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PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!
技术的研究进展
摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。
关键词 PCR技术;研究进展;应用
中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02
PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。
1 PCR技术原理
PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。
2 PCR技术的分类
在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。
实时荧光定量PCR技术
1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。
荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。
多重PCR技术
多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。
在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。
单分子PCR技术(SM-PCR)
单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。
单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。
3 PCR技术的应用
PCR技术在水产上的应用
基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。
PCR技术在微生物检测上的应用
1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。
4 展望
传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。
5 参考文献
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pcr实验步骤如下：
1.初始化步骤。这仅对热启动PCR必不可少。此步骤将溶液加热至94-98°C，以激活DNA聚合酶。该步骤的时间取决于所使用的聚合酶。
2.变性步骤。DNA是双链分子，DNA扩增需要引物与单链DNA模板相互作用。在此步骤中，将反应混合物加热至94-98°C并保持20-30秒，以破坏两条链之间的氢键并生成单链DNA分子。此时进入PCR循环。
3.退火步骤。变性后，反应混合物中的DNA模板是单链的。由于引物与DNA模板互补，当反应温度降低到50-65℃时，引物会与模板序列匹配，互补碱基之间形成氢键。退火温度取决于所用引物的Tm，一般比引物Tm低3-5℃左右。该步骤将持续约20-40秒以完全退火，然后聚合酶将定位到引物-模板杂交体以开始DNA组装。
4.伸长步骤。在此步骤中，DNA聚合酶开始合成DNA，因此温度应为DNA聚合酶的最适温度。一般选择72°C，但有些酶在68°C时效果更好。
这一步与体内DNA复制非常相似，DNA聚合酶将dNTPs添加到引物中，以5'到3'方向与模板互补，最终产生新的双链DNA片段。延伸时间取决于目标DNA片段的长度和DNA聚合酶的能力。一般来说，DNA聚合酶每60秒产生一千个碱基。
步称为一个循环，每循环一次，目标片段量翻倍。一个PCR过程使用30-35个循环。在PCR循环的早期，PCR产物以指数速率积累，而在PCR循环的后期，随着dNTPs、引物的减少和DNA聚合酶在变性温度下的失活，反应减慢，PCR速率逐渐下降。
6.最终伸长率。30-35个循环结束后，在68-74℃的温度下最终延伸约5-10分钟，以充分延伸剩余的单链DNA。
7.贮存。最终产品可以在PCR机器中维持温度在4-10°C。
最早接触PCR是在做科创和本科毕业论文相关实验的时候，通过扩增野生型菌株和突变体菌株的某个基因，然后通过AS-PCR方法，设置温度梯度，筛选一对能够区别S和M菌株的特异性引物。
那个时候对PCR有一个大概的影响，其实在操作方面是没什么问题的。但是仔细想起来，和其他实验一样，都是一知半解，对PCR亦是如此。因此，我觉得有必要重新学习一下PCR相关的各种技术和原理。
【进入正题】
PCR (polymerase chain reaction)聚合酶链式反应，又称体外DNA扩增技术，在1985年由美国Cetus公司的Kary Mullis首创，可以将微量目的DNA片段扩增一百万倍以上。Kary Mullis本人因此获1993年诺贝尔化学奖。
前面分享过PCR之歌，这里在系统整理PCR相关知识之前，重温一下。
一、PCR的原理
在 DNA聚合酶催化下，以母链DNA为模板，以特定引物为延伸起点，通过变性、退火、延伸等步骤，体外复制出与母链模板DNA互补的子链DNA的过程。
聚合酶链式反应用于扩增一小段已知的DNA片段，可能是单个基因，或者仅仅是某个基因的一部分。与活体生物不同的是，PCR只能复制很短的DNA片段，通常不超过10kbp。DNA是双链分子，因此用互补DNA双链的构造单位（核苷酸）来度量其大小，单位为碱基对（base pair, bp）。
二、PCR反应成分
template
过多：
非特异性条带增加。
过少：
PCR产量降低。
primer
预扩增核酸片段两端的已知序列，决定特异性。
偏高：
非特异产物扩增及错配，增加引物之间形成引物二聚体，产量降低。
偏低：
产量降低。
polymerase
耐高热
偏高：
引物非特异产物的扩增。
偏低：
产物量降低。
dNTP
dATP、dGTP、dCTP、dTTP
过高：
加快反应速度，还可增加碱基的错误掺入率和室验成本。
过低：
反应速度下降，可提高实验的精确性。
buffer
Mg2+
Taq酶具有Mg2+依赖性，显著影响反应的特异性和扩增片段的产量。
过量：
能增加非特异扩增并影响产率。
过低：
则酶活性显著下降。
10~50 mM Tris- Cl ()
维持Taq酶作用环境的偏碱性
25~50 mM KCl
促进引物退火，＞50 mM会抑制Taq酶的活性。
100μg/ml牛血清白蛋白(BSA)
对酶有一定的保护性，如质量不好将起相反的作用，建议使用乙酰化的BSA。明胶、Tween-20、二硫苏糖醇(DTT)也有类似作用。
三、PCR反应基本步骤
一般的聚合酶链式反应由20到35个循环组成，每个循环包括以下3个步骤：
变性(Denaturation)：
退火或称接合,复性(Annealling)：
延伸(Extension)：
四、PCR反应条件优化
1、变性温度和时间：
保证模板DNA解链完全是保证整个PCR扩增成功的关键。
加热90~95°C, 30~60s，再复杂的DNA 分子也可变性为单链。
温度过高或高温持续时间过长，可对Taq酶活性和dNTP分子造成损害。
2、复性温度和时间:
PCR扩增特异性取决于复性过程中引物与模板的结合。
复性温度越高，产物特异性越高。复性温度越低，产物特异性越低。
需根据引物的Tm值具体设定。
3、延伸温度和时间:
一般位于Taq酶最适作用温度70~75°C之间。引物小于16个核苷酸时，过高的延伸温度不利于引物与模板的结合，可以缓慢升温到70~75°C。
延伸反应时间，可根据待扩增片段的长度而定，小于1kb, 1min足够；大于1kb需加长延伸时间。Taq酶可根据1kb/min增加时间。
这里需要注意，延伸时间过长可能出现非特异扩增。因此需要设置恰到好处的延伸时间。
4、循环数:
其他参数选定后，PCR循环次数主要取决于模板DNA的浓度。
理论上说20〜25次循环后，PCR产物的积累即可达到最大值，实际操作中由于每步反应的产率不可能达到100%，因此不管模板浓度是多少，20~30次是比较合理的循环次数。循环次数越多，非特异扩增增加。
五、PCR延伸技术
由PCR延伸而来的技术很多，这里只介绍日常实验中常用到的几种。
PCR
降落PCR，主要用于PCR的条件的优化。在许多情况下引物的设计使得PCR难以进行，例如特异性不够易错配等。退火温度过高会使PCR效率过低，但退火温度过低则会使非特异扩增过多。
因此，前面几个循环的起始退火温度设定为比引物的最高熔解温度（Tm）再高几度。前几循环温度逐渐下降至设定的最终Tm。通过较高温度获得特异性匹配较高的模板后，再以较低温度高效率扩增。
逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction，RT-PCR)的原理是：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo（dT）或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。
PCR/quantitative PCR
实时荧光定量PCR技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号积累实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。
PCR
先用低特异性引物扩增几个循环以增加模板数量，再用高特异性引物扩增。
PCR
重叠延伸PCR分为2种：用重叠延伸PCR做定点突变 和 用重叠延伸PCR做序列缺失突变，即重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR)
用重叠延伸PCR做定点突变（由于原理简单，直接上图）
该步一定要用pfu酶，不能用Taq酶，因为Taq酶容易在PCR产物末端加A，会造成产物移码突变。
用重叠延伸PCR做序列缺失突变
6.高GC含量PCR
具有高GC含量（>65%）的DNA模板由于G和C碱基间的强氢键影响，比较难以扩增。富含GC的序列同时也涉及二级结构。因此，富含GC的序列可导致DNA聚合酶沿模板扩增时“卡顿”并干扰DNA合成。
为了扩增高GC含量的片段，双链模板必须解离，以便引物与模板结合，并使DNA聚合酶能够读取到序列。为了克服强GC相互作用，最常用的方法是使用DMSO等PCR添加剂或辅助溶剂来帮助DNA变性。然而，这些试剂通常会降低引物的 Tm，所以退火温度也需进行相应的调整。
高合成能力的DNA聚合酶由于与模板的结合能力更强，有利于完成高GC含量PCR。超高热稳定性DNA聚合酶也有利于高GC含量PCR，因为较高的变性温度（如，使用98°C代替95°C）可能会促进双链解离和PCR扩增。
等位基因特异性PCR（ allele specific PCR，AS-PCR ），是指利用引物与模板之间的碱基错配可以有效地抑制PCR反应，进而达到模板区分（等位基因区分）的目的。
由于PCR过程中引物延伸是3'端开始的，所以3'末端的碱基对引物的延伸来说处于至关重要的位置。如果这个碱基与模板互补，则引物能不间断延伸，PCR可以正常进行，得到特定长度扩增带，反之，则不能延伸。所以只要将与正常等位基因所不同的那个突变碱基安排在引物3'最末端，当用某一含突变序列的引物进行PCR时，如果得到特异条带，表明被测基因含有该种突变。没有特异扩增带出现，则表示没有这种突变。
注意：这里由于仅仅利用了引物3'末尾碱基的错配，因此需要摸索一个合适的Tm，才能达到检测目的。
【Reference】
Mullis, Kary B. et al. "Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences" 美国专利第4,683,195号
类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性--退火（复性）--延伸三个基本反应步骤构成：1.模板DNA的变性：模板DNA经加热至90~95℃一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；2.模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55~60℃，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；3.引物的延伸：DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下，于70~75℃，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程，就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。
重庆交通大学物理创新实验报告班级：2010检测一班作者1：米翔作者2：于海毓作者3：李然明 指导老师：韩向宇实验名称：良导体热导率的动态法测量一．实验目的1．通过实验学会一种测量热导率的方法。2．解动态法的特点和优越性。3．认识热波，加强对拨动理论的理解。二．实验原理实验采用热波法测量铜、铝等良导体的热导率。简化问题，令热量沿一维传播，周边隔热,如图1所示。根据热传导定律，单位时间内流过某垂直于传播方向上面积A的热量，即热流为 （1） 其中K为待测材料的热导率，A为截面积，文中 是温度对坐标x的梯度,负号表示热量流动方向与温度变化方向相反．dt时间内通过面积A流入的热量 图1 棒 元 若没有其他热量来源或损耗，据能量守恒定律，dt时间内流入面积A的热量等于温度升高需要的热量 ，其中C，ρ分别为材料的比热容与密度。所以任一时刻棒元热平衡方程为（2）由此可得热流方程 （3）其中 ，称为热扩散系数．式（3）的解将把各点的温度随时间的变化表示出来，具体形式取决于边界条件，若令热端的温度按简谐变化，即 （4）其中Tm是热端最高温度，为热端温度变化的角频率。另一端用冷水冷却，保持恒定低温 ，则式（3）的解也就是棒中各点的温度为 （5）其中T0是直流成分， 是线性成分的斜率，从式（5）中可以看出：1) 热端(x=0)处温度按简谐方式变化时，这种变化将以衰减波的形式在棒内向冷端传播，称为热波． 2) 热波波速： （6）3) 热波波长： （7）因此在热端温度变化的角频率已知的情况下，只要测出波速或波长就可以计算出 D．然后再由 计算出材料的热导率K．本实验采用.式（6）可得 则 （8）其中，f、T分别为热端温度按简谐变化的频率和周期．实现上述测量的关键是：1) 热量在样品中一维传播．2) 热端温度按简谐变化．三．实验仪器1. 仪器结构实验仪器结构框图见图2(a)，该仪器包括样品单元，控制单元和记录单元三大部分．实际仪器由两种工作方式：手动和程控．他们都含样品单元和控制单元，不同的只是记录单元．前者用高精度x-y记录仪，后者用微机实现对整个系统的控制、数据的采集、记录和绘图，学生自行数据处理． 图2(a) 热导率动态测量以结构框图仪器主机由用绝热材料紧裹侧表面的园棒状样品（实验取铜和铝两种样品）、热电偶列阵（传感器）、实现边界条件的脉动热源及冷却装置组成，见示意图2(b)．样品中热量将只沿轴向传播，在任意一个垂直于棒轴的截面上各点的温度是相同的，于是，只要测量轴线上各点温度分布，就可确定整个棒体上的温度分布．温度的测量采用热电偶列阵．将热电偶偶端均匀插在棒内轴线处，两个相邻偶间距离均为2cm，为保持棒尾的温度 恒定，以防止整个棒温起伏，用冷却水冷却． 图2(b) 主机结构示意图2. 脉动热源及冷却装置为实现热温度随时间做简谐变化，在样品棒的一端放上电热器，使电热器始终处于T/2开、T/2关的交替加热的状态，于是电热器便成了频率为 T的脉动热源(图3(a))。由于存在热滞后，并不是加热器一停止加热，棒端温度就立刻冷却下来。为增加曲线变化幅度，由电脑控制“进水电磁阀门”使得在加热半周期时，热端停止供水；停止加热半周期时，热端供水冷却。为了保证冷却处于一个稳定的温度T0，冷断要一直保持供水。当脉动热源加热到一定时间后，棒的热端就会出现稳定的幅度较大的温度脉动变化（图3(b)）．当热量向冷端传播时，根据傅里叶分解，则棒端温度为脉动形式： （9）式(9)说明T是由 倍频的多次谐波组成，当这些谐波同时沿棒向冷端传播时，高次谐波迅速衰减，见图3(c)，约至6~7厘米后就只剩基波，其波形为(a) (b) (c) 图3 简谐热端温度的形成 （10）若取此处x=0，它就是边界条件式(4)温差电偶列阵中各点均为由热端传来的与式（10）一样的热波．实验中还需提供一个周期与基波相同的方波做计算位相差的参考方波，用它参考求出波速V，已知周期T，可用式（8）计算K值．3． 控制单元及作用 控制单元包括主控单元和相关几个单元，作用是：1） 对来自热电耦的待测温度信号进行调理。2） 提供“手动”和“程控”两种工作方式。仿真软件采用程控模式，操作软件控制实验的进行。3） 提供周期为60，120，180，240秒的参考方波。4） 控制加热器半周期开，半周期关的周期性供电。5） 控制进水电磁阀门半周期热端停水，停止加热的半周期进水。4. 数据记录 “程控”方式下数据自动发送到电脑进行记录和处理，处理过程参见“实验指导”中的“操作软件使用”。四． 实验内容测量铜棒和铝棒的导热率。1． 打开水源，从出水口观察流量，要求水流稳定1) 热端水流量较小时，待测材料内温度较高，水流较大时，温度波动较大。因此热端水流要保持一个合适的流速，大约200ml/分。仿真软件对应实验场景中表示流速的箭头 保持一个合适的大小（大小如“ ”即可）。2） 冷端水流量要求不高，只要保持固定的室温即可。一般取200ml/分，仿真软件对应实验场景中表示流速的箭头 保持对应的大小。3） 调节水流的方法是保持电脑操作软件的数据显示曲线幅度和形状较好为好。4） 两端冷却水管在两个样品中是串连的，水流先走铝后走铜。一般先测铜样品，后测铝样品,以免冷却水变热。5) 实际上不用冷端冷却水也能实验，只是需要很长时间样品温度才能动态平衡。而且环境温度变化会影响测量。 水流调节在仿真软件中是通过在实验场景中鼠标点击对应水龙头完成的。2． 打开电源开关，主机进入工作状态在实验场景中通过鼠标右键弹出菜单，选择仪器电源开关。3.“程控”工作方式1) 完成前述实验步骤，调节好合适的水流量。因进水电磁阀初始为关闭状态，需要在测量开始后加热器停止加热的半周期内才调整和观察热端流速。2) 打开操作软件。 操作软件使用方法参见“实验指导”中“操作软件使用”部分说明。3) 接通电源。在实验场景中鼠标右键弹出菜单，选择“打开电源”接通测量仪器电源。4）在控制软件中设置热源周期T（T一般为180s）。选择铜样品或铝样品进行测量。测量顺序最好先铜后铝。6) 设置x,y轴单位坐标。x方向为时间，单位是秒，y方向是信号强度，单位为毫伏(与温度对应)。7) 在“选择测量点”栏中选择一个或某几个测量点。8) 按下“操作”栏中“测量”按钮，仪器开始测量工作，在电脑屏幕上画出T~t曲线簇，如下图所示。上述步骤进行40分钟后，系统进入动态平衡，样品内温度动态稳定。此时按下“暂停”，可选择打印出曲线，或在界面顶部“文件”菜单中选择对应的保存功能，将对应的数据存储下来，供数据测量所用。“平滑”功能尽量不要按，防止信号失真。9) 实验结束后，按顺序先关闭测量仪器，然后关闭自来水，最后关闭电脑。这样可以防止因加热时无水冷却导致仪器损坏。铜的热导率测量： 铝的热导率测量： 4. 数据处理测量数据额T~t曲线簇计算机将该数据保存好后进行数据处理。从得到的T~t曲线簇中选取数条曲线进行处理，一般铜取6条，铝取5条。对取出的曲线测出其峰值。上图中一共取了7条曲线，对应的测量点位置分别为l1=0cm, l2=2cm, l3=4cm,…l7=12cm，每条曲线对应峰值的时间分别为t1,t2,… t7。相邻曲线峰值对应的时间差和距离差分别为t和l。曲线1和6对应的时间差为t6-t1=5t,距离差为l6 – l1= 5l。则热波波速： 。根据式（8） 即可得到样品的热导率,单位是w/(m*K)。 1. 计算铜的热导率： 2. 计算铝的热导率： 五．注意事项1． 仿真软件操作提示：在界面上单击鼠标右键或选择“实验帮助”，选择弹出菜单的“实验内容”、“实验指导”指导实验进行。鼠标在界面移动时，相应物体位置会出现提示信息。2． 为防止因加热时无水冷却导致仪器损坏，实验前要首先打开冷热端进水龙头，实验结束时要先关闭测量仪器，然后关闭自来水，最后关闭电脑。3． 实验中尽量保持热端水流稳定，以免水流波动导致系统无法达到动态平衡，从而影响测量结果。4． 测量过程中，无法更改样品类型和热源周期，暂停时候可以更改加热周期。实验前选好热源加热周期，周期一般取180s。实验中尽量不要变动热源周期，以免破坏系统的动态平衡。5． 实验中一次测量中超过最大时间长度9000s后，系统将自动停止测量。如果需要继续测量，请先保存当前数据后在“新建”新的数据文件进行测量。6． 选择工具栏“刷新”功能，将按照当前操作软件设置刷新数据显示。7． 按下“暂停”按钮后，加热器暂停加热，热端开始进水。暂停期间系统暂停测量数据。按下“测量”恢复运行时，当前时刻与暂停前时刻之间数据显示的一条直线表示暂停期间没有数据测量。8． 按下“平滑”按钮平滑数据时，将覆盖当前数据。如果要保留当前数据，请在平滑前进行保存。9． 为了避免残余高次谐波对测量的影响，在数据处理前最好先对数据曲线进行滤波处理。按下“滤波”按钮将对当前数据显示区内数据进行处理，处理结果中只保留当前显示区内的数据。如果需要保留其他数据，请在滤波处理前保存。10．“滤波”处理时，要保证数据显示区内至少有2个完整周期的以上数据，否则将造成处理结果不理想。11．按下“计算”按钮进入“ 数据处理”窗口系统认为本次测量结束，将自动停止测量。如果需要继续测量时，请关闭“数据处理”窗口后，重新建立一个数据文件，然后在开始测量。12．按下“计算”按钮进入“ 数据处理”窗口时，系统把当前数据显示区的加热周期作为数据处理的加热周期。为了避免计算错误，数据来源的显示区内加热周期不要有变化。六．思考题1． 如果想知道某一时刻t时材料棒上的热波，即T~t曲线，将如何做？答： 观察测量状态显示中的运行时间，到待测时间时，摁下操作栏中的暂停键即可得到某时刻材料棒上的热波。2． 为什么较后面测量点的T~t曲线振幅越来越小？答：高次谐波随距离快速衰减，所以较后面测量点的T~t曲线振幅越来越小。
你好！从你的描述中，我了解到你最初的实验方法是对比实验（contrast experiment），但是导师认为这个名称不太准确，而真正的对比试验应该做独立样本t检验。关于独立样本t检验，它是一种常用的统计方法，用于比较两个独立样本之间的差异。具体来说，它通常会涉及到以下几个步骤：
1. 设定假设：在进行独立样本t检验之前，需要先设定一个原假设和一个备择假设，用来描述两个样本是否存在显著差异。
2. 确定显著性水平：根据研究目的，需要确定一个显著性水平，通常是或，来决定是否拒绝原假设。
3. 样本数据收集：收集两个独立样本的数据，然后计算它们的均值和标准差。
4. 计算t值：通过计算两组样本的均值差异和标准误差，可以得出t值。
5. 判断显著性：最后，将计算得到的t值与t分布表中对应的临界值进行比较，以决定是否拒绝原假设。
关于你所使用的教学设计实验是否属于对比实验，这需要考虑你所研究的内容具体情况而定。我建议你可以进一步查阅相关文献，对比对照一下你所使用的实验方法和普遍被认可的对比实验方法的异同，以便更好地确定实验方法名称。希望这些信息能对你有所帮助！
声明：该答案来源于“知否AI问答”，一款全方位“智能问答”、“知识获取”和“内容生成”系统。
大学？硕士？
记忆、注意怎么用问卷做啊，只能实验吧。你见过用问卷来作这方面研究的吗？你可以做幸福感什么的，比如说学习成绩与幸福感之间的相关性研究等等。
1、用好样式
编写论文，一定要使用样式，除了Word原先所提供的标题、正文等样式外，还可以自定义样式。
一般情况下，不论撰写学术论文或者学位论文，相应的杂志社或学位授予机构都会根据其具体要求，给论文撰写者一个清楚的格式要求。比如，要求宋体、小四，行间距17磅等等。这样，论文的撰写者就可以在撰写论文前对样式进行一番设定，这样就会很方便的编写论文了。
2、使用交叉引用设置编号
一定不要自己敲编号，推荐使用交叉引用，否则手动输入的编号极可能给你文章的修改带来无穷的后患。标题的编号可以通过设置标题样式来实现，表格和图形的编号通过设置题注的编号来完成。在写"参见第x章、如图x所示"等字样时，不要自己敲编号，应使用交叉引用。这样做以后，当插入或删除新的内容时，所有的编号和引用都将自动更新，无需人力维护。并且可以自动生成图、表目录。
3、对齐
一定不要用手动敲空格来达到对齐的目的。只有英文单词间才会有空格，中文文档没有空格。所有的对齐都应该利用标尺、制表位、对齐方式和段落的缩进等来进行。如果发现自己手动打了空格，一定要谨慎，想想是否可以通过其他方法来避免。同理，一定不要通过敲回车来调整段落的间距。
4、绘图技巧
论文中会用到很多图表，强烈建议论文撰写者分清论文中的图形和表格，表格可以使用Word提供的工具进行编写，很简单，这里就不再赘述了。框图和流程图的编辑，强烈建议使用Office 2003中绑定的Microsoft Office Visio Professional 2003画。如果不能忍受Visio对象复制到Word的速度，还可以试试SmardDraw，功能不比Visio弱，使用不比Visio难，速度却快多了。
以上就是关于论文写作中Word操作技巧的相关分享，希望对大家有所帮助，想要了解更多相关内容，欢迎大家及时在本平台查看!
Word长文档制作的4大步骤：1、制作长文档的纲目结构；（将视图方式切换到大纲视图，输入1级标题，默认为1级标题，完毕后输入2级标题，将1级标题变为2级标题的方法是按“TAB键”，注：降级按“TAB键 ”，升级按“SHIFT+TAB”键，把所有的二级标题输入完成后，含有下属标题的一级标题段落前面的段落控制符有原来的小矩形变成十字形，单击十字形，可选中该段落以及它的下属段落）2、为长文档设置多级标题编号；（长文档的多级标题输入完成之后，执行全选，选择菜单“格式→项目符号和编号”命令，打开“项目符号和编号”对话框，选择“多级编号”选项卡，选中第二行第二种编号方案然后单击“自定义”按钮，打开“自定义多级符号列表”对话框。选中“级别”列表框内的“1”，然后选择编号样式为“一、二、三”，在编号格式框内“一”字符之前输入“第”，之后输入“章 ”， 选中级别列表框内的“2”， 在“编号格式”框中可能显示的是“一.1 ”这样的编号格式，如果要把该2级标题段落的标号格式设置成正规的“ ”编号格式，则需要按下“高级”按钮，然后在“正规形式编号”复选框前打上钩即可。编号完成后，就可以切换到“页面视图”，进行文档正文内容的填充工作。）3、在文档中让插图自动编号及交叉引用题注；（为了让文档更具表达力，我们可能需要插入很多图片。插入图片之后，随之而来的工作就是为插图编号，用Word的术语讲，针对图片、表格、公式一类的对象，为它们建立的带有编号的说明文字，即称为“题注”。通俗的说法就是插图的编号。为插图编号后，还要在正文中设置引用说明。引用说明文字和图片是相互对应的，我们称这一引用关系为“交叉引用”。具体设置为，插入图片，选中图片，单击右键，在弹出的菜单中选择“题注”命令，打开“题注”对话框。假设我们需要的编号格式为“如图1、如图2”等，那么单击“新建标签”按钮，在弹出的“新建标签”对话框中输入“如图”，注意不要输入任何数字，实际编号的数字Word会自动处理的。输入完成后单击“确定”返回“题注”对话框，由于我们希望每次插入图片后Word能够自动为插图编号，所以单击“自动插入题注”按钮，在打开的对话框中进行设置。在插入时添加题注列表框中勾选“Microsoft Word图片”复选框，然后选择使用标签为“如图”，默认的编号输入为“1、2、3”，如果你要更改编号数字，可以单击“编号”按钮，在弹出的对话框中进行设置。设置完成，单击“确定”后返回Word编辑窗口。以后插入图片时，Word就会自动为它们添加编号。接下来把光标定位到第2张图片的插入位置，插入第2张图片，也可以看到Word自动在它下方添加了题注“如图2”。插入所有图片之后，接下来为图片设置引用说明。将光标定位于正文中需要添加插图1引用说明的位置，选择菜单命令“插入→引用→交叉引用”命令，打开“交叉引用”对话框，在“引用类型下拉”列表内选择“如图”，在“引用内容”下拉列表内选择“只有标签和编号”，然后在“引用哪一个题注”列表框内选中“如图1”，单击“确定”，这时“交叉引用”对话框并没关闭，我们可以把插入点定位于需要添加图2的引用说明的位置，然后选中“引用哪一个题注”列表框内的“如图2”，单击“插入”按钮即可为如图2添加引用说明。用同样的方法为其它插图在正文中添加引用说明。使用交叉引用的好处是：如果删除其中某一个图片，包括它的题注以及引用说明。如果我们是用常规方法手动为插图输入题注和引用说明，那么现在被删除的这幅图片后面的所有插图的题注和引用说明的编号就都不对了，需要重新手动修改。不过由于前面我们是使用的是Word自动添加题注以及“交叉引用”功能为插图添加的引用说明，所以现在就只需把文档内容全部选中，按下键盘“F9”，Word就可以自动更新域，让后面的题注和引用说明中的序号自动更新为正确状态。）4、为长文档编制目录和索引。（所谓“目录”，就是文档中各级标题的列表，它通常位于文章扉页之后。目录的作用在于，方便阅读者可以快速地检阅或定位到感兴趣的内容，同时比较容易了解文章的纲目结构。 所谓“索引”，就是以关键词为检索对象的列表，它通常位于文章封底页之前。索引的作用在于，阅读者可以根据相应的关键词，比如人名、地名、概念、术语等，快速定位到正文的相关位置，获得这些关键词的更详细的信息。在我们使用过的中学数理化课本中，最后通常都有索引，列出了重要的概念、定义、定理等，方便我们快速查找这些关键词详细信息。 如果“手动”为长文档制作目录或索引，工作量都是相当大的。而且弊端很多，比如当我们对文档的标题内容更改后，又得再次更改目录或索引。文档目录通常位于文档正文内容之前，于是将插入点定位于文档首行，按下键盘“Ctrl+Enter”插入了一个分页符，然后在文档首行适当位置输入“目录”，设置为“居中对齐”。 将插入点放在“目录”下方恰当位置，选择菜单“插入→引用→索引和目录”命令，打开“索引和目录”对话框，选择“目录”选项卡，在“目录”选项卡里我们可以设置与创建目录相关的内容。比如可以单击“格式”框的下拉箭头，在弹出的下拉列表中选择Word中预先设置的各种目录格式，通过预览区可以查看相关格式的生成效果。单击“显示级别”框的选择按钮，可以设置生成目录的标题级数，单击“制表前导符”框的下拉箭头，可以在弹出的列表种选择一种选项，设置目录内容与页号之间的连接符号格式，完成与目录格式相关的选项设置之后，单击“确定”按钮，Word即可自动生成目录，6 目录生成后，也许外观并不符合我们的要求，在这种情况下，我们可以方便地根据自己的要求进行更改。用和前面相同的方法进入“索引和目录”对话框，并选择“目录”选项卡，单击“修改”按钮。在打开的“样式”对话框中，由于我们要对目录中一级标题文字进行修改，故选中样式列表框中的“目录1”，然后单击“修改”按钮，最后，值得注意的是，如果当目录制作完成后又对文档进行了修改，不管是修改了标题或正文内容，为了保证目录的绝对正确，请对目录进行更新。操作方法为：将鼠标移至目录区域单击右键，在弹出的菜单中选择“更新域”命令，打开“更新目录”对话框，选择“更新整个目录”单选框，然后单击“确定”即可更新目录）
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毕业设计开题报告中实验准备情况的写作，需要包括以下几个方面：1. 实验目的：明确实验的目的和意义，说明实验的重要性和必要性。2. 实验原理：简要介绍实验所涉及的基本原理和相关理论知识。3. 实验方法：具体阐述实验的操作步骤和流程，说明实验所需的材料、仪器设备和试剂等。4. 实验设计：详细介绍实验设计方案，包括实验组和对照组的设置、实验变量和控制变量的确定、实验数据的采集和处理等。5. 预期结果：预测实验结果，解释可能出现的异常和偏差，说明如何进行分析和解释实验结果。6. 安全措施：列出实验过程中需要注意的安全事项和应急措施，保证实验过程的安全和顺利进行。7. 时间计划：制定实验时间表，明确实验的开始和结束时间，合理安排实验时间和进度。需要注意的是，实验准备情况的写作应该简明扼要、清晰明了，避免使用复杂的专业术语和长篇大论的句子。同时，应该根据实际情况和实验要求，精细化设计实验方案，确保实验能够顺利进行并取得预期的结果。
能。预实验最主要的目的是为了验证你之前设计的实验方案的可行性。预实验分为两大类，一类是外部预实验(Externalpilotstudy)，一类是内部预实验(Internalpilotstudy)，其中内部预实验可以纳入到文章中。
关于毕业论文参考文献，首先,文献类型不同,其著录方式不同;其次尽管不同的文献类型，著录方式不同 ,但基本上分为三个部分,分别是:(1)参考文献的作者;( 2 )参考文献的名称和文献类型;(3)参考文献的出版信息。第一类专著、论文集、学位论文、报告等文献类型的著录方式:[序号]主要责任者.文献题名[文献类型标识9].出版地:出版者,出版年,起止页码a (任选) 。第二类是期刊文章,其著录格式如下:[序号]主要责任者.文献题名[].刊名,年，卷(期) :起止页码。期刊文章是使用最多的文献类型,它的著录也包括着作者、文献名称及类型、出版信息三部分内容。第三类是会议论文集,其著录格式如下:[序号]析出文献主要责任者.析出文献题名[A].原文献主要责任者(任选) .原文献题名[C].出版地:出版者,出版年.析出文献起止页码。
我们写论文中的“参考文献”又叫参考书目，根据我自己写论文的经历来看它的意思是指我们在撰写毕业论文过程中所查阅参考借鉴过的著作和报刊杂志等等一些资料，然后把它标注在在毕业论文的末尾。
一、那论文的参考文献具体是指什么呢？
二、我们在引用参考文献时需要注意什么呢？
三、我给大家讲一下参考文献格式：
1、参考文献和注释。按论文中所引用文献或注释编号的顺序列在论文正文之后，参考文献之前。图表或数据必须注明来源和出处。
[编号]、作者、文章题目、期刊名(外文可缩写)、年份、卷号、期数、页码。
[编号]、作者、书名、出版单位、年份、版次、页码。
2、附录。包括放在正文内过分冗长的公式推导，以备他人阅读方便所需的辅助性数学工具、重复性数据图表、论文使用的符号意义、单位缩写、程序全文及有关说明等。
[M]——专著,著作
[C]——论文集(一般指会议发表的论文续集，及一些专题论文集，如《xxx大学研究生学术论文集》
[N]—— 报纸文章
[J]——期刊文章：发表在期刊上的论文，尽管有时我们看到的是从网上下载的(如知网)，但它也是发表在期刊上的，你看到的电子期刊仅是其电子版
[D]——学位论文 ：不区分硕士还是博士论文
[R]——报告：一般在标题中会有"关于xxxx的报告"字样
[S]—— 标准
[P]——专利
[A]——文章：很少用，主要是不属于以上类型的文章
[Z]——对于不属于上述的文献类型，可用字 母"Z"标识，但这种情况非常少见
[DB/OL] ——联机网上数据(database online)
[DB/MT] ——磁带数据库(database on magnetic tape)
[M/CD] ——光盘图书(monograph on CDROM)
[CP/DK] ——磁盘软件(computer program on disk)
[J/OL] ——网上期刊(serial online)
[EB/OL] ——网上电子公告(electronic bulletin board online)
很显然，标识的就是该资源的英文缩写，/前面表示类型，/后面表示资源的载体，如OL表示在线资源。
四、经验总结
我们在写论文的时候，尤其是我们的毕业论文，说多了都是泪呀，这都是根据我自己当年写毕业论文的血泪史，总结出来的结论参考文献有三个好处：