都很熟悉了,不就是WB吗?每天都做啊,白底黑带,但是最近经常阅读SCI文献(特别是高分的)小伙伴可能会发现,近两年发表很多高影响因子的文献的WB结果图发生了大变样:白底变成了黑底,条带从黑色变成了:红,橙,黄,绿,蓝等各种颜色了(如下),条带亮度,对比度都好了很多了,不同蛋白还能呈现出不同颜色的条带,很多同学可能会问,这是什么黑科技?是用分析软件设置的颜色吗?还是PS软件P出来的了?其实都不是,这是最近比较火的免疫印迹黑科技——荧光WB技术,这不,很多同学还在实验室中苦逼的跑着WB,“为啥背景那么深?为啥没有目的条带?为啥分子量不对?为什么对比度这么低?哀怨声此起彼伏的时候,殊不知,免疫印迹领域已经发生着一场由“黑白”到“彩色”的光影革命。荧光WB产生背景:尽管大多数生命科学研究者采用化学发光底物进行检测,但由于对多重分析的需求不断增加,现在越来越多的国外科学家开始使用荧光检测法。目前国内实验室使用较多的仍是化学发光,而SCI出现高背景(图1),不仅影响图片的美观,还会影响实验结果的判断。当WB出现高背景时,小艾发现主要是由于WB实验流程中的转膜、封闭、抗体孵育和检测等具体实验细节问题引起的,接下来小艾将跟大家详细介绍一下出现高背景现象的原因及解决方案。