葡萄糖含量测定研究分析论文

葡萄糖氧化酶法。1．原理葡萄糖在葡萄糖氧化酶的作用下产生葡萄糖酸和过氧化氢，过氧化氢在过氧化物酶的作用下使邻联甲苯胺生成蓝色物质，该有色物质在625 nm波长下与葡萄糖浓度成正比。通过侧定蓝色物质的吸光度值可计算样品中葡萄糖的含量。2．仪器①实验室常用设备。②722型分光光度计。3．试剂除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。①三氯乙酸(40％)：称取4．0 g三氯乙酸，用水溶解并稀释至100 mL。②无水乙醇。③2 mol·L-1NaOH溶液：称取8 g NaOH，用水溶解并稀释至100 mL。④1％邻联甲苯胺溶液：称取0．1 g邻联甲苯胺溶解于10 mL无水乙醇中，倒人棕色瓶中，4℃冰箱保存。⑤乙酸缓冲液(pH5．O)：称取14．28 g乙酸钠(CH。COONa．3H20)溶于水中，加入2．7mL冰乙酸，使pH为5．O，用水定容至1L。⑥葡萄糖氧化酶溶液：称取一定量的葡萄糖氧化酶(Sigma公司)用水溶解，使酶含量为100U／mL。4℃冰箱保存一周。⑦过氧化物酶溶液：0．010 g辣根过氧化物酶溶于10 mL7J(~，4℃冰箱保存一周。⑧酶溶液：取100 mL乙酸缓冲液，分别加入邻联甲苯胺溶液、葡萄糖氧化酶溶液、过氧化物酶溶液各l mL，混匀。4℃冰箱可保存7周。⑨酶空白液：取100 mI。乙酸缓冲液，分别加人邻联甲苯胺溶液、过氧化物酶溶液各l mL，混匀。4℃冰箱保存1周。(注意酶空白液中不含葡萄糖氧化酶)⑩葡萄糖标准液：将葡萄糖标准品(纯度大于99％)于80℃干燥至恒量。精确称取O·050 g，用水移人100 mL容量瓶中，定容至刻度线。此标准液相当于浓度为0．5 mg．mI。_。。4．操作步骤①样品处理a．固体样品：称取0．5～5 g已粉碎的样品于锥形瓶中，加入50 mL水后沸水浴15 min。冷却后，转移至100 mL容量瓶中并用水定容至刻度，反复摇动混匀样品，过滤，弃初始几滴滤液。收集滤液，如果滤液澄清，可直接用于测定或稀释后用于测定。如果滤液浑浊，吸取20mL滤液转移至另一容量瓶中，加人无水乙醇至刻度。混合后静置至少30 min，过滤，滤液用于测定。b·液体样品或少糖、淀粉等碳水化合物水解液：吸取2～10 mL样品或水解液，加入4倍量无水乙醇(使乙醇最终浓度为80％，以沉淀不溶性多糖和部分蛋白质)，混合。静置至少30min，过滤后滤液定容备用(如果过滤后滤液仍浑浊，或样液体积过少，可于3 000 r／min离心15min，上清液备用)。c．新鲜牛乳等样品：吸取0．5～2 mL样品，用水稀释，加入3 mL 40％三氯乙酸溶液(用于沉淀蛋白质)，用水定容至100 mL，过滤。吸取5 mL滤液，用2 m01．L一，NaOH调节pH至中性，用水定容至i0 mL，备用。②测定a-标准空白管的制备：在试管中加入0．5 mL水和5 mL酶溶液。b·标准管的制备：5支试管中先分别加入葡萄糖标准液0．1、0．2、0．3、0．4、0．5 mL，再分别加入水0．4、0．3、0．2、0．1．0．0 mL，最后各加入酶溶液5 mL。c·样品空白管的制备：在试管中加人0．5 mI。样品提取液和5 mI。酶空白液。d·样品测定管的制备：在试管中加人0．5 mL样品提取液和5 mL酶溶液。将上述各试管中溶液混合后于37℃水浴反应15 rain，625nm测定吸光度值。(注意：反应时间应严格控制，因葡萄糖与酶溶液的成色反应与反应时间密切相关，5．计算根据吸光度值求出葡萄糖标准曲线的回归方程，采用插入法求出测定管中葡萄糖含量，再根据稀释定容体积和称样量，计算出样品中葡萄糖含量。6．说明①此法适用于谷类、乳类、饮料、酒类等食品样品和血液样品。检出量为0．02 mg。②此方法中的酶溶液只能和葡萄糖反应，特异性强，灵敏度高。③如果样品提取液为无色，不需做样品空白。有色样品或样品提取液浑浊，则应做样品空白以减少干扰。

总糖很好测，但是如果只测定葡萄糖，建议用气相色谱法。葡萄应充分破碎后热水提取，石油醚脱色，水层加乙醇至80%醇含量。搜集沉淀，低温干燥，即得粗总糖。视情况是否过活性炭柱进一步纯化。将样品溶于水，用气相色谱测定，可以定量，而且与其他糖有良好的分离。葡萄酒直接稀释，醇沉就可以了。使用葡萄糖对照品作出标准曲线，就可以计算了。试剂很简单，乙醇，蒸馏水，氮气即可仪器仅需气象色谱仪。

葡萄糖氧化酶法测定血清（浆）葡萄糖 【原理】 葡萄糖氧化酶 (glucose oxidase ， GOD) 利用氧和水将葡萄糖氧化为葡萄糖酸，并释放过氧化氢。过氧化物酶 (peroxidase ， POD) 在色原性氧受体存在时将过氧化氢分解为水和氧，并使色原性氧受体 4- 氨基安替比林和酚去氢缩合为红色醌类化合物，即 Trinder 反应。红色醌类化合物的生成量与葡萄糖含量成正比。 【试剂】 1 ． 0.1mol/L 磷酸盐缓冲液 (pH7.0) 称取无水磷酸氢二钠 8.67g 及无水磷酸二氢钾 5.3g 溶于蒸馏水 800ml 中，用 1mol/L 氢氧化钠 ( 或 1mol/L 盐酸 ) 调 pH 至 7.0 ，用蒸馏水定容至 1L 。 2 ．酶试剂 称取过氧化物酶 1 200U ，葡萄糖氧化酶 1 200U ， 4- 氨基安替比林 10mg ，叠氮钠 100mg ，溶于磷酸盐缓冲液 80ml 中，用 1 mol/L NaOH 调 pH 至 7.0 ，用磷酸盐缓冲液定容至 100ml ，置 4 ℃保存，可稳定 3 个月。 3 ．酚溶液 称取重蒸馏酚 100mg 溶于蒸馏水 100ml 中，用棕色瓶贮存。 4 ．酶酚混合试剂 酶试剂及酚溶液等量混合， 4 ℃可以存放 1 个月。 5 ． 12mmol/L 苯甲酸溶液 溶解苯甲酸 1.4g 于蒸馏水约 800ml 中，加温助溶，冷却后加蒸馏水定容至 l L 。 6 ． 100mmol/L 葡萄糖标准贮存液 称取已干燥恒重的无水葡萄糖 1.802g ，溶于 12mmol/L 苯甲酸溶液约 70ml 中，以 12mmol/L 苯甲酸溶液定容至 100ml 。 2h 以后方可使用。 7 ． 5mmol/L 葡萄糖标准应用液 吸取葡萄糖标准贮存液 5.0ml 放于 100ml 容量瓶中，用 12mmol/L 苯甲酸溶液稀释至刻度，混匀。 【操作步骤】 1 ．自动分析法 按仪器说明书的要求进行测定。 2 ．手工操作法取试管 3 支，按下表操作。 葡萄糖氧化酶法测血糖操作步骤 加入物 (ml) 空白管 标准管 测定管 血清 － － 0.02 葡萄糖标准应用液 － 0.02 － 蒸馏水 0.02 － － 酶酚混合试剂 3.0 3.0 3.0 混匀，置 37 ℃水浴中，保温 15min ，在波长 505nm 处比色，以空白管调零，读取标准管及测定管吸光度。 【计算】 【参考范围】 空腹血清葡萄糖为 3.89 ～ 6.11mmol/L 。 【临床意义】 1 ．生理性高血糖可见摄入高糖食物后，或情绪紧张肾上腺分泌增加时。 2 ．病理性高血糖 (1) 糖尿病：病理性高血糖常见于胰岛素绝对或相对不足的糖尿病患者。

葡萄应充分破碎后热水提取，石油醚脱色，水层加乙醇至80%醇含量。搜集沉淀，低温干燥，即得粗总糖。视情况是否过活性炭柱进一步纯化。将样品溶于水，用气相色谱测定，可以定量，而且与其他糖有良好的分离。葡萄酒直接稀释，醇沉就可以了。使用葡萄糖对照品作出标准曲线，就可以计算了。试剂很简单，乙醇，蒸馏水，氮气即可仪器仅需气象色谱仪。