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学术堂整合了一份中国农业科学类发表期刊论文的写作格式及字体大小,供大家参考:一、封面题目:小二号黑体加粗居中.各项内容:四号宋体居中.二、目录目录:二号黑体加粗居中.章节条目:五号宋体.行距:单倍行距.三、论文题目小一号黑体加粗居中.四、中文摘要1、摘要:小二号黑体加粗居中.2、摘要内容字体:小四号宋体.3、字数:300字左右.4、行距:20磅5、关键词:四号宋体,加粗.词3-5个,每个词间空一格.五、英文摘要1、ABSTRACT:小二号、内容字体:小四号、单倍行距.4、Keywords:四号加粗.词3-5个,小四号TimesNewRoman.词间空一格.六、绪论小二号黑体加粗居中.内容500字左右,小四号宋体,行距:20磅七、正文(一)正文用小四号宋体(二)安保、管理类毕业论文各章节按照一、二、三、四、五级标题序号字体格式章:标题小二号黑体,加粗,居中.节:标题小三号黑体,加粗,居中.一级标题序号如:一、二、三、标题四号黑体,加粗,顶格.二级标题序号如:(一)(二)(三)标题小四号宋体,不加粗,顶格.三级标题序号如:.标题小四号宋体,不加粗,缩进二个字.四级标题序号如:(1)(2)(3)标题小四号宋体,不加粗,缩进二个字.五级标题序号如:①②③标题小四号宋体,不加粗,缩进二个字.医学、体育类毕业论文各章序号用阿拉伯数字编码,层次格式为:1××××(小2号黑体,居中)××××××××××××××(内容用4号宋体).××××(3号黑体,居左)×××××××××××××(内容用4号宋体).××××(小3号黑体,居左)××××××××××××××××××××(内容用4号宋体).①××××(用与内容同样大小的宋体)a.××××(用与内容同样大小的宋体)(三)表格每个表格应有自己的表序和表题,表序和表题应写在表格上方正中.表序后空一格书写表题.表格允许下页接续写,表题可省略,表头应重复写,并在右上方写"续表××".(四)插图每幅图应有图序和图题,图序和图题应放在图位下方居中处.图应在描图纸或在洁白纸上用墨线绘成,也可以用计算机绘图.(五)论文中的图、表、公式、算式等,一律用阿拉伯数字分别依序连编编排序号.序号分章依序编码,其标注形式应便于互相区别,可分别为:图、表、公式()等.文中的阿拉伯数字一律用半角标示.八、结束语小二号黑体加粗居中.内容300字左右,小四号宋体,行距:20磅.九、致谢小二号黑体加粗居中.内容小四号宋体,行距:20磅十、参考文献(一)小二号黑体加粗居中.内容8-10篇,五号宋体,行距:20磅.参考文献以文献在整个论文中出现的次序用[1]、[2]、[3]……形式统一排序、依次列出.(二)参考文献的格式:著作:[序号]作者.译者.书名.版本.出版地.出版社.出版时间.引用部分起止页期刊:[序号]作者.译者.文章题目.期刊名.年份.卷号(期数).引用部分起止页会议论文集:[序号]作者.译者.文章名.文集名.会址.开会年.出版地.出版者.出版时间.引用部分起止页十一、附录(可略去)小二号黑体加粗居中.英文内容小四号TimesNewRoman.单倍行距.翻译成中文字数不少于500字内容五号宋体,行距:20磅.
康乃馨原名香石竹(Dianthus caryophyllus L)，又名麝香石竹，属石竹科，下面是我为大家精心推荐的康乃馨栽培技术论文，希望能够对您有所帮助。
康乃馨的培育及切花保鲜技术
摘要 为了让广大花卉爱好者正确认识和掌握康乃馨的培育和保鲜技术，从康乃馨的品种分类、形态特性、生长习性、培养繁殖、病虫害防治、切花采收与保鲜等方面进行详细论述，以供参考。
关键词 康乃馨;切花;分类;特征特性;繁殖;保鲜
中图分类号 文献标识码 B 文章编号 1007-5739(2014)19-0190-01
康乃馨原名香石竹(Dianthus caryophyllus L)，又名麝香石竹，属石竹科，石竹属，原产欧洲南部、地中海沿岸至印度地区，在世界上已有2 000年的栽培历史，为大众型切花，其生产量占全部切花的17%，仅次于菊花，为世界四大切花之一[1]。康乃馨应用广泛，气味芳香，易于保存。其单位面积产量在所有室内切花生产中最高，能够采用机械化、自动化规模生产。
随着康乃馨作为一种鲜切花越来越受人们的青睐，其生产规模不断扩大，生产技术要求也越来越高，高质量、高标准的鲜切花越来越被人们所关注。因此，进一步了解康乃馨的生活习性及品种分类对生产高质量的鲜花将有很大帮助。鲜花的质量好坏关键就在于它的“鲜”，因此康乃馨的保鲜技术显得格外重要，加强保鲜技术的研究将是决定康乃馨切花产业成败的关键。
1 康乃馨的特征特性
品种分类
我国自欧美引入康乃馨进行栽培约有70年的历史，栽培品种很多，大致可分为两大类，即露地栽培种和温室栽培种。露地栽培种耐寒力强，可露地越冬，常作二年生花卉栽培，适于花坛布置及切花用;温室栽培种呈亚灌木状，具四季开花性，适于盆栽，但更多作切花生产。康乃馨品种众多，花色各异，有黄色系、红色系、白色系等类型。
形态特性
康乃馨为常绿亚灌木，作宿根花卉栽培。株高60～90 cm，正常花期5―10月。茎光滑，基部木质化，稍被白粉;叶对生，线状披针形，全缘，基部抱茎，灰绿色，被白粉;花常单生或2～5朵簇生枝端，呈聚伞状排列，其原始种及部分紫色栽培品种具淡丁香芳香。
生长习性
喜空气流通、干燥及日光充足之环境。要求排水良好、腐殖质丰富、保肥性能良好而微呈碱性之粘质土壤，忌连作及低洼地。喜肥，能耐一定低温，为冬季供应切花，现常作为设施栽培的品种。性好凉爽而不耐炎热，理想的栽培地是夏季凉爽、湿度低，冬季温暖的地区。
2 繁殖技术
扦插
采用扦插育苗生产切花的时间要求分批、分期进行，温室栽培以1―3月和9―11月为宜，露地栽培以4―6月和9―10月为宜，成活率高，生长健壮。插条规格及标准：生长点活力强，长10～12 cm，具4～5对叶，重约10 g，最好采用母株茎中部粗壮的3～4节生出的侧芽。以膨胀珍珠岩和草木灰按7∶3拌匀的混合物作基质，基质深度8 cm为宜。株行距 cm× cm。插前用50 mg/kg ABT-2生根粉或吲哚乙酸加奈乙酸或～吲哚丁酸喷插条基部。冬季扦插一般采用玻璃地棚或塑料薄膜地棚供插穗越冬生长之用[2]。
组织培养
康乃馨是较早组织培养成功的花卉之一，在生产上应用广泛。材料为康乃馨侧芽抽生的嫩茎，或在解剖镜下取茎尖(～ mm)。嫩茎切成～ cm长的小段，用MS+6-BA(2 mg/L)+NAA( mg/L)作产生绿芽和继代培养培养基，pH值调节至～。用MS+NAA(1～4 mg/L)作生根培养基。控制室温24 ℃左右，并用日光灯加光8 h进行培养。
3 病虫害防治
枯萎病
枯萎病为真菌性病害，病原菌为香石竹尖镰孢菌。在整个生长期均可发病。发病初期，植株地上部生长缓慢，同时根部变色[3]。该病病菌在土壤和病株中存活，可通过根和茎基部侵入植株，还可借插条传播蔓延。此病在夏季发展最迅速，危害最严重。应选用无病插穗，发现病害应立即拔除病株，与其他花卉实行2～3年轮作。发病初期可喷施50%多菌灵500倍液或代森锰锌500～600倍液，或对土壤消毒。
叶斑病
叶斑病主要侵害叶和茎，是一种世界性病害，有时也侵染花蕾和花[4-6]。该病在4月上旬至初冬均可发生，适宜生长温度为25～30 ℃，温室则全年都可发病，多雨季节发病最重。植株下部老叶发病多且重。生长期发病，可喷75%百菌清可湿性粉剂800倍液，或50%代森锰锌可湿性粉剂500～700倍液，或50%甲基托布津可湿性粉剂500倍液。隔7～10 d喷1次，连喷2～3次。
虫害
主要有种蝇、蝼蛄，可用毒饵诱杀。温室或塑料薄膜地棚内，最好在地床下设3 cm厚的黄沙层，以防蚯蚓入内活动。对蚜虫、红蜘蛛、夜盗蛾等虫害，则可喷药毒杀。
4 切花保鲜技术
采收
对于大花型康乃馨既可在花蕾即将绽开时采收，也可以待外轮花瓣从花萼内露出时采收。而多花型康乃馨应在有2朵花已开放，其余花蕾已透色时采收。采收时可用剪刀，也可用小型收割机。用剪刀时，应小心地将花枝剪下并从支撑网中拉出，避免折断花茎。
康乃馨的贮存寿命和瓶插寿命直接与其碳水化合物含量有关。而花中的碳水化合物含量又与一天中的时间变化有关。在13：00―16：00，康乃馨中的碳水化合物含量最高。因此，应在此时间段内采收切花，以确保最大限度地延长切花寿命。
保鲜
采花后，放入干净或含有保鲜剂的水中[7]。冷藏温度 ～0 ℃，相对湿度90%～94%。康乃馨对乙烯敏感，因此花枝应插在含有乙烯抑制剂的保鲜液(300 mg/kg 8-羟基喹啉+50～100 mg/kg硝酸银+5%～7%蔗糖)中贮藏。
蕾期采收的康乃馨需要进行催花处理。大花型催花液：200 mg/kg 8-羟基喹啉柠檬酸盐+25 mg/kg硝酸+50 mg/kg硫酸铝+10%蔗糖。多花型催花液：300 mg/kg 8-羟基喹啉柠檬酸盐+300 mg/kg噻苯达唑+10%蔗糖。
5 参考文献
[1] 冯天哲.家庭养花病虫害防治[M].北京：中国林业出版社，1989.
[2] 陈静瑶，魏文雄.不同基质对康乃馨不正常组培苗的影响[J].福建农业科技，1996(3)：24.
[3] 丁小维，梁雪妮，桂敏，等.不同激素配比对康乃馨芽增殖及玻璃化的影响[J].中国农学通报，2006(4)：269-271.
[4] 刘春松，叶辉，王良吉，等.香石竹的离体培养[J].安徽农业科学，2005(8)：1425-1485.
[5] 赵志昆，田海霞.康乃馨主要病害的防治[J].西北园艺，2000(4)：37-38.
[6] 李慧.康乃馨切花的保鲜[N].中国花卉报，2003-05-27(8).
[7] 潘尚芬.康乃馨鲜切花生产技术[J].农业科技与信息，2008(19)：40-41.
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SHI，“春集。通过欧阳修，请参阅“欧阳文忠乐府公共靠近身体。厚文，这“春季系列”一词，篇末注：“误为”兰湾组，燕叔（闫书），混乱甚至是相互矛盾的任务。 “吴铮王第二哥哥的前辈云”这个词，另一个“东宫书府”印，李煜疑问。的采桑子·诗 亭前春逐红英最好的舞态徘徊。细雨菲微，眉毛，暂时保持打开状态。 绿化广场平静的芳香色调，香港印度灰烬。金奈的感情，嗜睡，朦胧入睡。第二采桑子·秋季抱怨 辘轳金井梧桐晚，几树静秋。白天的雨水新愁。百脚虾玉钩。 琼窗口关闭双蛾春破获，在头部两侧，中，虞姬尺度游泳9韩宝上游。 [注]宋泽以学校为基础的“山寨”之谜借这个集合“花，”丑奴儿订单“类编”山寨“注：”'罗浮秩序“” 。 “花纳粹编译的”调教下标题“秋抱怨。”五代诗“标题”罗浮养鹅。 这个词是一个牛市，希腊的经济，词林选择“音量”。系统古代和现代字“注说：”刻严山。然现在通过的相似小山词“不包含这个词。厚文，这南塘两个主要字”这个词“虞美人”捆钞此后云：“两个以上的字墨家，王季宫判处医院。“这个词无疑是皇帝的墨水，李钰。 磅连订单·一 秋闺 申吁氨静态的，法院的空，破持续低温砧间歇性风。无奈夜长人失眠，数声和月到帘笼。 磅练子，让·“ 精品 云鬓乱晚报残留物，用仇恨的迈耶远岫保存。斜的护理香腮春笋和招标，对他们来说，泪倚阑干？ [注]字看，养身“词林的选择。王国维系列的南唐两个主要的话”中列出的补遗产。 “花崔编译包含在这个字中，徒劳的散文名称。三种物质可以让 不寐倦长更多的家庭，衣原体线。1月寒秋竹冷，风切变夜间窗户的声音。 [注]这个词，陈熊“古词”交房心灵“作为皇帝的字。又传唐无名的，到的郭Maoqian乐府诗集“标题”上皇3。我通过韦应物嘉靖中国绝句“七”全唐诗施“第26卷，10000 ;魏集（消耗古老的的法院的这个”Weisu状态设置为“四个系列韦江州集“）这个词。或误用此之前，首先这第一次魏韦应物“三巨头，二，麦”10000中国绝句“音乐楼诗”，“唐和诗”，那么，几乎结合收入？王国维系列的南唐两个主要的话“在附录，王兹根据的逻辑这个收入。谢信恩·一 （残句）授予的窗口部队被困以来也勇............. /> 谢吸恁中的第二 秦楼没见过笛女，备用元的风景。面粉英国：金瑞低昂。东风生气之前头发，翻领香港。 琼窗口的唤醒停留Canri年有恨！应垂杨碧阑干。暂时满足，像一个梦懒思考。 / a> [注意]王国维的“南唐主词”校勘记：第一次真正的部门“临江仙调逻辑。 协鑫恩后 樱花订单前一月喜欢在床上担心倚薰笼。就像去年的今天，恨的是一样的。 DW不整云憔悴，泪染成红色胸罩。何处相思苦？的窗口屏幕Zuimeng。 [注意]姬增加“南唐主词笺”注说：“这条领带的一切错误，没有其他学校。 协鑫恩·四 庭空客散人画堂半掩珠帘分类。燕燕在森林，风淅淅晚上。小楼新月，修长的回头以来。 春镇的空老人们的，可怜的何新愁恨？黄金窗口的力量Kunqihuanyong。一声羌笛令人吃惊的：醉汤宜勇。 [注意]原来在下面的句子： （缺乏）春镇老新愁空恨有多穷。 （缺乏）闻羌笛，惊起醉怡内容。 “南塘两个主词”校勘记：NB王国维系列这一重要的“临江仙”调。这首“春天里”下面是另一个第一。 谢吸恁的五个 春天的樱花秋天，将被困的摆动架归。鱿鱼漏暗斜月的延迟。 □□□□□□□，□□□□□。在来军彻小窗口画面，直到我不知道。 谢吸恁六 慢慢秋满阶红叶暮光之城留不住。过重阳，台榭登机在茱萸香港秋季。 紫菊气，飘的风庭户，晚烟笼细雨。人民政治协商会议新雁咽寒声，愁恨中等长度相似。 注意姬增加“南唐主词笺”注云：Concil既不是分割的，也不是类的调他的语气中也有喜欢此填写。超过6个字，所谓的原注孟公爵家墨涉嫌网络转销呆帐想成功的候选人将按照简错了，。 临江仙 樱桃落尽春归去，蝶转向灯粉红色的飞行。杜鹃个月的小楼西，玉钩罗幕，惆怅暮烟垂直。 不弄孤独分散王残烟草低迷。炉凤凰香港繁忙的细腻孩子。空持罗带回首：恨依依。 破阵子 四十年来家国，三公里的山山水水。凤阁龙楼，甚至是无畏的，玉树琼枝烟和莳萝。 一些有共识的武器。 一旦归为臣虏，沉腰花费潘寺庙，。最重要的是赶紧辞职庙日教坊犹他演奏的送别歌。 眼泪宫娥。 之一虞美人· 春园和 春花秋月过去时颜色。时尚周期，明家园的痛苦。 雕栏玉砌应犹在力。问君能有几多愁，恰似一江春水向东流。 NB吕氏春秋“夏漫笔记”：李煜归向后，郁郁不乐，发现在口头上。之的七夕生活，所以妓女在外面听到的音乐。传“时尚”的周期它们东风。坐下，然后麻烦。虞美人· 风的小院中庭芜绿柳眼春相续。凭栏独自沉默半天还是像当年的声音竹新月。 ，抱怨未散的雕像前池冰面早日解决。烛明香暗画楼深，满鬓清霜残雪勤于思考。 [注]吴讷“几百个字的旧手稿”南唐主词“设置这个词元英华崇拜，在“为”虞美人阴影。嵩泽元以学校为基础的“山寨”，“萧剩余的频谱，古代和现代诗歌其余醉”调“意义上的老问题。> 闲置望江梅·一梦远，南国正芳春。板的管弦乐，城市河流路是飞絮如尘卷，看花忙着杀了人！ /> 望江五月的第二 闲置梦远，南国清秋。特立尼达江山寒色远，芦花深处停着一辆船。长笛悦明大厦。 / a> [注]两个以上的“望江梅”，王国维系列的南唐二主词“，一个在分为上，下两阕。韵不合，这首曲子歌和无与伦比的音。特此根据管效率第一“的南唐主体工程分为两个第二首歌，他们通过鄢书。”全歌“。望江南· 多少恨，昨夜梦魂英寸法院，游泳像老车，例如水马如龙，花月春风！ / a> 西花蓟马二 许多的泪水，面对复杂的交叉仪和泪水。心莫凤笙休的打击，伤心欲绝的无疑是眼泪！看到一个欢 沉默，独自在西方，月如钩。寂寞梧桐深院锁清秋。 无奈和混乱，悲伤的离别。是一般滋味在心头。看到欢· 林华西娥王春红，太匆匆，无奈朝来寒雨晚来风。 高棉泪，相留醉，时重。不用说人生后悔水长东。 / a> 邬耶踢 昨晚的风和雨，帘幕飒飒秋声。蜡烛的残留物排出的截止频率靠在枕头。??UPS不能是平的。 BR /> 阙人用流动的水，数到一梦浮生，醉乡路应该是稳定的频率，加行难以承受的。波· 过去唯一值得悲伤，排荆困难。秋季庭院苔侵袭为了秣陵在汴京概念，术语忙的卷珠帘整天，谁是怎么回事？ 复仇已经深深埋，强大的气蒿莱。晚凉天净月华开。玉楼瑶神庙的影子，空中秦淮想太多！ [注]“的山寨续集”调整“感恩”的标题下。 “古代和现代的正统”的调子问题“，秣陵在汴京阅读。厚文可以南唐两个主要的字”请注意：单词“通池州简支梁第六。 浪淘沙·第二届 春暮光之城怀旧 帘外雨潺潺，春天轻松。罗黎明被子不容忍，冷。我是一个贪婪的喜悦中午的梦想。 独自莫栏杆，无限江山，不容易见时很难。忘了落花春去也，天上人间。 [注意]鲁本“南唐两个主要的词”浪淘沙令“。的南塘两个主要字“，”海浪“，”山寨“，”字“，”古代与现代诗的其余醉“调的标题下”怀旧“，萧剩余的频谱”的调子“春暮光之城怀旧之情。清源·山林集雪 梵宫100英尺，云后卫，得到
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安徽农业大学学报比中国农学通报好安徽农业大学学报主管单位：安徽省教育厅主办单位：安徽农业大学快捷分类：农业农业综合出版地区：安徽国际刊号：1672-352X国内刊号：34-1162/S创刊时间：1957发行周期：双月刊期刊开本：A4审稿时间：1-3个月所在栏目：农业科技综合影响因子：期刊级别： CSCD核心期刊 北大核心期刊 统计源期刊中国农学通报主管单位：中国科学技术协会主办单位：中国农学会快捷分类：农业农业综合出版地区：北京国际刊号：1000-6850国内刊号：11-1984/S创刊时间：1984发行周期：旬刊期刊开本：A4审稿时间：1-3个月所在栏目：农业科技综合影响因子：期刊级别： CSCD核心期刊 统计源期刊
期刊名称2006年2007年2008年2009年2010年2011年安徽农业科学 西南农业学报云南农业大学学报中国农学通报
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南唐后主李煜存体诗十六首甚至书籍已故的李遇秋阴9月10日的酒Zhaxing，姚明的心情难平感。在寒冷的黄色的花是不是一个优秀的红叶风电竞争鼓风海索广的汽笛声。 世界累的庸俗状态，甚至是感伤的边缘尚未最后敲定忘记。由于双鬓沾满了白色的学习安仁，因为害怕。 秋莺剩余莺什么，我不知道秋天，穿越森林，还是独自旅行。在每一个可能的方式，倾耳听，深黄到羽的古语。 栖迟回到世界与悲伤陆，光亮如盛破碎的郭台铭。莫萦绕好回去，露华浓凄冷廖华担心。 疾病 山家园的标题山家墙上的早期病与乍得光，张利毛巾布朗说，休闲。炉开小火深回暖的沟提到一个新的流了几首歌曲的声音。 临时约庞涓安全颓废的质量，最终的情况下，远问焉。谁战战尘累贪婪合作的鱼龙化石机构强名称。 发送邓王20兄弟从有利的，牧宣城 戈维光延迟，不酒重倾西路谢便携性。郝波入侵的担心光波，乱山凝讨厌的颜色级别。 国家柏树桨情况，在极我凭阑干一天西进。咫尺之隔多少烟江，拥抱重凄凄。 道口王江石城栖霞江南江北旧家乡，三十年甜美的梦。吴袁工委冷落，广陵台湾的寺庙已经荒凉。 云笼千的远岫担心，雨归舟泪万行。三百年，四兄弟不堪坐下细思量。 拉辞职 首先 珠打破前珍，花凋世界以外的春天。并不是引脚我的心恨，手中的身体。的药物玉篮犹他州残留，香莲已经沾上的灰尘。在哀悼后感，无泪沾巾。 二 卓越的品质与芳树，浮危机的路是第一位的。是可悲的春季实施，下雨的伤害丛。 金盏花韩国这是什么东西徘徊空。下跌问的千载谢东风悼诗 读过难消，解释，孤怀孕的痛苦，叹了口气。雨深秋和寂莫，担心被引病情加重。 咽前的思维，在黑暗的眼睛上花的绝对风。我可怜的孩子是球迷，空王应读。 感谢的回忆2 你看到桐花头发老枝，一楼烟雨暮光之城荒凉荒凉。凭栏惆怅人，谁会觉得单燃檑眼的。 二 层城市再也看不到的娇姿，节日包裹着悲伤不能自持。有很多当年的老烟月，芙蓉城新月哭了。 梅花 周到的移植，这首歌曲的门槛小酒吧侧。重量约芳的一天，担心不盛燕。 呛开始受损，乘以每月的灌溉寒泉。谁料花的新月是不完整的。 失去烟花主，东君，因为我不知道。香味更好的目的是什么，犹他去年发行的棒。 书的精神盛宴毛巾 浮生憔悴，强岁的损失婵娟。辛勤的汗水的手离开香港污渍，标志着的眉毛染料戴烟。 书琵琶 大庭广众以来的肩膀，如切割窗扇难胜链。天翔住宿凤尾，我热情在谭插槽。 疾病的回忆 憔悴的一年，甚至抑郁症有益的自我伤害。丰伟骨疾病的侵袭，雨气咽悲伤的感觉。 夜丁玮药物或向半染霜胡子。实际上，前沿似乎并不像问空王。 疾病本身的疾病的妻子，宴坐香味认为自己是在书里的东西坚固路。乐赵京卫捣药居留权门关闭幽静的庭院，只家禽。 嘎嘎懒得听的词何取，小婢，而不是禁止的行力。赖问佛教已知的气味或麻烦万途入侵。 冠军后，金梁娄子元帝在荆州：的汪中眩过去，书籍几十个。荆州坏了，烧自己的书，这一个显着的咸重的头发，看到老虎，我不知道它的斑点。后溪卫破江陵的三种最佳烧他的书，说：文武路，最好今晚进行。荆州坏焚书两种语言也有几乎一模一样。诗大方。 牙签万美元轴裹红绡，王可预订薪酬火的。不留在祖龙，文物文章，在目前的脸。 残留的句子 相反，牛郎星，姚洋的河流。可黄姑女，专用遥控器的大海。癸辛杂识──金莺队应该是狂恨，蝶舞已经不多了。 ──标题为“花瓣”。 随笔注云：这是时间不长，亡国。 揖让个完整的风吹动。 ──标题翼风扇。 说：“丹林艳语言”注意：在味道，因为于呗意大利诗举这个太祖说：“国子监的歌曲盛宴！” 病态的弱点，岩岩至五年。 ──句话后，看到“英揆法骨髓注意 下降燕病很难拉复杂，相当小点军区专业，因为羞愧。 冷笑的秦皇通过静态巡逻可惜姬满苦。 寺庙从今天蒂姆·白菊花去年仍是黄色的。──句子下面看到约翰府名谈“ 万古霉素到结束的标准化死醉乡墓地高原。 ──注云：于虽母乘醉书在你醒来时，看到大遗憾的是，不久谢。 生命是短暂的，就像千年的画。 ──看到野生的客户丛谈“ 天的映射薄仙云，秋高天蓝色深。──看海录碎事 a> 乌克兰根据年初潜辉，烛龙将竞争兵。──下面的句子“孔帖子全路呢嗯楚分支。 您飏日西庄严的冷。 九重，四牖平开风扇天鹅灯鱼。 忌盛宴，无需操作员的自由裁量权。 ，倒入一碗长寿，深杯状交付讨价还价。 南唐皇帝李钰和可疑字50问题还西铩 红太阳一直30英尺，通过金炉顺序的田祥兽，红色锦缎地衣与一步皱纹。 美容舞点金钗溜，酒??恶捻花嗅觉长笛和鼓奏远离气味的房子。 浣溪纱 ，把蜡烛漂移的梦想正常化会寻找非当天教的愿望和身体侵犯的遗物绝望。 要在撞球台空逝水荫花楼阁谩斜晖，登机更沾衣。 谷搂椿 晚化妆品早期的明肌雪，春庙例如，E向列。凤凰吹长笛没有水无云，沉重的霓裳歌遍彻。 临风谁更香屑醉拍摄阑干感人，减产。归休放烛花红，待踏马蹄清夜月。 [注意]看到这个词通曹勋松隐文集。 “南唐二主词”原注云：“传重大借读，曹宫”。又云：“墨老在资本以外的光束李王祠。怀疑曹勋品味的书，当时还以为这个词的后代勋，以及王国维的这个条目的逻辑”南唐二主词。“ />泉汤氏，字“，”木兰花“注意：”'俞搂蝽“，和”春天瞿晓'A'可惜主机的游戏'。“ / a> 漏斗 金雀发夹漂亮的脸蛋，花暂时满足。我知道这天爱问这个意义上说六月可惜。 香秒杀蜡成泪，还像两个头脑。珊枕腻，锦被子着凉，睡觉更漏残留。 注意这个词词从一种作物，看到“花间集”。尊重前“分类丽景。后系列的为”南唐二主词“李煜。搅拌长漏斗细春雨，花的漏音眺交付。害怕塞雁，从城市乌克兰，画屏金鹧鸪。 通过重幕，惆怅谢家池阁。红烛背，挂毯挂项务薄，梦寐已久的六月我不知道。 /> [注]一个词。菩萨蛮·一 花明月暗笼雾今夜侧去郎陈袜步香秩序，移动金缕鞋。 华堂南汉一向偎人颤。奴隶出来难，教郎恣意可惜。 /> [注意]“设置”尊重“子雪人。 “这个词全面的”子夜“。”传说“”子夜歌“，”正统“的标题下调：”安静的喜悦。 “花纳粹编制的”调星期后，姐姐的标题下。 “字”的调子的“闺房思想。” 菩萨蛮·的第二 女蓬莱院闭屋顶，画堂午睡说不出话来。抛枕翠云光，绣花的衣服气味芬芳。 潜力珠锁动作，惊讶地发现银幕上的梦想。面对缓慢微笑的惊喜，无限的爱。 菩萨蛮·“宫词铜弹簧韵脆锵发挥的新的声音缓慢移光纤玉学院。眼睛暗相勾秋波横流。 雨云深绣户，钟苏谐波。到一个空的盛宴罢工，灵魂的球迷做梦。 喜迁莺 的咏叹调下降，宿云微说不出话来枕头靠在。梦草思想依依，天远雁声稀。 唱莺散，我花乱，寂寞画童折嗯元。片红休席卷伊拉克，留下的舞人归。 之一的长相思· 云卦，玉一梭，澹澹衫儿薄薄罗，轻颦双黛螺。 秋天的风，雨相和，帘外芭蕉32窝，但由于长度的夜晚的人！ 注意这个词，传递，孙晓虚伪的系列“民歌词”。刘埚，因为他们通过看到沉愚蠢的“长岛集。按照这个”南唐王国维两个主要的词“项的逻辑。长相思，第二 山，一个2倍的山丘，和远天高烟水寒，相思枫叶丹。 鞠花插头鹅飞的人不还，鞠花残基，窗帘妓院和休闲。 [注意]邓苏字的传记，看到“彭韫刻”宋和元31字“这”兵手掌字“，和陈中秀学校的平房。宋泽元以学校为基础的类编译排水古代宫廷”山寨其他对李渔“称号。王国维系列南唐二主词“分类的附录。斛珠 美国总人口的颂 BR />早出晚归，沉檀轻注这些孩子。暮光之城丁香牙齿，清歌，临时引樱桃破。残留的阴色 罗秀易杯深旋香醪模糊。绣床斜波：焦烂嚼红茸，笑到贪狼吐。子夜歌的生活愁恨何免费的吗？“忘我”单独我爱什么极限！的家园梦重返社会的现代天纵。 高层在网站上长久地记住秋季看清楚。的往事已成空，还像做梦一样。[注意]陆吁谙南塘两个主要的话在标题为“菩萨蛮。前一组“”点“的问题。尊重这个词苑英华这方面，前一组”注：“菩萨蛮”。词牌“子夜歌”，“菩萨蛮人“。 子夜歌 寻春鱿鱼老莫应先春早，看花。薄雾色翡翠灵活的引擎，浮光表面的颗粒清除。 伤害频率，笑迷住了禁苑春归晚上的。醉闲置平，诗与结古镇。 [注意]：“菩萨蛮编年史剩余的诗歌。后庭花破孩玉树庭前，瑶草妆镜前。去年，花不老在今年回合1月，莫教偏头痛，个月，花，天教长少年。[注]韩国刊本宜山路由元好问乐府发现在明弘治。花纳粹编译这个词，都没有标明作者的名字，“春季系列”的四个印度素食主义者本增编注：“字”卷上引陈“乐书”云：单词“后庭花破孩”，李钰，凤岩寺有相对“李为锋，但遗憾的是没有指定选择一个字，李，也不是这条领带。” />“词谱”亦云：“后庭花破孩调整金元以来的最高水平，”音乐书“所谓”李钰，凤岩寺的相对速度“的语言不匹配。王国维这是南唐两个主词“附录中列出兹根据王的逻辑这笔收入。/>渔翁一个标题体现春江Diaosou图 喷雾故意千年雪，魏贤，桃子和李子沉默了团队的春天。一罐酒，一竿纶，如世界列侬几个？ 渔翁·第二 着春风一叶舟纶茧缕一轻钩。花满渚，酒满瓯，万顷波免费。蝴蝶 春末 远离每晚馆高忙步行距离，乍得清明，早觉得伤害了春晚上的雨风生活，朦胧的丹月云来去。 陶李依依春暗度，谁在秋千笑低耳语？一个心脏线程数以百万计，世界上没有任何安排。 [注意]地球上没有安排在其他“非必要”：“”，是国际采取“免费”，由于古老的传统字“闲”和“忙”与“自由”与之间。 [注]这个词还通过李馆（世英）看到杨绘“阴调整设置的能力。”通过欧阳修“欧阳文忠公爱身体乐府。尊前集“，”花崔编译“”唐代“历代诗其余为李钰。从。柳枝 由于宫人Qingnu 风格的老到处芳魂感旧游看到Spring的耻辱，谢谢你，长5月相识，强大的垂直烟穗拂头。 BR /> 清平乐 内存做 不来弹出一个半，触目柔肠断。谜行踪梅花雪乱，拂了人也满了。 鹅消息传闻，路遥归梦难。离恨就像春天的草，但该行更远还生。 BR /> 开元音乐头脑中数茎白发，他职业生涯的青山。空山乃路雪的治疗，因为也没有人。 注意]邵长光特色的“南唐两个主要的字”的剧本。这个词，并通过古条件，请参阅“10000中国绝句”的卷16 【注意事项】苏轼的“东坡全集·后记李钰开元音乐词”云：“李主神仙腾遁字的书，它没有遭受更多痛苦，因此，要起飞世界网呀？ 字南唐二主词“，除了吴少章光，包括收集皆为”的南塘两个主要字“的剧本被记录在”东坡题跋兹根据邵系列本收入。阮郎回报率的郑王庙（Wat Arun）第二哥哥 水日“的标题山，东风，春天是空闲的。的花瓣一塌糊涂酒阑珊，，抱怨Zuimeng。 整个翠DW？灵儿现场，但不幸的眉头，黄昏独自宜兰穿的声音安静的夜晚，化妆品残留物。 [注]旧手稿的调教下小姐的名字呢“百字，卢苑苯，侯文这小江的声音复制这南塘二主词”注：“郑王庙（Wat Arun）10年轻兄弟。 “篇末注：后隶书”东宫书楼“??印度”。 [注]这个词，因为他们通过冯艳 - SHI，“春集。通过欧阳修，请参阅“欧阳文忠乐府公共靠近身体。厚文，这“春季系列”一词，篇末注：“误为”兰湾组，燕叔（闫书），混乱甚至是相互矛盾的任务。 “吴铮王第二哥哥的前辈云”这个词，另一个“东宫书府”印，李煜疑问。的采桑子·诗 亭前春逐红英最好的舞态徘徊。细雨菲微，眉毛，暂时保持打开状态。 绿化广场平静的芳香色调，香港印度灰烬。金奈的感情，嗜睡，朦胧入睡。第二采桑子·秋季抱怨 辘轳金井梧桐晚，几树静秋。白天的雨水新愁。百脚虾玉钩。 琼窗口关闭双蛾春破获，在头部两侧，中，虞姬尺度游泳9韩宝上游。 [注]宋泽以学校为基础的“山寨”之谜借这个集合“花，”丑奴儿订单“类编”山寨“注：”'罗浮秩序“” 。 “花纳粹编译的”调教下标题“秋抱怨。”五代诗“标题”罗浮养鹅。 这个词是一个牛市，希腊的经济，词林选择“音量”。系统古代和现代字“注说：”刻严山。然现在通过的相似小山词“不包含这个词。厚文，这南塘两个主要字”这个词“虞美人”捆钞此后云：“两个以上的字墨家，王季宫判处医院。“这个词无疑是皇帝的墨水，李钰。 磅连订单·一 秋闺 申吁氨静态的，法院的空，破持续低温砧间歇性风。无奈夜长人失眠，数声和月到帘笼。 磅练子，让·“ 精品 云鬓乱晚报残留物，用仇恨的迈耶远岫保存。斜的护理香腮春笋和招标，对他们来说，泪倚阑干？ [注]字看，养身“词林的选择。王国维系列的南唐两个主要的话”中列出的补遗产。 “花崔编译包含在这个字中，徒劳的散文名称。三种物质可以让 不寐倦长更多的家庭，衣原体线。1月寒秋竹冷，风切变夜间窗户的声音。 [注]这个词，陈熊“古词”交房心灵“作为皇帝的字。又传唐无名的，到的郭Maoqian乐府诗集“标题”上皇3。我通过韦应物嘉靖中国绝句“七”全唐诗施“第26卷，10000 ;魏集（消耗古老的的法院的这个”Weisu状态设置为“四个系列韦江州集“）这个词。或误用此之前，首先这第一次魏韦应物“三巨头，二，麦”10000中国绝句“音乐楼诗”，“唐和诗”，那么，几乎结合收入？王国维系列的南唐两个主要的话“在附录，王兹根据的逻辑这个收入。谢信恩·一 （残句）授予的窗口部队被困以来也勇............. /> 谢吸恁中的第二 秦楼没见过笛女，备用元的风景。面粉英国：金瑞低昂。东风生气之前头发，翻领香港。 琼窗口的唤醒停留Canri年有恨！应垂杨碧阑干。暂时满足，像一个梦懒思考。 / a> [注意]王国维的“南唐主词”校勘记：第一次真正的部门“临江仙调逻辑。 协鑫恩后 樱花订单前一月喜欢在床上担心倚薰笼。就像去年的今天，恨的是一样的。 DW不整云憔悴，泪染成红色胸罩。何处相思苦？的窗口屏幕Zuimeng。 [注意]姬增加“南唐主词笺”注说：“这条领带的一切错误，没有其他学校。 协鑫恩·四 庭空客散人画堂半掩珠帘分类。燕燕在森林，风淅淅晚上。小楼新月，修长的回头以来。 春镇的空老人们的，可怜的何新愁恨？黄金窗口的力量Kunqihuanyong。一声羌笛令人吃惊的：醉汤宜勇。 [注意]原来在下面的句子： （缺乏）春镇老新愁空恨有多穷。 （缺乏）闻羌笛，惊起醉怡内容。 “南塘两个主词”校勘记：NB王国维系列这一重要的“临江仙”调。这首“春天里”下面是另一个第一。 谢吸恁的五个 春天的樱花秋天，将被困的摆动架归。鱿鱼漏暗斜月的延迟。 □□□□□□□，□□□□□。在来军彻小窗口画面，直到我不知道。 谢吸恁六 慢慢秋满阶红叶暮光之城留不住。过重阳，台榭登机在茱萸香港秋季。 紫菊气，飘的风庭户，晚烟笼细雨。人民政治协商会议新雁咽寒声，愁恨中等长度相似。 注意姬增加“南唐主词笺”注云：Concil既不是分割的，也不是类的调他的语气中也有喜欢此填写。超过6个字，所谓的原注孟公爵家墨涉嫌网络转销呆帐想成功的候选人将按照简错了，。 临江仙 樱桃落尽春归去，蝶转向灯粉红色的飞行。杜鹃个月的小楼西，玉钩罗幕，惆怅暮烟垂直。 不弄孤独分散王残烟草低迷。炉凤凰香港繁忙的细腻孩子。空持罗带回首：恨依依。 破阵子 四十年来家国，三公里的山山水水。凤阁龙楼，甚至是无畏的，玉树琼枝烟和莳萝。 一些有共识的武器。 一旦归为臣虏，沉腰花费潘寺庙，。最重要的是赶紧辞职庙日教坊犹他演奏的送别歌。 眼泪宫娥。 之一虞美人· 春园和 春花秋月过去时颜色。时尚周期，明家园的痛苦。 雕栏玉砌应犹在力。问君能有几多愁，恰似一江春水向东流。 NB吕氏春秋“夏漫笔记”：李煜归向后，郁郁不乐，发现在口头上。之的七夕生活，所以妓女在外面听到的音乐。传“时尚”的周期它们东风。坐下，然后麻烦。虞美人· 风的小院中庭芜绿柳眼春相续。凭栏独自沉默半天还是像当年的声音竹新月。 ，抱怨未散的雕像前池冰面早日解决。烛明香暗画楼深，满鬓清霜残雪勤于思考。 [注]吴讷“几百个字的旧手稿”南唐主词“设置这个词元英华崇拜，在“为”虞美人阴影。嵩泽元以学校为基础的“山寨”，“萧剩余的频谱，古代和现代诗歌其余醉”调“意义上的老问题。> 闲置望江梅·一梦远，南国正芳春。板的管弦乐，城市河流路是飞絮如尘卷，看花忙着杀了人！ /> 望江五月的第二 闲置梦远，南国清秋。特立尼达江山寒色远，芦花深处停着一辆船。长笛悦明大厦。 / a> [注]两个以上的“望江梅”，王国维系列的南唐二主词“，一个在分为上，下两阕。韵不合，这首曲子歌和无与伦比的音。特此根据管效率第一“的南唐主体工程分为两个第二首歌，他们通过鄢书。”全歌“。望江南· 多少恨，昨夜梦魂英寸法院，游泳像老车，例如水马如龙，花月春风！ / a> 西花蓟马二 许多的泪水，面对复杂的交叉仪和泪水。心莫凤笙休的打击，伤心欲绝的无疑是眼泪！看到一个欢 沉默，独自在西方，月如钩。寂寞梧桐深院锁清秋。 无奈和混乱，悲伤的离别。是一般滋味在心头。看到欢· 林华西娥王春红，太匆匆，无奈朝来寒雨晚来风。 高棉泪，相留醉，时重。不用说人生后悔水长东。 / a> 邬耶踢 昨晚的风和雨，帘幕飒飒秋声。蜡烛的残留物排出的截止频率靠在枕头。??UPS不能是平的。 BR /> 阙人用流动的水，数到一梦浮生，醉乡路应该是稳定的频率，加行难以承受的。波· 过去唯一值得悲伤，排荆困难。秋季庭院苔侵袭为了秣陵在汴京概念，术语忙的卷珠帘整天，谁是怎么回事？ 复仇已经深深埋，强大的气蒿莱。晚凉天净月华开。玉楼瑶神庙的影子，空中秦淮想太多！ [注]“的山寨续集”调整“感恩”的标题下。 “古代和现代的正统”的调子问题“，秣陵在汴京阅读。厚文可以南唐两个主要的字”请注意：单词“通池州简支梁第六。 浪淘沙·第二届 春暮光之城怀旧 帘外雨潺潺，春天轻松。罗黎明被子不容忍，冷。我是一个贪婪的喜悦中午的梦想。 独自莫栏杆，无限江山，不容易见时很难。忘了落花春去也，天上人间。 [注意]鲁本“南唐两个主要的词”浪淘沙令“。的南塘两个主要字“，”海浪“，”山寨“，”字“，”古代与现代诗的其余醉“调的标题下”怀旧“，萧剩余的频谱”的调子“春暮光之城怀旧之情。清源·山林集雪 梵宫100英尺，云后卫，得到
学术堂整合了一份中国农业科学类发表期刊论文的写作格式及字体大小,供大家参考:一、封面题目:小二号黑体加粗居中.各项内容:四号宋体居中.二、目录目录:二号黑体加粗居中.章节条目:五号宋体.行距:单倍行距.三、论文题目小一号黑体加粗居中.四、中文摘要1、摘要:小二号黑体加粗居中.2、摘要内容字体:小四号宋体.3、字数:300字左右.4、行距:20磅5、关键词:四号宋体,加粗.词3-5个,每个词间空一格.五、英文摘要1、ABSTRACT:小二号、内容字体:小四号、单倍行距.4、Keywords:四号加粗.词3-5个,小四号TimesNewRoman.词间空一格.六、绪论小二号黑体加粗居中.内容500字左右,小四号宋体,行距:20磅七、正文(一)正文用小四号宋体(二)安保、管理类毕业论文各章节按照一、二、三、四、五级标题序号字体格式章:标题小二号黑体,加粗,居中.节:标题小三号黑体,加粗,居中.一级标题序号如:一、二、三、标题四号黑体,加粗,顶格.二级标题序号如:(一)(二)(三)标题小四号宋体,不加粗,顶格.三级标题序号如:.标题小四号宋体,不加粗,缩进二个字.四级标题序号如:(1)(2)(3)标题小四号宋体,不加粗,缩进二个字.五级标题序号如:①②③标题小四号宋体,不加粗,缩进二个字.医学、体育类毕业论文各章序号用阿拉伯数字编码,层次格式为:1××××(小2号黑体,居中)××××××××××××××(内容用4号宋体).××××(3号黑体,居左)×××××××××××××(内容用4号宋体).××××(小3号黑体,居左)××××××××××××××××××××(内容用4号宋体).①××××(用与内容同样大小的宋体)a.××××(用与内容同样大小的宋体)(三)表格每个表格应有自己的表序和表题,表序和表题应写在表格上方正中.表序后空一格书写表题.表格允许下页接续写,表题可省略,表头应重复写,并在右上方写"续表××".(四)插图每幅图应有图序和图题,图序和图题应放在图位下方居中处.图应在描图纸或在洁白纸上用墨线绘成,也可以用计算机绘图.(五)论文中的图、表、公式、算式等,一律用阿拉伯数字分别依序连编编排序号.序号分章依序编码,其标注形式应便于互相区别,可分别为:图、表、公式()等.文中的阿拉伯数字一律用半角标示.八、结束语小二号黑体加粗居中.内容300字左右,小四号宋体,行距:20磅.九、致谢小二号黑体加粗居中.内容小四号宋体,行距:20磅十、参考文献(一)小二号黑体加粗居中.内容8-10篇,五号宋体,行距:20磅.参考文献以文献在整个论文中出现的次序用[1]、[2]、[3]……形式统一排序、依次列出.(二)参考文献的格式:著作:[序号]作者.译者.书名.版本.出版地.出版社.出版时间.引用部分起止页期刊:[序号]作者.译者.文章题目.期刊名.年份.卷号(期数).引用部分起止页会议论文集:[序号]作者.译者.文章名.文集名.会址.开会年.出版地.出版者.出版时间.引用部分起止页十一、附录(可略去)小二号黑体加粗居中.英文内容小四号TimesNewRoman.单倍行距.翻译成中文字数不少于500字内容五号宋体,行距:20磅.
农业与生命科学版 扬州大学学报：中南林业科技大学学报） 竹子研究汇刊 中国森林病虫 林业资源管理 浙江林业科技 林业实用技术 S8 畜牧、动物医学：中国草地学报） 草地学报 动物营养学报 蚕业科学 黑龙江畜牧兽医 草业科学 中国家禽 动物医学进展 中国饲料 畜牧与兽医 饲料工业 中国畜牧杂志 饲料研究 中国畜牧兽医 S9 水产：中国兽医科学） 中国兽医杂志 草业学报 中国草地（改名为：环境昆虫学报） 植物检疫 中国植保导刊 S6 园艺类核心期刊表 园艺学报 果树学报 中国蔬菜 北方园艺 食用菌学报 中国果树 中国食用菌 中国南方果树 S7 林业类核心期刊表 林业科学 林业科学研究 北京林业大学学报 福建林学院学报 东北林业大学学报 南京林业大学学报、蚕、蜂类核心期刊表 畜牧兽医学报 中国兽医学报 中国预防兽医学报 中国兽医科技（改名为. 自然科学版 浙江林学院学报 西北林学院学报 世界林业研究 中南林学院学报（改名为、狩猎. 自然科学版 浙江大学学报、农作物类核心期刊表 作物学报 中国水稻科学 麦类作物学报 玉米科学 杂交水稻 棉花学报 中国油料作物学报 大豆科学 种子 核农学报 农业生物技术学报 中国棉花 作物杂志 植物遗传资源学报 中国烟草科学 S4 植物保护类核心期刊表 植物病理学报 中国生物防治 植物保护学报 植物保护 农药 农药学学报 昆虫天敌（改名为. 农业与生命科学版 湖南农业大学学报 华南农业大学学报 河北农业大学学报 西南农业学报 江西农业大学学报 河南农业大学学报 吉林农业大学学报 安徽农业科学 上海农业学报 中国农业学报 沈阳农业大学学报 西北农业学报 四川农业大学学报 安徽农业大学学报 江苏农业科学 江苏农业学报 云南农业大学学报 山东农业大学学报，S5农学：中国土壤与肥料） 生态环境 中国水土保持 中国生态农业学报 S2 农业工程类核心期刊表 农业工程学报 灌溉排水学报 农业机械学报 节水灌溉 中国农村水利水电 干旱地区农业研究 农机化研究 中国农机化 S3. 自然科学版 广东农业科学 甘肃农业大学学报 湖北农业科学 新疆农业科学 广西农业生物科学 东北农业大学学报 贵州农业科学 河南农业科学 新疆农业大学学报 S1 农业基础科学类核心期刊表 土壤学报 水土保持学报 土壤 土壤通报 植物营养与肥料学报 水土保持通报 水土保持研究 土壤肥料（改名为. 自然科学版 浙江农业学报 内蒙古农业大学学报. 自然科学版 华中农业大学学报 中国农业大学学报 福建农林大学学报S 综合性农业科学类核心期刊表 中国农业科学 南京农业大学学报 华北农学报 西北农林科技大学学报
PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。下面是我整理的关于pcr技术论文，希望你能从中得到感悟!
技术的研究进展
摘要 PCR技术是一种体外酶促合成、扩增特定DNA片段的方法。因其高强的特异性和灵敏度以及检测速度快、准确性好等优点，已被广泛地应用于水产、微生物检测等许多领域。该文从PCR技术的原理及应用方面进行了综述，并对其发展做出了展望。
关键词 PCR技术;研究进展;应用
中图分类号 Q819 文献标识码 A 文章编号 1007-5739(2012)10-0047-02
PCR(polymerase chain reaction，PCR)即聚合酶链式反应，它是一种体外酶促合成，扩增特定DNA片段的方法。1985年，美国Karray等学者首创了PCR技术，并由美国Cetus公司开发研制[1]。随着科学技术的发展和突破，PCR技术已在多个领域得到广泛地应用，如微生物检测、兽医学、水产养殖等方面。由于该技术具有较强的灵敏度、准确度和特异性，又能快速进行检测，因而其应用领域也在不断延伸[2-3]。随着PCR技术的不断发展，在常规PCR技术的基础上又衍生出了许多技术，如多重PCR(mutiplex PCR)技术[4]、实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR，FQ-PCR)技术[5]、单分子PCR技术[6]。
1 PCR技术原理
PCR技术是根据待扩增的已知DNA片段序列、人工合成与该DNA 2条链末端互补的2段寡核苷酸引物，在体外将待检DNA序列(模板)在酶促作用下进行扩增。PCR的整个技术过程经若干个循环组成，一个循环包括连续的3个步骤：第1步是高温条件下的DNA模板变性，即模板DNA在93~94 ℃的条件下变性解链;第2步是退火，即人工合成的2个寡核苷酸引物与模板DNA链3’端经降温至55 ℃退火;第3步是延伸，即在4种dNTP底物同时存在的情况下，借助TaqDNA聚合酶的作用，引物链将沿着5’-3’方向延伸与模板互补的新链[7]。经过这个循环后，合成了新链，可将其作为DNA模板继续反应，由此循环进行。循环进程中，扩增产物的量以指数级方式增加，一般单一拷贝的基因循环25~30次，DNA可扩增l00万~200万倍[1]。PCR反应的步骤很简单，但是具体的操作是复杂的，如退火温度的确定、延伸时间的长短以及循环数等。因此，不同的反应体系应该确定适当的反应条件，以避免假阴性或假阳性等情况的产生。
2 PCR技术的分类
在传统PCR技术的基础上，根据人们的需要以及各个领域的应用要求，又衍生出很多种类的PCR技术。新技术在各领域广泛应用并逐渐改进，为进一步的研究提供了基础。
实时荧光定量PCR技术
1996年，学者经过研究，在传统PCR技术的基础上，首创了实时荧光定量PCR技术，新技术已经应用至医学领域、分子生物学和其他基础研究领域。实时荧光定量PCR技术基于传统技术的优势，还具有实时性、准确性、无污染，实现了自动化操作和多重反应，是PCR技术研究史上从定性到定量的飞跃[8]。
荧光定量PCR技术最大的特点是能将荧光基团加入到PCR反应体系中，借助于荧光信号，累积实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析[9]。实时监测这一特点是常规PCR技术所不具有的，因为其对扩增反应不能进行随时的检测。常规PCR技术的扩增终产物需要在凝胶电泳等条件下才能进行，无法对起始模板进行准确的定量，而荧光定量PCR技术的反应进程可以根据荧光信号的变化做出准确的判断[10-11]。一个PCR循环反应结束之后，定量PCR仪可以收集1个荧光强度信号，荧光信号强度的变化可以反映产物量的变化情况，这样就可以得到1条荧光扩增曲线[12]。荧光信号在指数扩增阶段，PCR产物荧光信号的对数值与起始模板量之间存在线性对应关系，然后进行定量分析[13]。
多重PCR技术
多重PCR(mutiplex PCR)技术是PCR技术的一种，为同一管中加入多对特异性引物，与PCR管内的多个模板反应，在一个PCR管中同时检测多个目标DNA分子。多重PCR技术可以扩增一个物种的一个片段，也可以同时扩增多个物种的不同片段[14]。
在同一反应体系中，多重PCR技术进行多个位点的特异性扩增时，引物间的配对、引物间的竞争性扩增等会对扩增效果产生重要影响。一方面，如果能选择适宜的反应体系和反应条件，可极大地提高多重PCR的扩增效果[15]。主要包括退火温度、退火及延伸时间、PCR缓冲液成分、dNTP的用量、引物及模板的量等。另一方面，DNA的抽提质量也影响多重PCR扩增效率，如DNA抽提不干净或降解都将影响PCR扩增效果[16]。
单分子PCR技术(SM-PCR)
单分子PCR技术是在传统PCR技术的基础上发展的，基本循环过程相同，但在反应条件、模板数量、DNA 聚合酶选择、引物设计方面具有不同点。该技术是以少量或单个DNA分子为模板进行的PCR[17]。
单分子PCR技术反应中，DNA 模板浓度极低，这就要求模板有较高的质量。因为这是试验成败的决定性因素。在设计引物时，应该严格控制GC的含量和Tm值，同时尽量避免引物间存在可配对序列。在反应混合物模板数极低的情况下，若引物之间存在少量配对序列，扩增时极易形成二聚体，使反应无法进行，得不到所需要的产物[18]。由于单分子PCR技术反应的变性温度(96~98 ℃)大多比常规PCR技术(94 ℃)略高，因而对DNA 聚合酶热稳定性的要求也更加严格，需要有较好的热稳定性，以防止温度过高而使其失活。其变性时间(5~15 s)、退火时间及延伸时间也短于常规PCR技术[17]。
3 PCR技术的应用
PCR技术在水产上的应用
基因表达是检测某个基因在不同发育期或不同组织中的表达量变化，或受到某种试验处理过程中的影响而出现表达量变化的情况。有学者应用real-time PCR技术研究碳水化合物含量对翘嘴红鲴糖代谢酶G6Pase、GK以及PEPCK表达量的影响[19-21]，研究结果可为翘嘴红鲴饲料配方中的最合适糖含量提供理论依据。孙淑娜等[22]研究叶酸拮抗剂对斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2表达的影响，表明叶酸拮抗剂对早期胚胎的心脏发育影响较大，可导致斑马鱼心脏发育延迟及心脏形态异常，并下调斑马鱼心脏发育相关基因BMP2b及HAS2的表达，这可能是叶酸生物学活性受抑后导致心脏发育异常的机制之一。Sawyer et al[23]以斑马鱼的未受精卵、胚胎、仔鱼和成鱼为研究材料，采用实时荧光定量PCR技术，检测了P450aromA和P450aromB在不同组织的表达量，表明在各组织中均有2种基因的表达，但表达量显著不同，呈现组织特异性。
PCR技术在微生物检测上的应用
1990年，Bej et al[24]在利用多重PCR的方法检测了Leg-ionella类菌种和大肠类细菌，其结果是通过点对点方法固定的多聚dT尾捕捉探针和生物素标记的扩增DNA进行杂交来检测的。张志东等检测口蹄疫病毒(FMDV)持续性感染的带毒动物，表明实时荧光定量PCR技术具有快速检测、准确、客观等优势，较优于传统的检测方法[25-26]。Metzger-Boddien et al[27]对PCR-ELISA的方法进行了评价，结果显示，样品中沙门氏菌的检出率可以达到98%。
4 展望
传统PCR技术以及衍生出来的新型PCR技术自面世以来，已被广泛应用到生命科学的各个领域。随着技术方法的不断改进与完善，荧光定量PCR技术将会逐渐完善并广泛应用。多重PCR技术在食品病原微生物、非致病微生物及环境微生物检测中具有重要作用;未来的研究主要集中在去除食品抑制因子干扰、改进样品前处理技术等方面，其次是整合应用多重PCR与其他技术，必将在未来食品微生物检测中有非常好的应用前景。
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