物络合素合成酶基 因、铁离子还原酶基因和锌转运蛋白基因L’‘〕。这些 基因通过基因工程的改造，重组到合适的受休细胞 中表达相应的蛋白质和酶，达到治理难以降解的有 毒有害污染物的目的。sorsa等〔”〕把MTS插人 LamB序列的153位点，在中表达MTs，解决 r细胞内MTs对金属离子有限的吸附能力。综L 所述，基因重组技术具有快速、高效的特性，已逐渐 成为环境生物技术的研究热点。 技术 FISH技术利用核糖体内长度适中(约1500bp)、 高度保守的165:RNA序列作为理想的基因分类靶 序列，其中使用的165:RNA寡核普酸探针一般是 进行了荧光标记的20bp左右特异性核昔酸片段， 利用该报告分子(如生物素、地高辛)与荧光素标记 的特异亲和素之间的免疫化学反应，经荧光检测系 统对待测DNA进行定性、定量或相对定位分析。 FISH技术能提供处理过程中微生物的数量、空间分 布和原位生理学等信息。 硝化细菌是一类生理上非常特殊的化能自氧 菌，传统的研究方法要经过富集、分离、分类和鉴定 步骤，耗时长。HSH技术的引人解决了上述困难。 FlsH技术还被广泛用于活性污泥系统、硝化流化床 反应器和膜生物反应器等废水处理系统}’61。 基因工程微生物越来越多地被用于农业害虫 控制和环境污染的生物修复，对人类健康和环境的 影响引起广泛关注。1994年出现了一种新的标记 系统:绿色荧光蛋白(GFP)，由于GFP基因表达产 物对细胞没有毒害作用，且由GFP产生的荧光标记 检测卜分方便、简单。在某些被污染的环境中可分 离出降解该污染物的细菌，通过基因重组等手段使 用GFP分子标记，可更容易的分离检测被标记的 细胞叫。 Bastes等[’8]进行了苯酚降解菌染色体GFP基 因标记实验。通过PCR和Southemblot分析，证明 GFP基因已成功整合到宿主细胞的染色体中。对 标记菌与野生型的降解能力比较结果证明，GFP分 子标记的插人并不影响细胞的苯酚降解能力。 用G即标记Pseudomonasputida，研究活性淤 泥中细菌存活情况{’9飞。Pseudomonasputida被转到 活性淤泥2min后，观察到细胞在淤泥絮凝物间自 由游动;培养3d后，发现荧光细胞减少，大部分已 被合并到淤泥絮凝物中，以防止细菌被原生动物捕 食。用oFP标记石.eozi和Serraliamarceseern，考 察菌株附到絮凝物卜的过程{’()j。使用表面荧光显 微镜能将带有GFP标记的细胞从活性污泥中区分 开，井进行观察和记数。而聚焦激光扫描显微镜 (cLsM)可使GFP标记细菌产生三维轮廓，结合表 面荧光显微镜和CLSM观察GFP标记细胞，结果表 明，细胞表面疏水性在细菌附到絮凝物的过程中起 重要作用，两种细菌附在絮凝物上的模式有很大不 同，通过这种方法可更好地理解细菌赫附机理，有 助于提高废水处理效果。 3结语 分子生物技术的应用使研究人员可从微观的 角度更细致深人地了解微生物对污染物降解的具 体生理生化机制，在分子水平 _ _ [揭示生物体吸收、 迁移、积累有害物质最终被毒害，及适应、抗性等生 态问题，从而筛选到更多有利用价值的微生物。随 着越来越多微生物全部基因序列的解码，对各种细 菌体内可降解基因的分布和表达会有更深人的了 解，有关技术的发展和成熟必将对污染物的降解过 程有一个整体的、生态水平上的认识。 参考文献 l李凤，刘世贵 . 分子生物学技术在环境微生物研究中的 应用 . 世界科技研究与发展，2003，25(4):88一92 2AltsehulSF，GishW，MillerW， mentsearehtool . 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随着医学技术的进步，各高校也开始开设兽医专业，兽医的主要任务是研究和实施家畜家禽疾病的诊疗、防治、检疫及畜产品卫生检验等。下文是我为大家整理的关于畜牧兽医 毕业 论文的内容，希望能对大家有所帮助，欢迎大家阅读参考!
浅析鸡大肠杆菌病病因分析和预防治疗
在近十几年的肉鸡生产中，养殖户为了控制大肠杆菌及某些细菌感染，在使用饲料添加剂及治疗中盲目应用一些抗菌药物，从而导致耐药菌株越来越多，并日趋严重。事实上，因为大肠杆菌可通过菌毛将其抗药性质粒传递给其他大肠杆菌，所以，大肠杆菌的抗药性形成较快，环境中大肠杆菌耐药性菌株越来越多。
近几年来，地区实验室曾多次无菌采取疑似大肠杆菌病的本地病鸡、死鸡的心血、肝、脾、肾等病料，进行病原菌的分离、生化鉴定和药敏试验。生化鉴定结果显示，引起试验鸡只发病的病原为大肠杆菌，药物敏感性试验结果表明，本地区大肠杆菌对硫酸安普霉素、阿米卡星高度敏感，对新霉素、庆大霉素中度敏感，对环丙沙星、氟苯尼考耐药。曾经对致病性大肠杆菌敏感的药物出现了不敏感和不同程度的耐药，提示在以后的肉鸡生产中应慎用抗生素，在使用药物治疗大肠杆菌病时，要充分利用药敏试验，为鸡大肠杆菌病的防治提供科学的理论依据，并需注意交替用药，按疗程投药才能收到较好的治疗效果。
1、病因分析
免疫抑制
主要是由鸡新城疫病毒、禽流感病毒、鸡传染性支气管炎病毒、支原体等病原体的感染继发造成。往往会先破坏呼吸道和消化道的黏膜屏障系统的完整性，致使被感染鸡只不同程度地出现免疫抑制等，从而为大肠杆菌的入侵打开了门户。
免疫应激
某些应激反应可引发大肠杆菌病的发生。如接种疫苗时鸡群产生的应激反应以及免疫程序设计不当都会引起鸡群抵抗力下降或呼吸道症状，从而造成大肠杆菌感染和继发感染。
有害环境
有害的环境因素也是引起大肠杆菌感染主要原因之一。 饲养 管理差，环境污染严重，应激因素长期存在，都能促进该病的发生和流行。如气候突变、寒冷、闷热、通风换气不良、氨味过浓等应激因素，使鸡群抗病力减弱，大肠杆菌乘机侵入，引起机体发病。卫生条件差，粪便、污水、病死鸡等不能无害化处理，从而造成了鸡场环境污染严重，细菌、病毒大量存在。对消毒工作不重视或不严格，饲养密度过大，潮湿的环境又为大肠杆菌及其他致病性微生物的滋生创造了条件。
饮饲及营养状况
日常生产中，饲养方式、饮水等会直接影响到鸡群营养状况的好坏，日粮营养水平的高低以及不同营养成分之间的平衡状况等都是引发大肠杆菌感染的重要因素。如饲料营养缺乏(维生素等含量不足)、饲料霉变等，会导致鸡抵抗力下降，对大肠杆菌易感性增加，引起大肠杆菌病的发生。
2、预防与治疗
对本病的防控应坚持预防为主的原则，治疗要坚持尽早发现、尽快投药治疗的原则。
预防 措施
加强饲养管理。对饲料进行合理搭配，保持饲料、饮水清洁，及时清除粪便等。饲养密度过大的鸡群，要适度调整，保持良好通风换气，保持适宜的温度和湿度，避免骤冷骤热，以减少各种应激等诱发因素。
加强消毒。定期对场地、器具等进行彻底消毒，注重带鸡消毒。污染严重或常发病鸡场，要根据情况适当缩短消毒间隔时间，一般5～7d要进行一次彻底消毒。
疫苗接种预防。接种大肠杆菌疫苗可在一定程度上控制该病的发生，但因大肠杆菌血清型较多，其效果并不十分理想。对有条件的已发生污染的鸡场建议用本场分离的大肠杆菌菌株制作灭活菌苗进行免疫接种，效果可靠。
加强种蛋管理，建立健康的种鸡群。大肠杆菌可因种蛋带菌而垂直传播，因此，必须做好种鸡群大肠杆菌病的净化工作。
对病鸡不能留作种用，一律淘汰。另外，种蛋本身不带菌，但由于捡拾不及时或者产蛋箱卫生状况不良，使种蛋与粪便接触而受到污染。因此，孵化场还须作好对种蛋的消毒，以减少种蛋污染。在种蛋入孵前必须做好药物消毒工作。如果有条件，种蛋产出后2h内应用药物熏蒸消毒或用的过氧乙酸进行带鸡喷雾消毒，确保种蛋有最高的孵化率和健雏率。
实行全进全出制。全进全出的饲养 方法 是预防该病的有效方法，可有效避免不同日龄、不同批次鸡群间的交叉感染。同时，鸡群尽可能采用封闭式管理，这样可减少或杜绝鸡群与大肠杆菌的污染物接触，防止本病发生。
加强饲料饮水的兽医卫生监测。饲料的采购、贮存和加工等环节要加强卫生管理，防止发霉、变质，减少大肠杆菌的污染。对水井、水塔和水箱等储水设施以及输水管道要经常清理、定时消毒。
药物预防。在饮水或饲料中按预防剂量投喂抗生素可对该病的发生起到预防作用。
有效控制其他疾病。在基层服务中发现，很多其他疾病导致大肠杆菌病的继发或混合感染，如鸡沙门氏菌病、霉形体病、传染性鼻炎、传染性支气管、喉气管炎、新城疫等。对于这些疾病，目前都有较好的疫苗或药物进行预防。因此应制定适合本场的防疫程序并认真实施，尽可能防止其他疾病的发生，这样也就间接的起到预防和减少大肠杆菌病的发生。
治疗
(1)首先，病鸡隔离，及时治疗。对急性经过的不及救治的病死鸡做好焚烧掩埋及消毒工作。(2)加强饲养管理，消除诱因，加强卫生消毒。(3)合理使用抗菌药。通过药敏试验，选择高敏药物，克服盲目用药，根据药敏实验结果，合理选择和交替使用抗菌素。(4)使用中药。一般情况下，单纯因大肠杆菌感染而发病者较少，大部分都是继发或混合感染，辩症施治，合理搭配中药可以取得良好的疗效。方剂：黄连50g、黄芩60g、紫花地丁40g、赤芍30g、栀子30g、地榆60g、大黄40g、木香30g、白头翁50g、知母30g、秦皮50g、甘草30g，烘干粉碎后，按500g拌饲料100kg自由采食，连喂3d，可较好的控制病情。(5)综合措施。根据用药史及病情，全面分析药理并通过药敏实验筛选，采用中西药结合的方式综合治疗，并在饲料中2倍量投服维生素C保健粉，同时饮用电解多维，可取得较好的治疗效果。
大肠杆菌是条件性致病菌，防制该病的关键在于加强饲养管理，做好各个环节的卫生消毒，减少各种诱发因素，严格执行卫生防疫措施，创造一个良好的饲养环境。有效控制容易并发和继发该病的病原是防止本病发生的有效措施。由于各地大肠杆菌的血清型，特别是优势血清型存在差异，有效而通用的菌苗尚未出现，因此筛选地区性免疫原性优良的大肠杆菌菌株制作菌苗，乃是防制鸡大肠杆菌病及有效进行免疫预防的基础。建议有条件的鸡场，最好采用自家灭活苗，这样效果可靠，更适用于血清型复杂的地区。
参考文献：
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浅谈鸭曲霉菌性肺炎的临床症状、剖解和治疗
鸭曲霉菌病，又称鸭曲霉菌性肺炎，主要是由烟曲霉等真菌引起的鸭呼吸道传染病。其特征是在呼吸器官组织中发生炎症，尤其是在肺和气囊出现灰黄色的结节，胸腹部气囊也可能有霉菌斑。此病主要发生于雏鸭，多呈急性经过，发病率高，可造成大批死亡，成年鸭多为散发。2013年5月罗山县某鸭场饲养的肉鸭发生了一起以肺和气囊出现灰黄的结节为主要特征的传染病，根据发病情况、临床症状、尸体剖检及实验室检查，初步确定为鸭曲霉菌病，并结合病情，给予药物治疗，基本控制了病情。
1、发病情况
该鸭场饲养的5 000只樱桃谷肉鸭，在16～18日龄起开始发病，最初每天发病10～20只，后每日发病达30～50只，每日有15～20只鸭死亡，全程共发病约1 800只，死亡516只，发病率36%，病死率。在发病初期，养殖户认为是大肠杆菌病，并使用抗生素治疗，但不见效果。
2、临床症状
患鸭病初精神不振，眼半闭，羽毛松乱无光，食欲减退或废绝。随病情发展，病鸭气喘、呼吸困难、加快，胸膜部明显煽动，渴欲增加，嗜睡，常呆立或伏卧在地，气喘，口腔和鼻腔流出浆液性分泌物，粪便稀薄，呈白色或绿色，急剧消瘦，出现死亡。
3、剖检变化
主要病变在肺和气囊，肺充血、切面流出红色泡沫液，肺实质中有大量大头针帽或小米粒大小的灰黄色结节，有的在胸部气囊也可见，病程稍长的鸭肺部结节融合成更大的黄白干酪样结节，结节切面呈明显的层状结构，气囊增厚、混浊，肝脏轻度肿大，肠粘膜充血，有的可见腹膜炎。
4、实验室诊断
取肺病灶的霉菌结节或霉菌斑少许，涂于载玻片上，加10%氢氧化钾溶液1～2滴，混匀透明后，加盖玻片，在高倍镜下观察，可见有分枝和横隔的曲霉菌菌丝及孢子。
5、治疗
立即更换新鲜的饲料，更换垫料，并把垫料下的土铲去一层，同时，配合中草药治疗。
方组：升桔梗260 g、蒲公英500 g、苏叶500 g、枇杷叶15 g、知母20 g、金银花30 g。上药共煎汤得1 000 ml(1 000羽雏鸭1 d用量)，拌料内服，3次/d，另外在饮水中加高锰酸钾。同时，对病重雏鸭进行特殊护理，用滴管滴服上述药液，2次/d， ml/次。鸭群按以上方法治疗5 d后症状逐渐消失，7 d后停止用药，但是仍有个别病重鸭死亡。
6、体会
曲霉菌在自然界广泛分布，一般最常见而且致病性最强的为烟曲霉菌，其孢子在自然界分布较广泛，常污染垫草及饲料，除此之外，其他曲霉菌也可引起感染，如黄曲霉、黑曲霉及构巢曲霉等。曲霉菌对外界具有显著的抵抗力，干热120℃经1 h、煮沸5 min，方可杀死。消毒剂，如，福尔马林、水杨酸、碘酊等需经1～3 h，方可灭活。霉菌孢子可随空气传播，健康鸭通过吸入含有霉菌孢子的空气或采食染菌饲料，经呼吸道或消化道感染。在种蛋孵化过程中，霉菌还可穿透蛋壳而使初生鸭感染。因此，防控曲霉菌病的综合措施：(1)加强饲养管理。此病目前还没特效治疗办法，重在预防，特别要注意鸭舍的通风和防潮湿。(2)搞好环境卫生，及时清理鸭粪，更换垫料，不垫发霉的垫料。(3)加强饲料贮存和保管工作，不喂已霉变的饲料。(4)鸭舍、饲槽、饮水器等器具要定期消毒。(5)喂料时要少喂勤添，避免料槽中饲料积压。(6)如果鸭群已被污染发病，病鸭要及时隔离，清除垫料和更换饲料，鸭舍要彻底消毒。
试谈犬皮肤病的诊断
1发病情况
犬的皮肤病病因复杂，种类繁多，防治难度较大，其中一些还可传染给人。凡能惹起犬皮肤瘙痒、脱毛、结痂和皮肤异常变化的疾病统称为皮肤病。如何进步治愈率，缩短治疗周期，降低复发率，是宽广宠物医护人员十分关注的问题。犬皮肤病一年四季均可发作，但以夏、秋季多发，冰冷的冬季少发。经过对109例皮肤病犬的 总结 ，发现犬皮肤病主要为螨病(62例，占)和真菌性皮肤病(32例，占)，且大多数还是螨虫和真菌的混合感染性皮肤病。
螨病中常见的螨虫有蠕形螨、疥螨和耳痒螨，真菌性皮肤病主要为小孢子菌、石膏样小孢子菌和须毛癣菌感染;此外，犬皮肤病中尚有过敏性皮肤病(5例，占)、营养缺乏性皮肤病(4例，占)等。犬皮肤病是临床常见病，病因复杂，种类繁多，防治难度较大，一些还是人兽共患。2012年以来，笔者曾先后接诊犬皮肤病75例。犬皮肤病一年四季均可发作，但以夏季、秋季多发，冰冷的冬季少发。47例皮肤病中，螨病28例，占，真菌性皮肤病19例，占。大多数是二者混合感染。螨病中，常见蠕形螨、疥螨和耳痒螨，真菌性皮肤病主要为小孢子菌、石膏样小孢子菌和须毛癣菌感染。
2病症
病原为耳痒螨，主要寄生于犬耳道内，有时也爬到身体其他部位惹起局部损伤，有高度传染性。临床表现为耳道发炎、充血、耳道内有多量红褐色或灰白色分泌物，并有腥臭味，耳壳内侧潮红糜烂，犬不时抓耳挠腮，或用头磨蹭空中或笼壁，体表散布拇指盖大血痂并构成脱毛区。犬皮肤病普通临床表现为剧痒、脱毛、结痂、皮肤肥厚以及患部呈现红斑、丘疹等，病症相似。要做好鉴别诊断。
蠕形螨病
由犬蠕形螨寄生于犬皮肤的毛囊和皮脂腺内惹起。正常情况下，犬体表也有少量蠕形螨存在。当机体应激或抵御力降落时，大量繁衍，引发疾病。患犬病初表现颜面两侧皮肤潮红、充血。
继之脱毛并构成许多皱褶，然后扩散到额部、背部、胸腹下以致全身。病部有1～5个小的和周围界限明白的红斑状病变，痒感不剧烈。严重时，身体大面积脱毛，浮肿，呈现红斑、皮脂溢出和脓性皮炎，瘙痒。
疥螨病
本病病原体为犬疥螨，传染性较强。主要经过接触感染，过度拥堵、暗淡、潮湿等较差的卫生条件会加剧疾病的发作和展开，人接触病犬也可感染。检查发现，虫体主要寄生于耳尖外侧、尾根、脚爪、口周围及眼圈等皮薄毛稀的部位，病变也多发作于此，严重者可扩散至全身。表现剧痒，不时抓挠啃咬，患部脱毛、结痂，耳壳边缘、尾根、脚爪处皮肤增厚，密布糠麸样厚痂。
根据病史和奇痒、脱毛、结痂等临床病症可树立初步诊断。确诊用皮肤病诊断液，方法同蠕形螨病。犬疥螨呈宽卵圆形，雌虫平均大小约为380μ×270μ，半透明，白色，体表覆以相互对等的细毛;雄虫平均大小约为220μ×170μ，其外形同雌虫相似。
耳痒螨病
根据病史和临床病症可树立初步诊断。确诊也可用皮肤病诊断液，方法如下：用掏耳勺刮取耳道分泌物，置于载玻片上，滴加诊断液2～3滴，混匀后加盖玻片，压薄后镜检。若被感染，则虫体和虫卵明晰可见。痒螨呈椭圆形，足体凸出。雄虫第4对足不兴隆，不能伸出体边缘，比第3对足短3倍：雌虫第3、4对足无吸盘。
皮肤癣菌病
又称癣，是由皮肤癣菌侵袭毛发、爪和皮肤等角质组织惹起的真菌性皮肤病，病原体主要有犬小孢子菌、石膏样小孢子菌和须毛癣菌等。潮湿、暖和的气候，拥堵、不洁的环境以及缺乏阳光映照等是惹起本病的主要诱因。患犬大面积严重脱毛、瘙痒，体表散布红色丘疹，脱毛区掩盖油性厚痂，刮去痂皮暴露潮红或溃烂的表皮，严重者构成溃疡。随着病程延长，患部呈现色素冷静，毛根易脱，毛干易断。
过敏性皮肤病
如湿疹、荨麻疹等。湿疹是表皮和乳头层由致敏物质所惹起毛细血管扩张和渗透性增高的一种过敏性炎症反响，临床上以患病皮肤发作红斑、丘疹、水疱、脓疱、糜烂、结痂及鳞屑等皮损，并伴有热、痛、痒病症为特性。荨麻疹是皮肤乳头层和棘状层血管渗出液增加的一种过敏性疾病，临床以患病皮肤突然发作许多圆形或扁平的疹块和疾速消散，并伴有皮肤瘙痒为特性。惹起犬过敏的要素有昆虫的叮咬、暗淡潮湿的环境、烈日暴晒、刺激性药物、营养失调、代谢紊乱以及机体内在的一些过敏因子等。
营养缺乏性皮肤病
本病有一定群发性，多由饲养管理不当、消化吸收障碍招致某些维生素、微量元素缺乏而惹起。如犬食物单一，或长期饲喂高蛋白、高脂肪食物，或饲喂蜕变食物等可构成维生素C、维生素B以及硒、钙等缺乏。患病犬被毛干枯，毛易断易脱，皮肤表面有豆粒大或拇指盖大小的出血斑，皮屑增加，痒感不明显。
其他
包括由葡萄球菌等惹起的细菌感染，由犬瘟热病毒感染呈现的硬脚垫病，角质层下脓疱性皮肤病，维生素A过多症，毛细血管扩张症，溢脂性皮炎，中毒性皮炎，自体免疫性皮肤病等。
3治疗
根据皮肤病盛行特性，采取“彻底检查，洗浴去痂、重复用药、辨证施治、消弭病因、消毒环境”等综合性防治准绳，中止平面式用药(体内、体表、环境)，根据病情不同，采用“轻则治其标，重则治其本”的方法，治疗务须彻底，以防复发。
伊维菌素注射液
该药为广谱驱外寄生虫药，临床上主要用来治疗疥螨、蠕形螨、耳痒螨惹起的传染性皮肤病，对虱子、跳蚤和蜱也有防治作用。犬按～ ml/kg体重量·次，皮下注射，1次/周。
癣螨净擦剂
该药为纯中药配方，无毒反作用，具有杀螨、抗菌、止痒以及除虱、灭蚤等作用。临床上主要用来治疗疥螨病、耳痒螨病、蠕形螨病、真菌性皮肤病、过敏性皮炎、湿疹等惹起的皮肤病。该药外用，于患部涂擦，1～2次/d。耳痒螨病、中耳炎时，应向耳道内滴入药液3～5滴，再清算干净，1次/3d。
癣螨净浴液
该药也系纯中药配方，无毒反作用。临床上主要用来治疗晚期全身性、顽固性皮肤病，如疥螨病、蠕形螨与真菌混合感染性皮肤病、真菌性皮炎、脓皮病、过敏性皮炎、湿疹、脱毛症及自咬症等。该药外用，用前先用温水稀释100～200倍，将患犬药浴8～10 min。另外该药还可用于环境、宠物用具的消毒。
癣螨净注射液
药具有杀螨抑菌功用强、作用耐久等特性。临床上主要用于治疗各种螨虫、真菌惹起的传染性皮肤病。特别对蠕形螨、真菌混合感染的顽固性皮肤病、脓皮病有特效。剂量：005～ ml/ kg体重量·次，皮下注射，1次/7d。
益康唑霜
该药为广谱抗真菌药，对皮肤真菌有杀菌作用，临床上主要用来治疗犬的皮肤、毛发、爪的真菌病。该药外用，于患病涂擦，2次/d。
灰黄霉素
其能有效抑止小孢子菌、毛癣菌等真菌，临床用来治疗由真菌惹起的皮肤病。剂量：20 mg/ kg体重量·次口服，连用30 d。
受体阻断药
本类药物主要有盐酸苯海拉明、盐酸异丙嗪、扑尔敏、扑敏灵等，能选择性地对立H1受体所致的血管扩张作用，临床上主要用来治疗各种皮肤、粘膜的过敏反响，如湿疹、荨麻疹等。另外，维生素C、糖皮质激素类(如地塞米松)、钙制剂、麻黄碱等也有抗过敏作用，是防治皮肤病常用的辅助药物。苯海拉明，剂量：～1 mg/kg体重，肌肉注射。内服：30～60 mg/次。
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噬菌体（phage）是侵袭细菌的病毒，也是赋予宿主菌生物学性状的遗传物质。噬菌体必须在活菌内寄生，有严格的宿主特异性，其取决于噬菌体吸附器官和受体菌表面受体的分子结构和互补性。噬菌体是病毒中最为普遍和分布最广的群体。通常在一些充满细菌群落的地方，如：泥土、动物的肠道里，都可以找到噬菌体。
比较分离纯化噬菌体与分离纯化细菌的基本原理和具体方法上的不同DNA和蛋白质这两种物质中DNA是噬菌体的遗传物质，所以组成成分为甲的DNA和乙的蛋白质的“杂合”噬菌体感染大肠杆菌后得到的子代噬菌体的表现型与甲种一致；组成成分为乙的DNA和甲的蛋白质的“杂合”噬菌体感染大肠杆菌后得到的子代噬菌体的表现型与乙种一致
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闵伟红，吉林省大安市人，中共党员。20__年9月考入中国农业大学食品科学与营养工程学院攻读博士学位。
该生在攻读博士期间，认真学习"三个代表"和"十八"大精神，积极参加党组织和学校以及实验室的各项活动。待人诚恳热情，实验认真，刻苦，努力。完成了申请博士学位所要求的全部课程，学习成绩优良，已修学分17，平均成绩81分。在国内<食品科学>，<食品与发酵工业>等相关专业期刊上发表论文5篇。
闵伟红所承担的课题属于国际合作项目。她以我国占积压稻谷中80%的早籼稻为原料，以传统自然发酵生产米粉为基础，首次进行了纯种乳酸菌发酵生产米粉的探索，并对乳酸菌改善米粉食用品质的机理，以及乳酸菌对淀粉改性和凝胶形成机理进行了研究。对乳酸菌发酵米粉的工艺进行了探讨，建立了评价淀粉凝胶类食品如粉皮、粉丝、米粉等食品"筋道感"的评价模型和 方法 。从而奠定利用早籼米生产高品质米粉的理论基础。
该论文在研究乳酸菌发酵产物对米粉品质改善的结果和建立淀粉凝胶类食品筋道感模型上具有创新性。对乳酸菌发酵米粉的工艺研究具有适用性。
论文作者能较全面地查阅国内外的文献，掌握该研究领域的动态，论文结果反映出作者具有较坚实的相关理论基础和熟练掌握先进的微生物学、物理化学和食品工程方面的实验技能，并且具有独立从事上述科研工作的能力。
我认为该博士论文已达到申请博士学位的要求，特同意其进行博士论文答辩，并推荐其申请博士学位。
丁长河是20__级博士研究生，该同学__于北京农业工程大学食品工程专业本科 毕业 ，__年无锡轻工大学食品科学与工程专业硕士毕业，该同学还曾经在全国第六大啤酒集团河南金星啤酒厂担任技术部负责人三年。
丁长河同学在校学习期间，拥护党的路线、方针和政策，积极参加学校和学院组织的各项活动。在日常研究工作和学习中能严格要求自己，坚持真理、勇于探索、诚恳热情、乐于助人、团结同学。
丁长河同学注重基础理论知识的学习和实验技能的提高，大量阅读了研究相关的书籍资料，知识面较宽。在学期间刻苦努力，成绩优良，取得总学分17学分，平均成绩85分。研究工作期间已被国内核心期刊录用学术论文2篇。另有1篇论文已被国外SCI索引源杂志接收，正在修改中。所从事研究的研究课题为国家"十五"科技攻关项目"功能性低聚糖"的子项目，项目编号为____。该项目前期研究在20__年6月被 教育 部鉴定为科技成果，在20__年9月该成果获山东省科技进步二等奖，丁长河同学是该课题主要完成者之一。
丁长河同学所完成的毕业论文"链霉菌高产木聚糖酶以及酶学性质的研究"，在查阅大量国内外文献的基础上，在国内首先筛选和鉴定了一株高产木聚糖酶的卷须链霉菌菌株，并研究了诱变和优化产酶条件对卷须链霉菌产酶的影响，液体发酵酶活国内最高。论文对卷须链霉菌木聚糖酶进行了纯化，得到电泳纯的低分子量木聚糖酶，进一步对纯酶的酶学性质进行了研究，这些研究为该酶的应用打下了基础。另外，论文还对橄榄绿链霉菌的产酶条件进行了优化和中试实验，链霉菌木聚糖酶酶活国内外最高。
该研究论文与国民经济发展紧密结合，实验方案设计合理、数据准确，结论可靠，
研究结果具有重要的理论意义和实用价值，为木聚糖酶高产和工业化应用奠定了基础。
该论文主要涉及微生物学、生物物理学、生物化学、发酵工程等学科，表明丁长河同学已掌握较深厚的基础理论知识和系统的专业知识，具备了独立进行科研工作的能力。
论文中还有一些内容，如玉米芯水不溶木聚糖诱导高产木聚糖酶机理，200升中试发酵罐发酵产酶条件的优化等，由于时间和条件的限制，没有能够做得更为完善。
总之，我认为，丁长河同学的论文已达到博士学位论文水平的要求，现推荐参加博士学位论文答辩，建议答辩通过后授予博士学位。
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__在硕士研究生学习阶段，有针对性的认真研读了有关核心课程，打下扎实的科研基础;在准备硕士论文期间，其积极参与各项教学科研活动，在教学实践的'过程中，认真阅读教材和查阅学术资料，大大提升了其专业水平。同时他还具有较强的动手能力，并参与了导师的多项课题，使自己的理论与实践水平得到了很大的提升。相信这些经历和积累都将成为其人生道路上的宝贵财富。
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__在硕士研究生学习阶段，注重政治理论学习，关心国家大事，拥护党的路线方针政策，时刻牢记担负的社会责任，坚决抵制邪教组织，政治立场坚定。在专业课程学习上，认真学习了软件工程的核心课程，所选课程全部达到国家要求。在科研实践中，广泛阅读有关博士、硕士论文和大量的外文文献，实践动手能力比较强，参与了导师多项课题的研究。在学习之余，该生注重个人综合素质的提升，曾代表学院参加了武汉大学 足球 赛并获得第一名的成绩，平时也经常和同学一起参加课外活动，这些活动不仅锻炼了身心，还加深了同学之间的友谊。相信这些经历和积累都将成为胡光人生道路上的宝贵财富。在以后的工作和学习中，望该生继续保持并发扬严谨治学的作风，兢兢业业，争取取得更大的成绩。
生态聚合液在环保方面的应用 一、 作用与机理 利用微生物治理污水和城市生活垃圾，是今后环保产业的主攻方向。生态聚合液在环保中的作用机理是以光合菌群和酵母菌群为主导，协同其它有益微生物共同作用，综合它们的分解、发酵、合成等功能，对有害气体先以脱氢的形式使其无害化。通过氧化、还原、发酵等途径，产生抗氧化物质，从而有效地抑制了病原微生物和腐败微生物的繁殖，消除了二氧化硫、硫化氢、甲烷等有害气体，除臭去污，并可抑制有害虫卵的发育，减少蚊虫的产生；把有害有毒转化为无害无毒，变有害为有用。在厕所除臭、生活垃圾利用、工业废水、臭湖死水的治理、游泳池净化等环保领域里，应用前景十分广阔且成本低廉。（图示河流净化） 现在污水净化主要用的是活性污泥法，它和生态聚合液净化法相同，所不同的是生态聚合液几乎不出现污泥．而通常的活性污泥法越是水质净化的水平提高，越是产生大量的污泥．那为什么用生态聚合液不产生污泥呢？其理由如下：在生态聚合液中共存着有效发酵分解和合成菌．它首先通过发酵分解，有机物被水溶化之后迅速地被混在这里的其他细菌消化掉．与此同时大量地生成抗氧化物质，每天通气几个小时它就产生自我消化的作用，它有自身消耗至消失的特征．所以它不出现污泥，水也干净了。 1、治理城市生活垃圾，消除恶臭，减轻水源污染； 2、治污效益显著：有机氮、金属离子、混浊度、COD（化学需氧量）、BOD（生化需氧量）、SS（浮游生物）等均下降至国标以下，DO（溶解氧）上升，水质得到改善。 3、能使污水中重金属还原，消除毒害；能将6价镉还原为无毒3价镉。 4、利用生态聚合液比一般净化槽处理污水，可大大缩短曝气时间，提高功效，节约水及用电资源，降低能耗和成本。 二、处理方法 目前常用生态聚合液治理环境的方法有： 1、三级净化槽法： 2、生物膜法： 3、水面喷施法： 以上方法对娱乐场所及浴池的水质净化同样有效。浴池水净化处理后可循环再利用。 4、垃圾发酵法：根据厨余（生活垃圾）的含水量撒放固体的生态聚合液发酵料，以吸干水分。其中也可含一些骨头。操作方法：将每天的垃圾倒入密闭的容器中，在上面撒一层生态聚合液发酵料，然后盖紧盖不使透气。天天如此直到装满。用生态聚合液处理过的垃圾不但没有臭味，放置10多天以后还可制成长满白色菌丝的生物肥料，是很好的有机肥，种花、种菜、种果都很好，不生病虫害并能改良土壤。垃圾生物肥也可放在水里浸泡一天，萃取的液肥既可灌田提高产量又可净化污水，真是一举两得。 5、垃圾场处理：垃圾场可用100-200倍生态聚合液稀释喷洒降低腐臭，减少蚊蝇，污水不发黑发臭；极臭的污水、粪沟等可投放生态聚合液发酵料，可减少臭味，降低污染，改善环境。 三、生态聚合液处理污水的方法 生态聚合液微生物群体在环境治理中的联合作用分解有机污染物的原理与禽畜圈粪便处理一样，抑制腐败细菌的生长，改善有机物的分解途径，减少NH3和H2S的稀放量和胺类物质的产生，同时光合菌中某些种利用H2S作供氢体消耗H2S，消除环境中的恶臭，减少蚊蝇蘖生。 一、厕所和生活污水处理 用生态聚合液处理生活污水，在水源口加生态聚合液发酵液，使生态聚合发酵液渗入污水中，经沉淀、发酵、净化三经处理，厕所粪便被分解，并被液化无块无臭无蝇，经净化三天后水透明度达标，处理后的废水可循环再利用，按50人次/ 日活动地场所的生活污水自理为例，每所4次在水源口加生态聚合液发酵液，在净化池过滤后通过抽水泵提水，形成水循环利用系统。餐馆废水含油脂量大，经生态聚合液处理后，含油脂污水经24小时可被净化。 二、有机废水处理方法 厕所和生活污水处理：在水源口每天加入1000倍的生态聚合液稀释液，污水进入沉淀池后，在沉淀池中浇泼250倍生态聚合液稀释液3％／m3。在废水排放口填加吸附性强的材料（如多孔陶器），吸附生态聚合液稀释液或发酵料，形成生态聚合液菌群大量繁殖的“繁殖场”（类似生物膜作用），使废水在生态聚合液“繁殖场”得到处理。“繁殖场”的形状、大小和废水滞留时间要随废水所含成分和排放量而定。为了使生态聚合液菌群分解有机物有足够的生物量，在“繁殖场”内可添加 ％的糖蜜（红糖），经过沉淀、发酵、净化处理，粪便被分解，液化无块。经三天后水质透明度达标。餐馆废水含油脂量大，按上述方法处理后含油脂污水经24小时可被净化。 三、工业废水处理方法 屠宰场、制革厂、淀粉厂、酿酒厂、造纸厂等工业废水都可以用生态聚合液有益微生物菌剂进行有效的净化。其方法是：进口处按流量的1％添加250倍生态聚合液稀释液（边流边加），废水流入一级沉淀池，池内装曝气管，按每立方浇泼3％的200倍生态聚合液稀释液，曝气管不断曝气使废水循环24小时，在一级沉淀池出口处填加吸附性强的材料（如多孔陶器）吸附生态聚合液稀释液或发酵料，形成生态聚合液菌群大量繁殖的“繁殖场”，经生态聚合液繁殖场流入二级沉淀池，经过同样办法处理后流入三级沉淀池处理，废水得到净化，水质清亮，可以再循环利用。 四、应用生态聚合液对粪便污水进行净化 公厕粪便污水常因处理不及时或处理方法不当，造成对环境的严重污染，同时给城市环卫工作增加了沉重负担。据统计，我国城市中每年的粪便产量达几千万t，且以年10％的速度递增。尤其近年来，随着城市建设规模的迅速扩大和城市人口的急剧增加，使粪便污水处理问题的研究更具重要性、迫切性。 我国现有粪便处理方式，一是施用于农田；二是排放于水体。前者因运输工具的落后及运距过远，要消耗大量的人力、物力和财力，而后者又常常造成对水体的污染，危害人类健康。 基于以上情况，为探索出一条粪便无害化处理的新路子，1996年10月，我们与某公司合作，利用日本教授研制的生态聚合液有效微生物菌群，并根据微生态工程原理采用生物技术和工程技术相结合的方法，首次将其应用于公厕粪便污水的研究，取得了良好的效果。为彻底解决城市粪便这一难题奠定了良好基础。 设备与工作原理 试验设备是由新兴公司从日本引进的生态聚合液小型合并净化槽B型。属分离接触式，本净化槽有三个室，第一室是用来接受积存从厕所排出的粪便污水，通过微生物的作用将其发酵分解，也就是将大分子量的有机物分解为小分子量的有机物；第二室的功能是进一步将有机物分解成水和CO2气体； 第三室的任务是借助鼓风机的作用，使有机物进一步分解，使厌氧菌自我消失，保证水体得以净化且不产生污染。 试验场地：某公厕 根据公厕建设的实际情况，试验场地由有关部门安排公厕试验。净化槽安装在厕所西墙外，周围用石棉板和稻草保温。接入男部大便池两个。 结果分析 试验前期，除公厕正常使用外，每天还不断地往净化槽中补充一定量的粪尿液。经计算，处理率令人满意，高达80％以上， 试验场地设在交通银行大门前约50米的公厕。整日车水马龙，人来人往。我们的试验吸引了不少人参观光顾，其中有80％以上的反映没有臭味。在试验过程中，我们采用臭气嗅觉评价法对净化槽上部约1m高的地方进行臭气强度的监测证明确无什么臭味，符合环保要求。 此试验证明，利用生态聚合液微生物菌群处理粪便污水，一年四季可连续进行。但应注意，生态聚合液中的硝化菌将垃圾中的NH4－N转化成NO3－N，而NO3－N则被反硝化成N2气体或由真菌作用固定为微生物氮。因此，由此机理还可证明，使用生态聚合液能有效地保持或提高了垃圾中的N、P、K及有机养分。如将此垃圾进行筛分、粉碎，制成颗粒肥，它还是一种高效优质的农家肥。 处理的是溶解于水中的有机物。为了防止温度过低，槽中结冰，冬季要做好保温工作。 应用生态聚合液有效微生物菌群处理粪便污水无危害，无污泥，周围环境无臭味。除臭的主要机理为：在第三室中， 由硝化菌将NH4－N转化为NO3－N，在第一室和第二室中NO3－N2气体， 或收其它微生物菌（如真菌）作用被固定为微生物氮。从而大大减少了NH4－N在碱性条件下的挥发， 降低了池中NH3的浓度，因此，人们嗅不到臭味。 利用生态聚合液微生物菌群处理粪便污水是一个投资省见效快，不扩大占地面积，好管理的项目，容易在大中城市推广应用。据我们的估算，建一个化粪池的面积即可建成一个净化槽，建一个化粪池的资金加1／2辆4t抽粪车的资金即可满足建个净化槽的资金，平日消耗生态聚合液微生物菌群的费用、维修气泵的费用、电的费用只是一辆抽粪车费用的％。环卫局计划再次与新兴公司合作，请日本有关专家对净化槽进行改进，并将标准提升为－89建设部生活杂用水水质标准。使污水资源化，实现经济效益、社会效益、生态效益三者的统一。 我国水资源本身就短缺，再加上日趋严重的水污染更造成我国水资源紧张。目前解决水资源日益短缺方法不外乎两方面：一方面节约用水，提高水的利用率；另一方面寻找新的淡水资源。而污染经过处理后回用则是开辟新的水资源的重要途径，不仅省钱，而且从生态资源和环境保护方面是最可行的。正因为污水处理回用是解决人类水资源短缺的有效途径，所以，它引起了各国政府的广泛重视。南阳市白河的污染主要来自工业废水和生活废水的排放。工业废水的排放量为6128万t，工业废水处理量为1701万t。生活污水和工业废水一起排放，其中含化学需氧量万t，重金属万t、氰化物、悬浮物、硫化物。这些废水流入下游给农业造成了严重污染。污水处理就目前的处理方法大体有物化处理、化学处理和生化处理三种，物化处理大都限于一级处理阶段，达到降低污染负荷，缓解二级处理负荷的目的，处理后的水质难以达到排放标准。化学处理法主要指用水处理剂，大多用于二级处理，该法可以作为生物处理的预处理，也可作为生物处理后深度处理，但它或多或少地要消耗和污染水源。生物化学处理是目前广泛采用的方法，由于生物处理污水效果好，成本低，不会造成二次污染，同时由于固定化技术，使微生物高浓度化，利用遗传工程培养高效微生物，为我们处理污水提供了可能。生态聚合液能解决缺水问题，甚至能使厕所污水变为饮用水，关于生态聚合液处理污水的研究国内国外都有不少报道。因此，采用生态聚合液技术对沼气发酵后的废液及生物药厂废水进行处理，使其基本达到排放标准，减少废水对环境的污染是我们研究的目的。 五、厨余垃圾的无害化处理 用生态聚合液发酵料（玻卡西）和密闭的容器使菜渣、剩饭等生活垃圾厌氧发酵将它制成优质的堆肥，厨余垃圾处理的最好办法。发酵的垃圾不会发出恶臭，用它制作的肥料肥效显著。同时，渗出的液体不仅是有效的液肥，而且排入下水道能清除管道污垢，净化水质。这些排水最终流入河川湖海还能强化其自净的作用。 一、材料：塑料垃圾桶2个，最好有密封盖。生态聚合液原液或玻卡西。 每个垃圾桶需能容纳一个星期的生活垃圾。以四口之家为例，垃圾桶的容量为15－20公升。 为了顺利进行发酵，一定要设法使垃圾桶保持厌氧状态，避免水分过多和空气进入，而且最好是两层，以使发酵过程中流出的液体与垃圾分开，否则容易发生腐败。如没有两层桶，可在桶底倒扣一个塑料箩，在塑料箩上放置塑料袋，袋上开些小孔，以使液体流出。垃圾投入塑料袋后扎紧。 二、处理方法： 1、多余的水分有碍发酵，所以垃圾尽量干燥，新鲜有机垃圾如蛋壳、骨头等尽量弄碎，否则空间大了空气容易进入。 2、每次放入垃圾后均匀散布玻卡西，比例是100：5，或喷洒一遍100倍的稀释液。如垃圾里的油及水分较多，可加些吸水材料，如报纸屑等。 3、压紧垃圾，排除里面的空气，上面盖一层塑料布，然后盖紧。 4、每天的垃圾继续投入塑料袋里扎紧。垃圾桶里逐渐会有液体流出来，须二至三天抽取一次。液体如呈透明茶色，表明发酵成功。如果颜色浑浊，则应增加玻卡西的量。 5、垃圾装满后密封放置一周，使它发酵熟成。同时使用另一个桶并进行重复上述的操作。为了轮流处理垃圾，所以需要两个垃圾桶。 6、垃圾发酵后产生的液体是极佳的有机液肥，可用于浇花，刷洗厕盆、便器。也可以直接倒入便槽中，可去除污垢及臭味。 三、发酵垃圾堆肥的使用方法： 发酵垃圾堆肥可埋入花盆里，但不能接触植物根部，应用土间隔开。 使用发酵垃圾堆肥培育出的花根系发达，花株特别肥壮，花叶绿而亮，花型饱满，色泽鲜艳。鲜花期延长1－2倍以上。催花、保花、保果，座果率均能提高许多。花圃不再生杂草。各种花卉均能使用发酵垃圾堆肥，效果极好。 四、厨余垃圾发酵处理之好处： 1、对一个家庭来说，妥善处理厨余垃圾，使之不产生恶臭，改善家庭卫生，减少蟑螂，蚊蝇，蚂蚁及老鼠等病媒的滋生，降低传播病菌的感染。 2、发酵垃圾能变废为宝，可作有机肥，可净化下水道，可去除异味。 3、避免环境污染，不会污染其他有用资源垃圾。并且不用每天倒垃圾。 4、降低垃圾处理的环节，减少掩埋场及焚化炉的场地、人工、燃料费等。 5、节省大量资金，增加社会资源，增进人体健康，净化环境。 可发动社区、学校、机关企业的退休人员、学生、员工一起来做，并设立定点收集站，收集的发酵垃圾可送到园林局、农业站作肥料用。一举多得，何乐而不为？ 附：发酵淘米水的方法及使用 淘米水经生态聚合液发酵后，也可有效利用。方法是：在淘米水里放一撮玻卡西或原液及红糖，搅拌后密闭发酵，温度最好是30度左右。4、5天后淘米水变成淡棕色，并有发酵的醇香味。用它稀释300倍浇花，可使花朵硕大，色泽鲜艳，花期延长。如将它排入下水道，能够去除管道里的污垢，又能净化家庭排水，消除异味。 何谓厨余垃圾？ 厨余垃圾包括：剩菜饭、菜叶、果皮、骨头、海产壳、花生瓜子壳、中药渣、树叶等有机物。但不包括淘米水、剩菜汤等液体。 只要我们有百分之一的人使用生态聚合液，那么，污水就能得到相当程度的净化。我们每天只要抽出一点点的时间，国家就能节省出大量的资金用到更需要的地方。 六、生态聚合液在宾馆的使用方法 利用微生物治理空气污染、污水和城市生活垃圾，是今后环保产业的主攻方向。生态聚合液在环保中的作用机理是以光合菌群和酵母菌群为主导，协同其它几十种有益微生物共同作用，综合它们的分解、发酵、合成等功能，对有害气体先以脱氢的形式使其无害化；通过氧化、还原、发酵等途径，产生抗氧化物质，从而有效地抑制了病原微生物和腐败微生物的繁殖，消除了二氧化硫、硫化氢、甲烷、甲醛等有害气体，除臭、防霉、去污，并可抑制有害虫卵的发育，减少蚊虫的产生；把有害有毒转化为无害无毒，变有害为有用。厕所除臭、生活垃圾的利用、在工业废水、臭湖死水的治理、游泳池的净化等环保领域里，应用前景十分广阔并且成本非常低廉。 生态聚合液能有效分解污垢（有机物）及臭味成份，并能抑制有害杂菌的繁殖。家庭中可使用喷雾器喷洒，或在洗拖把、抹布的水中放入原液，浓度视臭味或污垢的程度。在霉菌及杂菌容易繁殖的地方，喷洒次数多一些，浓度高一些。臭味或污垢越重，浓度应越大。应在霉菌及杂菌增值之前使用效果最好。前几次时使用100倍的稀释液，以后逐渐减低浓度，原理是使原液中的有益菌群能尽快定居繁殖并占据优势，以便尽快分解消除霉菌及杂菌，迅速去除异味，并能消除空气中的有害物质，净化空气。异味重、污垢多、黏腻潮湿之处每日使用一次，其他较清洁的地方可一周使用1－2次。 使用场所：居室、歌厅、宾馆走廊、地毯、居室空间、厕所、卫生间、浴室、空调风口、厨房、地面、洗涤池、排气扇、抽油烟机、下水口、墙角旮旯、窗沿、阳台等。 注意事项：不要与其他消毒液等杀毒剂同时使用，表面出现白色丝状物不影响使用，用前摇匀。放置在阴凉、避光的场所。如有气体，应将气体放出。
霉菌形成分枝菌丝的真菌的统称。不是分类学的名词，在分类上属于真菌门的各个亚门。构成霉菌体的基本单位称为菌丝，呈长管状，宽度 2～10微米，可不断自前端生长并分枝。无隔或有隔，具1至多个细胞核。在固体基质上生长时，部分菌丝深入基质吸收养料，称为基质菌丝或营养菌丝；向空中伸展的称气生菌丝，可进一步发育为繁殖菌丝，产生孢子。大量菌丝交织成绒毛状、絮状或网状等，称为菌丝体。菌丝体常呈白色、褐色、灰色，或呈鲜艳的颜色，有的可产生色素使基质着色。霉菌繁殖迅速，常造成食品、用具大量霉腐变质，但许多有益种类已被广泛应用，是人类实践活动中最早利用和认识的一类微生物。 霉菌是丝状真菌的俗称，意即“发霉的真菌”，它们往往能形成分枝繁茂的菌丝体，但又不象蘑菇那样产生大型的子实体。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。 霉菌的菌丝。构成霉菌营养体的基本单位是菌丝。菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。 根据菌丝中是否存在隔膜，可把霉菌菌丝分成两种类型：无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。无隔膜菌丝中无隔膜，整团菌丝体就是一个单细胞，其中含有多个细胞核。这是低等真菌所具有的菌丝类型。有隔膜菌丝中有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝体由很多个细胞组成，每个细胞内有1个或多个细胞核。在隔膜上有1至多个小孔，使细胞之间的细胞质和营养物质可以相互沟通。这是高等真菌所具有的菌丝类型。 为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育的需要，许多霉菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态和组织，这种特化的形态称为菌丝变态。 吸器。由专性寄生霉菌如锈菌、霜霉菌和白粉菌等产生的菌丝变态，它们是从菌丝上产生出来的旁枝，侵入细胞内分化成根状、指状、球状和佛手状等，用以吸收寄主细胞内的养料。 假根。根霉属霉菌的菌丝与营养基质接触处分化出的根状结构，有固着和吸收养料的功能。 菌网和菌环。某些捕食性霉菌的菌丝变态成环状或网状，用于捕捉其它小生物如线虫、草履虫等。 菌核。大量菌丝集聚成的紧密组织，是一种休眠体，可抵抗不良的环境条件。其外层组织坚硬，颜色较深；内层疏松，大多呈白色。如药用的茯苓、麦角都是菌核。 子实体。是由大量气生菌丝体特化而成，子实体是指在里面或上面可产生孢子的、有一定形状的任何构造。例如有三类能产有性孢子的结构复杂的子实体，分别称为闭囊壳、子囊壳和子囊盘。 霉菌有着极强的繁殖能力，而且繁殖方式也是多种多样的。虽然霉菌菌丝体上任一片段在适宜条件下都能发展成新个体，但在自然界中，霉菌主要依靠产生形形色色的无性或有性孢子进行繁殖。孢子有点像植物的种子，不过数量特别多，特别小。 霉菌的无性孢子直接由生殖菌丝的分化而形成，常见的有节孢子、厚垣孢子、孢囊孢子和分生孢子。 霉菌的孢子具有小、轻、干、多，以及形态色泽各异、休眠期长和抗逆性强等特点，每个个体所产生的孢子数，经常是成千上万的，有时竟达几百亿、几千亿甚至更多。这些特点有助于霉菌在自然界中随处散播和繁殖。对人类的实践来说，孢子的这些特点有利于接种、扩大培养、菌种选育、保藏和鉴定等工作，对人类的不利之处则是易于造成污染、霉变和易于传播动植物的霉菌病害。 由于霉菌的菌丝较粗而长，因而霉菌的菌落较大，有的霉菌的菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种则有一定的局限性，直径1-2厘米或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。
苜蓿种子内生菌的分离开题报告应该包括以下内容：1.研究的背景和意义：介绍苜蓿种子和内生菌的相关背景和意义，包括苜蓿在农业生产中广泛应用以及内生菌的生态作用等。同时概述国内外对苜蓿种子内生菌的研究进展和不足之处，引出本研究的研究目的。2.研究目的：明确本研究的具体研究目的和需解决的问题，即分离、鉴定苜蓿种子内生菌的多样性和数量，并分析其生态功能及其与苜蓿生长发育的关系。3.研究方法：介绍本研究所采用的实验设计、样本采集、实验室操作等详细的研究方法和步骤，并阐述其科学、可靠和有效性。4.预期研究结果和意义：阐述分离、鉴定苜蓿种子内生菌的多样性和数量的预期结果，以及对苜蓿生长发育和生态作用的影响，同时指出研究的理论价值和实际意义。5.研究的进展和计划：对研究进展情况进行概括，并列出接下来的研究计划和工作安排，包括实验进度、数据分析、研究结果的检验与验证、论文的撰写和发表等。6.参考文献：引用在开题报告中涉及到的相关文献和资料。总之，苜蓿种子内生菌的分离开题报告应该全面、具体和条理清晰，让读者能够清晰地了解该研究的研究目的、方法和预期结果，并发现其中的科学价值和意义，有助于顺利进行后续的实验研究和论文撰写。
植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告
紧张又充实的大学生活即将结束，大学生们马上就要开始最难熬的毕业设计阶段，而我们做毕业设计之前要先写好开题报告，快来参考开题报告是怎么写的吧！以下是我整理的植物保护专业本科毕业论文（设计）开题报告，欢迎大家借鉴与参考，希望对大家有所帮助。
毕业论文题目：
菌寄生真菌纤细齿梗孢蛋白酶基因的克隆与表达
姓名： xx 学号： xxxx
年级： xxx 专业： 植物保护
指导教师：姓名 xxx 职称 教授
学科 植物病理
山东农业大学教务处
20XX年x月x日
一、选题依据（拟开展研究项目的研究目的、意义）
菌寄生(Mycoparasitism)是发生在菌寄生真菌与寄主真菌之间的一种寄生方式，是自然界普遍存在的一种真菌与真菌之间的相互作用。一直以来，生物间相互作用及信号传导的分子机制，是当今生命科学研究的热门。利用菌寄生真菌与寄主真菌作为研究的模式系统来揭示生物相互之间的相互作用机制有重要理论和实践意义。李多川(Li,1996)先生发现纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)和串珠镰刀菌(Fusarium moniliforme)的菌寄生关系以来，我们实验室试图通过研究纤细齿梗孢和串珠镰刀菌，来建立菌寄生真菌与寄主真菌相互作用机制研究的模式系统，从而揭示菌寄生真菌与寄主真菌之间相互作用的分子机制。纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是串珠镰刀菌的一种重寄生真菌，该菌是一种接触性活体重寄生菌，离体试验发现其分生孢子只有在串珠镰刀菌细胞壁提取物刺激下才能萌发。这说明两者之间的重寄生关系是建立在二者识别与互作的分子机制上的(Li,2004)。在纤细齿梗孢和串珠镰刀菌相互作用过程中，几丁质酶、蛋白酶等细胞壁裂解酶可能起到重要作用。其中，蛋白酶在木霉属菌寄生真菌中的功能已经得到初步证明，而纤细齿梗孢的蛋白酶的研究还未见报道。因此，克隆纤细齿梗孢蛋白酶编码基因对于从分子水平上研究重寄生真菌和寄主识别和互作机制有着重要的意义。
二、文献综述内容(在充分收集研究主题相关资料的基础上，分析国内外研究现状，提出问题，找到研究主题的切入点，附主要参考文献)
纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)是李多川教授分离得到的一种活体营养接触型菌寄生真菌[1~3]，其寄主包括Fusarium moniliformeAlternaria alternata等。近年来，我们实验室一直在努力以其为基础研究菌寄生真菌与寄主真菌之间的相互作用的分子机制。经过多年的研究，人们渐渐认识到真菌细胞壁蛋白在细胞与外界的相互作用过程中扮演着重要的角色。细胞壁蛋白研究已经成为生物间相互识别机制研究的热点。鉴于以上原因，我们实验室成功分离纯化了纤细齿梗孢的寄主之一Alternaria alternata菌丝细胞壁上的一种特异性糖蛋白——凝集素，并初步证明其在和孢子吸附过程中起到识别因子的作用[4]。近年来，菌寄生真菌细胞壁裂解蛋白酶在菌寄生过程中的作用被人们逐渐重视起来。克隆和表达菌寄生真菌的蛋白酶编码基因变得很有意义。本研究试图以菌寄生真菌纤细齿梗孢(Olpitrichumtenellum)作为研究材料克隆了其蛋白酶基因。根据氨基酸的保守序列设计兼并引物，然后采用RT-PCR和RACE是一个较为快速、简单和高效的方法。本实验根据同源保守序列设计兼并引物，通过RT-PCR及RACE-PCR的方法，克隆了蛋白酶的编码基因的全长cDNA序列，并对该基因进行了序列分析，为后续试验打下了基础。
由于Olpitrichum tenellum在离开寄主的人工培养基中很难生长，纯化其蛋白酶变得非常困难。因此，我们需要使用外源蛋白表达系统得到蛋白，进一步研究其性质，从而搞清楚其在重寄生过程中的作用。在过去的几十年间，随着DNA重组技术的不断发展，通过构建遗传工程菌株，人们可以较容易地使各种各样的天然酶的基因在微生物系统中高效表达，从而在很大程度上摆脱对天然酶源的依赖。
基因工程的表达系统有原核表达系统和真核表达系统两大类。在原核表达系统中，大肠杆菌表达系统是目前了解最深入，实际应用最为广泛的表达系统。与其他表达系统相比，大肠杆菌表达系统具有遗传背景清楚、目标基因表达水平高、培养周期短、抗污染能力强等特点。在基因表达技术中占有重要的地位，是分子生物学研究和生物技术产业化发展进程中的重要工具[5]。
Pichia pastoris基因表达系统经过十几年发展，已基本成为较完善的外源基因表达系统，具有易于高密度发酵，表达基因在宿主基因组中稳定整合，能使产物有效分泌并适当糖基化，培养方便经济等特点。利用强效可调控启动子AOX1，已高效表达了HBsAg、TNF、EGF、破伤风毒素C片段、基因工程抗体等多种外源基因[6]，证实该系统是高效、实用、简便，能提高表达量并保持产物生物学活性的外源基因表达系统。表达系统在生物工程领域将发挥越来越重要的作用，促进更多外源基因在该系统的高效表达，提供更为广泛的基因工程产品[7]。
我们已经分离到蛋白酶的编码基因，本研究中将该基因的去掉信号肽序列的正确阅读框融合于原核表达载体pET-22b(+)和毕赤酵母表达载体pPIC9K上，分别转化 BL21及Pichia pastoris GSxx5，以期在这些菌株中有效表达该基因的编码产物，从而为以后功能研究打下基础。
1 李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.吉林农业大学学报,20：37~65.
2 21.李多川.1998.菌寄生真菌分子生物学研究进展.微生物学通报，25：345~347.
3 .李多川，沈崇尧.1997.菌寄生菌物与寄主菌物相互作用的研究进展.西北农业学报，6：94~98.
4 张成省，李多川，孔凡玉. alternata菌丝细胞壁凝集素的纯化与特性研究.植物病理学报，35(2)：141~147.
5 .xx.何诚，朱运松.1998.甲醇营养型酵母表达系统的研究进展.生物工程进展,18：7~xx.
6 彭毅，杨希才，康良仪.2000.影响甲醇酵母外源蛋白表达的因素.生物技术通报，4：33~36.
7 韩雪清，刘湘涛，尹双.2003.毕赤酵母表达系统.微生物学杂志，3：35~40.
三、研究方案(主要研究内容、目标，研究方法、进度)：
1、研究内容：
本课题选择纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)做为研究对象，通过RT-PCR及RACE技术分离克隆了其丝氨酸蛋白酶基因，并进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究，为进一步的研究工作打下基础。
2、研究的目标：
克隆了纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)的丝氨酸蛋白酶基因，进行原核及真核表达，并对其的性质进行了研究。
3、研究方法：
将纤细齿梗孢(Olpitrichum tenellum)接种到LB培养基上，培养14个小时后，收集菌丝，然后采用总Trizol法提取RNA。再从GenBank数据库中搜索到大量的蛋白酶氨基酸序列，并根据同源性进行分类，分别设计兼并引物。再通过RT-PCR、3’-RACE、5’-RACE获得全长cDNA、DNA克隆，并将其连接到载体上，然后采用电击法将将重组质粒转入到全长cDNA、DNA克隆中，通过透析纯化蛋白酶，最后研究其特性。
四、研究进度：
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆 。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。
五、技术路线：
收集菌丝
总RNA提取
同源序列 设计引物
特性研究
RT-PCR、
3’-RACE、5’-RACE
纯化表达产物
全长cDNA、DNA克隆 转化大肠杆菌、毕赤酵母
四、进程计划(各研究环节的时间安排、实施进度、完成程度)
20xx年5月23日~20xx年5月29日 整理收集资料，并跟着研究生学习基本实验技术。完成实验的1%。
20xx年5月30日~20xx年6月18日 提取RNA，设计引物、全长cDNA、DNA克隆。完成实验的50%。
20xx年6月19日~20xx年7月15日 转化大肠杆菌、毕赤酵母表达，获得纯纯产物，并研究其特性。完成实验的95%。
20xx年3月~20xx年6月 对实验结果不理想的实验重做，整理实验数据，完成毕业论文，并准备毕业答辩。完成100%。
五、导师对文献综述的评语
签字：
20xx年xx月xx日
六、专业意见
专业主任签字：
20xx 年 月 日
七、学院意见
学院(章)： 负责人签字：
20xx年xx月xx日
摘要：
针对目前浙江农林大学植物保护研究法实验教学方法、内容及手段等方面存在的一系列问题，提出了相关改革对策：优化实验课程内容，整合实验模块，学生自行设计实验方案等教学方法和手段的改革，以及课程考核方式和时间安排的调整，旨在培养学生的科研兴趣及创新能力。
关键词：
植物保护论文
目前，国内外很多农业院校的植物保护专业均开设了昆虫研究法和植病研究法课程。为优化本科培养方案，浙江农林大学通过调整教学大纲，将植病研究法、昆虫研究法和农药研究法合并成一门植物保护研究法课程。植物保护研究法是植物保护专业重要的专业限选课程之一，是植物保护研究的重要组成部分，也是培养和提高学生专业实验技能和学习兴趣的重要课程，是一门专业性、实践性很强的实验学科。通过这门课程的教学，能使学生掌握植物保护研究的基本方法及基本原理，培养植物保护研究常规操作能力，以及查阅资料、设计实验方案和实际操作能力，提高学生的逻辑思维、整理资料、总结归纳和论文撰写的能力。笔者分析了浙江农林大学植物保护研究法实验教学中存在的问题，提出教学改革内容，并总结了改革成效。
1.实验教学存在的问题
传统实验教学的弊端传统实验教学的主要特征是“灌输式”“填鸭式”，学生在2个小时的实验过程中就是简单地按照实验指导书和实验大纲中的实验方法和步骤依葫芦画瓢，实验完成后，又按照统一的模式填写实验报告。在整个实验过程中，学生无需独立思考和分析，更谈不上发挥创新能力了。因此，很难让学生对实验产生兴趣，培养学生的创造性思维就更无从谈起了。虽然这种传统实验模式简明、清晰，有利于学生对相关结论的认可、理解和记忆，也有利于教师对整个教学过程的控制，教师和学生很轻松愉快地就能完成实验教学任务。学生走上工作岗位后，传统实验教学的弊端立即显现。学生缺乏设计实验的能力，在实验过程中缺乏发现问题、分析问题和解决问题的能力，实验后缺乏正确分析实验结果的能力。因此，传统的实验教学模式急需改革。
实验教学内容系统性不强植物保护研究法是植物保护专业本科学生的一门专业课程，其涉及的内容有昆虫研究法、植病研究法和农药研究法。在以往的实验课程中，只是简单地把这3门课的实验合在一起上，并没有把内容紧密联系在一起，如昆虫实验时，指导教师一般是教授昆虫学科的教师;而在进行植病实验时，则由讲授植病学科的教师指导。这样的实验模式难以使植物病虫害系统联系起来，学生学习专业知识不够系统和深入，容易造成理解上的片面性和孤立性，不利于掌握该专业的系统知识和技能。
实验考核不科学以往实验课程成绩评定的主要依据是实验报告，而每次实验课结束后，学生递交的实验报告只是把实验大纲(包括实验口的、原理、仪器与试剂、内容及方法)原文不动地抄一遍，实验结果更是千篇一律，这样实验就变成了预演过程，学生在实验中缺乏思考，不利于培养发现问题、提出问题、分析问题和解决问题的能力，背离了实验课教学的初衷。同时，还会导致每位学生的实验成绩差异微乎其微，不具有良好的区分度。
2.教学改革内容
重视教学环节在以往的实验课程中，实验教学所需要的实验用具和材料大多数都是实验教辅人员提前准备，导致他们的工作量非常大。让学生参与实验材料的准备和管理，一方面提高了教辅人员的工作效率;另一方面可以让学生对实验过程有全面了解，获得整个科研实践过程的训练，从而养成好的实验习惯，在未来的科研工作中做到计划周密、有条不紊地安排和实施实验计划。同时，在实验教学过程中，必须教育学生认真操作、仔细观察、实事求是地记录实验结果，并对实验进行科学分析。一日_发现弄虚作假的学生，一定要严厉批评，同时帮助他们分析失败的原因，找出解决的方法，有条件的情况下，让其重新做实验，让学生充分意识到科学研究允许失败，但是不能有半l从虚假。提高学生的实践能力实践教学是培养和训练学生实践操作能力，独立分析问题、解决问题能力的重要手段，尤其对于学生创新能力的培养，具有其独特的地位和作用。该项口分别以某种农作物病虫害为主轴展开一系列的实践性实验教学，要求学生自主设计实验和执行各项实验内容，指导教师负责答疑和提供技术帮助。学生通过自己分组、调查、取样、鉴定、查阅资料、讨论制订实验方案和动手实验等一系列步骤，不仅可以很好地将课堂上所学的理论知识与实践相结合，而且还有助于提高自学能力、实践能力和团队协作能力，进一步培养科学思维和创新能力。优化实验教学内容结构将整个实验课程设置成一个综合性的大实验：分别以某个农作物上的病虫害发生规律及防治措施贯穿整个课程。将口前昆虫研究法的昆虫标本的采集与制作、昆虫人工饲养技术、昆虫生态学研究方法、昆虫生理生化研究方法、昆虫分子生物学研究方法和害虫综合治理研究方法5个实验和植病研究法的植物病害调查、植物病原菌分离与鉴定技术、植物病原菌分子生物学鉴定技术、植物病原真菌遗传转化技术和植物病害综合治理技术5个实验合并成1个综合性大实验，将植物病虫害研究以故事的形式紧密地整合在一起，让学生将课堂知识与田间实际应用有机地联系在一起，加深对理论知识的理解，提高学习兴趣。整个实验就是以具体的作物病虫害发生为时间轴，具有很强的连贯性和系统性，学生只有认真完成每一个实验，才能很好地保证后续实验的顺利进行，有助于增强学生的责任感和团队合作精神，同时也改变了学生实验报告千篇一律的`现象。改革成绩评定方式实验课成绩一方面是对学生实验完成好坏的肯定，另一方面也对学生起到了一定的督促作用。为了做到对学生的全面评价，实验成绩除实验报告和考勤成绩外，应将实验过程中学生的学习主动性、动手操作能力、实验结果记录规范性量化纳入成绩考核。在实验过程中，教师应主动观察并记录每个学生的实际动手、操作能力，量化后按一定比例记入总成绩，对那些既有独立操作能力，又有创新意识的学生，适当给予创新学分。实验过程中，学生是否遵守实验室规则、是否具有团队合作精神，实验结束后，学生是否打扫卫生、是否清洗实验器材等，这些看似小问题，但也体现着一个人的品质和素养，做得好的学生也可以适当加分。
3.改革成效
提高学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识学生能在同一时间完成植病研究法、昆虫研究法和农药研究法3门实验课程，体现了实验课程很强的连贯性和系统性。学生在实践过程中将这3门课程的相关内容紧密、有机地联系起来，对植物病虫害防治有了更深入的认识，同时也提高了学生的专业技能及其对专业知识重要性的认识。在实验的过程中，强调把学生的动手能力放在首位，让学生更多地参与到实验中，切身体会到所学专业的意义。
培养学生发现、提出、分析和解决问题的能力植物保护研究法实验教学模式具有系统化和整体化特点，同时涉及昆虫研究法、植病研究法、农药研究法等相关学科课程。在实验过程中，学生在对病虫害的认知及其防治等问题的处理上始终处于主体地位，在独立思考、查找资料、咨询专业教师、综合分析之后，拟定出具体的处理方案，能够融会贯通地掌握植物保护学科的理论知识和基本实践技能。
提高指导教师的业务水平新的实验教学模式综合运用了3门相关课程的理论知识，加强了课程的综合实践环节，因此指导教师自身的知识面、操作技术、实践应用和协调能力都需要提升。所以，这种实验教学模式促使教师在教学过程中同学生一起不断学习，丰富专业理论知识，完善专业实践体系，提高发现、提出、分析和解决问题的能力，了解和掌握学科及相关学科的发展动态、研究的新进展、出现的新技术，从而提高了指导教师的业务水平。
4.结语
植物保护研究法在植物保护专业2013级和2014级本科生实验课程教学中进行了实践，通过问卷调查，95%的学生认为在实验过程中有较多的动手机会，激发了自己对实验的兴趣，提高了自己分析和解决问题的能力。因此，认为该教学方法可以发挥学生的主观能动性、拓展学生的科研思路、激发学生的创新创造力和提高学生的独立应用实践能力，具有良好的教学效果。
毕设开题报告怎么写
一段忙碌又充实的大学生活要即将结束，大家都开始做毕业设计了，而我们做毕业设计前指导老师都会要求先写开题报告，来参考自己需要的开题报告吧！下面是我精心整理的毕设开题报告怎么写，供大家参考借鉴，希望可以帮助到有需要的朋友。
毕业论文开题报告怎么写简述
第一是标题的拟定。课题在准备工作中已经确立了，所以开题报告的标题是不成问题的，把你研究的课题直接写上就行了。比如我曾指导过一组同学对伦教的文化诸如“伦教糕”、伦教木工机械、伦教文物等进行研究，拟定的标题就是“伦教文化研究”。
第二就是内容的撰写。开题报告的主要内容包括以下几个部分：
一、课题研究的背景。
所谓课题背景，主要指的是为什么要对这个课题进行研究，所以有的课题干脆把这一部分称为“问题的提出”，意思就是说为什么要提出这个问题，或者说提出这个课题。比如我曾指导的一个课题“伦教文化研究”，背景说明部分里就是说在改革开放的浪潮中，伦教作为珠江三角洲一角，在经济迅速发展的同时，她的文化发展怎么样，有哪些成就，对居民有什么影响，有哪些还要改进的。当然背景所叙述的内容还有很多，既可以是社会背景，也可以是自然背景。关键在于我们所确定的课题是什么。
二、课题研究的内容。
课题研究的内容，顾名思义，就是我们的课题要研究的是什么。比如我校黄姝老师的指导的课题“佛山新八景”，课题研究的内容就是：“以佛山新八景为重点，考察佛山历史文化沉淀的昨天、今天、明天，结合佛山经济发展的趋势，拟定开发具有新佛山、新八景、新气象的文化旅游的可行性报告及开发方案。”
专家解读毕设开题报告
1 毕业论文选题的原则
毕业论文选题一般要求满足以下原则：
①开拓性:前人没有专门研究过或虽已研究但尚无理想的结果，有待进一步的探讨和研究，或是学术界有分歧，有必要深入研究探讨的问题;
②先进性:硕士毕业论文要有新的见解，博士毕业论文要做出创造性成果;
③成果的必要性:所选课题应有需要背景，针对实际的和科学发展的需要，即应有实际效益或学术价值;
④成果的可能性:课题的内容要有科学性，难易程度和工作量要适当，充分考虑到在一定时间内获得成果的可能性。
以上要求说明，毕业论文题目不是给定的，而是研究出来的，只有在对所研究领域的过去、现在的研究资料等信息进行全面把握、深入分析的基础上，才能够确立满足以上“四性”要求的选题，从而为完成高质量的毕业论文奠定坚实的基础。无论是结合导师已有科研任务的选题，还是自选课题，选题之前的“信息积累”与“发现问题”均是研究生所必须经历的过程，尽管导师已完成了以上过程，但导师并不能替代研究生，这就是研究生学习、研究的独立性要求。
2 开题报告的内容与撰写要求
开题报告的内容一般包括：题目、立论依据(毕业论文选题的目的与意义、国内外研究现状)、研究方案(研究目标、研究内容、研究方法、研究过程、拟解决的关键问题及创新点)、条件分析(仪器设备、协作单位及分工、人员配置)等。
开题报告——毕业论文题目
题目是毕业论文中心思想的高度概括，要求:
①准确、规范。要将研究的问题准确地概括出来，反映出研究的深度和广度，反映出研究的性质，反映出实验研究的基本要求——处理因素、受试对象及实验效应等。用词造句要科学、规范。
②简洁。要用尽可能少的文字表达，一般不得超过20个汉字。
开题报告——毕业设计立论依据
开题报告中要考虑：
① 毕业论文的选题目的与意义，即回答为什么要研究，交代研究的价值及需要背景。一般先谈现实需要——由存在的问题导出研究的实际意义，然后再谈理论及学术价值，要求具体、客观，且具有针对性，注重资料分析基础，注重时代、地区或单位发展的需要，切忌空洞无物的口号。
② 国内外研究现状，即文献综述，要以查阅文献为前提，所查阅的文献应与研究问题相关，但又不能过于局限。与问题无关则流散无穷;过于局限又违背了学科交叉、渗透原则，使视野狭隘，思维窒息。所谓综述的“综”即综合，综合某一学科领域在一定时期内的研究概况;“述”更多的并不是叙述，而是评述与述评，即要有作者自己的独特见解。要注重分析研究，善于发现问题，突出选题在当前研究中的位置、优势及突破点;要摒弃偏见，不引用与导师及本人观点相悖的观点是一个明显的错误。综述的对象，除观点外，还可以是材料与方法等。
此外，文献综述所引用的主要参考文献应予著录，一方面可以反映作者立论的真实依据，另一方面也是对原著者创造性劳动的尊重。
开题报告——毕业设计研究方案
开题报告中要考虑：
① 研究的目标。只有目标明确、重点突出，才能保证具体的研究方向，才能排除研究过程中各种因素的干扰。
② 研究的内容。要根据研究目标来确定具体的研究内容，要求全面、详实、周密，研究内容笼统、模糊，甚至把研究目的、意义当作内容，往往使研究进程陷于被动。
③ 研究的方法。选题确立后，最重要的莫过于方法。假如对牛弹琴，不看对象地应用方法，错误便在所难免，相反，即便是已研究过的课题，只要采取一个新的视角，采用一种新的方法，也常能得出创新的结论。
④ 研究的过程。整个研究在时间及顺序上的安排，要分阶段进行，对每一阶段的起止时间、相应的研究内容及成果均要有明确的规定，阶段之间不能间断，以保证研究进程的连续性。
⑤ 拟解决的关键问题。对可能遇到的最主要的、最根本的关键性困难与问题要有准确、科学的估计和判断，并采取可行的解决方法和措施。
⑥ 创新点。要突出重点，突出所选课题与同类其他研究的不同之处。
开题报告——毕业设计条件分析
突出仪器设备等物质条件的优势。明确协作单位及分工，分工要合理，明确各自的工作及职责，同时又要注意全体人员的密切合作。提倡成立导师组，导师组成员的选择要充分考虑课题研究的实际需要，要以知识结构的互补为依据。
开题报告怎么写
第一，你要写什么
这个重点要进行已有文献综述，把有关的题目方面的已经有的国内外研究认真介绍一下(先客观介绍情况，要如实陈述别人的观点)，然后进行评述(后主观议论，加以评估，说已有研究有什么不足)，说现在有了这些研究，但还有很多问题值得研究。其中要包括你选题将要探讨的问题。由于目前研究不足，所以你要研究。所以，你的硕士论文要写什么是根据文献综述得出来的，而不是你想写什么就写什么。如果不做综述，很可能你的选题早被别人做得很深了。
第二，为什么要写这个
这个主要是说明你这个选题的意义。可以说在理论上，你发现别人有什么不足和研究空白，所以你去做，就有理论价值了。那么你要说清楚你从文献综述中选出来的这个题目在整个相关研究领域占什么地位。这就是理论价值。
然后你还可以从实际价值去谈。就是这个题目可能对现实有什么意义，可能在实际中派什么用场等等。
第三，如何写
在开题报告里你还应当说清楚你选了这个题目之后如何去解决这个问题。就是有了问题，你准备怎么去找答案。要说一下你大致的思路，同时，重点阐述你要用什么方法去研究。如文献分析法、访谈法、问卷法、定量研究、实验研究、理论分析、模型检验等等。
在上述三个方面中间，文献综述是重点。没有文献综述，你就无法找到自己的题目，也不知道这个题目别人已经做得怎么样了，所以你要认真进行综述。当然，综述的目的还是引出你自己的话题，所以不能忘记评述哟。
复式结构
实际上，我们在撰写论文时，并不一定要拘泥于伞式结构一种模式。应根据论文内容的内在逻辑联系，构思有关阐析、推理及反驳等论证的实质部分如何穿插安排、展开，才能全面、准确、简明地说明问题，可以灵活运用 复合型结构 。
学术论文正文的写作，多采用伞式结构，以伞式结构作为论文的主框架，其具体形式常见为图2-10所示。
学术论文常采用标题和序号，因为通过它们可以鲜明地突出论文的主要内容，使结构脉络清晰，且富有一种整洁有序、循序渐进的节奏美感。
标题和序号可分为若干个层次，编号系统常采用：
一 (标题)
二 (小标题)
(次级小标题)
(1) (阐述事实小项)
毕业设计论文写作方法
毕业设计论文是毕业设计工作的总结和提高，与从事科研开发工作一样，必须有严谨求实的科学态度。毕业设计论文应有一定的学术价值和实用价值，能反映出作者所具有的专业基础知识和分析解决问题的能力。
前言部分
前言部分也常用 引论 概论 问题背景 等作为标题，主要介绍论文的选题。
首先阐明选题的背景和选题的意义。选题需强调实际背景，说明在计算机研究中或部门信息化建设、管理现代化等工作中引发该问题的原因，问题出现的环境和条件，解决该问题后能起什么作用等。结合问题背景的阐述，使读者感受到此选题确有实用价值和学术价值，确有研究或开发的必要性。
综述部分
任何一个课题的研究或开发都是有学科基础或技术基础的。综述部分主要阐述选题在相应学科领域中的发展进程和研究方向，特别是近年来的.发展趋势和最新成果。通过与中外研究成果的比较和评论，说明自己的选题是符合当前的研究方向并有所进展，或采用了当前的最新技术并有所改进，目的是使读者进一步了解选题的意义。
其次，还能反映出学生综合分析的能力。从大量的文献中找到可以借鉴和参考的内容，这不仅要有一定的专业知识水平，还要有一定的综合能力。对同行研究成果是否能抓住要点，优缺点的评述是否符合实际、恰到好处，这与一个人的分析理解能力关系密切。
方案论证
在明确所要解决的问题并完成文献综述后，很自然地就要提出自己解决问题的思路和方案。在写作方法上，一是要通过比较显示自己方案的价值，二是让读者了解方案的创新之处或有新意的思路、算法和关键技术。
论文主体
主体部分的写法，视选题的不同可以多样化，研究型论文和技术开发型论文的写法就有明显的不同。
开题报告逻辑
一、问题提出的逻辑
无论开题报告的第一部分要求陈述的具体内容有多大差异，它都内在地指向研究者要研究的问题。所谓要研究的问题，就是在理论或实践中存在但又还没有研究或没有得到彻底研究的问题，它主要指以下三个方面的内容：
①现有的研究根本就没有意识到或发现的新问题；
②已有的研究还没有运用或运用得不够成熟的视角和方法；
③研究者直觉地预感到可能成立的新观点(相当于研究假设)。
问题与问题是相互联系的，研究者可以从他人所提出的问题中生出新问题，因此研究者必须对相关文献加以研究(包括文献综述或文献述评，以下简称文献研究)，找到其中所研究的问题。文献研究当然可以是对研究现状的把握，不过研究现状这一说法很容易给研究者以误导，似乎只要知道当前该领域的研究情况就可以了，其实并不尽然，由于问题从来都是在历史中形成的，假如不把握问题发展的历史，不仅难以理解当前正在研究的问题，更重要的是无法觉察问题的发展趋势，假如不以问题的发展趋势为前提的话就不可能提出具有前沿意义的问题来。强调对研究现状的把握，在很大意义上是由于当前的研究文献隐含着研究问题形成与发展的历史。事实上，许多研究文献在前言里或多或少地会对所研究的问题及其历史作简要叙述，假如研究者能够意识到这一点的话，可以追溯出问题的形成与发展史，这就为接近前沿创造了基础，当然对前沿的接近不能没有跨年度研究文献的支持。
假如研究者把前沿问题(或者自认为所提出的问题是新问题)作为自己的研究重点，就不能不把问题的形成历史纳入其视界之内，可见，历史意识对研究者来说是非常重要的。当然，强调研究现状，还有一个原因乃在于研究者不想把新问题作为研究重点，而是要谋求对已成共识的问题的解决，其重点已转移到了方法的研究上，这时长篇累犊地陈述问题的历史就不那么合适了。
方法与问题、方法与方法之间也是相互联系的。就一般意义而言，假如不思考方法所对应的问题是什么，对方法的理解就不可能充分，也不可能创造出适合于解决问题的新方法来。问题确实可以是方法上的问题，当研究者试图以一种新的视角、路径和策略去解决一个也许不能算是新的问题的时候，在做文献研究时可以侧重于对方法的形成史、各种方法被使用的条件、各种方法所具有的优势和不足进行研究，并在此基础上提出新的方法。这样一来，对研究现状的把握虽然重点在于分析当前所使用的各种方法，但也涉及到这些方法的历史，而方法的历史又与问题的历史密切联系在一起，从这个意义来讲，在方法上提出问题往往涉及到问题与方法两个方面，特别对那些还没有充分明确，或者还没有得到普遍认同的问题更是如此。简言之，只有研究者所关注的问题已明显成为该领域的研究者的共同问题时，才能把方法及其历史作为文献研究的重点。
把已有研究文献所呈现的观点(或结论)加以概述是开题报告的基本要求，许多文献研究都把重点放在这个方面，但是，诸文献所呈现的观点与该文献所研究的问题、所运用的方法是密切相关的，假如没有对问题的梳理、没有对方法的分析，就不能对这些观点的正确性作出判断，可见，对研究文献所呈现的观点加以研究离不开对问题和方法的考察。当然，研究者可以将其侧重点放在对各种观点及其联系的分析上，虽然不同的文献所呈现的观点十分分散，由于这些文献所研究的问题大致相同或相近，它们的观点必然有着某种一致性，假如这些观点不具有一致性，这足以说明对这些观点加以研究的必要性，当然，各种观点也可能是对问题的不同侧面的回答，这也可以说明将这些观点相互补充，形成更具有综合性的观点的必要性。概言之，以诸文献所呈现的观点为基础去提出问题具有很强的综合性，它可以表现在问题的澄清、方法的修正、新观点的生成上，当研究者把新观点的生成作为问题提出来的时候，就相当于提出了一种新的假设。
从以上三个方面可以看出，问题的提出所依据的是问题、方法与观点各自的发展历史以及这三者之间的相互关系所形成的内在逻辑。考虑到文献提要是围绕问题、方法与结论来陈述的，假如研究者能够认真研究文献提要的话，完成问题的提出这个任务是不那么困难的。
二、研究内容的展开逻辑
在研究生的开题报告里，课题的价值、研究的目标、研究的内容、拟解决的关键问题以及课题的创新性是分布在不同的位置上的①，其实，这些要素都包含在研究内容里。
研究内容是研究问题的具体化，通过问题的提出这一环节，研究者所提出的往往是一个有一定综合性的问题，假如不能将其分解的话，也就难以使问题得到明确，就难以生成论文的提纲。论文提纲是研究内容最具体的表现，但它也是问题是否明确的重要标志。论文提纲一般以层级性标题来显示，但是其内在的逻辑乃是问题的层级结构，只有明确了问题的层级结构，才能确定论文的纲目，因此，研究者最好能够以疑问句的形态来表现其研究构思。在开题报告会上，如何表达要研究的问题、怎样解释这些问题、怎样去解决这些问题并以某种能够理解的口头语言表达出来，才是研究生要重点思考的。
拟解决的关键问题其实已在问题的提出中或多或少地得到了解决，这不仅是说，问题的提出要以一个问题作为其结果(不少开题报告都忽略了这一点，至少从形式上没有把这个问题以明显的方式呈现出来)，而且它是研究内容(即论文所涉及的全部问题的根据，具有提纲掣领的作用。只是由于这个问题过于粗糙而易与其他研究相混同，需要对其加以具体化，正是在这一具体化过程中生成了研究内容，研究内容所显现的是论文的问题域。
关键问题其实是问题域中那些能够把其他问题联系起来的“关节”，抓住了这样的问题往往能够实现问题域的突破，可见，关键问题是由问题域的内在逻辑所决定的，而非人为选择的结果，也不是研究者主观上认定的难以解决的问题或重点问题。关键问题是非常具体的，从关键问题的选择中很容易考察研究者对问题的洞察力和研究的创新性，假如关键问题与研究所涉及的论题基本一致的话，完全可以用关键问题作为整个研究的问题，这样就能避免史学家严中平所说的“大题目，小文章”的偏向。
客观地说，一篇论文不可能解决问题域里的所有问题，甚至不可能彻底解决一个问题，而只能在一定的范围、程度和水平上获得解决，而这正是陈述研究目标时所要考虑的。研究目标就是对论文所涉及的问题范围、解决该范围内的每个问题所要达到的程度和水平加以限定。换言之，每个问题都应有相应的研究目标与之对应，以一两句话就能将研究目标交代清楚是不太可能的。遗憾的是，很少有研究生能够意识到这一点。造成这种研究目标意识缺乏的原因首先在于表格式开题报告在设计上过于简单，研究目标经常置于问题的提出之后，这其实相当于启发研究生要从所提出的问题上去思考研究目标，从逻辑上说，这是没有问题的，但是，这样的设计很难把研究目标与具体的研究问题联系起来;还有一个原因在于研究生根本就不清楚研究目标是什么，不少教育专业的研究生在开题报告中将“研究目标”描述成“教育目标”了。
课题的创新性是对研究进行的价值判断，而这显然与课题的研究意义是密切相关的，但是表格式开题报告将前者放在问题的提出里，而把后者放在研究内容里。本来，从理论意义和实践意义方面对课题的研究作价值判断本身并没有多大的问题，但这种判断往往很容易泛化到没有边界的程度，因此而影响研究者对自身课题所具有的真实价值的认识。其实，对于一项研究来说，能够为人类知识提供一点新的成分、为人类实践提供一点新的启示就足以显示其意义了，在这个意义上，课题的研究意义甚至课题的研究目的与课题的创新性根本就是一回事，它们都是通过研究者所提出的新问题、新方法、新假设表现出来的。
三、研究方法的构思逻辑
与问题的提出、研究内容相比，在研究生的开题报告中，这个方面的问题更为突出。对于许多研究生来说，似乎只要把各种研究方法罗列出来，至多对这些方法加一点解释就足够了。其实，研究方法与研究的问题是直接对应的，假如没有对问题的认真分析，研究方法又从何谈起呢?虽然许多研究方法有着比较广泛的适应性，但是问题不同，解决问题的角度、路线、方式就不同，研究方法不仅仅与论文所要解决的中心问题(由问题的提出来完成)相互对应，更重要的是要与研究内容中的具体问题基本对应(不一定一个问题对应一种方法，也不是一种方法对应一个问题)，因此，正确的做法是首先对研究内容所涉及的问题加以归类，然后根据各类问题设计适合的研究方法。假如无法做到如此精细的话，至少也应该对拟解决的关键问题所需要的研究方法作出讨论。
由于研究方法与研究问题有着不可分割的关系，对研究方法的构思就不能不涉及到研究的可行性、研究实施方案甚至研究工作计划等项目，把这项工作视为系统工程一点都不过分。但是，在研究生的开题报告里，实施方案被简化为资料的收集、资料的分析、论文的写作，而可行性报告则被描述成资料充分、时间充裕、导师强大、个人努力等等，不难看出，这些描述其意义相当有限。
研究的可行性首先要求对问题难度的判断，只有那些难以解决的问题才有谈及可行性的需要，我们之所以感受到解决问题的困难，其根本原因在于还没有把问题搞清楚，还找不到问题的突破点在哪里，还缺乏解决问题所需要的成熟的主客观条件，还没有找到解决问题的有效路径，这样一来，研究的可行性应该从个人对问题的理解力、问题解决的突破口的选择、解决问题的视角和路径的选择、解决问题所需要的条件等方面去展开。特别需要指明的是，虽然研究生导师是专家，但是研究生也有自主选题的权利，假如研究生所选择的题目并不是导师的专攻领域的话，导师的强大未必就是决定研究可行性的关键因素。
研究的实施方案与工作计划在本质上并没有多大区别，它们所要回答的问题都是怎样去研究问题，因此两者都不是按照时间来展开的，而是按照问题来展开的，对所研究的问题在什么时间、以什么方式去解决作出交代，因此最好将研究内容里的问题按照由易而难的顺序加以排列，然后再分配相应的时间，一般来说，容易的问题所需要的时间比较少，而且应该先解决，然后再集中更多的时间用于解决难度比较大的问题。可见，研究时间的分配不是平均化的，更不是笼统地按照资料收集、资料分析、撰写论文来安排的。
四、结语
目前，研究生的开题报告都以表格的形式来呈现，这种形式会带来许多意想不到的问题。由于表格内含的项目被分割符号分离开来，从表面看，每个项目都有自身的独立性，这样很容易忽略各项目之间的联系，对于许多研究生来说，似乎填好了表格所要求的项目，开题报告就算完成了;再加上研究生们以日常思维来理解研究的意义、研究现状、研究目标、研究内容、研究的可行性、研究实施方案、研究工作计划等‘”，在他们看来，开题报告似乎就是他们的学习计划或工作计划，因此而失去了开题报告的科学意义；更为艰难的是虽然在开题报告会上，导师们老是抱怨学生没有问题意识、题目太大、问题不明，但是研究生自己并不知道问题出在哪里。其实，只要掌握了开题报告的内在逻辑，这些问题都可以迎刃而解。概括地说，开题报告无非就是有依据地提出问题，对问题加以分析，谋划解决问题的方法。只要研究生们坚持一切以问题为中心，就不难找到开题报告各部分之间的关系，也不难写出真正能够指导自己研究的开题报告来。
海洋生物来源药物先导化合物的研究进展【摘要】海洋生物中活性物质丰富，本篇文章对国内外近3年来从海洋生物中分离提取到的萜类化合物以及糖苷类化合物进行了归纳，并对其研究趋势进行了展望。这些新发现的萜类化合物广泛分布于海藻、珊瑚、海绵以及一些海洋真菌等海洋生物中，主要以单萜、倍半萜、二萜、三萜结构型式存在；而糖苷类化合物在海藻、海绵、海参、海星等海洋生物中发现大部分以糖苷脂、甾体糖苷、萜类糖苷型式存在。【关键词】海洋生物萜类化合物糖苷类生物活性【Abstract】.【Keywords】Marineorganism;terpenoid;glycoside;bioactivity海洋是生命之源，由于海洋环境的特殊性，具有高压、低营养、低温（特别是深海）、无光照以及局部高温、高盐等生命极限环境，海洋生物适应了海洋独特的生活环境，必然造就了海洋生物具有独特的代谢途径和遗传背景，必定也会有新的、在许多陆地生物中未曾发现过的新结构类型和特殊生物活性的化合物。萜类物质是一类天然的烃类物质，其分子中具有异戊二烯(C5H8)的基本单位。故凡由异戊二烯衍生的化合物，其分子式符合(C5H8)n通式的均称萜类化合物(terpenoids)或异戊二烯类化合物（isopenoids）。但有些情况下，在分子合成过程中由于正碳离子引起的甲基迁移或碳架重排以及烷基化、降解等原因，分子的某一片断会不完全遵照异戊二烯规律产生出一些变形碳架，它们仍属于萜类化合物。海洋生物中萜类化合物主要以单萜、倍半萜、二萜、二倍半萜为主，三萜和四萜种类和数量都较少，且大部分以糖苷形式存在。萜类化合物是海洋生物活性物质的重要组成部分，广泛分布于海藻、珊瑚、海绵、软体动物等海洋生物中，具有细胞毒性、抗肿瘤活性、杀菌止痛等活性作用。糖苷的分类有多种方法，按照在生物体内是原生的还是次生的可将其分为原生糖苷和次生糖苷（从原生糖苷中脱掉一个以上的苷称为次生苷或次级苷）；按照糖苷中含有的单糖基的个数可将糖苷分为单糖苷、双糖苷、三糖苷等；按照糖苷的某些特殊化学性质或生理活性可将糖苷分为皂苷、强心苷等；按照苷元化学结构类型可分为黄酮糖苷、蒽醌糖苷、生物碱糖苷、三萜糖苷等，海洋类的糖苷大部分是按照此特点分类的，主要包括鞘脂类糖苷、甾体糖苷、萜类糖苷和大环内酯糖苷等，在很多海洋生物如海藻、珊瑚、海参、海绵等中均发现有糖苷类化合物存在。已有的研究表明海洋糖苷类成分大都具有抗肿瘤、抗病毒、抗炎、抗菌、增强免疫力等生物活性。抗白血病和艾氏癌药物阿糖胞苷Ara-C(D-arabinosylcytosine)1、抗病毒药物的Ara-A2以及Ara-C的N4-C16-19饱和脂肪酰基化衍生物3是海洋糖苷类药物成功开发的典范〔1〕。本篇文章对国内外自2005年来从海洋生物中分离提取到的萜类化合物以及糖苷类化合物进行了总结。1萜类化合物单萜2005年等人〔2〕对从红藻Plo
放线菌作为生物活性物质的主要产生菌早已成为人们研究的焦点。然而随着放线菌分离和分类研究的不断深入，大量常见菌株已被反复研究，因此从中发现新化合物的几率逐渐降低。由于新物种具有产生新的生物活性物质的潜力，人们开始使用新的方法在尽可能广泛的范围内寻找新的物种，特别是那些用常规方法很少分离到的稀有放线菌 (rare actinornycetes)…。2O世纪 50年代以来人们从稀有放线菌中发现了大量有价值的抗生素，如小单孢菌产生的庆大霉素，诺卡氏菌产生的利福霉素，马杜拉放线菌产生的马杜拉霉素和洋红霉素，糖多孢菌产生的红霉素，游动放线菌产生的游壁菌素，拟无枝酸菌产生的万古霉素等等。这些事实表明稀有放线菌也具有产生新抗生素的巨大潜力ll,21。分离这些稀有放线菌，不仅可以减少对产生已知生物活性物质菌株的重复分离，还可扩展放线菌次生代谢产物的化学多样性。 由于稀有放线菌对生长环境的特殊要求，难以用常规手段分离获得 ，所以要根椐不同类群的特性设计针对这些特定种属的选择性分离方法。近年来，国内外学者在对国家自然科学基金资助项目,云南省自然科学基金重点项目.稀有放线菌选择性分离的研究方面取得了较大进展,同时也用这些选择性分离方法分离到不少稀有放线菌，并显著提高了具有医用前景的生物活性物质的发现机率。此外，这些分离方法的使用也有助于同答这样一个问题 ：稀有放线菌很少被分离到是因为它们在环境中数量稀少，还是仅仅因为它们难以被分离和培养。本文就以上情况介绍了近年来发展起来的几种高选择性分离稀有放线菌的有效方法。 1 胞外多糖胶 (gellan gum)和动孢溶液 (flooding solution)相结合的分离方法 Gellan gum是由Pseudomonas elodea产生的胞外多糖，过去常用来作为植物组织培养的凝固剂，能促进植物生长。Suzuki等人 首先将其用于稀有放线菌的分离，并发现胞外多糖胶能促进很多放线菌的气生菌丝生长和孢子形成.很多物质都能增加放线菌游动孢子的游动性，如蛋[j胨，牛肉膏，含土壤浸汁的磷酸盐缓冲液，脱脂牛奶等。各种动孢溶液对不同的菌影响不同，Suzuki等在使用脱脂牛奶作为动孢溶液时发现不同的菌对脱脂牛奶的浓度、pH、处理时的温度、离心时的速度及时间有不同的要求。另外，使用高压灭菌后的脱脂牛奶比使用未灭菌的脱脂牛奶所获得的游动孢子数少，这可能因刺激孢子游动性的物质对高温高压敏感所致l4]。 1．1 选择性分离鱼孢菌 Suzuki等曾以鱼孢菌作为他们筛选生物活性物质的目标菌，对采自28个国家的466份土样进行了分离，从 2l份土样中分离到了鱼孢菌，发现鱼孢菌广泛分布于亚洲，欧洲，大洋洲，南美洲和北美洲。他们所使用的高选择性分离方法是l4j：200mg土样自然风干一80℃干热处理60min冷却，加 2mL 0．1％脱脂牛奶 (溶于 lOmmol／[ MOPS，pH 8．0)-+27cC温育 60rain,不时摇动以释放游动孢子一1，000×g室温离心 l0min一取上清液梯度稀释后涂布 HVG平板 (0．05％腐殖酸，2mmol／L CaCI ，0．7％胞外多糖胶)，27℃培养 21～28d。HVG培养基是在 HVA培养基的基础上改进的，与 HVA不同的是HVG含有 CaC1，并以胞外多糖胶代替琼脂。加入适量的 CaC1 不仅使胞外多糖胶得以凝固，而且比加入 MgSO 和 MgCI 更有利于某些放线菌的气生菌丝生长和孢子形成 。1．2 选择性分离游动单孢菌 玫瑰色游动单孢菌能产生孢囊霉素，这种含硫的抗生素能通过抑制芽孢杆菌等革兰氏阳性菌的蛋白合成而影响其生K。对游动单孢菌的高选择性分离程序是_6j：500mg土样 自然风下一l00℃干热处理60min 冷却，加入 2mL灭菌的 0．1％脱脂牛奶 (溶于 5mmol／L CHES，pH 9．0) 32℃温育90rain，不时摇动以释放游动孢子一1，000×g，室温离心 l0min一再于32 温育60rain一取上清液梯度稀释后涂布于 HSG平板 (含三甲氧苄二氨嘧啶 20mg／L，萘啶酸 lOmg／L，依诺沙星 20rng／L，氨苄青霉素钠 2mg／L，放线酬 50mg／L，制霉菌素50 mg／L)，35℃培养 l4～21d。用这种方法对 1，200份土样进行分离时，从 137份土样中分离到246株游动单孢菌。并发现委内瑞拉游动单孢菌广泛存在于从热带到温带的土壤中，但在土壤中的密度很低。HSG培养基 组成：0．05％ 腐质 酸，3mmol／L CaC12，0．000l％ FeSO4•7H2 O，0．0001％ MnC12‘4H2O，0．0001％ ZnSO4•7H2O，0．0001％ NiSO4•6H2O，5mmol／L CHES，0．7％胞外多糖胶 ，pH9．0。 1．3 选择性分离游动双孢菌 对游动双孢菌 (Planobispora)的高选择性分离程序是 ：500mg土样 自然风干---~90％干热处理 60min一冷却，加人 2mL 0．1％脱脂牛奶 ，0．01％Tween80，lOOmg／L三甲氧苄二氨嘧啶，lOOmg／L萘啶酸 (溶于5mmol／I CHES,pH 9．0)---~35。【=温育60min，不时摇动以释放游动孢子一1，000×g，室温离心 l0min一 取上清液梯度稀释后涂布 HSG平板 (含三甲氧苄二氨嘧啶 50mg／L，萘啶酸 50mg／L，依诺沙星20mg／L，氨苄青霉素钠 2m L，链霉素 lm L，放线酮 50mg／L，制霉菌素 50 me,／I ，pH9．0)，32oC培养 l4～21d。利用这种方法，对采 自世界各地的 1，467份土样进行的分离中，从5l份土样中分离到 l】9株游动双孢菌，88％的游动双孢菌分离于pH7．0～7．9的土样,并发现游动双孢菌只出现在热带和亚热带的土样中。 2 再水化一离心法 (rehydration-centrifugation) 具游动孢子的放线菌能在干燥时形成孢子或孢子囊，而当再次湿润时释放出活跃的孢子。游动孢子会受到某些物质的吸引，停留下来再次繁殖。对游动孢子的分离方法很多，如使用头发或花粉为诱饵的捕集法；以毛细管来进行的化学趋化法等。这些方法虽然也能分离到某些稀有放线菌，但要么费时费力，要么对设备和操作人员有特殊要求。最近，Hayakawa等人在 Makkar和 Cross的再水化法 基础． 发明了再水化一离心法_9 J，分离稀有放线菌，效果显著。操作具体程序是：取 500mg风干磨细土壤于锥形瓶中一用 50mL含 10％土壤提取液的10mmol／I 磷酸盐缓冲液轻轻润洗一铝箔覆盖，30。【=温育 90min_÷取 8mL润洗液，1，500×g，室温离心20rnjn一静置 30min~0．2mL涂布 HV琼脂 (含三甲氧苄二氨嘧啶20mg／L，萘啶酸 10mg／L，放线酮 50mg／L)。分离平板的总菌落数随土样而不同，有 37％ ～86％是具游动孢子的稀有放线菌，其中以游动放线菌和指孢囊菌为主。在不同 样品中也能分离到放线动孢菌，短链游动菌和动孢囊菌。上述方法经 Otoguro等人I m 改进后可高选择性分离束丝放线菌 (Actinosynnema)。风干搅碎的样品置研钵中按 10：1(w／w)的量加人 CaCO 粉末，混匀一铺于玻璃纤维膜上，加无菌水使样品湿度达 20％ (w／w)一26。【=培养 l4d_÷样品室温风干至恒重，置于平皿，加 50mL含 10％土壤提取液的 10mmoL／L磷酸盐缓冲液 (pH7．0)一 30。【=浸泡 2h一取 8mI 上述溶液 1，500×g，室温离心20rnjn一静置 30min一取上清涂布 HV琼脂 (含弗氏霉素40mg／L，卡那霉素 40mg／L，三甲氧苄二氨嘧啶 20mg／L，萘啶酸 10mg／L)，30。【=培养 2～3周。Otoguro等人用上述方法对 39份样品进行分离，其中l7份样品分离到束丝放线菌，其检出率占总菌落数的4％ 一86％。对任意选取的29株束丝放线菌进行的抗菌试验发现其中28株具有抗菌活性。HVA培养基 (1L)组成：腐殖酸 0．1g，CaCO3 0．02g，Na2HPO4 0．5g，MgSO4- 7H20 0．5g，KC1 1．7g，FeSO4•7H20 0．01g，核黄素0．5mg，硫胺素0．5mg，维生素B60．5mg，烟酸 0．5mg，肌醇 0．5mg，泛 酸 0．5mg，生物 素 0．25mg，对一氨基苯 甲酸0．5mg，琼脂 18g，pH7．2。 3 极高频辐射法 (extremely high frequency radiation) 应用极高频辐射法 (EHF)分离稀有放线菌的机理在于 EHF能抑制一些原核生物，藻类和单细胞微生物的生长，促进某些异养和光合微生物的生长及休眠菌株的复苏。所以采用极高频辐射 EHF法可以选择性地分离那些能耐受 EHF甚至受到 EHF激活的菌株。 具体过程是… ：取 100mg磨碎混匀的土样悬浮于 lOmL无菌水中，用频率为 1kHz的 EHF照射盛有土壤悬液的试管或平皿底部 (所使用的 EHF无热效应)。处理方式有两种：一种是以5．6mm或 7．1mm单一波长处理；另一种足以3．8mm～5．8mm或 8mm ～11．5mm波长连续处理。处理后州种土样都涂布于 Gauze 2琼脂 (含萘啶酸 10 ms／L，制霉菌素 50 ms／L)。结果显示，以单一波长5．6mm或7．I mm处理不能选择性分离到稀有放线菌。而以 3．8mm～5．8mm和8ram～11．5mm波长连续处理后，稀有放线菌的比例从原来的4．1％ 分别升至8．4％和30．6％。其中马杜拉菌，小四孢菌和野野村荫的绝对数量大为提高， 同时还能分离到那些普通方法无法分离到的菌株，如拟无枝酸芮和拟诺 氏菌。并日,分离物中具抗菌活性菌株分别增加了 13％和20％。在此基础上 Li等人 将极高频辐射法与连续分析相结合，能分离到单独使用这两种方法所不能分离到的稀有放线菌，如珊瑚状放线菌 、原小孢菌、游动放线菌和拟孢囊菌，同时，具有抗菌活性的菌株数量增加了10％ ～20％。具体程序是：加无菌水使土样湿度达 30％ (w／w)一撒在普通琼脂培养基上一+第0，7，14，30，45d分别取样进行 4．6ram～5．8ram和 8mm～1 1．5mm两种波段的 EHF’处理(在取样前 样始终保持30％的湿度)_÷涂 于土壤浸汁琼脂即可 (含 1mL／L维生素 溶液：10rag泛酸钙，10mg尼克酸，1mg硫胺素以及微晕的生物素共同溶于 20mL水；10mg／L荣啶酸；50mg／L制霉菌素)。 4 噬菌体定向分离法 (bacteriophage) 传统的分离方法由于对土样的微生物多样性等基本情况了解较少，加之放线菌生长缓慢，于是可能浪费数月的时问去分离土样中并不存在的菌株，而当目标菌又是稀有放线菌时更是如此。基于这 •原因，Esther等人… 设计了一种以细菌噬菌体作为指示物对环境样品中的野野村菌 (Nonomuria)进行快速筛选和分离的新方法。首先确定土样中是否含有能感染目标菌的噬菌体。具体步骤如下：3g土样悬浮于 100mL PYCa液体中一28℃，250r／rain，培养 24h一培养液3，O00g离心20min一上清液经0．45 m滤膜过滤一取5 T 滤液接种于野野村菌菌苔上一28℃培养48h以上一将含有噬菌斑的琼脂切下，用5mL PYCa洗涤一洗液经0．45Ixm滤膜过滤一点接滤液于长有野野村茼菌苔的琼脂上以确定噬菌体是台可以再牛。对能产生噬菌斑的土样，采用常规的选择性分离方法对 目标菌进行分离。结果， 放线菌l1l 20％为野野村菌。可见其并不是我们以前所认为的那样 “稀有”。同时，我们也可以将适量的只对一种或儿种链霉菌有裂解作用的噬荫体加入土样中来减少非目标菌的数 量。 5 蔗糖梯度离心法 (sucrose-gradient centrifugation) 由于土壤中营养贫乏，放线菌大部分以孢子形式存在，网此可以利用孢子的不同特性对不同的放线菌进行选择性分离。Karwowski 等人曾根据放线菌孢子浮力密度的差异，利用氯化铯密度梯度超速离心有效地从土壤中分离小单孢菌。最近，Yamamura 等人m 根据这一特性，运用蔗糖梯度离心选择性地分离诺卡氏菌，也取得了成功。其方法是：在离心管中从上到下设置各 lmL的 10％、20％、30％、40％ 、50％ (w／v)的蔗糖梯度。将用无菌水稀释为 10。土壤悬液 1mL加入到离心管上层，240×g， 室温离心 30rain。离心后把每层蔗糖取出稀释后涂布 0．2mL于 HV琼脂 (含萘啶酸10mg／L，放线酮 50mg／L，金霉素 10mg／L)。结果，大部分诺卡氏菌 (Nocardia)的孢子出现在 20％的蔗糖层中，小单孢菌可以在20％和 30％蔗糖层发现，但数量较少。游动放线菌等放线菌的游动丝状孢子只能在 10％蔗糖层出现。用这种方法对 l4份土样进行分离时，诺卡氏菌类群的检出率占总菌落数的5％ ～89％，而且 7l％的菌有抗菌活性。 6 结语 不断涌现出的新型稀有放线菌分离方法将成为天然产物筛选中的有用工具 ，也使我们了解到稀有放线菌事实上广泛存在于土壤等环境中，只是由于分离方法和手段的不完善才使得它们较少获得。当然，除了使用特殊方法对稀有放线菌进行分离外，扩大分离范围也是获取稀有放线菌的一个重要手段。比如作者所在单位从 80年代初开始温泉高温菌的研究，发现大量新的高温微生物资源。1991年，该所姜成林和徐丽华建 立了双孢放线菌新属 (Actinobispora)。近几年，该所还从新疆 、青海样品中发现嗜盐放线菌新属一个、嗜冷链霉菌新种一个、嗜盐放线菌新种 6个、嗜碱放线菌新种 4个。这些材料为我们的天然产物筛选奠定了坚实的基础。在寻找下一代化学治疗剂和新的生物活性物质的过程中，放线菌特别足稀有放线菌仍然是重要的目标菌。目前，已有超过 120种抗生素由游动放线菌产生，250多种抗生素是由马杜拉放线菌产生，到 1998年共发现有 32种生物活性物质来源于链孢囊菌，这些化合物都具有广泛的化学多样性，使得这些菌成为工业开发的重点对象。
分离放线菌用高氏1号培养基加10%的酚数滴以抑制细菌的生长。将高氏1号培养基熔化，冷却至50℃左右时，加入10%的酚数滴，然后到平板，并标记稀释倍数。将10克土样倒入盛有玻璃珠和90毫升无菌水的三角瓶中，震荡30分钟，制成悬浊液。再取一支1毫升无菌移液管，吸取毫升土悬液注入盛有毫升无菌水的试管中取另一支1毫升无菌移液管吹吸三次，吸取毫升注入另一盛有毫升无菌水的试管中，以此类推，稀释四次。接下来，取一支1毫升无菌移液管吸取不同浓度的悬液各毫升于相应的平板上，用无菌涂棒涂匀。将培养皿倒置于28℃恒温箱中培养3~4天即可转管 。