lcms方法开发毕业论文

中药是中华民族的伟大瑰宝，有着丰富的资源和悠久的传承历史，历经了千百年的临床实践，虽然积累了丰富的临床经验，为中华民族的健康事业作出巨大的贡献。但是中药的研发仍然充满了挑战，如药材来源变异大、有效成分不明、质量控制困难、缺乏清晰准确的安全性评价、药理作用机制不明等等。因此，至今还没有一种中药通过美国FDA的新药审批；而且，欧盟已经颁发了(欧盟传统药品法案)，也直接影响了中药的出口。为了扭转目前这种尴尬的境地，实现真正与国际接轨。发展祖国中医药事业，必须对中药的安全性、作用机理及其药理活性成分有明确的认识，并深入剖析。近十多年来。在西方药物发现和开发阶段利用体外和计算机辅助研究技术进行化合物的吸收、分布、代谢、排泄和毒性(ADME／T)特性研究，大大提高了新药研发的成功率【1]。所以借鉴西方新药研发的成功经验，将ADME／T评价体系引入到中药的研究中。特别是药物代谢研究，不仅有利于揭示中药的真正有效成分和作用机理，而且有利于研究中药复方的配伍规律等。本文将综述药物代谢(Dmg Metabolism)在中药研究中的应用概况及其进展。1 药物的代谢药物在机体内的消除方式主要有两种：一种是药物不经任何代谢而直接以原型随粪便和尿液排出体外；另一种是部分药物在体内经代谢后，再以原型和代谢物的形式随粪便和尿液排出体外。药物的代谢(drug metabolism)也称为药物生物转化(biotransformation)，是药物从体内消除的主要方式之一【2J。药物在体内的代谢主要分为两个步骤【3j，第一步称为I相代谢反应。药物在I相反应中被氧化、还原或水解，催化I相代谢反应的酶主要为肝微粒体中的细胞色素P450酶。第二步称为Ⅱ相结合反应。药物在Ⅱ相结合反应中与一些内源性的物质(如葡萄糖醛酸、硫酸、甘氨酸、谷胱甘肽等)结合或经甲基化、乙酰化后排出体外。催化Ⅱ相结合反应的酶主要有葡萄糖醛酸转移酶、谷胱甘肽一s一转移酶、磺基转移酶和乙酰基转移酶等【4 】。其中P450酶在众多外来化合物的生物转化过程中扮演了重要角色，被P450酶催化的底物相当广泛，90％以上药物的氧化是由P450酶催化的。是人体内最重要的代谢酶，其催化的I相代谢反应是化合物在体内代谢的关键步骤。因为这一步反应通常是药物从体内清除的限速步骤，可影响化合物的半衰期、清除率等动力学特性，且P450酶活性常常随遗传因素、年龄、疾病状态或其他药物相互作用的影响而发生改变L7J。一般来说，药物在体内经过代谢转化后其药理活性发生了较为复杂的变化，大致分为四种情况：第一，代谢物活性或毒性降低；第二，形成活性代谢物；第三，形成毒性代谢物；第四，前药的代谢激活。总之，药物代谢转化的最终结果是使药物极性增加。有利于药物的排出体外【2．3】。2 药物代谢研究的方法药物代谢的研究方法分为体内法和体外法，两者各有优缺点，所以通常两者相结合进行药物的评价研究。体外研究可以通过高通量筛选对大量化合物进行筛选，对大量候选化合物的药动学特性作出初步的评价。缩小体内筛选的范围，一般应用于药物发现和开发的初期。体内代谢研究是体外研究的良好的衔接点，因为有时候应用体外模型预测体内参数不理想，必须借助体内筛选。当然在药物开发的后期，也要进行动物和人体体内药物代谢研究，总之，两者相辅相成【3J。2．1 体内法药物的体内代谢研究主要是在整体水平上进行的。给予一定剂量的药物后，于不同的时间段分别收集胆汁、尿液和粪便，然后用高效液相色谱法(HPLC)或液质联用技术(LC-MS／MS)等方法在胆汁、尿液和粪便样品中寻找药物的代谢物(包括I相和Ⅱ相代谢物)。并对代谢产物进行初步的分析和鉴定，最终确定药物在体内的代谢途径。2．2 体外法肝脏是药物代谢的主要和重要器官之一，是药物生物转化的主要场所，因为富含有丰富的肝药酶，所以大部分的药物在肝脏被代谢。故药物的体外代谢模型多以肝脏为基础。常见的有：肝微粒体体外温孵法、肝细胞体外温孵法、离体肝灌流法、肝切片法和重组I)450酶体外温孵法等。药物体外代谢研究中应用到的方法除了高效液相色谱法(HPLC)或液质联用技术(LCMS／Ms)，还有分子生物学的方法，如we．ston bloting等。体外法因有其独特的快速简便和节约成本等优势和特点。所以在药物代谢研究中得到了广泛的应用。除了肝脏以外，口服药物还必须经过胃肠道消化吸收后才能进入血液发挥疗效(如人参皂苷的体内代谢[8 )，因此药物在胃肠内菌群的代谢越来越受到人们的重视，而且已经有人把药物在肠内菌代谢的研究引入到药物代谢的研究范畴。其常见的研究方法也有整体肠内菌代谢实验和离体实验两种，前者是对人或动物服药后的消化道各部分及其内容物进行分析，后者有粪便温孵法和消化道内容物温孵法，随着微生物技术的发展，也可用肠内菌纯菌株、混合菌或粗酶进行代谢研究。3 药物代谢在中药研究中的应用3．1 中药代谢产物谱的定性研究要了解中药在体内的代谢转化规律，首先应该明白其在体内转化成什么产物，而且这些产物有可能是活性增强的产物或活性减弱的产物。也有可能是毒性成分。因此对代谢产物谱的研究显得特别重要，它不仅可以阐明其在体内的代谢途径和机制，也可以进行代谢产物的有效性和安全性评价。国内对这一方面的研究报道较多，一般是将中药代谢后的各种生物样品采用各种手段分离后进行分析鉴定。如阿基业等人给予大鼠一定剂量的盐酸关附甲素后，在不同时间间隔收集大鼠尿液，应用液质联用法进行分析鉴定。结果表明关附甲素在大鼠体内可以转化成为关附壬索、关附醇胺、关附甲素葡萄糖醛酸和硫酸结合物、关附壬索葡萄糖醛酸和硫酸结合物，经过生物转化，代谢产物的极性增加，药效下降【9j。李晓海等人采用大鼠肝微粒体体外温孵法和大鼠体内法对左旋一叶蔌碱的代谢转化进行了研究，代谢产物分别鉴定为6一位羟基、6．位羰基及5一位a及B羟基取代的左旋一叶蔌碱，还证实了体内6一位羟基代谢物进一步形成了Ⅱ相结合物。最终基本阐明左旋一叶蔌碱在大鼠体内外代谢转化的途径Cio】。徐文等人将待测淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ与新鲜配制的大鼠肠内溶物悬液在37℃孵化，采用高效液相色谱同时测定孵化前后溶液中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的浓度，结果表明淫羊藿苷被肠道菌群迅速代谢成淫羊藿次苷Ⅱ，而淫羊藿次苷Ⅱ不被代谢[11]。3．2 中药代谢酶谱的研究鉴定参与中药代谢的代谢酶种类及其贡献，对中药现代化的研究同样重要。因为遗传因索和环境因素造成人体对药物代谢的存在差异，这种差异表现为代谢酶的表达差异，其根本原因是代谢酶的基因多态性决定的，依此可将人群分为强、中和弱代谢型等表型C12J。强代谢者和弱代谢者之间药代动力学性质存在显著差异[13J，因此给予不同代谢表型人群相同的剂量，药物产生的疗效会完全不一样。甚至会中毒现象的发生【l 。所以鉴定参与中药代谢的代谢酶种类及其贡献有利于指导临床合理用药，保证用药安全有效。此外中药代谢酶谱的研究还有利于研究中药的配伍规律、中药毒性研究等。高凯等人采用大鼠肝微粒体体外温孵法和高效液相色谱技术，通过运用不同的CYP同工酶选择性抑制剂和底物进行抑制实验，初步选出介导甘草次酸单羟化所涉及的CYP同工酶为CYP 3A1／2和CYP 2C9／10 cis}，研究结果提示当甘草次酸在CYP 3A1／2和CYP 2C9／lO弱表达的代谢者人群中使用时，应该注意剂量的控制，否则可能会出现中药的安全性问题。3．3 中药对代谢酶的诱导或抑制以及药物间相互作用研究中药的化学成分非常复杂。许多中药有效成分对CYP450酶表现出明显的诱导或抑制。如中药白芷中富含呋哺香豆素化合物，研究发现白芷提取物可以抑制大鼠肝微粒体CYP 3A、CYP 2C和CYP 2D1的活性，所以会抑制甲苯磺丁脲、地西泮、硝苯地平等在体内的代谢[16]。中药黄芩的主要有效成分黄芩苷。对 1Al、CYP 2B1和CYP 2Cll这3种同工酶有明显的诱导作用【l 。中药在lJ笛床上常复方用药或与化合物合并用药。这就有可能发生药物间的相互作用，引起药效、药动学、毒性等的变化。药物间的相互作用主要表现为药物代谢酶的诱导或抑制。如人参的有效成分人参皂苷Rd，它对CYP3A4有抑制作用；而人参再造丸、通心络等中成药组方中又含有人参，因此如果患者在服用通心络、人参再造丸等中成药时，同时服用经CYP3A4代谢的化学药硝苯地平、胺碘酮等，就可能会导致低血压等不良反应[18]。高月等人考察中药丹参、苦参、人参及其与藜芦合用对大鼠肝P450酶活力及mRNA表达的影响，结果显示这3种中药与藜芦配伍合用后均不同程度的抑制了P450酶含量和主要的药物代谢酶CYP3A及CYP2E1的酶活力。提示可能正是由于3种中药与藜芦配伍后对药物代谢酶的抑制作用减缓了剧毒中药藜芦中相关物质的代谢．致毒性增加，产生了不期望的中药毒性【l 。4 展望随着科学技术的发展，中药代谢的研究除了深入研究单一成分的代谢外。首先应加强有效部位、单味药材和中药复方的代谢研究，这样才能更准确更全面的阐明中药的药效作用机制；其次，应该深入开展中药基于代谢酶的配伍规律的研究，阐明中药复方中各单味药材之间的相互关系以及中药复方的解毒机制。总之，随着中药代谢的深入研究，以及其他学科和技术的合作。必将揭示中药的代谢规律、中药的配伍规律和解毒机制等，为中药新药的研制、创新药物的发现以及指导临床用药作出贡献。

Lcms分析方法建立的过程，就是按照正常的逻辑性分析步骤操作。逻辑性的操作就是要从最基础的分析步骤，然后按照逻辑思维加大难度。

四川大学遗传学硕士点于1981年建立，1993年批准建立博士点。经过多年来的不断发展壮大，现已形成明确和稳定的研究方向，形成了各自的特色和优势，成为西部地区一个重要的遗传学研究基地。本学科点现有博士生导师3人（张义正教授、刘世贵教授、杨志荣教授），招收硕博连读研究生；硕士生导师10余人。“分子遗传学及基因工程”研究方向以张义正教授作为学术带头人，在二十世纪九十年代初就开始从事基因工程研究，一个主要研究内容是利用基因工程技术克隆和表达一些有重要理论意义或经济价值的基因。该方向在木质素酶基因家族的研究中，取得了具有世界领先水平的研究成果；对于微生物蛋白酶基因的克隆与表达研究则具有重要的开发应用价值；此外，在转基因作物的建立、中医及中药分子生物学理论的研究、珍稀动物重要基因的克隆等方面也都开展了大量的研究工作。“现代遗传与生物工程”研究方向以刘世贵教授作为学术带头人，研究工作主要是应用现代生物技术，开发和保护利用我国西部丰富的微生物资源、动植物资源研制高技术生物工程产品，应用于草地病虫鼠害防治、生产绿色有机食品和医药行业。“植物遗传学”是本学科的一个传统的特色研究方向，以李旭峰教授和赵云教授为学术带头人，主要从在植物细胞、分子遗传学及等生物技术研究。首次利用我国特有野生资源蓝花子，通过细胞工程方法，获得了油菜萝卜胞质雄性不育系的恢复系，使我国能在不久的将来利用该系统育成杂交油菜新品种。抗除草剂转基因油菜恢复系（PolCMS）的育成，为克服现在生产上使用的PolCMS杂交F1代种子不纯的问题，提供了全新的思路和绝妙的方法。还对西南地区特色的野生植物资源遗传多样性进行系统研究。“微生物遗传学”研究方向以杨志荣教授作为学术带头人，主要研究工作是利用遗传学研究技术进行药用微生物的基础及应用研究，基因工程菌构建草原灾害生物学研究、草原克生生物学研究，在该方向取得了多项国家和部省级科技进步奖。“细胞遗传学”研究方向以归国的年轻骨干教师作为学术带头人，主要从事干细胞研究。此外为顺应现代遗传学发展的需求，本学科新增了“分子进化”和“生物信息学”研究方向。遗传学专业是历年来考生们踊跃报考的专业之一，研究生在三年的学习过程中，具有良好的科研条件和导师的精心指导，得到了很好的理论知识的学习和实验技能的训练。毕业研究生可以从事科研、教学、医药、环境、检疫等相关工作。 园林植物与观赏园艺是农学中重要的学科领域之一，四川大学园林植物与观赏园艺学科点具有较强的科学研究能力和研究条件，长期从事园林植物细胞工程、园林植物遗传育种、园林植物资源与管理、园林植物保护、园林设计与工程园林工程施工与管理等研究领域，获得了多项具有较高学术水平和较大应用价值的研究成果。本学科点注重园林植物与观赏园艺和生物科学、生态学、生物技术、园林、城市规划等相关专业的交叉渗透，充分利用四川大学在这些学科的综合优势，形成了整体实力较强、学术水平较高、结构合理的学术队伍。专业能力要求：掌握园林植物与观赏园艺学科坚实的理论基础和系统知识，了解从事该专业研究的国内外发展动态，具有从事园林植物与观赏园艺科研、教学、管理和独立承担技术工作的能力，能熟练掌握一门外国语，具有较宽的知识面、较强的适应性及扎实、熟练的专业技能。具有一定的美学修养。园林设计与工程研究方向要求全面扎实地掌握基本理论、规划设计的手法及先进的技术手段和绘图、制作模型的技能，并在某一方面进行深入的学习和研究。具有与各类规划设计人员合作进行城市规划、城市绿地系统规划、风景名胜区规划、城市园林及城市景观设计与单项设计等多方面的能力。研究方向：⒈园林植物⒉园林保护⒊园林生物技术⒋园林设计与工程⒌园林资源与管理 细胞生物学专业硕士点从1979年开始面向全国招生，是四川省干细胞重点实验室基地，本校“211工程”干细胞重点实验室的一部分。本专业的师资力量雄厚，现有教授4名，副教授6名，本专业具有生物化学、分子生物学、细胞生物学、遗传学、动物生物学、动物生理学等齐全的教学和科研仪器设备，编有《细胞生物学》等国家重点教材。毕业的研究生在国内外均有较好的发展。细胞生物学专业目前的主要研究方向包括：细胞的分子生物学、干细胞生物学、衰老的细胞分子机制、细胞工程与体细胞克隆。 生物化学与分子生物学硕士点于1997年由生物化学硕士点（1985年建点）和分子生物学硕士点（1994年建点）合并，经过多年来的不断发展，现已具有七个明确的研究方向：酶学、蛋白质化学与蛋白质工程、蛋白组学、糖蛋白结构与功能、分析生物化学、基因分子生物学。自1981年以来，本学科点已先后招生128人次，培养毕业并取得硕士学位60余人，现在读57人。硕士毕业生中近2/3出国留学，其余在国内高校从事教学、科学院等单位从事科研、医药公司从事科研和开发工作。本学科点有一支较强的学术队伍，其中教授5人，副教授10人，讲师10人，其职称分布和年龄结构合理。本学科点已建立起良好的实验和课程体系，现有专业基础课和方向学位课：高级细胞生物学、分子生物学、分子克隆、分子生物学实验、酶的结构与功能、蛋白质结构与功能、基因工程原理、代谢及调控、数据及图象处理、现代仪器分析、细胞生物学技术、文献评读等，其中分子克隆和基因工程原理为博士生课程。此外，除了充分利用现有的实验室：如分子生物学实验室、蛋白质化学实验室、核酸化学实验室、细胞生物学实验室外，还可利用教育部专业实验室的设备，以及最近教育部世界银行贷款80万美圆所购仪器。现已建成省级重点实验室－分子生物学及生物技术实验室，面向四川省开展基因工程研究和人才培训。95年以来本学科点先后承担了国家自然科学基金、国家攻关项目、教育部和四川省以及成都市等部门的科研项目。发表研究论文近200篇，获国家级奖励2项，省部级奖励4项。并取得多项科研成果，为国家培养了一批高层次人才。这些研究成果不仅具有重要的学术价值，而且有的成果已产生了很好的经济效益。现在研的国家和部省级研究课题共20项。 本学位点于1995年批准设立。依托四川大学生命科学学院为国家培养农业、生物及相关领域高层次专门人材。本学科从事无公害生物农药及生物防治领域的研究，主要研究方向包括：（1）微生物及微生物农药；（2）天然产物化学及植物农药；（3）环境友好性农药。研究手段利用了生物种间“相生相克”的原理，从自然环境中发掘克生生物因子对有害生物进行防治，以及呼性化合物的合成，进行友好农药的研制，现已形成了灾害生物学及克生生物学，生物农药和绿色农药创制，制剂工业化生产，田间生物防治技术及区域化综合治理的完整研究体系。本学科点现有教职工23人，其中教授5人，博士生导师3人，副教授7人，具有博士学位教师11人，形成了一支老、中、青结合，以中青年科技人员为主体的科技队伍，两次被国家部委授予“先进科研工作集体”称号。近年来，本学科点先后承担各级重大科研项目50余项，取得了一大批重大科技成果，获国家及部、省级科技奖20余项，发表论文300余篇，研究开发新型生物农药6种，其中两种已获得国家新农药登记证。本学位点招生以来，已培养毕业硕士生12名，现在读硕士生15人。学成毕业后可从事生物农药、绿色农药、医药、微生物学、植物化学等领域的研究与产品开发工作。毕业去向主要包括高等学校，科研院所及相关企事业单位等。此外，相当一部分学生还获得了直接读博士学位和出国深造的机会。 人口爆炸性增长，环境污染如全球变暖、臭氧层空洞、大气和水污染，资源枯竭如淡水短缺、生物多样性严重丧失、荒漠化等，一方面困扰着各国政府，另一方面已经严重地影响到我们每一个人的生存和生活质量，人类要有良好的生存和生活质量，人类要有未来，就必需十分关注这三个问题。生态学刚产生时的目的是研究生物与他们环境之间的关系，今天生态学已经成为解决上述三个问题的理论基础。生态学要研究的是：在自然情况下生物如何去适应它的生物和非生物环境，包括对温度、水、能量和其它生物所形成的环境的适应；生物如何在与其生物环境和非生物环境的共同进化过程中形成自己独特的生长和繁殖方式；作为整体的生物即群落的结构和动态如何；生物与它们环境所形成的生态系统的结构和动态如何；在更大的空间尺度和更长时间尺度上，生物多样性如何在进化压力的作用下形成小尺度空间中无法观察到的模式；为什么地球上或某个地区会有这么多种生物；是什么在维持地球上的生物多样性；生物多样性的高低与生态系统稳定性间有关系吗；我们能够保护如大熊猫这样的野生动植物吗；转基因生物这样的人造生物在生态系统中的近期和长期行为如何，它将造福人类还是摁扣内导致人类毁灭。任何一个问题的复杂程度都不亚于象“生命的起源”这样的问题。将生态学的原理应用于社会和经济问题，可以为解决污染、退化、荒漠化、全球气候变暖、臭氧层空洞、酸沉降等环境问题，为解决动植物灭绝、包括转基因生物等外来生物入侵等生物多样性丧失的问题，为解决已破坏环境的治理，为解决能源短缺、水等资源枯竭的问题，为解决农业的可持续发展问题等提供理论依据。生态学是生命科学史最接近大自然的二级学科，特别适合那些热爱大自然、愿以揭露野生动植物奥秘为目标交为之奋斗的人士。进入到这个专业，你就有机会真正成为探索大自然的人员之一，就象引人入胜的《探索》中描述的那样。 四川大学动物学硕士点建立于1982年具有博士学位授予权。本学科现有中科院院士1人，教授4人，副教授4人，大多具有博士学位，已成为一支年龄结构合理，科研能力强多学科结合的科教队伍。近20年来，本学科已培养研究生近100名，承担国家级、部省级科研项目多项，多项科技成果获教育部、四川省和国家科技进步奖。特别是在大熊猫等珍稀濒危动物繁育及保护生物学研究方面独具特色。本学科主要研究方向包括保护生物学、动物分子生物学、资源动物学、动物遗传学和动物生态学。本学科硕士毕业后的就业范围较为广泛，可在有关科研单位与大专院校从事与本学科有关的科研与教学工作，亦可从事有关的管理或开发等方面的工作。 我校植物学科历史悠久，早在20世纪20年代在著名植物学家钱崇澍教授的带领下开展了植物分类学的研究。尔后又在著名植物学家方文培教授的领导下建立了植物分类科研队伍。1981、1985年植物学分别获得硕士、博士学位授予权。1991年我校植物学科被评为首批省级重点学科，并于1996年通过了省级有关部门组织的评估，获得优秀。同年，以植物学科为基础，列入国家“211工程”重点建设学科（资源生物学）计划。1999年植物学科被教育部批准设立高等学校特聘教授岗位点。2002年植物学被批准为国家级重点学科。通过几年的建设，本学科已形成了特色鲜明、优势突出的研究方向，这些研究方向着重针对西南地区丰富的植物资源及独特的生物多样性，从不同层次、不同领域进行系统深入的研究，取得了一批在国内外具重要影响的科研成果，培养了不少的优秀专门人才。近5年来，本学科共承担了国家自然科学基金（包括重大项目）、科技攻关、国际合作项目等部省级以上科研项目50多余项，获国家级及部省级科技成果奖10余项，在国内外重要核心刊物上发表不术论文200余篇，本学科已建立起一支学术造诣深、科研能力强、教学质量高，年龄结构合理的学术队伍，有教授8人，博士生导师4人，副教授10人。本学科培养了大量的硕士生和博士生。主要涉及研究方向：植物系统与进化生物学、植物发育生物学与生物技术、植物生理、植物天然产物、植物多样性及保护、藻类学及资源利用。