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见倒是见过一面，但可惜没有联系方法，帮不到忙。他研究的主要是血小板，而非因子。
von Willebrand因子裂解酶活性水平的检测及其临床应用Residual Collagen Binding Assay for von Willebrand Factor-Cleaving Protease Activity and Its Clinical Application高维强 苏健 邢秀萍 王京华 白霞 王兆钺 阮长耿摘 要：血管性血友病因子裂解酶(vWF-cp)是新近发现的一个金属蛋白酶,其活性在多种生理病理状态下发生改变.为了研究von Willebrand因子裂解酶活性检测及其临床应用,用ELISA法检测了vWF-cp酶解前及裂解后血清(浆)中血管性血友病因子(vWF)的胶原结合能力,两者之比作为该待测血清(浆)的相对vWF-cp活性水平.同时观察血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者与肿瘤患者体内vWF-cp活性的改变.结果表明,该方法准确测出了87名健康成人和79例患者血样的残余胶原结合力(R-CBA),批内变异和批间变异分别为3 60%(n=9)和(n=5).53名健康成人血清vWF-cp活性水平为(±)%,30名健康成人血浆vWF-cp活性水平为(±)%.6例TTP患者中5例血浆vWF-cp活性水平显著降低,25例良性肿瘤患者血清vWF-cp水平轻度降低,49例恶性肿瘤患者则明显下降(P值分别小于和).结论:以R-CBA检测vWF-cp活性水平简单易行,可应用于临床检验.恶性肿瘤患者,尤其是TTP患者血浆(清)vWF-cp活性水平显著降低.关键词：血管性血友病因子裂解酶;残余胶原结合试验;血栓性血小板减少性紫癜分类号：; 文献标识码：A文章编号：1009-2137(2004)06-0726-04作者简介：通讯作者:阮长耿,所长、院士、教授.电话:/:作者单位：高维强（苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,苏州,215006）苏健（苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,苏州,215006）邢秀萍（河南省开封市第一人民医院血栓室,开封,475000）王京华（哈尔滨医科大学附属第一医院血液科,哈尔滨,150086）白霞（苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,苏州,215006）王兆钺（苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,苏州,215006）阮长耿（苏州大学附属第一医院,江苏省血液研究所,苏州,215006）参考文献：〔1〕Gerritsen HE, Robles R, Lammle B, et al. Partial amino acid sequence of purified yon Willebrand factor-cleaving protease. Blood,2001; 98: 1654- 1661〔2〕Furlan M, Robles R, Galbusera M, et al. yon Willebrand factorcleaving protease in thrombotic thrombocyto-penic purpura and the hemolytic-uremic syndrome. N Engl J Med, 1998; 339: 1578-1584〔3〕Tsai HM, Lian EC. Antibodies to von Willebrand factor-cleaving protease in acute thrombotic thrombocytopenic purpura. N Engl J Med, 1998; 339: 1585-1594〔4〕Mannucci PM, Canciani MT, Forza I, et al. Changes in health and disease of the metalloprotease that cleaves yon Willebrand factor. Blood, 2001; 98:2730-2735〔5〕Furlan M, Lammle B. Assays of von Willebrand factor-cleaving protease: a test for diagnosis of familial and acquired thrombotic thrombocytopenic purpura. Semin Thromb Hemost, 2002; 28:167 - 172〔6〕Rick M, Moll S, Taylor M, et al. Clinical use of a rapid collagen binding assay for yon Willebrand factor cleaving protease in patients with thrombotic thrombocytopenic purpura. Thromb Haemost,2002; 88:598-604〔7〕Ruggeri ZM. Old concepts and new developments in the study of platelet aggregation. J Clin Invest, 2000; 105:699 -701〔8〕Fujikawa K, Suzuki H, McMullen B, et al. Purification of human von Willebrand factor- cleaving protease and its identification as a new member of the metalloproteinase family. Blood, 2001; 98:1662 - 1666〔9〕Zheng X, Chung D, Takayama TK, et al. Structure of yon Willebrand factor cleaving protease (ADAMTS13), a metalloprotease involved in thrombotic thrombocytopenic purpura. J Biol Chem,2001; 276:41059-41063〔10〕Levy GG, Nichols WC, Lian EC, et al. Mutations in a member of the ADAMTS gene family cause thrombotic thrombocytopenic purpura. Nature, 2001; 413: 488-494.〔11〕施文瑜,王迎春,白霞,等.Von Willebrand因子胶原结合试验的建立及其临床应用.中华检验医学杂志,2003;26:200-203〔12〕Oleksowicz L, Bhagwati N, DeLeon-Fernandez, et al. Dificient activity of von Willebrand's factor-cleaving protease in patients with disseminated malignancies. Cancer Res, 1999; 59:2244-2250收稿日期：2003年12月1日修稿日期：2004年6月25日出版日期：2004年12月1日请看PDF全文==========================================我还打过一遍电话你要不把分给我你就不太不地道了，这是我好不容易找到的他的一个论文。你太走运了，好谢谢我吧，我听过他的一个演讲。============================================作者简介：通讯作者:阮长耿,所长、院士、教授.电话:/把分给我吧下面那个qdcz也是我
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是不是被坑了 ...是的中国知网不在收录国际生物医学工程杂志的文章了，是因为他的主办是中华医学会的，中华医学会的文章只上万方。 ...
《中华检验医学杂志》1978年9月创刊，是我国检验医学和各科医学实验室诊断领域最具权威性和影响力的高级学术核心期刊，被制药及药品毒理化数据库、中国期刊全文数据库、中国科技论文统计和分析刊源数据库等国内、国外近20个权威检索机构或数据库收录。被国家新闻出版总署和国家科技部授予“双效期刊”，连续七次荣获“百种中国杰出学术期刊”称号及“中国期刊方阵”期刊，并多次获优秀期刊奖。
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3100~3102-1993《量和单位》中有关量、单位和符号的规定及其书写规则，具体执行可参照中华医学会杂志社编写的《法定计量单位在医学上的应用》。组合单位符号中表示相除的斜线多于1条时应采用负数幂的形式表示，如ng/kg/min应采用ng·kg-1·min-1的形式；组合单位中斜线和负数幂亦不可混用。在叙述中应先列出法定计量单位数值，括号内写旧制单位数值；如果同一计量单位反复出现，可在首次出现时注出法定与旧制单位换算系数，然后只列法定计量单位数值。参量及其公差均需附单位，当参量与其公差的单位相同时，单位可只写1次，例如：“4 ng/L±2 ng/L”可以表示为“（4±2） ng/L”。量的符号一律用斜体字，如吸光度（旧称光密度）的符号为A，“A”为斜体。12．数字：执行GB/T 15835-1995《出版物上数字用法的规定》。公历世纪、年代、年、月、日、时刻和计数、计量均用阿拉伯数字。小数点前或后≥5位数字时，每3位一组，组间空1/4个汉字空。但序数词和年份、页数、部队番号、仪表型号、标准号不分节。百分数的范围和偏差，前一个数字的百分符号不能省略，如：5%~95%不能写成5~95%，（2±6）%不能写成2±6 %。附带尺寸单位的数值相乘，按下列方式书写：4 cm×3 cm×5 cm，不能写成4×3×5 cm3。13．参考文献：著录格式基本执行GB/T 7714-2005《文后参考文献著录规则》。采用顺序编码制著录，依照其在文中出现的先后顺序用阿拉伯数字标出，并将序号置于方括号中，排列于文后。尽量避免引用摘要作为参考文献。内部刊物、未发表资料、个人通信等请勿作为文献引用，确需引用时，可将其在正文相应处注明。引用文献（包括文字和表达的原意）务请作者与原文核对无误，外文文献需要提供PubMed的PMID号。日文汉字请按日文规定书写，勿与我国汉字及简化字混淆。同一文献作者不超过3人全部著录；超过3人可以只著录前3人，后依文种加表示“，等”的文字。作者姓名一律姓氏在前，名字在后，外国人的名字采用首字母缩写形式，缩写名后不加缩写点；不同作者姓名之间用“，”隔开。题名后标注文献类型标志对电子文献是必选著录项目，其他文献可选择标注。文献类型和电子文献载体标志代码参照GB 3469《文献类型与文献载体代码》。外文期刊名称用缩写，以Index 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WS/T 463—2015 xuè qīng dī mì dù zhī dàn bái dǎn gù chún jiǎn cè
Measurement of serum low density lipoprotein cholesterol
ICS C 50
中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 463—2015《血清低密度脂蛋白胆固醇检测》（Measurement of serum low density lipoprotein cholesterol）由中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会于2015年06月23日发布，自2015年12月31日起实施。
本标准按照GB/T —2009给出的规则起草。
本标准主要起草单位：武汉大学中南医院、北京医院老年医学研究所、北京医院。本标准起草人：周新、郑芳、陈永梅、陈文祥、王抒、董军。
血清低密度脂蛋白胆固醇检测
本标准规定了血清低密度脂蛋白胆固醇测定及其质量保证的基本原则。
本标准适用于实验室的血清低密度脂蛋白胆固醇测定，也供有关体外诊断厂商参照使用。
下列术语和定义适用于本文件。
分析系统 *** ytical system
适合对某检验项目在规定浓度范围内给出分析结果的一组按规定条件使用的仪器和装置，包括试剂和物品。
注1：对于临床生物化学检验，分析系统主要由按规定条件使用的仪器、试剂和校准物组成。
注2：其他标准（如GB/T 22576—2008）中的类似概念为“检验程序”，但检验程序包括更广泛内容，对于本文件，分析系统相当于检验程序的分析部分。
注3：改写ISO/IEC导则99：2007，定义。
验证 verification
提供客观证据，考虑任何测定不确定度，说明给定事物满足规定要求。
[ISO/IEC导则99：2007，定义]
注1：本标准主要是指分析系统的验证，即某分析系统在本实验室的性能是否与规定性能指标或厂商提供的性能指标一致。
注2：有关概念是“确认”（validation），即“规定要求”满足指定用途的验证，本标准的验证包含确认的含义。
低密度脂蛋白胆固醇 Low density lipoprotein cholesterol; LDLC
应用经典的分离和定义脂蛋白的超速离心法，按密度从低到高将脂蛋白分为乳糜微粒（CM）、极低密度脂蛋白（VLDL）、中间密度脂蛋白（IDL）、低密度脂蛋白（LDL）和高密度脂蛋白（HDL）等。血清LDL是指密度 kg/L～ kg/L的脂蛋白，以LDL中的胆固醇（LDLC）物质的量浓度（mmol/L）表示。血清LDLC浓度的传统单位是mg/dL，mg/dL换算为mmol/L的换算系数为（1 mmol/L1 mg/dL×）。
我国人群血清LDLC第5百分位数和95百分位数分别约 mmol/L和 mmol/L。LDLC个体内生物学变异约8%，个体间生物学变异约26%。
LDLC主要用于动脉粥样硬化性心血管病危险分析。LDLC升高是心血管病危险因素。国内外成人血脂异常防治指南都以降LDLC作为心血管病患者降脂治疗的第一目标。划分LDLC采用固定切点，LDLC< mmol/L为合适水平，LDLC mmol/L～ mmol/L为边缘升高，LDLC≥ mmol/L为升高。
LDLC分析原理有多种，包括超速离心法、电泳法、色谱法，匀相法（直接法）、沉淀法、间接法（Friedewald公式计算法）等。LDLC常规检验目前主要采用匀相法和间接法。
注1：我国LDLC常规检验日前推荐采用匀相法。
注2：本文件针对匀相法等实验方法，间接法适用范围见。
匀相法又称直接法，有多种方法，常见的有选择性遮蔽法、清除法等。选择性遮蔽法采用硫酸α环糊精和镁离子等遮蔽CM和VLDL，用聚氧乙烯聚氧丙烯多聚醚遮蔽HDL，胆固醇酶试剂只作用于LDLC产生显色物质。清除法先用一种表面活性剂使胆固醇酶试剂只作用于CM、VLDL、HDL的胆固醇，但不显色，随后用另一种表面活性剂使胆固醇酶试剂作用于LDLC产生显色物质而被检测。
间接法又称为Friedewald公式计算法，Friedewald公式以VLDL组成恒定[VLDL的胆固醇（VLDLC）除以甘油三酯（TG）]的假设为前提，计算公式为：LDLC总胆固醇（TC）高密度脂蛋白胆固醇（HDLC）TG/5（TG/5为按mg/dL计，以mmol/L计则为TG/）。应用Friedewald公式计算法的条件是：
a） 空腹血清不含乳糜微粒；
b） TG浓度在 mmol/L以下；
c） 无Ⅲ型高脂血症。
Friedewald公式计算法在TG低于250 mg/dl。（ mmol/L）的情况下有一定的可靠性，但TG高于250 mg/dl。（ mmol/L）时可靠性下降，TG高于400 mg/dl。（）时失去可靠性。此外由于CM含TG的比例较VLDL高，所以CM的存在也会造成LDLC的测定偏差。此法最大的优点是低成本、简便，但不能用于TG>400 mg/dL（ mmol/L）或某些异常脂蛋白血症的标本。显然，用此公式计算LDLC的可靠性受TC、TG、HDLC三项指标测定质量的影响。
患者准备和血液样品采集应满足以下要求：
a） 患者在采集样品前应处于稳定代谢状态；
b） 患者在采集样品前至少2周内保持通常饮食习惯，保持体重稳定；
c） 患者在采集样品前24 h内不进行剧烈体育运动；
d） 患者在采集样品前禁食约12 h；
e） 患者在采集样品前坐位休息至少5 min；
f） 静脉穿刺过程中止血带使用不超过1 min。
a） 血液样品保持密封，样品管处垂直状态，封口朝上；
b） 血液样品管轻取轻放，避免剧烈震荡，防止引起溶血；
c） 血液样品在采血后1 h～2 h内离心，分离血清，含促凝剂采血管可在更短时间内离心（参照采血管说明书）；
d） 分离的血清样品在分析前保持密封；
e） 血清在室温下的存放时间不大于4h，若需贮存4 h～48 h，应存于4℃环境，若需更长时间贮存，应置于70℃以下环境；血清不可反复冻融。
根据实验室实际情况选择适宜类型分析系统，主要包括仪器、试剂和校准物，若采用半自动仪器，还包括适宜的移液设备和温育设备等。
注1：仪器主要分白动和半自动仪器，日前多数实验室采用自动生化分析仪，小型实验室可能采用半自动分析仪。
注2：可见下列类型分析系统：
——封闭系统，仪器、试剂和校准物来自同一厂商，供配套使用，见于部分使用白动分析仪的情况；
——开放系统，试剂和校准物来自同一厂商，供配套使用，仪器另选，见于部分使用自动分析仪的情况和使用 半自动分析仪的情况；
——组合系统，仪器、试剂和校准物来自不同厂商或机构，由实验室自己组合，见于部分使用自动和半自动分 析仪的情况。
宜尽量选用封闭系统或开放系统，必要时，可使用组合系统。
注：使用组合系统的理由，可能是有证据表明配套校准物缺乏可靠性，也可能是其他合理原因。
宜尽量选用分析结果可溯源至公认参考系统（参见附录A）的分析系统。
注1：美国疾病控制预防中心（CDC）胆固醇参考方法实验室网络（CRMLN）运行LDLC分析系统溯源认证计划，该 计划用多份（>40）患者血清将常规方法直接与参考测定程序或指定比对方法对比。CDC在其网站保持有效 期内的通过认证的分析系统列表。
注2：还可以有其他溯源方式，GB/T 21415—2008对临床检验量值溯源原理及要求做出说明。
封闭系统和开放系统，应按厂商说明使用；使用组合系统，或对分析系统做其他改变（如各种分析参数、条件或方式等），需有充足理由，并需对分析系统性能进行充分验证（见）。
分析系统应达到下列性能指标：
a） 所测的分析物与LDLC定义（见）一致，一般情况下不受其他血清成分的明显干扰（特异性）；
b）分析结果的总变异系数小于4%（精密度）；
c） 分析结果的偏倚在±4%范围内（正确度）；
d） 测定范围 mmol/L～ mmol/L。
任何新选用的分析系统，在用于患者样品检验前，应进行性能验证。可采用的验证程序参见附录B。
下列情况应验证所列全部性能：
a） 采用封闭系统或开放系统，厂商未给出所列之性能指标；
b） 采用封闭系统或开放系统，厂商给出的性能指标不满足之要求；
c） 采用组合系统或做过改变的分析系统；
d） 采用封闭系统或开放系统，厂商给出所列之性能指标且符合要求时，可仅验证正确度。
应根据工作经验、行业交流、科学文献等选用性能可靠的分析系统（主要是试剂和校准物品牌）。应尽量保持使用同种分析系统，不宜随意、经常更换分析系统。
应进行内部质量控制。质控品应适宜用于脂蛋白分析，足够均匀、稳定，浓度在医学决定水平附近，至少两个水平；应尽量长期保持使用同种质控品，不宜经常更换质控品；每批检验至少分析一次质控品。
注：有些商品生化质控品由于来源、组成、性质等原因，可能不适宜用作LDLC质控品。白制、足量、 70℃以下温度保存的新鲜冰冻血清是LDLC的良好质控品。
应参加经卫生行政管理部门认定的室间质量评价机构组织的临床检验室间质量评价。
应以我国法定计量单位mmol/L报告LDLC测定结果，需要时，另外给出传统单位mg/dL结果。以mmol/L为单位的结果保留小数点后2位有效数字。检验报告应注明医学决定水平，需要时，另外注明参考区间。LDLC升高的判断，需考虑分析变异、个体内生物学变异及检验次数等因素。
LDLC尚无国际公认的参考方法。国际影响较大的LDLC参考方法是美国疾病控制与预防中心（CDC）的超速离心／肝素锰沉淀/AK胆固醇测定法（β定量法）。此法用5 mL血清在 kg/L的密度下超速离心[离心条件：40000 r/min（离心力105000g），4℃， h]，切割中部离心管，去除血清中密度小于 kg/L的组分（顶部组分，主要为极低密度脂蛋白VLDL和乳糜微粒CM），将底部组分（主要为HDL和LDL，简称LHDL）完全转移到5 mL容量瓶中，定容。准确吸取2 mL底部组分到试管中，用80μL肝素（5000 U/mL）和100μL氯化锰（ mol/L）选择性沉淀LHDL中的LDL，离心分离上清中的HDL。用CDC的胆固醇参考方法AK法测定LHDL和HDL中的胆固醇（LHDLC和HDLC），白LHDLC中减去HDLC得LDLC。
LDLC没有国际公认的参考物质。美国国家标准与技术研究所（NIST）的参考物质1951b有LDLC的参考定值，定值方法为美国CDC的β定量法。我国有国家质量监督检验检疫总局批准的3种冰冻人血清LDLC国家一级标准物质（GBW 09178，GBW 09179，GBW 09180）。
参考系统的应用方式包括应用参考物质或应用参考测定程序。LDLC参考系统主要应用于以下方面：
a） 分析系统的溯源和质量评价；
b） 试剂的制备及质量评价；
c） 校准物质的制备、定值及质量评价；
d） 新常规方法的发展及评价；
e） 室间质评计划中的靶值确定；
f） 协作研究中血脂分析的质量保证。
采用分割样品对比评价特异性、精密度和测量范围，收集合适样品，用待验证分析系统和另一分析方法（对比方法）同时分析样品，比较分析结果。
收集至少10份病人血清样品，浓度在测量范围内基本均匀分布，每份血清分装3份，形成3套样品，密封70℃保存。
首选参考方法或指定比对方法，不可行时，可选用另种常规方法，最好是不同原理的方法，且有证据证明是性能可靠的方法，如经CRMLN认证的方法。
上述3套样品，分3次独立实验，用待验证方法和对比方法分析LDLC。
计算每份病人样品待验证方法3次分析结果的变异系数（CV），计算所有病人血清结果的平均CV。
计算每份病人样品两种方法3次分析结果的平均值，计算每份病人血清待验证方法结果的偏倚和绝对偏倚，计算所有病人血清结果的平均偏倚和平均绝对偏倚。
若平均CV小于4%，平均偏倚在±4%内，则分析系统精密度、特异性和测量范围符合要求。
若实验中的对比方法为参考方法或指定比对方法，结果同时说明正确度符合要求。
若实验中的对比方法是常规方法，用待验证方法分析有证参考物质或其他符合要求的参考物质至少3次，计算分析结果平均值与参考物质定值的差值（偏倚），若在±4%内，正确度符合要求。
[1] WS/T 225—2002 临床化学检验血液标本的收集与处理
[2] GB/T 22576—2008 医学实验室 质量和能力的专用要求
[3] GB/T 21415—2008 体外诊断医疗器械生物样品中量的测量 校准品和控制物质赋值的计量学溯源性
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