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蛹虫草生理活性研究进展论文

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蛹虫草生理活性研究进展论文

有关研究表明,蛹虫草含有虫草素、虫草酸、虫草多糖、蛋白质、超氧化物歧化酶(SOD)、麦角甾醇、氨基酸、维生素及多种微量元素,与冬虫夏草的化学成分基本相同。另外还包含虫草素在内的腺苷、尿苷、尿嘧啶、腺嘌呤等物质。蛹虫草的活性成分除前述已知的成分外,相信还有未知的活性成分有待发现、研究。 1951年,加拿大的Cunningh等观察到被蛹虫草寄生的昆虫组织不易腐烂,随后从中分离到一种腺苷类活性物质,命名为虫草素(Cordycepin),并确定其结构式为 3’-脱氧腺苷(3’-Deoxyadenosine),虫草素是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗菌素。虫草素又称虫草菌素、蛹虫草菌素、3’-脱氧腺苷。在已报道的400多种虫草中,蛹虫草是唯一能大量产生虫草素的虫草。分子生物学和现代医学的研究发现,虫草素具有多方面作用:免疫调节、抗肿瘤、抗真菌;增加脾脏重量、加快肝脏核酸和蛋白质更新速度,抗缺氧、增加心肌营养血流量及降低血清胆固醇和B酯蛋白,刺激糖酵解导致ATP合成增加,增强肝脏功能和肌肉中CPK的活性,对由于激素失调引起的性功能损伤有修复作用,能明显增加冠脉血流量,降低冠脉、脑及外围血管阻力。虫草素在医药上和分子生物学的重大意义而备受全球医学界和药学界关注。虫草素疗效显著,并且大量提取分离得到纯品非常不易,国际市场上虫草素的价格高昂,纯度98%的虫草素达到2000美元/克以上。据报道,美国将蛹虫草主要成分虫草素提纯,研制成针剂用于治疗白血病和癌症,已进入Ⅲ期临床试验。 虫草多糖是一类高分子复合物,在蛹虫草中含量为4~10%,是蛹虫草中含量最高的主要药理活性物质。它的抗癌活性和免疫活性已引起人们的极大兴趣。从1977年开始,日本和中国的科研人员开始对虫草多糖开展研究,已从天然冬虫夏草以及人工培育的虫草真菌中分别分离纯化出了多种多糖组份,并对其理化性质和药理活性进行了详细研究。大量研究表明,虫草多糖有着多种生物活性功能,被医学界和药物学界认为是当前世界上非常好的免疫促进剂之一,具有广泛的药理作用:提高免疫功能、抗肿瘤作用、抗衰老作用、降血糖、降血脂、抗动脉粥样硬化作用、抗放作用以及作为镇痛药源、保护肾脏的作用、抗病毒、保肝、抗辐射、耐缺氧、镇静等作用。 蛹虫草富含硒,硒被称为微量元素中的抗癌之王,是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH—PX)的必需组分,GSH-PX可引起人体不断产生可致癌自由基的破坏。

我国是发现和在医药上最早应用虫草的国家。在20世纪30年代,我国就开始发表若干新种,然后到70年代前期进展缓慢,从70年代后期开始,我国学者对虫草的研究才甚为活跃,开始对这类真菌资源展开调查、描述和鉴定。而对蛹虫草的资源分布、生物学特性、生理活性物质、药理作用、临床应用、人工栽培和工业深层发酵只是近二十几年的事。我国的医药工作者在药理作用、化学成分及临床应用方面,亦相继开展了大量的工作,取得了明显的进展。为了将蛹虫草代替天然的冬虫夏草,国内进行了大量的化学成分分析工作,实验结果表明:二者间所含的无机元素种类基本一致,在主要药性成分上蛹虫草比冬虫夏草的含量高,蛹虫草化学成分与冬虫夏草无根本性质的差别,但是蛹虫草的人工培植的蛹虫草子实体作为生物药开发是极具价值,其气味纯正、色泽鲜艳、实用性强、商品价值高,为中医最好的药用部位。国外在虫草功能、药化、药理方面的研究进展较快,对蛹虫草产生的虫草素抑制肿瘤、病毒和某些细菌的作用方面研究成果显著。

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很多,网上可以查询。学者王建芳、杨春清在论文中写到:“蛹虫草是传统的中药,化学成分和药理研究表明,其含有包括核苷类、多糖类、糖醇、甾醇类以及SOD酶在内的多种有效成分,具有镇静催眠、提高机体免疫、抗肿瘤、防止衰老、保护心肺组织等多种药理作用”。

冬虫夏草的研究进展(付光伟) | [<<] [>>] -------------------------------------------------------------------------------- 冬虫夏草是球壳目、麦角菌科、虫草属的虫生真菌,寄生于鳞翅目昆虫幼虫体上,把虫体变成充满菌丝的僵虫,这是菌核部分,由菌核生出有柄的棍棒形的子座。虫草是一种子囊菌,其生活史可分为分生孢子阶段(无性型)和子囊孢子阶段(有性型)。其具益精气、补虚损、止咳化痰之功效,具有免疫调节、抗肿瘤、升白细胞、降血压、抗衰老、抗疲劳、调节内分泌、抑菌、抗病毒等多种药理作用,长期以来被视为珍贵的强壮滋补中药和藏药。它主要产于西藏、青海、四川、云南等省3500~5000 m高原高寒草甸,因采集困难,资源奇缺,价格昂贵。全世界已报道的虫草属真菌已达400多种,我国已记载的有90多种。 1 冬虫夏草生态生物学特性 地理分布 冬虫夏草主要分布在我国的青藏高原,主产在青海和西藏,以青海的产量最多,其次为西藏的北部,此外,四川西部、云南西北部、甘肃南部和尼泊尔也有少量分布。商品中把产于藏民居住区的称为“藏草”,质较优,藏语称“牙扎衮布”;把产于非藏民居住区的统称为“川草”,质较次。青海省玉树地区的囊谦县和曲麻莱县所产之虫草个大、色黄、气浓,为全省所产虫草中之极品。 生态环境 冬虫夏草多生于海拔3500~5000m的高山草甸或高山灌丛草甸的土层中。这些地区常年平均温度低,无霜期短,夏季雨水多,土层肥厚,主要建群植物为莎草科篙草属和苔草属及蓼科蓼属植物,如珠芽蓼、圆穗蓼、拳参、尼泊尔蓼、肾叶山蓼和百合科植物川贝母等,有些地区还间有生长某些高山矮灌木,如蔷薇科的金露梅,杜鹃花科头花杜鹃等。 生物学特性 冬虫夏草因冬季受菌寄生的幼虫蛰居土中,夏季自虫体头部生出似草的子座而得名。每年6月下旬至7月上旬,蝙蝠蛾的蛹开始羽化。成虫初呈白色,1h左右后变为棕红色,后又变棕黑色,前后翅布满花斑,雌雄蛾交配后即在植株上产卵,平均每只雌蛾产卵400~500粒,最多可达700粒,成虫自羽化到死亡一般为3d。卵在适宜的温湿度条件下,经一个月左右孵化。幼虫白色,孵出后迅速钻入土中。以尼泊尔蓼、珠芽蓼、肾叶山蓼、川贝母和金露梅等植物的地下部分为食,幼虫在土中逐步成长至蛹化的整个过程大致需经3年的“地下生活”。如果在这个过程中某年某一或某些幼虫不孛被虫草真菌感染,那么次年夏天就变成了冬虫夏草,故冬虫夏草在规格上有大小之分,最大的虫草整个生长过程约需4年之久。蝙蝠蛾的高龄幼虫一般在6月中下旬被虫草真菌感染,一旦被感染。幼虫立即惊恐不安,随后很快行动迟缓,有的钻出地面到处乱爬,经过一番挣扎后爬向靠植物的根部距地表2~3cm深的土层中,头朝上尾朝下死去。此时的虫体内已充满菌丝,随后虫体表面的菌丝膜与周围的土壤颗粒黏结成“虫壳”,完成了虫草真菌的无性世代。当年入秋后虫草真菌即开始有性世代,即从被感染而死亡的虫体头部长出高约1cm 的幼小子座,此子座不露出土面,在冻土中越冬。翌年5月或6月土层解冻后,遇温湿度适宜时,子座以每天3~4mm的速度上长,钻出地面。形似小草。钻出地面的子座初为淡绿色,后变为紫红色,通常长至3~8cm后不再继续生长。通常一个虫体上只长一个子座,很少长多个者。出土子座停止生长后,上端稍膨大成能孕部分,其顶部还有尖帽状的不孕顶端。能孕部分表层嵌生无数半埋在组织中的子囊壳,以致能孕部分表面呈颗粒状粗糙。在显微镜下可以观察到子囊壳呈梨形,壳内有多数子囊,子囊内又有数个长条形的子囊孢子。孢子成熟后破囊从壳口逸出,乘风飞散,随水飘流,遇虫体而再感染,以致冬虫夏草在小环境中的出现常呈带状的集居群。冬虫夏草的菌物复合体中的菌不是一种而是复杂的真菌系。其差异常常取决于地域环境条件和寄主昆虫的种群特性,在自然界不同地区、不同土壤、气候、植被条件下的不同生物种群(寄生和菌系),常常发生特异的寄生、互生或共生关系,形成不同的生态系统。 2 虫草的化学成分 冬虫夏草内的化学成分复杂,其水分%,粗蛋白%,粗纤维%,碳水化合物%,灰分%,脂肪%。包括饱和脂肪酸%(硬脂酸)、不饱和脂肪酸%(油酸占%、B-亚油酸占%)。从虫草中还分离出D-甘露醇、尿嘧啶、腺嘌呤、腺嘌呤核苷、蕈糖、麦角甾醇、麦角甾醇过氧化物和胆甾醇软脂酸酯,以及具有抑菌、抗病毒、抗癌作用的虫草菌素(3,-去氧腺苷)。 3 药理作用 增强机体免疫调节功能 虫草具有促进T和B淋巴细胞增殖作用,明显抑制小鼠脾细胞对刀豆蛋白A和细菌脂多糖的反应;减少小鼠特异抗体分泌细胞数;降低同种异型抗原诱导的迟发型超敏反应及混合淋巴细胞反应。来源于虫草的新型免疫抑制剂FTR720,能直接作用于淋巴细胞,其表现免疫抑制效果,可抑制器官移植等的排斥反应; 抗肿瘤作用 现已知肿瘤细胞的生长繁殖需要大量的腺苷,而虫草素以其结构与腺苷相似的特征,通过识别错误,代替腺苷参与肿瘤细胞的生长繁殖,从而抑制肿瘤细胞的生长。冬虫夏草能杀伤K562肿瘤细胞,抑制LK细胞活性,冬虫夏草的水提取液在剂量5g/kg时能明显抑制小鼠5180和Lewis细胞的生长,并减少其转移的灶数。对人黑色素瘤B16细胞、人白血病HL16细胞有较好的抗肿瘤效果,但蛹虫草的作用优于冬虫夏草。 抗炎、抗菌、抗病毒作用 人工发酵虫草菌丝体的水提液对小鼠,天然虫草对大鼠都具有明显的抗炎作用,虫草中的虫草素具有明显抑菌作用。虫草发酵液中含有耐热的广谱性抗菌物质,能够拮抗革兰氏阴性及阳性菌、芽孢菌和非芽孢菌、链霉菌,对酵母及丝状真菌则没有抗菌活性,虫草(商品名心肝宝)对慢性肝炎也有明显的治疗效果 抗疲劳、耐缺氧、益智作用 郑伟等研究,3种冬虫夏草制剂抗疲劳作用的比较:天然冬虫夏草、虫草菌丝体培养液对小鼠均有较好的抗疲劳、高空耐缺氧及促智作用。健神抗衰片(由人工虫草菌丝体、玄驹、西洋参等组成)明显地降低衰老模型动物血MDA水平,提高SOD和GSH-Px活性。并能增加胸腺重量和系数。增加细胞免疫反应和吞噬细胞吞噬率;且使抗体生成细胞数与IL-1、6、8水平升高,故有较明显的抗脂质过氧化、抗衰老、调节免疫的生物作用。同时通过对东莨菪碱致记忆获得障碍模型小鼠的跳台试验证明,对小鼠记忆障碍有改善作用。 4 临床应用 呼吸系统疾病 对咳嗽无力、气短气喘、恶风自汗、神疲乏力等“肺虚症”有明显的治疗作用,对肺结核、哮喘、肺气肿也有良好的辅助作用; 肾科疾病 对腰膝酸软、遗精早泄、夜尿频等“肾虚症”及“肺、肾两虚症”有良好的辅助治疗作用; 心血管疾病 对冠心病有稳定的治疗作用,对动脉血管有明显抑制胶原性血小板聚集作用,抑制率为%—%类抗血栓药物; 肝炎及肝硬化 能直接改善肝脏功能,对肝硬化的防治有重要的价值; 血液病 对原发性血小板缺乏性紫癜有很好的辅助治疗作用,对白血病有一定的改善症状及减缓恶性程度的作用; 抗肿瘤 对肿瘤患者的相关症状改善有显著效果,并可降低其病症的恶性程度,延长存活期,改善生存质量。有升高白细胞的作用,可维持放、化疗的正常进行;

蛹虫草(又名北虫草、北冬虫夏草,),蛹虫草为子囊菌亚门,麦角菌目,麦角菌科、虫草属的模式种,世界性分布天然资源数量很少。由子座(即草部分)与菌核(即虫的尸体部分)两部分组成的复合体。冬季幼虫蛰居土里,菌类寄生其中,吸取营养,幼虫体内充满菌丝而死。到了夏季,自幼虫尸体之上生出幼苗,形似草,夏至前后采集而得。国内于1958年在吉林省首次发现,通过鉴定,认为它与冬虫夏草是同一个属,定名为蛹虫草。蛹虫草,其主要化学成分和保健功能与天然冬虫夏草很相似,有平喘止咳、壮阳补肾功能,对肺气肿、气管炎有较好疗效,能明显降低血糖、尿糖、降低血压、颅压的作用;还有抗菌、抗癌、增强免疫功能和润肌美容及消除“蝴蝶”斑等作用,至今尚未发现明显的副作用,其保健功能越益被人们认识。蛹虫草可以及时对身体进行综合调理。主产于云南、吉林、辽宁、内蒙古,生于针、阔叶林或混交林地表土层中鳞翅目昆虫的蛹体上。能采用家蚕和柞蚕蛹人工批量培育,药效、药理与野生种相似甚至更好。蛹虫草较之冬虫夏草,具有几个无可比拟的优点:一是北虫草为虫草属的模式种,分布广泛,为世界各国学者所认识和接受。二是北虫草已在人工条件下育成了完整子座。三是北虫草含有虫草菌素和虫草多糖,其独特药理作用已日益引起药学界的高度重视。由于蛹虫草具有以上优点,成为虫草属中药用虫草菌中的佼佼者。由于野生虫草资源稀缺,价格昂贵,难于普及。深圳市科茸生物技术有限公司的科技人员,用生物工程技术方法人工培养冬虫夏草,获得全面成功。在高科技营造的环境里,虫草的生长过程不受自然界不利条件的影响,有效成份不受损失,所以品质优良。经检测:人工培养虫草的主要营养与药用成分均与野生虫草的含量相当甚至更高。蛹虫草人工培养技术的成功,为我国开辟了名贵药材产业化生产的又一片天空。现代科学论证科茸蛹虫草不仅具有特殊的营养价值,而且有明显的药用价值。其中尤以虫草酸、虫草素、虫草多糖和SOD等多种生物活性物质的药用价值最为显著。虫草酸(甘露醇)可以显著地降低颅压,促进机体新陈代谢,因而使脑溢血和脑血栓病症得到缓解。虫草素是一种具有抗菌活性的核苷类物质,对核多聚腺苷酸聚合酶有很强的抑制作用。在DNA转录mRNA过程中使mRNA成熟障碍,抑制癌细胞的生长。并有降血糖的作用。虫草多糖是一种高度分枝的半乳甘露聚糖,它能促进淋巴细胞转化,提高血清IgG的抗体含量和机体的免疫功能,增强机体自身抗癌抑癌的能力。SOD(超氧化物歧化酶)可以消除机体内超氧自由基,具有抗衰老、抗癌抑癌的作用。此外,蛹虫草还含有丰富的硒(Se),这种微量元素已被大家公认是人体必需的微量元素,是谷胱甘肽过氧化酶的活性中心,以硒半胱氨酸的形式连接在酶蛋白的肽链上,保护细胞膜的稳定性的正常的通透性,并刺激免疫球蛋白和抗体的产生,增强机体免疫和抗氧化能力。同时,大量的科学实践证明硒可以明显地抑制癌细胞的生长。野生冬虫夏草价格昂贵。而目前市场上以发酵菌丝代替虫草,其有效成分和效果根本无法与天然虫草相比。本研究通过大量培养比较,筛选出了一株优良的蛹虫草菌种。虫草的成份分析表明,蛹虫草的蛋白质、糖、脂肪、腺嘌呤、尿嘧啶、甘露糖、氨基酸、生物碱、麦角甾醇和多种微量元素与野生冬虫夏草相比无根本差异,最重要的为蛹虫草的活性成份虫草素含量是野生冬虫夏草的5~10 倍。药理试验表明蛹虫草具有镇静、延长睡眠、抗肿瘤、提高性功能等生理功能,许多生理功能明显优于野生冬虫夏草。培育蛹虫草作为冬虫夏草的替代品或新保健食品、或进一步从中提取有效成分制备新药将有广阔的市场。经研究证明,蛹虫草具有调节全身功能、提高免疫能力、增强巨噬细胞的吞噬功能、促进抗体的形成,主要有保肺益肾养肝、止咳平喘祛痰、润肤防皱抗衰老、抗菌抗炎、镇静、扩张血管、降低血压、降低血糖、抗疲劳、耐缺氧等作用。

比对同克数的蛹虫草和冬虫夏草,蛹虫草中的虫草素为,最高可达3%;虫草多糖3~8%,腺苷;冬虫夏草中的虫草素左右,虫草多糖4%左右,腺苷左右。

昆虫生物学特性研究进展论文

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已在学术刊物上发表研究论文57篇,其中第一作者35篇,第二作者14篇,第三作者8篇。目录如下:1.杨茂发,廖启荣,汪廉敏. 桃瘤头蚜Tuberocephallus momonis(Matsumura)发生规律及防治. 贵州农学院学报,1996,15(2):46-50 .2.杨茂发,李子忠. 海南大叶蝉科三新种. 动物学研究,1998,19(4):.杨茂发,李子忠. 云南斑大叶蝉属一新种. 山地农业生物学报,1999,18(1):15-16,.杨茂发,李子忠,蒋书楠. 中国南无僧叶蝉属的研究. 昆虫分类学报,1999,21(1):.杨茂发,李子忠. 中国大叶蝉科一新记录属及一新种一新组合. 昆虫分类学报,1999,21(3):.杨茂发,李子忠. 中国窗翅叶蝉属三新种和一新记录种. 动物分类学报,1999,24(3):.杨茂发,李子忠. 贵州窗翅叶蝉属三新种. 昆虫学报,1999,42(4):.杨茂发,李子忠. 条大叶蝉属二新种记述. 华东昆虫学报,1999,8(2):.杨茂发,李子忠. 窗翅叶蝉族中国一新记录属及一新种.《昆虫学研究进展》(吴孔明,陈晓峰主编),北京:中国科学技术出版社,2000,.汪廉敏,廖启荣,杨茂发. 贵阳地区桃一点叶蝉发生规律及防治 . 贵州农业科学,1997,25(6):.廖启荣,杨茂发,陈恒阳. 贵阳地区稻秆蝇发生规律及防治 . 贵州师范大学学报(自然科学版),1998,16(增刊):.廖启荣,汪廉敏,杨茂发. 桃粉蚜发生规律及防治 . 贵州师范大学学报(自然科学版),1999,17(2):.杨茂发. 梨瘿华蛾的发生与防治 . 山地农业生物学报,2000,19(3):.杨茂发,李子忠. 窗翅叶蝉属二新种记述. 《昆虫分类区系研究》(张雅林主编),北京:中国农业出版社,2000,.杨茂发,张雅林. 中国大叶蝉亚科三新种.昆虫分类学报,2000,22(3):.杨茂发,李子忠. 福建武夷山条大叶蝉属一新种. 动物分类学报,2000,25(4):.杨茂发,李子忠. 中国边大叶蝉属的分类研究. 昆虫学报,2000,43(4):.杨茂发,李子忠.贵州斑大叶蝉属三新种. 动物分类学报,2001,26(1):.杨茂发,杜艳丽,李子忠. 中国斑大叶蝉属三新种一新记录. 动物学研究,2001,22(2):.杨茂发,廖启荣等. 毕节地区玉米害虫种群变动规律的研究 .《玉米高产集成技术应用与持续发展理论及技术研究》——玉米100万亩高产技术应用与研究论文集(赵致,张荣达主编),贵阳:贵州科技出版社,2001,.杨茂发,廖启荣,廖华刚. 粗背狭肋鳃金龟的发生规律及防治研究 .《玉米高产集成技术应用与持续发展理论及技术研究》——玉米100万亩高产技术应用与研究论文集(赵致,张荣达主编),贵阳:贵州科技出版社,2001,.杨茂发,张雅林. 云南大叶蝉亚科二新属二新种记述. 昆虫分类学报,2001,23(3):.杨茂发,李子忠. 四川条大叶蝉属二新种 . 昆虫学报,2002,45(Suppl.):.杨茂发,李子忠. 云南条大叶蝉三新种. 动物分类学报,2002,27(3):.杨茂发,李子忠. 同翅目:叶蝉科:大叶蝉亚科.《茂兰景观昆虫》(李子忠,金道超主编),贵阳:贵州科技出版社,2002,.杨茂发. 甲螨目:缝甲螨科,短缝甲螨科,广缝甲螨科,短甲螨科,上罗甲螨科,矮汉甲螨科,礼服甲螨科,蛛甲螨科.《茂兰景观昆虫》(李子忠,金道超主编),贵阳:贵州科技出版社,2002,.张燕,金道超,杨茂发,王慧芙. 甲螨的研究进展及展望. 贵州大学学报(农业与生物科学版),2002,21(5):.杨茂发,李子忠. 云南窗翅叶蝉属一新种. 中南林学院学报,2002,22(4):.陈颖,陈文龙,杨茂发,但汉斌. 南美斑潜蝇室内饲养及生物学特性. 天津农业科学,2002,8(4):.刘高峰,杨茂发. 梵净山自然保护区土壤甲螨群落结构与多样性. 山地农业生物学报,2003,22(1):.孙桂华,杨春旺,杨茂发. 天津自然博物馆馆藏大叶蝉亚科昆虫名录. 山地农业生物学报,2003,22(6):.杨茂发,徐芳玲,汪廉敏,李子忠,戴仁怀,宋琼章,徐翩. 宽阔水自然保护区昆虫初步调查.《宽阔水自然保护区综合科学考察集》(喻理飞,谢双喜,吴太伦主编),贵阳:贵州科技出版社,2004,.徐芳玲,杨茂发,汪廉敏,李子忠,戴仁怀,宋琼章,徐翩. 宽阔水自然保护区昆虫名录.《宽阔水自然保护区综合科学考察集》(喻理飞,谢双喜,吴太伦主编),贵阳:贵州科技出版社,2004,.杨茂发,李子忠. 台湾窗翅叶蝉属四新种记述. 动物分类学报,2004,29(3):.杨茂发,李子忠. 西藏条大叶蝉属三新种. 动物分类学报,2004,29(4):.刘细群,杨茂发. 贵州食蚜瘿蚊生物学特性的初步研究. 贵州农业科学,2005,33(1):.杨茂发,李子忠. 斑大叶蝉属一新种. 昆虫分类学报,2005,27(1):.杨茂发,骆军科,金道超. 黄柏瘦筒天牛生物学特性及其防治. 中国森林病虫,2005,24(2):.曹玲珍,杨茂发. 贵州蜻蜓目昆虫区系分析. 贵州农业科学,2005,33(2):.杨茂发,宋冬梅. 中国西藏大叶蝉亚科二新种. 昆虫分类学报,2005,27(2):.Maofa Yang, Lewis L. Deitz and Zizhong Li. A New Genus and Two New Species of Cicadellinae from China (Hemiptera: Cicadellidae), with a key to the Chinese genera of Cicadellinae. Journal of the New York Entomological Society, 2005, 113(1-2): 77-83.(SCI收录)42.杨茂发,李子忠. 同翅目:叶蝉科:大叶蝉亚科.《习水景观昆虫》(金道超,李子忠主编),贵阳:贵州科技出版社,2005,.张燕,金道超,杨茂发. 甲螨目:直卷甲螨科,真卷甲螨科,缝甲螨科,短缝甲螨科,上罗甲螨科,矮汉甲螨科,剑甲螨科,耳头甲螨科,盖头甲螨科,沙甲螨科,沙足甲螨科,滑珠甲螨科,奥甲螨科.《习水景观昆虫》(金道超,李子忠主编),贵阳:贵州科技出版社,2005,.孙立军,杨茂发,熊继文,曾令祥. 贵州地道中药材艾纳香害虫名录初报. 贵州农业科学,2005,33(5):.杨茂发,宋冬梅,李子忠. 同翅目:叶蝉科:大叶蝉亚科.《贵州大沙河昆虫》(杨茂发,金道超主编),贵阳:贵州人民出版社,2005,.金道超,杨茂发. 大沙河自然保护区景观昆虫区系多样性特点及演化的分析. 《贵州大沙河昆虫》(杨茂发,金道超主编),贵阳:贵州人民出版社,2005,.宋冬梅,杨茂发. 贵州大沙河昆虫新阶元和中国新记录阶元. 《贵州大沙河昆虫》(杨茂发,金道超主编),贵阳:贵州人民出版社,2005,.曹玲珍,杨茂发,周文豹. 蜻蜓目:蜓科,蜻科,色璁科,综璁科,山璁科,扇璁科. 《贵州大沙河昆虫》(杨茂发,金道超主编),贵阳:贵州人民出版社,2005,.唐毅,杨茂发. 鞘翅目:虎甲科. 《贵州大沙河昆虫》(杨茂发,金道超主编),贵阳:贵州人民出版社,2005,.周忠会,杨茂发. 鞘翅目:龙虱科,水龟虫科,锹甲科. 《贵州大沙河昆虫》(杨茂发,金道超主编),贵阳:贵州人民出版社,2005,.杨再华,杨茂发. 膜翅目:胡蜂科,马蜂科,异腹胡蜂科,蜾赢科,蜜蜂科,切叶蜂科,隧蜂科,泥蜂科. 《贵州大沙河昆虫》(杨茂发,金道超主编),贵阳:贵州人民出版社,2005,.向玉勇,杨茂发. 昆虫性信息素研究应用进展. 湖北农业科学,2006,45(2):.练启仙,桑维钧,杨茂发,李小霞,任春光,杨汝. 贵州皇竹草纹枯病的发生特点与防治建议. 山地农业生物学报,2006,25(2):.杨茂发,李子忠. 同翅目:叶蝉科:大叶蝉亚科.《赤水桫椤景观昆虫》(金道超,李子忠主编),贵阳:贵州科技出版社,2006,.张燕,金道超,杨茂发. 甲螨目:真卷甲螨科,卷甲螨科,缝甲螨科,类缝甲螨科,矮汉甲螨科,阿斯甲螨科,温奥甲螨科,剑甲螨科,盖头甲螨科,沙甲螨科,沙足甲螨科,滑珠甲螨科,小棱甲螨科,角翼甲螨科.《赤水桫椤景观昆虫》(金道超,李子忠主编),贵阳:贵州科技出版社,2006,.杨茂发,李子忠. 同翅目:叶蝉科:大叶蝉亚科.《梵净山景观昆虫》(李子忠,金道超主编),贵阳:贵州科技出版社,2006,.刘高峰,杨茂发. 甲螨目:真卷甲螨科,卷甲螨科,真卷甲螨科,缝甲螨科,类缝甲螨科,罗甲螨科,上罗甲螨科,懒甲螨科,洼甲螨科,矮汉甲螨科,小赫甲螨科,裂板鳃甲螨科,珠甲螨科,沙甲螨科,沙足甲螨科,美甲螨科,泥甲螨科,阿斯甲螨科,剑甲螨科,步甲螨科,盖头甲螨科,奥甲螨科,单翼甲螨科.《梵净山景观昆虫》(李子忠,金道超主编),贵阳:贵州科技出版社,2006,691-701.

冬虫夏草人工培养研究进展论文

撰文|程莉

责编|李晓明

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每千克身价高达几十万,冬虫夏草到底是食品?药品?还是保健品?“身份”扑朔迷离,命运数度“反转”,背后闪现各方利益角逐,但并没有妨碍它成为中草药里炙手可热的“明星”。

近段时间,冬虫夏草包括其产品中的价格之“王”——极草,被国家食品药品监督管理总局(以下简称“国家食药总局”)公开批评,利益相关各方争辩你来我回,舆论一度甚嚣尘上。

自始至终,被捧上天的冬虫夏草是否含有有效成分饱受专业人士诟病。综其一生,不过是一个“中国式”罢了。

1.籍籍无名

中国传统的中医药学和我国绝大多数学者所指的冬虫夏草, 是特指麦角菌科冬虫夏草菌的子座及其寄主蝙蝠蛾科昆虫冬虫夏草蝙蝠蛾幼虫尸体的复合体,主产于四川、青海、西藏、云南等海拔4000~5000米的高山草甸中。其他500多种虫草属真菌寄生并能产生子座的菌物结合体都只能称作虫草。

研究表明,蝙蝠蛾拟青霉和中国被毛孢同时存在于天然冬虫夏草中。2005年10月,中国菌物学会确认冬虫夏草的学名是Cordyceps sinensi (Berk.) sacc.,中国被毛孢(Hirsutella sinensis)为冬虫夏草的唯一无性型菌种,异名有蝙蝠蛾多(被)毛孢、中华束丝孢。

我国关于冬虫夏草的记载最早见于清代吴仪洛1757年著就的《本草从新》:“冬在土中,身活如老蚕,有毛能动,至夏则毛出土上,连身俱化为草,若不取,至冬则复化为虫。”此后,多种中医书籍都记载了冬虫夏草。《中华人民共和国药典》1990年版收录了冬虫夏草。不过,解放军总医院心内科主任医师吴海云对此并不为意,他在接受媒体采访时表示采访时说,在中医古籍中,几乎所有东西都是药,诸如指甲、灶灰、粪便都是药,都能在古籍中找到“功效”。

而在传统的藏医学中,虫草产地玉树州治多县的藏药师青梅然丁此前接受新华网采访时称:“虫草往往只发挥药引的作用。”在青海省藏医院数百种复方药物中,只有一种用于治疗妇科疾病的制剂用到了冬虫夏草。藏医药典《甘露本草明镜》中关于虫草的功效也只有一句话:“强身,补肾,用于治疗肝胆系统疾病。”北京中医药大学中药生药系主任张贵君也表示,传统中药配方中虫草用得很少。

虫草酸被认为是冬虫夏草的功效成分或标志性成分,但其实虫草酸就是甘露醇——一种非常普通而便宜的化工产品,被广泛用于食品、药物当中,一千克几十元而已。

1951年,德国科学家Cuningham等观察到被蛹虫草寄生的昆虫组织不易腐烂,随后从中分离到一种腺苷类活性物质, 确定其结构式为3’-脱氧腺苷,命名为虫草菌素, 又称虫草素,1960年已经实现了全化学合成。不过化学合成不能规模化生产,所以目前市场上的虫草素主要是通过人工培养蛹虫草(Cordyceps militaris)获得。虫草素是第一个从真菌中分离出来的核苷类抗生素,也是商家所吹捧的冬虫夏草的另一种活性成分。

但实际上,多项研究表明冬虫夏草中并不含虫草素。中科院微生物所真菌学国家重点实验室研究员董彩虹在接受媒体采访时表示,他们实验室采集了青藏高原不同产地的冬虫夏草,对其标本和液体发酵的菌粉进行检测后发现:“冬虫夏草里虫草素的含量超出了我们的检测范围,我们检测不到它,可以说冬虫夏草里基本不含虫草素。” 而据澎湃新闻报道:早在2011年,中科院上海生科院植物生理生态研究所研究员王成树就发表了关于蛹虫草基因组的研究成果。2013年,其课题组又发表了关于冬虫夏草菌基因组的研究论文。这些研究表明:冬虫夏草菌的基因组并没有合成虫草素的基因,所以是不能合成虫草素的,而蛹虫草菌是可以合成虫草素的。

在20世纪70年代乃至之前,冬虫夏草还非常低调,与传统滋补品人参和鹿茸相比,仅被当作“中药三宝”里最寻常的一种药材。60年代,在西藏1千克冬虫夏草可换两包单价3角钱的香烟;70年代,在青海、西藏,冬虫夏草的国家收购价为每千克21元。1974年,在青海省果洛州,不管什么品相的冬虫夏草的价格都是28元/千克左右。

2.身价暴涨

在野外,幼虫被侵染又长成冬虫夏草的几率很低,因此天然冬虫夏草资源很稀缺,人工培植也还没有获得成功,每年全国总产量仅80~150吨。随着需求增长,冬虫夏草的价格出现了一定程度的上升。1983年,上等冬虫夏草的价格涨到了300元/千克,而同一时期长白山区的人参每千克在60~80元左右,这个价钱相当于当时一个工人一个多月的工资。1990年左右,冬虫夏草价格涨至平均1000元/千克。相反,人参价格降至50元/千克。

冬虫夏草在公众眼中第一次公开高调露面伴随着另一个——马家军。1993年4月,马家军在天津集体刷新女子马拉松全国纪录;8月在斯图加特世锦赛包揽女子1500米、3000米、10000米全部3枚金牌;9月在七运会上狂破世界纪录;10月在西班牙夺世界杯马拉松赛女子个人和团体冠军。震惊世界的同时,马家军也一度被国际质疑服用兴奋剂,马家军拿补品、中草药作挡箭牌。除了大家记忆中非常熟悉的“中华鳖精”,还有冬虫夏草。因此,到了上世纪90年代中期,虫草零售价涨到了2000元/千克,上等冬虫夏草价格则更高。最后作家赵瑜的报告文学《马家军调查》证实马家军确实是服用了兴奋剂,队员成绩和“中草药”无关。

2003年非典时期,传言吃冬虫夏草能增强免疫力,甚至能包治百病,虫草一夜之间变成“神草”,引发市场狂炒,其价格一路暴涨,上等冬虫夏草价格从几千元/千克猛涨到万元/千克。从此,虫草正式步入“奢侈保健品”行列,计价单位也从“千克”变为“克”。

之后的2005年和2006年,冬虫夏草价格持续走高,在2007年时价格更是攀上了历史性巅峰,其中每千克2000条规格的冬虫夏草每千克高达20万元。

2008年,由于金融危机影响,虫草的销量严重受挫,当年均价下降了40%左右。到了2010年和2011年,受生态破坏和地震等自然灾害的影响,不少冬虫夏草产区出现减产,有的地区减产幅度甚至高达40%,供应萎缩使冬虫夏草行情再次上涨,价格重新一路飞涨。2011年7月,虫草价格超过2007年的历史最高点,“西藏商城”显示,2200条规格的冬虫夏草批发价万元/千克,而1800条规格的则达到21万元/千克。此后,冬虫夏草价格一直稳中有升。

而据《南方日报》称,业内人士透露除了产量不高,炒家囤货也是虫草涨价的一大原因。从虫草产区到消费城市,多级经销商层层囤货、层层加价。一些买家常年驻扎在青海西宁,在合适的时机出手购入囤货。

经历了多事的2015年和2016年,冬虫夏草的价格持续走低。从中国中药协会中药材信息中心官方网站中药材天地网上可以看到,2000条/千克规格的冬虫夏草,青海产地价格从2015年4月的万元/千克,降至最近价格万元/千克,西藏市场价格则由21万元/千克降至16万元/千克。尽管如此,四十年来,冬虫夏草价格飞涨了近万倍。而冬虫夏草中的“极品” ——极草5X冬虫夏草价格则更为惊人,在其官网上一瓶极草5X冬虫夏草纯粉片—双层片,售价达16900元。极草号称100%冬虫夏草,按照一瓶45片、每片克规格,可折算其价格每千克超过100万元。

3.食品?药品?还是保健品?

尽管冬虫夏草的身价一路飞涨,但它是食品?药品?还是保健品?其身份扑朔迷离。

虽然《中华人民共和国药典》收录了冬虫夏草,但张贵君表示:“收录了只能说它是中药材,但药材和药品还不是一回事。药材,农民可以随便买卖,但药材不能讲功效,只有药品才能讲功效,而药品对应什么疾病,要有实验药理学验证,对人体的作用应该通过临床实验来验证。” 事实上,对于冬虫夏草的功效,一直没有较高级别的论文证据支撑,这是业内共识。

其实早在2001年,当时的卫生部就已明令限制冬虫夏草这类国家二级保护物种作为保健食品原料,保健食品中的冬虫夏草应以冬虫夏草菌丝体蝙蝠蛾拟青霉替换。2005年,接手保健品监管的国家食药总局进一步明确,保健食品的原料使用了冬虫夏草的,应以人工繁殖的菌丝体予以替换。

2008年,极草以食品类产品许可证上市,当时产品外包装上显示为“青卫食证字(2008)第630000-400025号”。但是2009年8月6日,卫生部发文《蜂胶、冬虫夏草等不得挂“食”字号》明确指出:“卫生部未曾批准过冬虫夏草作为普通食品原料使用。国家中医药管理局组织专家讨论后也认为,目前冬虫夏草尚缺少作为食品长期服用的安全性评价研究数据,建议暂不作为食品原料使用。”

2010年12月国家质检总局也发布《关于冬虫夏草不得作为普通食品原料的通知》,严禁使用冬虫夏草作为食品原料生产普通食品。

于是,青海省卫生监督所在2011年4月发布公告,撤销了“极草”的食品批号,同时规定不得在产品包装上标注卫生许可证。

然而,青海省食药监局2010年12月7日出台了《青海省冬虫夏草中药饮片炮制规范》,将“极草”定义为冬虫夏草中药饮片。2012年6月份,国家食药监总局下发《关于冬虫夏草中药饮片炮制规范有关问题的通知》,指出冬虫夏草粉碎及压制成片不属于中药饮片炮制范畴,明确要求青海省对“规范”予以修正,妥善处理,切实加强对中药饮片的监督管理。

直到2012年8月15日,国家食药总局印发了《冬虫夏草用于保健食品试点工作方案》,第一次允许冬虫夏草直接被用为保健食品的原料,试点时限为批准试点企业相关产品之日起5年。同仁堂、康美药业、青海春天、劲牌有限公司、江中药业五家企业进入了保健品试点企业名单,这终于让冬虫夏草保健品拥有了“临时身份”。

2014年7月,冬虫夏草的热点产品“极草”又一次发生了转变。当时青海省食品药品监督管理局下发了《关于冬虫夏草纯粉片相关事宜的通知》和《关于撤销青海省冬虫夏草中药饮片炮制规范的公告》,明确规定:青海春天生产的冬虫夏草纯粉片的新身份为青海省出产的冬虫夏草经加工制成的产品,为青海省综合开发利用优势资源的试点产品。基于青海春天研发的冬虫夏草纯粉片的创新属性,不归属于既有监管体系中的药品,也不归属于既有监管体系中的食品或保健食品,其产品作为滋补类特殊产品进行管理。这样,极草获得了一个仅包括它一家的“滋补类特殊产品”身份。而根据青海省监管部门的规定,其生产依旧可以获得《药品生产许可证》。

4.陷入纷争

2016年2月4日,国家食药总局在其官网发布了《关于冬虫夏草类产品的消费提示》(以下简称《消费提示》),该提示称:近期,食品药品监管总局组织开展了对冬虫夏草、冬虫夏草粉及纯粉片产品的监测检验。检验的冬虫夏草、冬虫夏草粉及纯粉片产品中,砷含量为~毫克/千克。冬虫夏草属中药材,不属于药食两用物质。有关专家分析研判,保健食品国家安全标准中砷限量值为毫克/千克,长期食用冬虫夏草、冬虫夏草粉及纯粉片等产品会造成砷过量摄入,存在较高风险。

2月6日,青海春天发布公告回应称,控股子公司春天药用生产销售的虫草纯粉片为“唯一具备合法生产、销售身份”的此类产品。公司各项试验结果均显示,以净制冬虫夏草为原料的冬虫夏草纯粉片安全无毒。

不久之后的3月4日,国家食药总局在其官网发布了《关于停止冬虫夏草用于保健食品试点工作的通知》,停止冬虫夏草用于保健食品试点工作,此时距离该期限结束还差2年时间。

迫于各方压力,青海春天向国家食药总局申请信息公开,要求公开《消费提示》所依据的检测文件。于是,3月28日,青海春天收到了国家食药总局的回函《政府信息公开告知书》,从该告知书中可知,早在2015年7月11日,国家食药总局便告知青海省人民政府停止冬虫夏草纯粉片作为综合开发利用优势资源的产品试点以及冬虫夏草用于保健食品试点工作。但青海春天否认瞒而不报,表示在2016年3月28日收到告知书才看到该文。

2016年4月1日,青海省食药监局向青海春天子公司春天药用发出《关于青海春天药用资源科技利用有限公司换发〈药品生产许可证〉的批复》。但相关人士认为,青海春天获得《药品生产许可证》只能说明它有研发药品的能力和资格了,并不代表“极草”含片现在就有了药品身份,因为青海春天的冬虫夏草纯粉片产品目前还未获得药品批准文号。

目前,青海春天控股子公司春天药用资源科技利用有限公司已被要求停止冬虫夏草纯粉片产品试点以及相关产品生产经营。公司股票停牌中。

4月5日晚间青海春天连发两则公告,一方面搬出关联公司三普药业有限公司进行救场,春天药用将获得其冬虫夏草为原料的药品全国总经销权授权;另一方面,将向国家食药总局沟通再度申请其公开发布《关于冬虫夏草类产品的消费提示》所依据的法律法规等。

在国家食药总局网站数据库中含有冬虫夏草成分的国产保健食品共有19条记录,包括同仁堂的总统牌冬虫夏草灵芝提取物西洋参提取物三七提取物口服液、劲牌生物医药有限公司的两款冬虫夏草胶囊。而且所有产品宣称的保健功能都是调节或增强免疫力,个别产品还包括抑制肿瘤或辅助抑制肿瘤。国家保健食品评审专家金宗濂教授指出,我国现有一万多种保健食品,60%都是增强免疫功能的,“增强免疫功能”是保健食品申请进入市场时最容易通过的。

然而,对于宣称的“调节免疫功能”,吴海云认为这是一种含糊而讨巧的说法:“到底是增强还是降低免疫功能?还是增加某一项功能呢?免疫功能非常复杂,比如艾滋病会引起免疫功能低下,但有些疾病却是免疫过度亢进了。很多保健品都使用调节免疫的说法,这是卫生管理部门遗留的后患。听起来能增加抵抗力,但又没有临床依据,就叫调节免疫功能。”

而在药品数据库中,药品生产企业包括青海珠峰冬虫夏草原料有限公司、青海国草冬虫夏草资源开发有限公司、青海珠峰冬虫夏草药业有限公司、桓仁满族自治县恒宝参药有限公司、华东医药股份有限公司、杭州中美华东制药有限公司6家。国产药品仅有三种:青海珠峰冬虫夏草原料有限公司生产的发酵冬虫夏草菌粉、百令片和杭州中美华东制药有限公司生产的发酵冬虫夏草菌粉。不过,发酵虫草菌粉并非野生冬虫夏草,而是人工分离出冬虫夏草菌种后在人工环境下培养的,1988年获国家卫生部正式生产批件并获名“发酵虫草菌粉”。而且这三种药品都是作为中药审批的,而中药获批门槛较低。

食品生产许可获证企业(QS)包括两家,一家是青海久泰冬虫夏草酒业有限公司,其官网宣称“久泰所产产品均为保健品酒类,有虫草酒和浆果酒两种类型。而利用发酵冬虫夏草菌粉发酵液,继续发酵生成酒精,制成的虫草酒,其保留发酵冬虫夏草菌粉的多种多糖及营养物质,既有酒的香醇,又有冬虫夏草的功效。” 按照国家法规,食品不能声称功效,该企业产品的功效宣称只能是一句空话。

另一家是扬州凯尔生物科技有限公司,不过使用的是北冬虫夏草,也就是蛹虫草,与冬虫夏草不是一个东西。蛹虫草可以人工培育,能作为食品原料,价格很低。

此外,被当作中药材售卖的冬虫夏草不在食品、保健食品、药品管辖范围内,而我国中药材中标准中并没有砷含量的限量指标。

而被视为“极品”的极草则在食品、保健食品、药品数据库中,都没有找到。

冬虫夏草是青海省的重要支柱产业,据估计,青海省的冬虫夏草年交易额超过200亿元,而全国虫草产业的产值超过300亿元。冬虫夏草的去向,牵扯多方利益。但《冬虫夏草化学成分及其药理活性研究》一文中表明目前冬虫夏草的成分已基本清楚:野生冬虫夏草中含水分,粗蛋白~33%, 粗脂肪, 总糖~, 粗纤维, 水分, 灰分。此外还含有氨基酸、脂肪酸、核苷类物质、甾醇、7%~9%的甘露醇、多糖等, 这些成分是冬虫夏草发挥可能的生理活性或药效的主要物质基础。董彩虹表示,这些物质并不是冬虫夏草特有的,目前也并没有发现冬虫夏草中含有特有的活性成分。

参考文献:

1、朱佳石,郭英兰,姚艺桑,等.冬虫夏草成熟过程中中国被毛孢和蝙蝠蛾拟青霉DNA共存及竞争增殖力、化学成分变化[J].菌物研究,2007

2、刘高强, 王晓玲, 杨青, 等.冬虫夏草化学成分及其药理活性研究[J].营养研究, 2007,(1):202-206.

3、杨涛,董彩虹.虫草素的研究进展[J] 菌物学报, 2011, 30(2): 180-190

4、中华人民共和国卫生部新药审批品种(1988年3月)

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(一)有性型冬虫夏草人工培育现状冬虫夏草人工培育在近20年来全国先后有60多个科研单位和数千人进行了大量的研究、实验和探索;云南、四川等地已在高海拔地区取得了小面积培育有性型成功的经验,但由于周期长,高海拔地区无推广对象、投资大、效益不如自然采集的高等多种因素,一直未能大面积推广。在云南、四川、浙江、甘肃、青海、北京、福建、广东、贵州、广西等省(市、区)中低海拔地区,开展人工培育有性型冬虫夏草研究也有多年,虽然在某一些环节上已有多家取得了十分可喜的成绩或成果,如云南和四川等省已在昆明、成都和重庆的室内人工批量、重复繁殖成功蝠蛾昆虫;浙江等地在室内零星繁殖成功蝠蛾昆虫;但由于没有解决虫与菌接种和批量、重复长出子座体的难关,不能称为培育成功。离小面积、小批量、多次重复在低海拔人工培育出有性型冬虫夏草的目标都还十分遥远;虽然数家已声称在中、低海拔批量培育成功有性型冬虫夏草,事实上科学的可信度极低。因为:(1)目前还无一家能长期又稳定地分离培养到正宗的冬虫夏草真菌 (即反复在培养基上批量长出子座)。青诲、云南、四川、北京等地在培养基上都培养出过子座,但其子囊孢子稀少或无子囊孢子,而且生长都不稳定,不能说明已掌握了有性型人工在中低海拔的培育技术。(2)冬虫夏草菌无性型人工培养技术比较容易掌握,在室内接种到蝠蛾幼虫上也能感染成为僵虫期,但确罕见有完成有性型,长出子座体和子囊孢子。(3)目前子座的形成除了海拔、气候、土壤、气压等多种环境因素外,其菌之间是否多菌复合感染?如果是复合感染,又是哪一些菌在起关键作用?在什么时期与冬虫夏草菌起作用?等等问题尚不清楚。因此,要在中低海拔地区人工批量和重复培育出有性型的冬虫夏草,还需做大量的研究和实验工作。就是在高海拔地区进行大面积人工培育冬虫夏草,也还需开展许多技术性的实验工作。所以有性型冬虫夏草人工培育要达到规模化或产业化生产,研究还十分艰巨,路程还非常遥远。(二)无性型冬虫夏草人工培养现状由于有性型冬虫夏草的人工培育困难太大,近10多年来,大部分开展冬虫夏草人工培育研究的单位和研究人员都纷纷转向无性型的研究与应用上。由于虫草菌无性型培养技术容易掌握,而且从自然界采集冬虫夏草分离出来的真菌,绝大部分理化性质和药理功能与冬虫夏草的有性成分相似,所以各地都把自我分离出的真菌确定为冬虫夏草菌的无性阶段,并纷纷建厂生产菌粉和开发应用。目前已从自然界的冬虫夏草体中分离出自我认为是中华虫草菌无性型共有9属31种,其中有16种已经在北京、吉林、山西、上海、青海、浙江、福建、江西、广东、云南、贵州等19个省 (市)40多家,进行深层大规模发酵培养和固体培养菌丝体和分生孢子体作为有性型冬虫夏草的代用品,部分厂家已进入大的产业化生产,如至灵胶囊、金水宝胶囊、宁心宝胶囊、心肝宝、冬虫夏草鸡精、虫草胶囊、冬虫夏草酒、冬虫夏草人参补酒等20多种产品年产值均达千万元至数亿元。而且,由于用菌丝体和分生袍子人工繁殖周期短、产量高,今后作为冬虫夏草有性型的代用品,开发、应用的潜力还极大。三、冬虫夏草和蝠蛾昆虫人工培育技术(一)冬虫夏草茵的寄主昆虫饲养繁殖技术要进行冬虫夏草的人工培育,首先必须大量人工饲养寄主一一蝠蛾属昆虫。蝠蛾一生中有98%的时间都在土壤内生活,仅有一13d的成虫期营地面生活。所以,这类昆虫的人工饲养管理主要是在土壤中开展。1.蝠蛾的饲养工具(1)蝠蛾卵的饲养工具。饲养蝠蛾卵可用两种方法,一是用直径15一20cm的玻璃培 养皿,垫上2一3层滤纸,皿内放一块吸水棉保持湿度,每皿可饲养200一500粒卵。此法利于观察,但难掌握湿度。二是用l0cm xX5一8cm的广口瓶或者25cm x 30cm的玻璃饲养 缸,内置3一5cm厚的过筛细腐殖土,种上1一2棵珠芽寥植物,把卵放养于土表至lcm深的土层中,每瓶可饲养300一1000粒卵;饲养时只要掌握住植物不枯萎,即可不加湿度。此法卵的孵化率高,但观察和移植幼虫对比较困难。(2)幼虫的饲养工具有以下4种。a.玻璃养虫缸:用18一25cmX30一35cm的玻璃缸,也可用标本浸泡缸,放置土壤15一25cm,种上幼虫取食的植物,把刚孵化幼虫移入缸内,每缸可饲养10一30头幼虫。b.地下养虫箱:箱一般高30一50cm,宽20一25cm,厚3一5cm。饲养箱骨架用钢筋 焊成,上面钢筋做成提手,便于提动;宽的两面用3一5mm玻璃,便于观察虫体活动;底 和两个侧面装上16孔目的铜纱网,便于水分渗入。然后装上土壤,种植饲料植物,每箱放养20一50头幼虫;在较坚实的地上挖一个比饲养箱体积稍大和深的槽,把养虫箱放入槽中,观察时将养虫箱提出地面,抹去外表玻璃上的土壤,即可清楚看到幼虫活动情况。c.大型养虫笼:在半自然的状况下,选择一块排水好、土质疏松的场地,挖长12一l5m、宽2一3m、深4Ocm的深槽,底部和四周垫上尼龙纱网(最好用双层,小虫不易钻出),再把疏松的腐殖土铲进填平,种上幼虫食物,放入幼虫饲养,每平方米可放养30一50头;该法有利于大规模饲养,但观察困难。d.用各类盆具裸露饲养:把植物饲料洗净放入盆中,放入幼虫饲养,盆口覆盖一层黑布或者黑纸遮光。此法利于生活史观察,但要注意勤换饲料和清除粪便。(3)蛹和成虫的饲养工具。制作长50cm、宽50cm、高55一60cm的养虫箱。底部用薄铁板或双层铜纱网封底;顶和四周用铁纱或尼龙纱封盖,前面可制成一道活动纱网门。在箱底放入10一20cm的土壤,种上植物,把蛹和成虫放养土中,此法可进行密植饲养。2.饲养技术要点(1)土壤的选择。土壤是蝠蛾昆虫一生中最主要的活动场所。土壤条件是否适合该虫生活是人工饲养成活率高低的关键之一。最适宜蝠蛾生长的是高山草甸土;次之是流石滩和草甸混合土;再次之是高山棕色、暗棕色林土,其他土壤对此虫生长不良。(2)食料的选择。幼虫最喜取食圆穗蓼、珠芽蓼、黄芪、小大黄等植物的嫩根芽。由于蝠蛾昆虫是一类杂食性昆虫,在无上述植物的地方,可用禾本科 (如青稞、麦、谷芽等);十字花科、莎草科的嫩根饲养。在中、低海拔地区(适宜生活的温度下)用土大黄、胡萝卜、白萝卜、白薯 (红苕)、马铃薯、苹果等饲喂也能正常生长发育,最好为土大黄、胡萝卜和白薯三类。(3)温、湿度的选择。蝠蛾昆虫是一类耐低温而怕高温的昆虫。最适宜在15一19C中生活成长;此虫最适宜空气湿度75%一85%,土壤含水量40%一45%之间。3.管理技术(1)成虫期。成虫不取食任何食物,只要保持水分和适宜温度即能正常成活和产卵。但蛾子栖息环境与产卵量有关。成虫最喜选择有杜鹃和蝠蛾幼虫取食的蓼科等植物根旁产卵,所以在蛾子交配产卵前植上几株相关植物最佳;另外不能有强光影响。(2)卵期。要使卵能正常孵化,一定要掌握好适宜的温、湿度。(3)幼虫期。幼虫由于生长期长,而且虫体壁薄而易破,饲养时一定要细心,除了必要的观察、换土和换食料外,尽量减少翻动。幼虫的饲养关键是初孵的幼龄时期,初孵幼龄虫要给足细小鲜嫩、湿度不高的食物;土壤最好经过筛检,以免粗硬物擦伤主体。此外,为了延长食料和土壤不霉坏,更换前用紫外灯照射杀菌l5min,土壤也可在阳光下暴晒1一2h后再用。(4)蛹期。养蛹时,把养蛹器皿内的土壤压实,然后用与蛹粗细的木棍人工造一土室,土室略斜,深约2一3cm,每室放一蛹,放蛹时,蛹头向土表面,上用细土盖住。蛹的温湿度,可控制在大气湿度80%一85%,土壤含水量42一45%之间,温度18一22℃之间。[二]冬虫夏草菌的人工培养技术要获得纯正的冬早夏草菌种必须进行人工的分离、纯化、复壮、保存等工作。1.分离冬虫夏草菌的技术与条件(1)材料要求。获得纯的菌种对材料要求比较严格;一般来说如果是进行冬虫夏草的组织块分离法,最佳的分离材料是每年的10月底至11月份,青藏高原高寒草甸土壤刚开始冻结时期采的材料,这个时期冬虫夏草菌刚感染蝠蛾幼虫进入僵虫期不长时间,嫩小的子座芽刚长出虫头部一,虫体内其他杂菌较少,最易进行分离。如果是第二年5一6月份采的材料,僵虫体和子座上都有许多种杂菌共生或腐生,难获得纯菌种。若用子囊孢子进行分离培养,材料最好在每年的7月中、下旬子囊孢子刚有部分成熟期采集分离培养。(2)操作方法。有以下3步。a.僵虫体 (即菌核)的分离:分离前,用水刷洗干净主体表面,再用无菌水清洗2一3次;用一的升汞溶液,对分离材料进行约3一5min的表面消毒;再用无菌水清洗。选取与胸足为界的前段部分。用解剖刀切去表皮,避开消化道,取血腔菌丝切成芝麻粒大小,压入平板培养基中,每皿1一2粒。置于15一19℃中培养,待菌落长出一时,挑选少量菌丝反复在平板培养基上分纯2一4次,确定无其他杂菌后,移入试管保存和培养。b.子座芽分离:从僵虫头顶切下洗净的子座芽,置入升汞液中消毒2一3min,用无菌水洗净,切取中间部位组织块压入培养基中;培养条件同a。c.子囊孢子分离:用透明纸袋套住子囊孢子成熟的子座,让子囊孢子弹跳粘贴在纸袋上,然后,把有子囊孢子的纸袋浸入25%的葡萄糖液中,洗下孢子,放入15一19℃中培养,每天镜检,当袍子萌发时,用微吸管吸单个孢子滴于平板中培养;培养条件同a。也可把整个成熟的冬虫夏草带回室内,用棉纸把僵虫和连虫体的子座包住,仅留出有孕部分,在无菌室中,横放,下置一片载玻片,随时保持主体湿度;每天镜检,当看到子囊孢子弹到玻片时,用微吸管吸到平皿的培养基中培养;培养条件同a。(3)培养基的选用。a.马铃薯葡萄糖琼脂培养基 (PDA),此种配方是所有虫草菌属真菌的通用培养基,在分离培养初期可用该配方,不过菌种生长不十分旺盛,而且易老化、退化。b.加富培养基 (1):多性蛋白脐10g,葡萄糖50g,磷酸氢二钾1g,硫酸镁,活蚕蛹30g,生长素μg,琼脂20g,加水1000mL,pH:。加富培养基 (Ⅱ):蛋白脯40g,葡萄糖40g,去皮鲜马铃薯100g,磷酸氢二钾1g,硫酸镁,牛肉膏10g,生长素μg,蝠蛾活幼虫 (磨碎)30g,琼脂20g,高寒草甸土浸出液10OOmL,pH:。在加富培养基上,菌落比在PDA培养基上生长旺盛和迅速;加富Ⅱ号又优于Ⅰ号。2.生长特性 冬虫夏草菌的分离培养中须掌握温度、pH值、光照、碳和氮源及无机盐的利用状况。(1)不同温度对菌丝生长的影响。冬虫夏草菌喜偏低温度。在0一4℃时能缓慢生长;5一8℃时生长速度加快;10一19℃是此菌较适生长发育的范围;最佳生长温度为15一l9℃。超过20℃菌丝猛长,菌落由白色变为灰黑或棕黄色,开始出现变异,所以不宜高温培养。(2)对pH值的要求。冬虫夏草菌是一种偏酸性真菌,最适pH值为一,当pH值为以下和6以上时,随着增高或降低,生长缓慢至不生长。(3)光照的影响。此菌的子囊孢子萌发和菌丝生长初期,适应于弱光和短光照,后期则适应于较强光照。在人工培养中,菌丝、分生孢子和子座等具有明显的趋光性,向阳面生长多而密,背光面生长稀疏,全黑环境下培养的各种菌态纤弱、细长、稀疏。(4)对碳源的利用。冬虫夏草菌可利用多种碳源,但以葡萄糖和麦芽糖合用时生长最快,单用葡萄糖时也能良好地生长,次之是马铃薯等淀粉,再次之是蔗糖。冬虫夏草菌是一种由寄生活体寄主,再由腐生阶段发育成熟的真菌,所以对氮源中的多种有机氮均能较好的利用。而以活虫体最佳;蛋白胨与酵母膏合用生长也十分理想,次之是二者单独使用,再次之是牛肉膏等。而对无机氮如硫酸铵、硝酸钾等利用较差。对灰分养料有一定的需求,在有微量的硫酸镁、磷酸氢二钾的培养基中生长旺盛,次之是磷酸二氢钾,其他钠、钙、铁、铜等无机盐也可利用。3.培养方式 冬虫夏草菌分离纯化后,即可作为各种实验和扩大生产应用。(1)其扩大生产的方法常有三种:固体静置培养法、振荡培养法和大罐通气发酵培养法。a.静置培养:主要用在固体培养,如试管斜面、三角瓶培养、米饭培养等等。在静置培养中只要掌握好温度和光照即可使菌正常生长。当斜面上的分生孢子成熟后,即可存入1一2℃的冰箱中保存8一14个月,也可作为种子直接用于生产。b.振荡培养:采用液体培养菌种或小规模繁殖培养,都可用振荡培养。振荡培养的培养基,把固体培养基减去琼脂即可。设备最好选用恒温振荡培养机,用三角瓶置液体培养基,把试管固体菌种接入即可培养。经不断振荡使液体培养基中各种成分混合均匀而不致沉淀,同时促进气体与液体接触和交换,使氧进入液体培养基中,利于菌丝生长和分生孢子形成。c.大罐通气发酵培养:在大规模生产菌丝和分生孢子等菌粉时,必须用大罐通气发酵培养法。该方法通气是采用吸气或真空泵减压等方法,经过滤器除杂菌,送入罐内液体培 养基中供冬虫夏草菌的生长发育。(2)发酵工艺流程。自然冬虫夏草分离纯化→ 试管斜面种→ 振荡器液体一级 种→ 二级种→ 小型种子发酵种子罐→ 生产发酵罐 → 浓缩→ 喷粉干燥→ 成品菌粉。冬虫夏草菌罐中发酵要求温度在20一25℃,罐压一(一),通气量为一*;注入发酵罐中的液体培养基为罐容的65%一75%为宜。 接种量为10%,搅拌速度为180r/min,培养时间72一96h,即可放罐浓缩和喷粉。(3)发酵培养基多用。鲜马铃薯 (去皮)8%,蔗糖2%,玉米淀粉,蚕蛹粉1%,蛋白胨,硫酸铵,pH值一。(4)发酵培养成品标准。分生孢子即几全脱落母体孢子梗,孢子梗数量增加不明显 时,在镜下计数检查,每毫升含分生孢子18亿一25亿个;残糖低于1%;氨基氮低于,即可成为成品菌液。4.冬虫夏草菌回接要点 把有性型或无性型的冬虫夏草菌孢子回接到寄主昆虫体上,是人工培养有性型冬虫夏草和复壮无性型菌种的关键措施。(1)回接时期。冬虫夏草回接关键在于选择寄主昆虫抗菌薄弱时期,一是蜕皮期;二是幼虫取食活动激烈,摩擦损伤率较高时期。(2)回接方法。又分两种。a.喷雾法:当饲养的蝠蛾幼虫达4一6龄虫,有1/3以上的幼虫蜕皮时,把幼虫集中,用子囊孢子或者分生孢子对入5%一10%葡萄糖液喷雾到虫体或食物上,接种后约30min,菌液在虫体上略干,把幼虫放回土壤中任其自然生活。此法感病率高,但缺点是,幼虫不易从土中取出集中,而且集中时幼虫有互相残杀的习性,虫体被咬伤后,易被杂菌感染致死,冬虫夏草菌丝未充满体腔时,伤虫就会腐烂,不能形成僵虫 (菌核)。b.自然接触法:在大面积半自然土壤中饲养蝠蛾幼虫,定时取小样观察幼虫生长状况,当大部分幼虫适宜感病时,用饲料植物浸菌液种植和用细土拌菌接种,均匀撒入养虫的地表上,然后喷水,使菌渗入土中,幼虫取食活动时接触感染。此法寄主感染率不太高,但一经感染致病,冬虫夏草菌长势好,而且未感病的蝠蛾幼虫能正常生长,繁殖后代。

--------人工可以种植冬虫夏草------ “九五”科技攻关课题“青海省冬虫夏草生态学及人工培养技术的研究”课题12月12日在西宁通过专家鉴定验收,该课题的研究成果已达到国际先进水平。 1996年,原青海省科委即向青海省畜牧兽医学院下达了该课题。该院草原研究所科研人员克服种种困难在平均海拔4000米的虫草产区,对青海省冬虫夏草先后进行了寄主昆虫种类调查及生态学研究、寄主昆虫人工饲养技术研究、青海不同地区冬虫夏草真菌研究以及人工冬虫夏草接种的研究,利用分离出的菌丝体在全人工培养基中成功获得了与天然冬虫夏草形成一致的子实体。该课题的研究成果对青海省冬虫夏草的进一步开发提供了基础资料。 日前,此技术已获农业部支持,在青海普通农户进行大面积推广种植,并逐渐向全国推广。

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